CN103201292A

CN103201292A - 使用TGF-β拮抗剂治疗心肌梗死

Info

Publication number: CN103201292A
Application number: CN2011800523460A
Authority: CN
Inventors: G.Y.阿基塔; S.朗宁; 小理查德.C.格雷戈里; A.B.库德耶
Original assignee: Genzyme Corp
Current assignee: Genzyme Corp
Priority date: 2010-09-01
Filing date: 2011-09-01
Publication date: 2013-07-10
Anticipated expiration: 2031-09-01
Also published as: TR201903101T4; US20170233465A1; US10633437B2; MX354535B; NZ624382A; IL225018A; JP2013542179A; EP2611831B1; ES2715177T3; RU2013114365A; CL2013000586A1; BR112013004850A2; MX2013002390A; CA2809568C; WO2012030394A1; JP6377348B2; MY165160A; KR101939965B1; SG187953A1; RU2637088C2

Abstract

本文中公开了一种治疗患有心肌梗死，特别是急性心肌梗死的患者，或减少患者中心肌梗死的不良后果的方法，包括在心肌梗死的急性阶段期间对患者施用TGF-β拮抗剂。

Description

使用TGF-β拮抗剂治疗心肌梗死

发明领域

本公开内容涉及减少心肌梗死的不良后果的方法。

发明背景

心脏病的问题和健康后果是影响深远的。心脏病在美国是女性和男性两者的首要死亡原因。(Kung HC,Hoyert DL,Xu J,Murphy SL.Deaths:final datafor2005.National Vital Statistics Reports.2008;56(10))。每34秒在美国就有一人死于心脏病。每天有超过2,500名美国人死于心脏病。在2005年，652,091人死于心脏病(其中50.5%为女性)。占所有美国死亡人数的27.1%。心脏病是美国印地安人和阿拉斯加原住民、黑人、西班牙裔、和白人的首要死亡原因。对于亚裔和太平洋岛屿族裔，癌症是首要死亡原因(占所有死亡的27.5%)，心脏病是接近的第二位(25.0%)。(CDC.Deaths:leading causes for2004.NationalVital Statistics Reports.2007;56(5))。每年几乎600万例入院(在美国)是由心血管疾病所致。

在2009年，心脏病预计造成超过3046亿美元的花费，包括死亡护理服务、药物、和生产力丧失。(American Heart Association.Heart Disease and StrokeStatistics-2009Update.Dallas;AHA:2009.Statistics Committee and StrokeStatistics Subcommittee.Circulation.2008Dec15.)。在全世界范围内，冠心病在2005年导致超过760万人死亡。(World Health Organization.The GlobalBurden of Disease:2004Update.Geneva;WHO:2008.)。在2003年，约37%成人报告具有心脏病和中风的六项风险因素(高血压、高胆固醇、糖尿病、当前吸烟、身体不活动、和肥胖)中的两项或更多项。(Hayes DK等,Disparities inmultiple risk factors for heart disease and stroke,2003MMW,.2005;54:113–116)。

心肌梗死(MI)是由缺血引起的心脏组织死亡。“缺血”指通过由血管收缩或血流的局部障碍物产生的血供局部缺乏。对先前缺血的组织或器官，诸如心脏恢复血流称为“再灌注”。

急性心肌梗死(AMI)，或“心脏病发作”在局部化心肌缺血引起限定组织死亡区域形成时发生。AMI最常由冠状动脉中的动脉粥样硬化损伤的破裂引起。这引起血栓形成，堵住动脉，使其停止对其供应的心脏区域供血。

重度且长时间的缺血产生跨越心肌壁的整个厚度的坏死区。此类透壁性梗死通常引起ST段抬高。不太严重且不太长时间的缺血可以在冠状动脉阻塞继之以自发再灌注时发生；梗死相关动脉没有完全阻塞；阻塞是完全的，但是现有的并行血供防止了完全缺血；或者受累的心肌膜带中的氧需求较小。在这些条件下，坏死带可以主要限于心内膜下层(subendocardium)，这通常引起非ST段抬高MI。

坏死的心肌区和不受累的心肌区都在缺血事件后几小时、几天和几周里经历进行性变化。这种梗死后心肌演变过程导致初始事件后在可预测的时间发生特征性变化。急性缺血引起受累心肌膜中收缩性立即丧失，该状况称作低动力(hypokinesis)。坏死在急性缺血发作后约15-30分钟开始在心内膜下层中形成。坏死区在接着的3-6小时里朝心外膜向外生长，最终跨越整个心室壁。在梗死边缘，心肌膜可能发生顿抑(stunned)(可逆受损)，并且如果血流回复最终会恢复。剩余的有活力的心肌膜的收缩性升高，该过程称作高动力。

梗死内部发生一系列细胞、组织学和肉眼变化。梗死组织的肉眼外观的改变在细胞死亡开始后至少6小时内是不明显的。然而，细胞生物化学和超微结构在20分钟内开始显示异常。细胞损伤是进行性的，在约12小时里变得逐渐不可逆。

细胞死亡开始后4-12小时，梗死的心肌膜开始经历凝固坏死，该过程以细胞溶胀、细胞器分解和蛋白质变性为特征。在约18小时后，嗜中性粒细胞(吞噬性淋巴细胞)进入梗死。它们的数目在约5天后达到峰值，然后下降。在3-4天后，肉芽组织在梗死带边缘出现。肉芽组织由巨噬细胞、成纤维细胞(其沉积下瘢痕组织)、和新的毛细血管组成。梗死的心肌膜在4-7天特别软，因此极易破裂。随着肉芽组织在几周里向内朝着梗死中心迁移，坏死组织被巨噬细胞吞噬并消化。然后，肉芽组织逐渐成熟，伴有结缔(瘢痕)组织的增加和毛细血管的丧失。在2-3个月后，梗死已经愈合，留下变薄的、坚硬且呈浅灰色的心室壁的无收缩性区。

微观形态学变化如下随时间演变：波状心肌纤维在缺血发作后1-3小时出现。用四唑或碱性品红染料的染色缺陷在缺血发作后2-3小时出现。伴有横纹丧失、收缩带、水肿、出血、和早期中性白细胞浸润物的凝固坏死在缺血发作后4-12小时出现。持续的凝固坏死、细胞核的核固缩、和边缘收缩带在缺血发作后18-24小时明显。细胞核和条纹的完全丧失伴随着中性白细胞胞的严重浸润在缺血发作后24-72小时出现。巨噬细胞和单核细胞浸润以及纤维血管应答在缺血发作后3-7天开始。伴有突起的肉芽组织的纤维血管应答在缺血发作后10-21天是明显的。纤维化在缺血事件后7周或更早是容易明显的。

并发症可以包括：心律失常和传导缺陷、梗死形成或再梗死形成的延伸、充血性心力衰竭、心源性休克、心包炎、附壁血栓形成伴有可能的栓塞、心肌壁破裂伴有可能的填塞、乳头肌破裂伴有可能的瓣闭锁不全、和心室壁瘤形成。

发明概述

本文中公开了一种降低患者中心肌梗死的不良后果的方法，包括在心肌梗死的急性阶段期间对所述患者施用TGF-β拮抗剂。在一些实施方案中，心肌梗死是急性心肌梗死。可以在急性心肌缺血发作的120小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。在多个实施方案中，在急性心肌缺血发作的约72小时内、约48小时内、约24小时内、或约12小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。可以在受所述心肌梗死影响的组织的实质性巨噬细胞和单核细胞浸润前开始所述TGF-β拮抗剂的施用。在一些实施方案中，在以受所述心肌梗死影响的组织的嗜中性粒细胞浸润(neutrophilic infiltration)为特征的期间内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。在其它实施方案中，在以受所述心肌梗死影响的组织的坏死为特征的期间内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。一般地，患者可以是人或非人哺乳动物。

