CN103215338B - 一种分枝杆菌培养基及其制备方法 - Google Patents
一种分枝杆菌培养基及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103215338B CN103215338B CN201310152712.0A CN201310152712A CN103215338B CN 103215338 B CN103215338 B CN 103215338B CN 201310152712 A CN201310152712 A CN 201310152712A CN 103215338 B CN103215338 B CN 103215338B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- yolk
- distilled water
- preparation
- mycobacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 title claims abstract description 31
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 6
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 claims abstract description 6
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 claims abstract description 6
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 12
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 claims description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 4
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 abstract 3
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 abstract 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 abstract 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 abstract 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 abstract 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 abstract 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 abstract 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 abstract 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 201000007227 lymph node tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种分枝杆菌培养基及其制备方法。对于分枝杆菌培养基的制备方法，包括以下步骤：(1)基础液的配制：鸡蛋水洗，75％的乙醇液泡1h，去蛋清取蛋黄600ml，打匀；孔雀绿0.42g，加双蒸水21ml，研磨，滤纸过滤，取滤液18ml，加入蛋黄中搅匀；称取磷酸二氢钾3g，味精3g，葡萄糖36g，蛋白胨9g，丙三醇18ml，双蒸水300ml，加水煮开，混匀后凉置，加入蛋黄混匀液；(2)培养基的凝固与灭菌：培养基按8ml/支分装于有螺盖试管，放斜面，80℃±2×1h×3次间歇灭菌后，无菌操作，每管加灭菌双蒸水1ml，37℃孵育3天后如无菌生长则放置4℃保存待用。本发明表明不同种类分枝杆菌在分枝杆菌培养基斜面上生长速度和增殖效率比罗氏培养基更好。
Description
技术领域
本发明涉及一种分枝杆菌培养基及其制备方法。
背景技术
目前，以鸡蛋为基础的罗氏(Jensen，L-J)培养基作为培养分枝杆菌的一种固体培养基被广泛地应用于临床及实验研究中。罗氏培养基作为分枝杆菌的专性培养基，类属强选择性培养基，主要用于分枝杆菌的培养，其特异性及抗干扰能力较强，除少数霉菌可污染罗氏培养基外，罕有一般菌在罗氏培养基上生长的报道。但用这种培养基培养需时较久(通常需要1-2月)，而且阳性率不高(约10-30％)，往往在传代中丢失初始培养抑或丰度不能满足相关菌种鉴定特别是生化鉴定的菌量需要，因此，远不能满足临床诊治和防病的需要。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种分枝杆菌培养基。
本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种分枝杆菌培养基的制备方法。
对于分枝杆菌培养基，本发明采用的技术方案是，由下述组分的原料制成：
磷酸二氢钾3g，味精3g，葡萄糖36g，蛋白胨9g，丙三醇18ml，蛋黄600ml，2％孔雀绿18ml，双蒸水300ml。
对于分枝杆菌培养基的制备方法，本发明采用的技术方案是，包括以下步骤：
(1)基础液的配制：鸡蛋水洗，75％的乙醇液泡1h，去蛋清取蛋黄600ml，打匀；孔雀绿0.42g，加双蒸水21ml，研磨，滤纸过滤，取滤液18ml，加入蛋黄中搅匀；称取磷酸二氢钾3g，味精3g，葡萄糖36g，蛋白胨9g，丙三醇18ml，双蒸水300ml，加水煮开，混匀后凉置，加入蛋黄混匀液；
(2)培养基的凝固与灭菌：培养基按8ml/支分装于有螺盖试管，放斜面，80℃±2×1h×3次间歇灭菌后，无菌操作，每管加灭菌双蒸水1ml，37℃孵育3天后如无菌生长则放置4℃保存待用。
本发明的有益效果是：
本发明作为对罗氏培养基的改良，以6株标准分枝杆菌以及1株实验室分离株作为研究对象，在不同时间、温度下鉴别出这些菌最适培养状态，结果表明受试不同种类分枝杆菌在培养基斜面上生长速度和增丰效率除2株32℃生长分枝杆菌与罗氏培养基相近外，其余均明显优于罗氏培养基。