在一些实施方案中，TGF-β拮抗剂可以选自下组：i)特异性结合一种或多种TGF-β同种型的抗体或抗体片段；ii)TGF-β受体或其可溶性片段；iii)特异性结合一种或多种TGF-β受体的抗体或抗体片段；和iv)反义或干扰RNA寡核苷酸。

在一些实施方案中，所述方法进一步包括对所述患者施用能够选择性恢复TGF-β的期望功能的化合物。例如，能够选择性恢复TGF-β的期望功能的化合物可以是消炎药，或TNF-α拮抗剂。在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括对所述患者施用ACE抑制剂。ACE抑制剂可以选自下组：贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、福辛普利(fosinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、Transdolapril、赖诺普利(lisinopril)、依那普利(enalapril)和Ramparil。在其它实施方案中，所述方法可以进一步包括对所述患者施用血管紧张肽II受体拮抗剂。血管紧张肽II受体拮抗剂可以选自下组：依普罗沙坦(eprosartan)、替米沙坦(telmisartan)、氯沙坦(losartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、奥美沙坦(olmesartan)、坎地沙坦(candesartan)、和缬沙坦(valsartan)。

TGF-β拮抗剂可以是特异性结合一种或多种TGF-β同种型的抗体或抗体片段，并且可以中和人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3中的一者或多者。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段可以包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)及多至5处突变，或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)，或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1287A10VH域(SEQ ID NO:22)，或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1073G12VL域(SEQ IDNO:7)，或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)，或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)，或其抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)和PET1073G12VL域(SEQ ID NO:7)。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)和PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含PET1287A10VH域(SEQ ID NO:22)和PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含一组CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中所述HCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:25。在一些实施方案中，所述VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3在种系重链框架内。在一些实施方案中，所述VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3在来自种系氨基酸序列且包含至多12处突变的框架内。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段包含一组CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其中所述LCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:30。在一些实施方案中，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3在种系重链框架内。在一些实施方案中，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3在来自种系氨基酸序列且包含至多5处突变的框架内。

附图简述

图1显示了在施用1D11-D3和1D11D-5和13C4的情况下纤维化降低。

图2显示了心回波图分析中前壁增厚和后壁增厚。

图3显示了心回波图分析中区域室壁运动得分(regional wall motionscore)。

图4显示了在施用1D11和13C4的情况下的纤维化降低。

图5对13C4-D0、1D11-D0、13C4-D1、1D11-D1、13C4-D5和1D11-D5处理组显示了心回波图分析中的前壁增厚和后壁增厚。

图6对于媒剂、13C4-D0、1D11-D0、13C4-D1、1D11-D1、13C4-D5和1D11-D5处理组显示了心回波图分析中的区域室壁运动得分。

图7显示了与媒剂处理组对比的LV瘢痕体积。

图8显示了瘢痕临近区域中TUNEL阳性细胞数目。

图9显示了冠状动脉阻塞/冠状动脉再灌注(CAO/CAR)后4周测量的LV射血分数(LVEF)。

图10显示了CAO/CAR后2-4周时测量的LVEF。

图11显示了LV等容舒张时间。

图12显示了与媒剂相比的区域室壁增厚。

图13显示了LV-舒张期末压-容积关系的斜率。

图14显示了在以来自两种不同配制剂的1和5mg/kg剂量施用1D11的情况下LV中纤维化的降低。

图15显示了在以来自两种不同配制剂的1和5mg/kg剂量施用1D11的情况下有风险区域内纤维化的降低。

图16显示了在以来自两种不同配制剂的1和5mg/kg剂量施用1D11的情况下有风险区域内心肌膜的增加。

图17显示了媒剂、1和5mg/kg(对于两种配制剂)的13C4和1D11的心回波图分析中的局部壁运动得分。

图18显示了抗体的IV施用后1D11的剂量依赖性血清水平。

图19显示了在I/R后施用1D11的情况下血清骨桥蛋白的降低。

图20显示了IR后TGF-β1的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的TGF-β1降低。

图21显示了IR后TGF-β2的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的TGF-β21降低。

图22显示了IR后TGF-β3的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的TGF-b3降低。

图23显示了IR后胶原3的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的胶原3降低。

图24显示了IR后内皮缩血管肽-1的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的内皮缩血管肽-1降低。

图25显示了IR后纤溶酶原激活物抑制剂-1的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的纤溶酶原激活物抑制剂-1降低。

图26显示了IR后Snail1的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的Snail1降低。

图27显示了IR后Snail2的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的Snail2降低。

图28显示了IR后α-平滑肌肌动蛋白的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的α-平滑肌肌动蛋白降低。

图29显示了IR后纤连蛋白的诱导和I/R后剂量依赖性1D11介导的纤连蛋白降低。

图30显示了5mg/kg1D11的施用对Bax表达的影响。

发明详述

在MI，或心脏病发作后，心脏开始自身修复。此心脏修复过程可以分成重叠的阶段。第一阶段称为炎性阶段。炎性阶段后是增殖阶段。最后，成熟阶段是心脏修复的最后阶段。(Bujak,M.and Frangogiannis,NG Cariovasc Res.74:184-195(2007))。

在心脏病刚发作后，炎性阶段的特征在于心肌细胞死亡、细胞因子和趋化因子的诱导、和炎性细胞流入以清除濒死的组织。在增殖阶段期间，存在对炎性介质的阻抑作用，并且有帮助结缔组织纤维形成的细胞、成纤维细胞、和内皮细胞流入梗死区中。成纤维细胞分泌胞外基质。内皮细胞促成在形成中的松散纤维结缔组织，或称肉芽组织内形成微血管网络。浸润的炎性细胞然后开始进行细胞死亡，或称为凋亡。最终，在成熟阶段期间，来自增殖阶段的肉芽组织组织化并且成熟成密集的纤维结缔组织瘢痕。心肌膜中纤维化应答的此重塑可以是长时间的。一般而言，炎性阶段从梗死时间到MI后1-7天发生。增殖阶段从MI后约5-14天发生。最终，成熟阶段从MI后约10-14天开始，并且继续，直到发生心脏重塑。

TGF-β在梗死的心肌膜中被诱导，并且参与MI后修复的所有阶段，这一点已经给确定此细胞因子在心脏修复中的作用的尝试增加了复杂性。因此，TGF-β在MI后在心脏修复中的精确作用尚未得到充分了解。TGF-β是一种多功能细胞因子，它最初是以其将正常的成纤维细胞转化成能够贴壁依赖性生长的细胞的能力命名的。目前有至少五种TGF-β同等型得到了鉴定：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、和TGF-β5。有可能从多种物种，包括人、小鼠、青猴(green monkey)、猪、牛、鸡、和蛙纯化此TGF-β家族。还有可能从多种身体来源，包括骨、血小板、或胎盘纯化此TGF-β家族，用于在重组细胞培养中将其生成，并用于测定其活性。

在人类中，已知存在三种同等型TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3。(Swiss Prot登录号分别为P001137、P08112和P10600)。在其生物学活性状态中，这三种同等型是25kDa同二聚体，包含通过链间二硫桥连接的两个112个氨基酸的单体。TGF-β1与TGF-β2相差27个氨基酸，而与TGF-β3相差22个氨基酸。差异主要是保守氨基酸变化。已经通过X-射线晶体学确定TGF-β的三维结构，并且已经定义了受体结合区。人TGF-β和小鼠TGF-β两者是相似的。人TGF-β1与小鼠TGF-β1具有一处氨基酸差异。人TGF-β2与小鼠TGF-β2仅具有三处氨基酸差异，而人和小鼠TGF-β3是相同的。

术语“TGF-β”或“转化生长因子-β”指具有任何人TGF-β同等型的全长、天然氨基酸序列的所描述的分子家族。这些包括潜活(“潜活TGF-β”)和前体和成熟TGF-β的缔合的或未缔合的复合物。提及这样的TGF-β时，应当理解为提及了任一种目前鉴定的形式，包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、和TGF-β5及其潜活型式，以及未来鉴定的人TGF-β种类，包括源自任何已知的TGF-β序列且与所述序列至少约75%，优选地，至少约80%，更优选地，至少约85%，还更优选地，至少约90%，甚至更优选地，至少约95%同源的多肽。特定术语“TGF-β1”、“TGF-β2”、和“TGF-β3”、及“TGF-β4”和“TGF-β5”指文献中定义的TGF-β(例如Derynck等,Nature,见上文，Seyedin等,J.Biol.Chem.,262,见上文，及deMartin等,见上文)。术语“TGF-β”指编码人TGF-β的基因。

TGF-β家族成员是在分子的成熟部分中具有9个半胱氨酸残基，在成熟区中与其它已知的TGF-β序列共享至少65%同源性，并且可以竞争相同受体的蛋白质。另外，它们都似乎作为较大的前体被编码。前体在接近N端都具有一个高同源性区域，并且在前体的后来会通过加工除去的部分中，有三个半胱氨酸残基显示是保守的。TGF-β家族成员还似乎具有含4或5个氨基酸的加工位点。

大量病理状况中涉及到TGF-β活性水平升高，这样的病理状况包括但不限于下列各项：(i)伤口愈合期间的纤维化、瘢痕形成、和粘连；(ii)心脏、肺、肝、和肾的纤维化疾病；(iii)动脉粥样硬化和动脉硬化；(iv)某些癌症类型，包括前列腺的癌症、消化系统的神经内分泌肿瘤、宫颈的癌症、成胶质细胞瘤、和胃癌；(v)血管病(angiopathy)、血管病变(vasculopathy)、肾病；(vi)系统性硬化；(vii)病毒感染，诸如丙肝和HIV；和(viii)免疫学和炎性病症和缺陷，诸如类风湿性关节炎。

对TGF-β在心脏损伤中的作用的初步研究指示在MI后的心脏修复的第一或炎性阶段中发生保护性作用。在这些初步研究中，在缺血性损伤后几小时内在心肌缺血性损伤模型中施用TGF-β。Lefer在分离的大鼠心脏中显示了在缺血性心脏损伤之前，或刚发生之后施用TGF-β降低冠状循环中的超氧阴离子，维持内皮依赖性冠状舒张，降低自外源肿瘤坏死因子(TNF)介导的损伤，而且阻止重度心脏损伤。(Lefer,等Science,249:61,1990)。Lefer及同事继续证明TGF-β保护内皮功能，其特别是通过维持内皮的内皮衍生的舒张因子(EDRF，但是现在称为一氧化氮或NO)形成来实现。(Lefer,AM.BiochemPharmacol.42:1323-1327,1991)。用分离的心肌细胞或分离的心脏制备物进行的其它研究进一步阐明TGF-β介导的心脏保护的机制。

Keller等(Journal of Cardiovascular Pharmacology,30:197-204,1997)显示了在犬心脏I/R模型中，在缺血/再灌注前30分钟施用TGF-β时，与未处理的对照相比，在刚再灌注后在梗死带中蛋白质漏出指数(PLI)降低50%。然而，在再灌注后48小时没有观察到PLI的改善。另外，TGF-β在再灌注后1小时或48小时的犬中没有改善内皮依赖性舒张。这些结果提示了TGF-β可以在再灌注早期阻止冠状血管通透性升高，但是它不能阻止更晚的冠状血管损伤。(Keller等,J Cardiovasc Pharmcol.30:197-204,1997)。

新近，使用TGF-β受体拮抗剂中断TGF-β信号传导来调查TGF-β在MI修复中的作用。在一项研究中，Ikeuchi等(Cardiovascular Research,64:526-35,2004)通过在MI前7天在小鼠中肌肉内注射编码TGF-βII型受体(TβIIR)的胞外域的质粒阻断MI时的TGF-β信号传导。与未处理的小鼠相比，他们观察到MI后24小时期间升高的死亡率、升高的炎症、升高的左心室(LV)扩张和可收缩功能障碍，尽管梗死大小没有增加。为了在MI后的后期阶段阻断TGF-β，小鼠在MI后第0天或第7天接受TβIIR的肌肉内注射。MI后4周，TβIIR处理在非梗死心肌膜中阻止LV扩张、可收缩功能障碍、心肌细胞肥大和间质性纤维化。TGF-β在早期阶段中是有益的，但是益处随着持续的表达而丧失，导致LV重塑和衰竭。

在另一项研究中，Okada等(Circulation,11:2430-37,2005)在MI后3天给小鼠肌肉内注射编码可溶性TGF-βII型受体的腺病毒(Ad.CAGsTβRII)。在MI后经处理的小鼠中，存活显著改善。同时MI后4周心室扩张显著减弱且心脏功能改善。MI大小与对照没有区别，但是MI厚度和周长在经处理的动物中较小。在经处理的动物中梗死区成肌纤维细胞的凋亡频度更低。在MI后4周时施用Ad.CAG-sTβRII是无效的。Okada等认为抑制TGF-β的临界窗口在3天后且在4周前出现。他们的研究中的注射特意在认为处理不会影响心肌细胞的急性缺血性死亡的时间进行。Okada等认为在MI的急性阶段期间抑制TGF-β是有害的。

在这些研究后，使用针对TGF-β1、2和3有效的拮抗性抗体在MI修复中调查TGF-β拮抗作用。Frantz等(Basic Research in Cardiology,103:485-502,2008)在通过冠状动脉结扎诱导MI之前7天，或之后5天开始，对小鼠施用TGF-β拮抗性抗体或阴性对照抗体。贯穿研究的8周持续时间每隔一天施用抗体。死亡率在接受抗TGF-β抗体的组中显著更高。另外，这两个抗TGF-β抗体处理组表明升高的左心室扩张。这些作者推断冠状动脉结扎之前或之后的抗TGF-β处理增加死亡率，而且恶化左心室重塑。作者提示TGF-β拮抗的持续时间和TGF-β拮抗剂浓度的差异可能造成其研究与那些由Ikeuchi等(2004)和Okada等(2005)报告的研究之间的结果差异。

本文中公开了一种治疗患有心肌梗死，特别是急性心肌梗死的患者，或降低患者中心肌梗死的不良后果的方法，该方法包括在心肌梗死的急性阶段期间对患者施用TGF-β拮抗剂。如下的发现是令人惊讶的，可以在急性心肌缺血发作后不到120小时的时间行之有效地开始TGF-β拮抗剂的施用。在一些情况下，本文中所描述的方法可以在急性心肌缺血发作的约72小时内，在约48小时内、在约24小时内、或在约12小时内开始TGF-β拮抗剂的施用。一般地，在本文中所公开的方法中，在MI的急性阶段期间施用TGF-β拮抗剂。可以在受心肌梗死影响的组织的实质性巨噬细胞和单核细胞浸润前开始TGF-β拮抗剂的施用。在一些实施方案中，在以受心肌梗死影响的组织的中性白细胞浸润为特征的时期期间开始TGF-β拮抗剂的施用。在其它实施方案中，在以受心肌梗死影响的组织的坏死为特征的时期期间开始TGF-β拮抗剂的施用。

“治疗/处理”指治疗性处理和防范性或预防性措施两者。那些需要治疗的对象包括那些已经患有可治疗病症的对象及那些要预防病症的对象。治疗可以包括或不包括完全治愈或恢复正常功能。治疗也可以包括改善不想要的症状和/或不利病症后果的降低。“哺乳动物”可以是分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和牲畜、和动物园、运动、或宠物动物，诸如犬、马、猫、牛，等等。优选地，哺乳动物是灵长类，诸如例如猴、猿、或人。术语“有效量”指有效治疗哺乳动物中的疾病或病症的药物量。