具体实施方式
一、实验材料
1、菌种来源：瘰疬、结核、海鱼、耻垢、偶遇、溃疡分枝杆菌为世界卫生组织(WHO)提供的6个标准菌株。猿猴分枝杆菌为我所分枝杆菌实验室从患者组织中分离培养出的菌株，鉴定后4℃冰箱保存待用。
2、培养基：
罗氏培养基成分：由国际防痨和肺病联合会(International UnionAgainst Tuberculosis and Lung Disease，IUATLD)推荐，是长期以来广泛使用的传统分枝杆菌固体培养基，其成分见表1。
表1：罗氏培养基成分
分枝杆菌培养基组成，其成分见表2。
表2：分枝杆菌培养基成分
二、实验方法
1、分枝杆菌培养基的制备：
(1)基础液的配制：鸡蛋水洗，75％的乙醇液泡1h，去蛋清取蛋黄600ml，打匀；孔雀绿0.42g，加双蒸水21ml，研磨，滤纸过滤，取滤液18ml，加入蛋黄中搅匀；称取磷酸二氢钾3g，味精3g，葡萄糖36g，蛋白胨9g，丙三醇18ml，双蒸水300ml，加水煮开，混匀后凉置，加入蛋黄混匀液；
(2)培养基的凝固与灭菌：培养基按8ml/支分装于有螺盖试管，放斜面，80℃±2×1h×3次间歇灭菌后，无菌操作，每管加灭菌双蒸水1ml，37℃孵育3天后如无菌生长则放置4℃保存待用。
2、菌悬液的制备：
分别取适量6个标准菌株及1个实验室分离株置于含玻璃珠的锥形瓶内充分研磨使成单菌悬液，加灭菌双蒸水稀释，与标准比浊管比浊，制成107ml-1的菌悬液。
3、接种与培养：
将107ml-1的菌悬液10倍稀释至101ml-1，以灭菌吸管准确吸取7个不同梯度(101ml-1、102ml-1、103ml-1、104ml-1、105ml-1、106ml-1、107ml-1)菌液0.1ml按设计要求分别接种于罗氏和分枝杆菌培养基斜面上，将上述接种好的培养管与未作接种(空白对照)培养管在不同温度(25℃、32℃、37℃、45℃)培养箱中培养，于接种后3天之后每周观察一次直至两个月。
三、结果与讨论
我们选取各类代表菌株是基于以下考虑：1、生长速度不同菌(速生、慢生)；2、不同生长温度的菌(含特殊温度要求)；3、结核菌与非结核菌分枝杆菌；4、标准株及实验分离新株(这样可获深入而覆盖面广的验证)。分枝杆菌培养基改良的要点为鸡蛋中去除蛋清，避免了它对分枝杆菌的抑制作用，添加提高浓度的蛋白胨和葡萄糖有增富培养基的作用，从而起到增菌作用。表3表明，在相同菌浓度、相同培养时间及相同培养温度条件下，7株分枝杆菌在分枝杆菌培养基上菌落数大多比罗氏多，特别是我所实验室分离的一株分枝杆菌。所有未接种的培养基(空白对照)培养结果全部为阴性，证实两种培养基配制过程无污染、干扰。
表3：各中受试菌株在两种培养基中培养结果比较
注：表3中的“-”号代表培养基上斜面无菌落生长。
以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。
Claims (2)
1.一种分枝杆菌培养基，其特征在于，由下述组分的原料组成：
磷酸二氢钾3g，味精3g，葡萄糖36g，蛋白胨9g，丙三醇18ml，蛋黄600ml，2％孔雀绿18ml，双蒸水300ml。
2.如权利要求1所述的分枝杆菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)基础液的配制：鸡蛋水洗，75％的乙醇液泡1h，去蛋清取蛋黄600ml，打匀；孔雀绿0.42g，加双蒸水21ml，研磨，滤纸过滤，取滤液18ml，加入蛋黄中搅匀；称取磷酸二氢钾3g，味精3g，葡萄糖36g，蛋白胨9g，丙三醇18ml，双蒸水300ml，加水煮开，混匀后凉置，加入蛋黄混匀液；
(2)培养基的凝固与灭菌：培养基按8ml/支分装于有螺盖试管，放斜面，80℃±2×1h×3次间歇灭菌后，无菌操作，每管加灭菌双蒸水1ml，37℃孵育3天后如无菌生长则放置4℃保存待用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310152712.0A CN103215338B (zh) | 2013-04-25 | 2013-04-25 | 一种分枝杆菌培养基及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310152712.0A CN103215338B (zh) | 2013-04-25 | 2013-04-25 | 一种分枝杆菌培养基及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103215338A CN103215338A (zh) | 2013-07-24 |
| CN103215338B true CN103215338B (zh) | 2015-02-18 |
Family
ID=48813488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310152712.0A Active CN103215338B (zh) | 2013-04-25 | 2013-04-25 | 一种分枝杆菌培养基及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103215338B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1103893A (zh) * | 1993-12-14 | 1995-06-21 | 中国科学院上海植物生理研究所 | 分枝杆菌干燥培养基及其生产方法 |
| CN1626646A (zh) * | 2003-12-08 | 2005-06-15 | 赵乃国 | 一种综合微生物制剂的生产方法 |
| CN101225430A (zh) * | 2008-02-14 | 2008-07-23 | 江苏科技大学 | 抗菌抗结核植物内生菌的分离筛选方法 |
| CN102449137A (zh) * | 2008-12-05 | 2012-05-09 | 地中海(埃克斯-马赛第二)大学 | 包括结核分枝杆菌复合群分枝杆菌的分枝杆菌培养基和培养方法 |
-
2013
- 2013-04-25 CN CN201310152712.0A patent/CN103215338B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1103893A (zh) * | 1993-12-14 | 1995-06-21 | 中国科学院上海植物生理研究所 | 分枝杆菌干燥培养基及其生产方法 |