虽然某些TGF-β功能在MI后的早期阶段中可能是期望的，但是在急性期期间及之后的拮抗TGF可以导致心脏重塑和功能的改善。然而，在期望恢复一种或多种选择的TGF-β功能的情况下，可以希望与TGF-β拮抗剂共施用另一种能够选择性恢复期望的TGF-β功能的化合物。例如，能够选择性恢复期望的TGF-β功能的化合物可以是消炎药、或TNF-α拮抗剂。也可以期望共施用另一种治疗，例如，所述方法可以包括对患者施用ACE抑制剂。ACE抑制剂可以选自下组：贝那普利、卡托普利、福辛普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、Transdolapril、赖诺普利、依那普利和Ramparil。在其它实施方案中，所述方法可以进一步包括对患者施用血管紧张肽II受体拮抗剂。血管紧张肽II受体拮抗剂可以选自下组：依普罗沙坦、替米沙坦、氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、和缬沙坦。

中和性抗体可以用作TGF-β拮抗剂。“抗体”是免疫球蛋白，无论是天然的还是部分或完全合成生成的。该术语还覆盖包含抗体的抗原结合域的任何多肽或蛋白质。包含抗原结合域的抗体片段是诸如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd和双抗体等分子。术语“抗体”以最广义使用，并且明确涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两个完整的抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。单克隆抗体是高度特异的，针对单一抗原性位点。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除它们的特异性外，单克隆抗体的优势在于它们可以在不受到其它抗体的污染的条件下合成。修饰语“单克隆”指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，单克隆抗体可通过最初由Kohler等,Nature,256:495(1975)记载的杂交瘤方法来生成，或者可通过重组DNA方法来生成(参见例如美国专利No.4,816,567)。“单克隆抗体”还可使用例如Clackson等,Nature,352:624-628(1991)及Marks等,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)中记载的技术从噬菌体抗体库分离。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)₂和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合抗体Fc区的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。

术语“可变的”在抗体或抗体片段的上下文中指可变域的某些部分在抗体序列间差异广泛，并且在每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中使用的实情。然而，变异性并非遍及整个抗体可变域均匀分布。它集中于轻链和重链可变域两者中三个称作高变区的区段中。可变域中更高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况下形成β-折叠片结构一部分的三个高变区连接。术语“高变区”指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。一般地，高变区包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。“框架区”或“FR”残基是那些除了如本文中限定的高变区残基外的可变域残基。

“Fv”是含有完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。此区由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。正是在这种构造中，每个可变域的三个高变区相互作用而在VH-VL二聚体表面上确定了一个抗原结合位点。六个高变区共同赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异性的三个高变区的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。

Fab片段还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于重链CH1结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带至少一个游离硫醇基的Fab’的称谓。F(ab’)₂抗体片段最初是作为在Fab'片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab’片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。

根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的抗体的“轻链”可归入两种截然不同型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL域，其中这些域存在于单一多肽链中。

非人(例如啮齿类)抗体的“人源化”形式是含有自非人免疫球蛋白衍生的最低限度序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体是这样的人免疫球蛋白(接受抗体)，其中来自接受体高变区的残基为具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)，诸如小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类的高变区残基所替换。在有些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在接受抗体或供体抗体中未找到的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。一般而言，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的那些，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的那些。任选地，人源化抗体还会包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的。(Jones等,Nature,321:522-525(1986);Riechmann等,Nature,332:323-329(1988);and Presta,Curr.Op.Struct.Biol,.2:593-596(1992))。

“TGF-β抗体”指结合任何TGF-β同等型的抗体，优选地，结合TGF-β1、TGF-β2、或TGF-β3、或其任何组合，更优选地，结合至少TGF-β1、或至少TGF-β2，且最优选地，TGF-β1，或TGF-β1以及TGF-β2的抗体。任选地，抗体可以至少结合TGF-β3。

一种结合TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3同等型的中和性小鼠单克隆抗体称为1D11，并且可自R&D Systems(产品目录编号MAB-1835)或经由ATCC(登录号HB9849)得到。一种针对人TGF-β1的小鼠单克隆抗体也可购自R&DSystems。也已经从用包含氨基酸位置48至60(与TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3反应性的抗体)和氨基酸位置86至101(对TGF-β1特异性的抗体)的人TGF-β1肽免疫的小鼠生成中和性小鼠单克隆抗体。(Hoefer and Anderer,CancerImmunol.Immunother.,41:302-308(1995))。GC1008是一种人源化单克隆IgG4抗体，其中和所有TGF-β同等型，而且适合于人的治疗性使用。

1D11是一种在一大批体外测定法中中和小鼠TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3及人TGF-β1和TGF-β2的鼠泛特异性抗TGF-β抗体(美国专利No.5,571,714;R&D System MAB1835产品单)。在动物纤维化模型中，已经证明了1D11是有效的。然而，1D11是一种鼠单克隆抗体，并且可能不适合于人的治疗性使用。如此，在一些实施方案中，人抗体或包含人序列元件的经修饰的抗体可以是期望的。

在一些实施方案中，治疗MI的方法可以包括施用针对TGF-β的抗体以治疗与TGF-β相关疾病中TGF-β过度生成有关的急性纤维化。身体响应损伤或疾病而再生被破坏的组织。在长期或广泛的损伤的情况下，破坏的组织可能被特化的纤维化结缔组织所取代。这种纤维化组织的沉积可以导致患者中受累组织或器官功能的损害。在急性阶段期间施用有效量的抗TGF-β抗体可以降低随后的纤维化形成。此外，也可以在通常以纤维化为特征的MI后恢复期内施用有效量的抗TGF-β抗体以中和TGF-β的生物活性，由此降低纤维化形成。

在一些实施方案中，TGF-β拮抗剂可以选自下组：(i)特异性结合一种或多种TGF-β同等型的抗体或抗体片段；(ii)TGF-β受体或其可溶性片段；(iii)特异性结合一种或多种TGF-β受体的抗体或抗体片段；和(iv)反义或干扰RNA寡核苷酸。特异性结合并中和TGF-β分子的抗TGF-β抗体作为TGF-β拮抗剂是特别有用的。此类抗体的例子记载于美国专利申请公开文本No.2006/0251658。抗TGF-β抗体包括针对TGF-β，特别是人TGF-β的特异性抗体，包括针对TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的特异性抗体。

由于抗体可以以许多方式修饰，术语“抗体分子”应当理解为覆盖具有所要求的特异性的抗体的抗原结合位点的任何抗体或物质。因此，此术语涵盖抗体片段和衍生物，包括任何包含抗原结合域的多肽，无论是天然的，或是完全合成或部分合成的。因此，这样的嵌合分子也包括在内，其包含抗体的抗原结合域或等同物及与之融合的另一种多肽。嵌合抗体的克隆和表达记载于EP-A-0120694和EP-A-0125023，及许多后续的文献。因此，除非明确限制，术语抗TGF-β抗体在本文中以广义使用，包括完全抗体(例如，IgG，诸如IgG1或IgG4)、抗体片段(例如，scFv、Fab、dAb)、或包含源自抗TGF-β抗体或其组分的抗TGF-β抗原结合位点的分子。

TGF-β拮抗剂包括具有一个或多个氨基酸残基并且从非人来源导入其中的人源化单克隆抗TGF-β抗体。可以遵循Winter及同事的方法(Jones等,Nature,321:522-525(1986);Riechmann等,Nature,332:323-327(1988);Verhoeyen等,Science,239:1534-1536(1988))通过用高变区序列取代人抗体的相应序列实施人源化。因而，此类“人源化”抗体可以是嵌合抗体(例如，如记载于美国专利No.4,816,567的)，其中完整的人可变域的一小部分已经被取代为来自非人物种的相应序列。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些高变区残基和可能一些FR残基用来自啮齿类抗体中类似位置的残基取代。

依照所谓的“最佳拟合”方法，针对已知的人可变域序列的整个文库筛选啮齿类抗体的可变域的序列。然后，接受与啮齿类序列最接近的人序列作为人源化抗体的人框架区(FR)(Sims等,J.Immunol.,151:2296(1993);Chothia等,J.Mol.Biol.,196:901(1987))。另一种方法使用源自特定亚组的轻链或重链的所有人抗体的共有序列的特定框架区。可以对几种不同人源化抗体使用相同框架(Carter等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992);Presta等,J.Immunol.,151:2623(1993))。

优选地，人源化抗体保留对抗原的高亲和力和其它有利的生物学特性。为了实现此目的，可以通过如下的方法制备人源化抗体，所述方法包括使用亲本和人源化序列的三维模型来分析亲本序列和各种概念上的人源化产物。三维免疫球蛋白模型通常是可用的，并且是本领域技术人员熟悉的。计算机程序是可用的，其例示并显示选择的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。检查这些显示容许分析残基在候选免疫球蛋白序列运行中可能的作用，即，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从接受和输入序列选择FR残基并组合，从而实现期望的抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力升高。一般地，高变区残基直接且最实质性地参与影响抗原结合。

抗TGF-β抗体通常包含抗体VH和VL域。互补决定区CDR在VH和VL域内，所述互补决定区CDR可以包含在不同框架区FR内，以根据情况形成VH或VL域。抗原结合位点可以由抗体VH域和/或VL域或其抗原结合部分组成。

抗TGF-β抗体可以包含HCDR组、LCDR组、或两者，和/或人抗体VH域、VL域或两者。

HCDR1、HCDR2和HCDR3的组可以具有选自下组的序列：

HCDR1SEQ ID NO:3、HCDR2SEQ ID NO:4、HCDR3SEQ ID NO:5(本文中称为“HCDR的PET1073G12组”)；

HCDR1SEQ ID NO:13、HCDR2SEQ ID NO:14、HCDR3SEQ ID NO:15(本文中称为“HCDR的PET1074B9组”)；

HCDR1SEQ ID NO:23、HCDR2SEQ ID NO:24、HCDR3SEQ ID NO:25(本文中称为“HCDR的PET1287A10组”)。

LCDR1、LCDR2和LCDR3的组可以具有选自下组的序列：

LCDR1SEQ ID NO:8、LCDR2SEQ ID NO:9、LCDR3SEQ ID NO:10(本文中称为“LCDR的PET1073G12组”)；

LCDR1SEQ ID NO:18,LCDR2SEQ ID NO:19,LCDR3SEQ ID NO:20(本文中称为“LCDR的PET1074B9组”)；

LCDR1SEQ ID NO:28、LCDR2SEQ ID NO:29、LCDR3SEQ ID NO:30(本文中称为“LCDR的PET1287A10组”)。

HCDR的PET1073G12组以及LCDRS的PET1073G12组在本文中称为CDR的PET1073G12组。HCDR的PET1074B9组以及LCDRS的PET1074B9组在本文中称为CDR的PET1074B9组。HCDR的PET1287A10组以及LCDRS的PET1287A10组在本文中称为CDR的PET1287A10组。包含如本文中所公开的HCDR组的VH域可以另外包含含有如本文中所公开的LCDR组的VL域。优选地，这样的VH域与这样的VL域配对，且最优选地，VH和VL域配对与本文中所列的的克隆中的相同。

抗TGF-β抗体的VH域可以含有HCDR HCDR1、HCDR2和HCDR3的组，其中该组HCDR对应于具有一处或两处氨基酸取代的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10的组。

抗TGF-β抗体可以包含这样的VL域，其含有LCDR LCDR1、LCDR2和LCDR3的组，其中该组CDR对应于具有一处或两处氨基酸取代的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10的CDR组。

遵循计算化学在将多变量数据分析技术应用于结构/特性-活性关系中的引导(Wold,等Multivariate data analysis in chemistry.Chemometrics--Mathematics and Statistics in Chemistry(B.Kowalski编),D.Reidel Publishing Company,Dordrecht,Holland,1984(ISBN90-277-1846-6))，可以使用公知的数学技术诸如统计学回归、模式识别和分类来衍生抗体的定量活性-特性关系(Norman等Applied Regression Analysis.Wiley-Interscience;第3版(1998年4月)ISBN:0471170828;Abraham Kandel,Eric Backer.Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis.Prentice Hall PTR;(1995年5月11日),ISBN:0133418847;Wojtek Krzanowski.Principles of MultivariateAnalysis:A User’s Perspective(Oxford Statistical Science Series,No22(Paper)).Oxford University Press;(December2000),ISBN:0198507089;Ian H.Witten,Eibe Frank.Data Mining:Practical Machine Learning Tools and Techniques withJava Implementations.Morgan Kaufmann;(1999年10月11日),ISBN:1558605525;David G.T.Denison(编),Christopher C.Holmes,Bani K.Mallick,Adrian F.M.Smith.Bayesian Methods for Nonlinear Classification andRegression(Wiley Series in Probability and Statistics).John Wiley&Sons;(2002年7月),ISBN:0471490369;Arup K.Ghose,Vellarkad N.Viswanadhan.Combinatorial Library Design and Evaluation Principles,Software,Tools,andApplications in Drug Discovery.ISBN:0-8247-0487-8)。抗体的特性可以源自抗体序列的经验和理论模型、功能和三维结构(例如，分析可能的接触残基或计算的物理化学特性)，并且可以单一和组合考虑这些特性。

对已知原子结构的抗体的分析已经阐明了抗体结合位点的序列和三维结构之间的关系(Chothia C.等Journal Molecular Biology(1992)227,799-817;Al-Lazikani等Journal Molecular Biology(1997)273(4),927-948)。这些关系暗示，除了VH域中的第三个区域(环)外，结合位点环具有少数主链构象：规范结构之一。已经显示了特定环中形成的规范结构由其大小及环和框架区两者中关键位点处某些残基的存在决定(Chothia等及Al-Lazikani等,加上文)。

可以使用序列-结构关系来预测序列已知，但三维结构未知的抗体中的那些残基，它们在维持其CDR环的三维结构中及因此在维持结合特异性中是重要的。这些预测可以通过比较所述预测与来自引导优化实验的输出来确认。在一种结构方法中，可以使用任何免费可用的或商业包，诸如WAM(Whitelegg,N.R.u.and Rees,A.R(2000)Prot.Eng.,12,815-824)对抗体分子创建理论模型(Chothia等Science,223,755-758(1986))。然后，可以使用蛋白质可视化和分析软件包，诸如Insight II(Accelerys,Inc.)或Deep View(Guex,N.and Peitsch,M.C.Electrophoresis(1997)18,2714-2723)来评估CDR和FR中每个位置处的可能取代。然后，可以使用此信息来进行可能对活性具有最小或有益影响的取代。在CDR、抗体VH或VL域和特定抗体的氨基酸序列内进行取代需要的技术一般是本领域中可得的。可以生成变体序列，其具有可以预测为对活性具有或没有最小或有益影响的取代。

因此，抗TGF-β抗体可以包含限定的CDR组，特别是PET1073G12、PET1074B9和PET1287A10的CDR组，和在CDR组内具有一处或两处取代的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10的CDR组。相关的CDR组在抗体框架区或其它蛋白质支架，例如纤连蛋白或细胞色素B内提供。优选地，采用抗体框架区。