| CN1626646A (zh) * | 2003-12-08 | 2005-06-15 | 赵乃国 | 一种综合微生物制剂的生产方法 |
| CN101225430A (zh) * | 2008-02-14 | 2008-07-23 | 江苏科技大学 | 抗菌抗结核植物内生菌的分离筛选方法 |
| CN102449137A (zh) * | 2008-12-05 | 2012-05-09 | 地中海(埃克斯-马赛第二)大学 | 包括结核分枝杆菌复合群分枝杆菌的分枝杆菌培养基和培养方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Evaluation of an Ogawa Mycobacterium culture method modified for higher sensitivity employing concentrated samples;David Lubasi, et al.;《Tropical Medicine and Health》;20040730;第32卷(第1期);第2页左栏表1 * |
| 刘传玉.结核分枝杆菌的培养与生长.《结核病现代防治》.2001,第157页倒数2段,第158页9段,第158页倒数第2段-第159页第2段. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103215338A (zh) | 2013-07-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dubos et al. | Media for tubercle bacilli | |
| Ammar | Cultivation of Microalgae Chlorella vulgaris in Airlift photobioreactor for Biomass Production using commercial NPK Nutrients | |
| CN103898016B (zh) | 一株高产乳酸菌及其发酵蛋壳制备乳酸钙的方法 | |
| CN105462884B (zh) | 鸭支原体培养基及鸭支原体的分离纯化方法 | |
| CN109355349A (zh) | 一种阿克曼氏菌特异性筛选培养基及其制备方法和应用 | |
| CN108467840A (zh) | 利用土壤中提取的微生物菌种制备碳酸钙的方法 | |
| CN105385607A (zh) | 一种香菇液体深层发酵培养基配方及发酵工艺 | |
| CN104027798B (zh) | 一种全悬浮细胞培养生产猪圆环病毒2型抗原的方法 | |
| CN108330093A (zh) | 一种诱导水稻抗稻瘟病的生防菌株及筛选方法和应用 | |
| CN104004720B (zh) | 一种大规模高密度生产猪圆环病毒2型抗原的方法 | |
| CN108277163A (zh) | 一种分离纯化裸藻藻种的方法 | |
| CN101423808B (zh) | Vbnc沙门氏菌的复苏液及其制备方法和复苏方法 | |
| CN109971691A (zh) | 一株富硒细菌及其分离方法 | |
| CN117568235A (zh) | 一种产亚硝酸盐氧化还原酶的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN1766082A (zh) | 一种能够无光照异养生长小球藻的培养方法 | |
| CN104789488A (zh) | 具有降胆固醇作用的鼠李糖乳杆菌及用途 | |
| CN105420167B (zh) | 一种蜡状芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105779373A (zh) | 一种适宜稻曲病菌产孢的核糖培养基及其应用方法 | |
| CN103773709A (zh) | 一种具有高效解磷作用的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN103215338B (zh) | 一种分枝杆菌培养基及其制备方法 | |
| CN106635865B (zh) | 一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用 | |
| CN109112078B (zh) | 一株短杆菌菌株及应用 | |
| CN105385634B (zh) | 一株橡胶树根际促生菌株hbrm-86及其应用 | |
| CN108504603A (zh) | 一种诱导水稻抗稻瘟病的生防菌株及筛选方法和应用 | |
| Quispel | Symbiotic nitrogen fixation in non-leguminous plants. III. Experiments on the growth in vitro of the endophyte of Alnus glutinosa |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240620 Address after: 210000 East Side of the 5th Floor, Building C3, Hongfeng Science and Technology Park, No.1 Zhixin Road, Nanjing Economic and Technological Development Zone, Jiangsu Province Patentee after: Nanjing Weiju Biotechnology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: No. 12 Jiangwang Temple, Nanjing, Jiangsu Province, 210000 Patentee before: Wang Hongsheng Country or region before: China Patentee before: Wu Qinxue |
|
| TR01 | Transfer of patent right |