抗TGF-β抗体的重链可以利用人V_H1家族基因。在多个实施方案中，与人V_H1家族基因的种系氨基酸序列相比，重链框架氨基酸序列含有1-12，优选地3-12，且更优选地，3-8处氨基酸差异。在一些实施方案中，重链框架序列是种系序列。在特别优选的实施方案中，重链的抗体框架区可以是来自V_H1家族的人DP-10(V_H1-69)或人DP-88(V_H1-e)。利用人DP-10基因的一些实施方案在残基27、78和94处具有非种系氨基酸。在一些实施方案中，残基27是酪氨酸，残基78是苏氨酸，而残基94是丝氨酸或亮氨酸。在一些实施方案中，轻链利用与种系氨基酸序列相比具有1-5、1-4、更优选地，1-3处氨基酸差异的人Vκ3家族基因。在一些实施方案中，轻链框架序列是种系人V_κ3家族基因序列。在特别优选的实施方案中，轻链框架区可以是人DPK-22(A27)。在一些此类实施方案中，残基2是非种系氨基酸。在一些实施方案中，残基2是苏氨酸。

在一个高度优选的实施方案中，VH域具有SEQ ID NO:2(这称作“PET1073G12VH域”)或SEQ ID NO:12(这称作“PET1074B9VH域”)，或SEQ ID NO:22(这称作“PET1287A10VH域”)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，VL域包含SEQ ID NO:7(这称作“PET1073G12VL域”)或SEQ ID NO:17(这称作“PET1074B9VL域”)、或SEQ ID NO:27(这称作“PET1287A10VL域”)的氨基酸序列。一个实例抗TGF-β抗体由PET1073G12VH域SEQ ID NO:2和PET1073G12VL域SEQ ID NO:7构成。另一个例子由PET1074B9VH域SEQ ID NO:12和PET1074B9VL域SEQ ID NO:17构成。另一个例子由PET1287A10VH域SEQ ID NO:22和PET1287A10VL域SEQ ID NO:27构成。这些或任何其它抗体TGF-β结合位点可以包含在任何期望的抗体分子形式(例如scFv、Fab、IgG1、IgG4、dAb等)内，如本文中别处进一步讨论的。另一个例子是IgG4抗体分子，其包含PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域，优选地还包含相应的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VL域。

例子还有包含PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域、和/或PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VL域的其它IgG4或其它抗体分子，以及在抗体VH域内包含HCDR的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10组、和/或在抗体VL域内包含LCDR的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10组的其它抗体分子。

抗TGF-β抗体可以是结合人TGF-β的所有三种同等型的抗体。此类抗TGF-β抗体可以包含PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH和/或VL域或那些域的抗原结合部分。在一些实施方案中，来自上述项之一的VH域与来自上述项之一的VL域配对以提供抗原结合位点。例如，PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)可以与PET1073G12VL域(SEQ ID NO:7)配对，使得形成包含PET1073G12VH和VL域两者的抗原结合位点。在另一个实施方案中，PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)与PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)配对，使得形成包含PET1074B9VH和VL域两者的抗原结合位点。在另一个实施方案中，PET1287A10VH域(SEQ ID NO:22)与PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)配对，使得形成包含PET1287A10VH和VL域两者的抗原结合位点。在其它实施方案中，PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域与不同于相应的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VL的VL域配对。

类似地，本文中所公开的任何HCDR组可以在这样的VH域中提供，所述VH域单独或与VL域组合在作为特异性抗体使用。VH域可以具有如本文中所公开的HCDR组，并且若这样的VH域与VL域配对，则给该VL域可具有本文中公开的LCDR组。HCDR组和LCDR组的配对可以如本文中对PET1073G12、PET1074B9和PET1287A10抗体公开的那样。VH和/或VL域的框架区可以是种系框架。重链域的框架区可以选自VH-1家族，并且优选的V_H-1框架是DP-10或DP-88框架。轻链的框架区可以选自Vκ3家族，并且优选的此类框架是DPK-22。

一个或多个CDR可以取自本文中公开其序列的VH或VL域，并掺入合适的框架中。这在本文中进一步讨论。对使用本文中所描述的方法获得的抗体的其它CDR和CDR组而言同样适用。

抗体VH域、抗体VL域、HCDR组、LCDR组、CDR组、一个或多个HCDR，例如HCDR3，和/或一个或多个LCR，例如LCDR3，可以在TGF-β拮抗剂中采用。

可以依靠序列改变或突变及筛选方法获得VH和VL域和CDR的变体，包括氨基酸序列在本文中列出且可以在针对TGF-β的特异性抗体中采用者。

可以在本文中所公开的方法中采用本文中明确公开其序列的任何VH和VL域的可变域氨基酸序列变体。特定的变体可以包括一处或多处氨基酸序列变化(添加、缺失、取代和/或插入氨基酸残基)，可以是小于约20处变化、小于约15处变化、小于约10处变化或小于约5、4、3、2或1处变化。可以对一个或多个框架区和/或一个或多个CDR做出改变。

与任何如下所述的特异性抗体竞争或交叉竞争对抗原的结合的人的、人源化的、嵌合的或合成的特异性抗体可以在本文中所公开的方法中使用，所述特异性抗体既结合抗原，又包含特异性抗体抗原结合域、本文中公开的VH和/或VL域、本文中公开的CDR或HCDR3组、或任何这些的变体。例如，使用ELISA和/或通过将特定报告分子加标签于一种抗体(其可以在存在其它不加标签的抗体的情况下检出)，可以在体外容易地测定抗体间的竞争，以实现结合相同表位或重叠表位的特定抗体的鉴定。可以通过运行反向测定法来容易地测定抗体间的交叉竞争，例如，通过反转加标签的和不加标签的抗体以鉴定在两个方向中都阻断结合的配对。

可以使用如下的抗体来拮抗TGF-β，所述抗体包含与PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10抗体分子，特别是PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10scFv和/或IgG4竞争或交叉竞争的抗体的抗原结合位点。在多个实施方案中，抗体是人的、人源化的、嵌合的或合成的抗体。在别的方面，可以使用如下的抗体，其包含与本文中所描述的抗原结合位点竞争或交叉竞争对TGF-β的结合的人的、人源化的、嵌合的或合成的抗体的抗原结合位点，其中人的、人源化的、嵌合的或合成的抗体的抗原结合位点由VH域和VL域构成，且其中VH和VL域包含如本文中所公开的CDR组。

鉴于本文中所公开的信息，本领域中有多种方法可以用于生成针对TGF-β，并且可以与PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10抗体分子、具有CDR的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10组的抗体分子、具有PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10HCDR组的抗体分子、或具有PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10LCDR组的抗体分子竞争或交叉竞争的人的、人源化的、嵌合的或合成的抗体，以用作TGF-β拮抗剂。

可以通过如下方法获得一种或多种能够结合TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的特异性抗体，所述方法包括使抗体文库和TGF-β接触，并选择文库中能够结合所有所述TGF-β的一种或多种特异性抗体。文库可以在噬菌体颗粒的表面上展示，每个颗粒含有编码在其表面上展示的抗体VH可变域，和任选地还有展示的VL域(若存在的话)的核酸。在选择能够结合抗原并在噬菌体颗粒上展示的特异性抗体后，可以从展示所述选择的特异性抗体的噬菌体颗粒取得核酸。这样的核酸可以随后用来生成特异性抗体或抗体VH可变域(和任选地抗体VL可变域)：通过表达从展示所述选择的特异性抗体的噬菌体颗粒的取得核酸序列的核酸。

具有所述选择的特异性抗体的抗体VH域氨基酸序列的抗体VH域可以以分离的形式提供，包含这样的VH域的特异性抗体也可以。可以进一步测试结合TGF-β的所有三种同等型的能力，还有与PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10(例如，以scFv形式和/或IgG形式，例如IgG4)竞争或交叉竞争对TGF-β的所有三种人同等型的结合的能力。

作为TGF-β拮抗剂使用的抗体可以以PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10抗体分子，例如scFv，或优选地IgG4的亲和力，或者以大于上述分子之一的亲和力结合TGF-β1、TGF-β2和/或TGF-β3。有用的抗体可以以PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10抗体分子，例如scFv，或优选地PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10IgG4的效力，或者以大于上述分子之一的效力中和TGF-β1、TGF-β2和/或TGF-β3。

作为TGF-β拮抗剂使用的抗体可以以PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10抗体分子，例如，scFv，或优选地IgG4的效力，或者以大于上述分子之一的效力中和天然存在的TGF-β。可以在适当的条件下比较不同特异性抗体的结合亲和力和中和效力。

作为TGF-β拮抗剂使用的抗体包括这的人的、人源化的、嵌合的或合成的抗体，它们可以以等于或大于由PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域和相应的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VL域形成的TGF-β抗原结合位点的效力的效力中和天然存在的TGF-β。

除了抗体序列外，作为TGF-β拮抗剂使用的抗体可以还包含其它氨基酸，例如形成肽或多肽，诸如折叠域，或赋予分子以除了结合抗原的能力外的另一种功能性特征。特异性抗体可以携带可检测标记物，或者可以与毒素或靶向模块或酶(例如，经由肽键或接头)缀合。

抗原结合抗体包含抗原结合位点。抗原结合位点也可以依靠CDR在非抗体蛋白质支架，诸如纤连蛋白或细胞色素B，等等上的排列提供。Koide等,(1998)Journal of Molecular Biology,284:1141-1151;Nygren等(1997)CurrentOpinion in Structural Biology,第7卷:463-469)。用于工程化改造蛋白质中的新颖结合位点的支架于Nygren等,见上文中已有更为详细的综述。抗体模拟物的蛋白质支架披露于WO00/34784，其描述了包含具有至少一个随机化的环的纤连蛋白III型域的蛋白质(抗体模拟物)。对于用来嫁接一个或多个CDR，例如HCDR组的合适支架，可以由免疫球蛋白基因超家族的任何域成员来提供。支架可以是人或非人蛋白质。

非抗体蛋白质支架的优点在于它可以提供保守框架区中比至少一些抗体分子更小和/或更易制造的抗原结合位点。抗体的小尺寸可以赋予有用的生理学特性，诸如进入细胞、深度渗入组织中或触及其它结构内的靶物，或者在靶抗原的蛋白质空穴内结合的能力。

典型的是具有稳定的主链和一个或多个可变环的蛋白质，其中将一个或多个环的氨基酸序列特定或随机突变以创建具有结合靶抗原的特异性的抗原结合位点。此类蛋白质包含来自金黄色葡萄球菌(S.aureus)的蛋白A、运铁蛋白、四连蛋白、纤连蛋白(例如，第10纤连蛋白III型域)和脂笼蛋白的IgG结合域。其它方法包括合成的“Microbodies”(Selecore GmbH)，其基于环肽(cyclotide)，即具有分子内二硫键的小蛋白质。

除了抗体序列和/或抗原结合位点外，抗体还可以包含其它氨基酸，例如形成肽或多肽，诸如折叠域，或赋予分子以在结合抗原的能力外的另一种功能性特征。抗体可以携带可检测标记物，或者可以与毒素或靶向模块或酶(例如，经由肽键或接头)缀合。例如，抗体可以包含催化位点(例如，在酶域中)及抗原结合位点，其中抗原结合位点结合抗原，由此将催化位点靶向至抗原。催化位点可以抑制抗原的生物学功能，例如通过切割。

虽然如指出的，支架，诸如纤连蛋白或细胞色素B，可以携带CDR(Haan和Maggos,2004BioCentury,12(5):A1-A6;Koide等,见上文;Nygren等,见上文)，但是携带CDR或CDR组的结构一般会属于抗体重链或轻链序列或其实质性部分，其中所述CDR或CDR组所处的位置与由重排的免疫球蛋白基因编码的天然存在的VH和VL抗体可变域的CDR或CDR组对应。可以通过参考Kabat等,1987及其更新，现在在互联网上可用(URL:immuno.bme.nwu.edu或者使用任何搜索引擎寻找“Kabat”)确定免疫球蛋白可变域的结构和位置。

有可能采取单克隆和其它抗体，并使用属于重组DNA技术的技术，来生成保留初始抗体的特异性的其它抗体或嵌合分子。此类技术可涉及连接编码免疫球蛋白可变区的DNA与恒定区，或将抗体的互补决定区(CDR)引入不同免疫球蛋白的恒定区加框架区中。参见例如EP-A-184187、GB2188638A或EP-A-239400，及许多后续文献。生成抗体的杂交瘤或其它细胞可以进行遗传突变或其它变化，这些变化可能改变也可能不改变生成的抗体的结合特异性。

本领域中可用的抗体工程化的其它技术已经使得分离人的和人源化的抗体成为可能。例如，可以生成人杂交瘤，如由Kontermann等(Kontermann R和Dubel Stefan;Antibody Engineering,Springer-Verlag New York,LLC;2001,ISBN:3540413545)描述的。另一种确立的用于生成抗体的技术——噬菌体展示已经详细记载于许多出版物，诸如Kontermann等,见上文，及WO92/01047(下文进一步讨论)。可以使用这样的转基因小鼠来分离针对人抗原的人抗体，在所述转基因小鼠中，使小鼠抗体基因失活并且在功能上用人抗体基因替换，同时保持小鼠免疫系统的其它组分完整(Mendez等,1997)。也可以在其它转基因动物，诸如山羊、牛、绵羊、兔等中生成人抗体(单克隆或多克隆)。

可以使用合成的抗体分子作为TGF-β拮抗剂，所述合成的抗体分子是通过在合适的表达载体内合成并装配的寡核苷酸生成的基因表达而产生的，例如，如由Knappik等,见上文或Krebs等,Journal of Immunological Methods254:67-84(2001)描述的。

完整抗体的片段可以实施结合抗原的功能。结合片段的例子是(i)Fab片段，其由VL、CL、VH和CH1域组成；(ii)Fd片段，其由VH和CH1域组成；(iii)Fv片段，其由单一抗体的VL和VH域组成；(iv)dAb片段(Ward,E.S.等,Nature341,544-546(1989),McCafferty等(1990)Nature,348,552-554)，其由VH域构成；(v)分离的CDR区；(vi)F(ab’)2片段，即一种包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH域和VL域通过容许两个域联合以形成抗原结合位点的肽接头连接(Bird等,Science,242,423-426,1988;Huston等,Proc.Natl.Acad.Sci USA85,5879-5883;1998;(viii)双特异性单链Fv二聚体(PCT/US92/09665)；及(ix)“双抗体”，即通过基因融合构建的多价或多特异性片段(WO/13804);F.Holliger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA906444-6448,1993)。Fv、scFv或双抗体分子可以通过掺入连接VH和VL域的二硫桥来稳定化(Y.Reiter等,Nature Biotech,14,1239-1245,1996)。也可以生成包含与CH3域连接的scFv的微型抗体(minibody)(S.Hu等,Cancer Res.,56,3055-3061,1996)。

dAb(域抗体)是抗体的一种小的单体抗原结合片段，即抗体重链或轻链的可变区(Holt等,2003)。VH dab在羊驼(camelid)(例如，骆驼、美洲驼(llama))中天然存在，可以通过用靶抗原免疫羊驼，分离抗原特异性B细胞，并从个别B细胞直接克隆dAb基因来生成。dAb也可在细胞培养物中生成。其较小的尺寸、良好的溶解度和温度稳定性使得它们在生理学上特别有用，且适合于选择和亲和力成熟。抗体可以是如下的dAb，其包含基本上如本文中所列的VH或VL域，或包含基本上如本文中所列的CDR组的VH或VL域。

在要使用双特异性抗体的情况下，它们可以是常规的双特异性抗体，其可以以多种方式制造(Holliger,P.和Winter G.Current Opinion Biotechnol.4,446-449(1993))，例如，化学或从杂合杂交瘤制备，或者可以是上文提及的任何双特异性抗体片段。双特异性抗体的例子包括BiTE^TM技术的那些抗体，其中可以使用具有不同特异性的两种抗体的结合域，并藉由短的柔性肽将它们直接连接。这在短的单一多肽链上组合两种抗体。可以仅使用可变域在没有Fc区的情况下构建双抗体和scFv，这可能减少抗独特型反应的影响。

与双特异性全抗体形成对比，双特异性双抗体也可以是特别有用的，因为它们容易构建并在大肠杆菌(E.coli)中表达。可以使用噬菌体展示(WO94/13804)从文库容易地选择合适结合特异性的双抗体(和许多其它多肽，诸如抗体片段)。若要使双抗体的一条臂保持恒定，例如具有针对TGF-β的特异性，则可以生成文库，其中另一条臂有所变化，并且选择合适多特异性的抗体。可以通过隆突-进入-空穴工程化生成双特异性全抗体(C.E.B.Ridgeway等,Protein Eng.,9,616-621,1996)。

抗体可以是糖基化的，糖基化或者是天然实现的，或是通过各种真核细胞(例如，CHO或NS0(ECACC85110503)细胞)系统实现的，或者抗体可以是未糖基化的(例如，若通过在原核细胞中表达来生成)。例如，也可以通过抑制岩藻糖基化有意改变糖基化，提高所得抗体的ADCC活性。因而，可以表达抗体，使得使岩藻糖基化最小化或消除岩藻糖基化。

在一些实施方案中，CDR或VH或VL域与本文中列出其序列的规定区域是相同的或高度相似的。可以对CDR和/或VH或VL域做出1至5，优选地1至4或1或2，或3或4处氨基酸取代。与本文中给出其序列的那些高度相似的VH或VL域及CDR和CDR组由各方面涵盖，具有基本上如本文中所列的序列的那些亦然。

一般地，用于携带CDR或CDR组的结构会属于抗体重链或轻链序列或其实质性部分，其中CDR或CDR组位于与由重排的免疫球蛋白基因编码的天然存在的VH和VL抗体可变域的CDR或CDR组对应的位置。可以通过参考Kabat,E.A.等,Sequences of Proteins of Immunological Interest.第4版.USDepartment of Health and Human Services.1987及其更新，现在在互联网上可用(URL:immuno.bme.nwu.edu或者使用任何搜索引擎寻找“Kabat”)确定免疫球蛋白可变域的结构和位置。CDR依照Kabat等限定。CDR也可以为其它支架，诸如纤连蛋白或细胞色素B所携带。

优选地，基本上如本文中所列的CDR氨基酸序列被携带在人可变域或其实质性部分中作为CDR。优选的实施方案是基本上如本文中所列的HCDR3序列，并且优选的是，它们中的每一个被携带在人重链可变域或其实质性部分中作为HCDR3。

采用的可变域可以获自或源自任何种系或重排的人可变域，或者可以是基于已知的人可变域的共有或实际序列的合成的可变域。可以使用重组DNA技术来将CDR序列(例如，CDR3)引入缺乏CDR(例如，CDR3)的可变域的全集中。在本文中已经鉴定出优选的种系框架。

Marks等(Bio/Technology,1992,10:779-783)描述了生成抗体可变域全集的方法，其中将针对可变域区域的5’端处或附近的共有引物，与针对人VH基因的第三框架区的共有引物组合使用，来提供缺乏CDR2的Vκ可变域的全集。Marks等进一步描述了此全集如何可以与特定抗体的CDR2组合。使用类似的技术，可以用缺乏CDR3的VH或VL域的全集改组CDR3衍生的序列，并组合改组的完整的VH或VL域与关联的VL或VH域以提供抗体。然后，可以在合适的宿主系统，诸如WO92/01047或任何后续的若干文献，包括Kay,B.K.,Winter,J.,and McCafferty,J.(1996)Phage Display of Peptides and Proteins:ALaboratory Manual,San Diego:Academic Press的噬菌体展示系统中展示全集，使得可以选择合适的抗体。全集可以由10⁴以上的个体成员，例如，10⁶至10⁸或10¹⁰个成员组成。其它合适的宿主系统包括酵母展示、细菌展示、T7展示、核糖体展示、共价展示，等等。

Stemmer(Nature,1994,370:389-391)也披露了类似的改组或组合技术，该技术是就β-内酰胺酶基因来描述的，但是提到该方法可以用于抗体生成。

另一种备选是生成携带如下CDR的新颖的VH或VL区——使用一种或多种选择的VH和/或VL基因进行随机诱变，以在整个可变域内产生突变，来衍生这样的VH或VL区。此类技术由Gram等Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,89:3576-3580)描述，其使用易错PCR。在优选的实施方案中，可以在HCDR和/或LCDR组内做出一处或两处氨基酸取代。可以使用的另一种方法是对VH或VL基因的CDR区的定向诱变。此类技术由Barbas等,(1994,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,91:3809-3813)和Schier等J.Mol.Biol.263:551-567)披露。鉴于本文中提供的公开内容，技术人员会能够借助本领域中常规的方法，运用此类技术来获得其它抗体。可以对PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域进行突变以提供一种或多种VH域氨基酸序列变体，这些变体可以与一种或多种VL域组合。

VH域可以具有种系序列，在优选的实施方案中是DP-10或DP-88。VL域序列可以具有种系序列，在优选的实施方案中是DPK-22。可以采用PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10HCDR1、HCDR2和HCDR3，或HCDR的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10组中的一项或多项，和/或PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10LCDR1、LCDR2和LCDR3，或LCDR的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10组中的一项或多项。

免疫球蛋白可变域的实质性部分会至少包含三个CDR区，以及其居间的框架区。优选地，所述部分还会包含第一和第四框架区之任一或两者的至少约50%，该50%是第一框架区的C端50%和第四框架区的N端50%。可变域的实质性部分的N端或C端末端的其它残基可以是那些通常与天然存在的可变域区无关的残基。例如，通过重组DNA技术进行的抗体构建可能导致由接头编码的N或C端残基的引入(所述接头是为了便于克隆或其它操作步骤而引入的)。其它操作步骤包括引入接头以连接可变域与其它蛋白质序列，包括免疫球蛋白重链、其它可变域(例如，在双抗体的生成中)或蛋白质标记物。

包含成对的VH和VL域的抗体是优选的，也可以使用基于VH或VL域序列的单一结合域。已知单一免疫球蛋白域，特别是VH域，能够以特异性方式结合靶抗原。在任一单一特异性结合域的情况下，可以使用这些域来筛选这样的互补域：它们能够形成可结合人TGF-β的三种同等型的双域抗体。

这可以使用如WO92/01047中披露的所谓的分层双重组合方法通过噬菌体展示筛选方法来实现，其中使用含有H或L链克隆的个别菌落来感染编码另一条链(L或H)的克隆的整个文库，并依照噬菌体展示技术，诸如那些在所述参考文献中描述的技术选择所得的双链抗体。

抗TGF-β抗体可以进一步包含抗体恒定区或其部分。例如，VL域可以在其C端末端附着于抗体轻链恒定域，包括人C_κ或C_λ链，优选C_κ链。类似地，基于VH域的抗体可以在其C端末端附着于源自任何抗体同等型，例如IgG、IgA、IgE和IgM以及任何同等型亚类，特别是IgG1和IgG4的免疫球蛋白重链的整体或部分(例如CH1域)。IgG4是优选的。IgG4对于一些应用是优选的，因为它不结合补体，效应器功能降低。在期望效应器功能的情况下，IgG1是优选的。也可以通过本领域中已知的方法操作抗体的糖基化状态(诸如通过降低岩藻糖含量)来提高效应器功能。重链可以具有或没有C端赖氨酸残基。在一些实施方案中，也可以使用具有这些特性并且可稳定化可变区的任何合成的或其它恒定区变体。

抗体或其抗原结合片段的不均一制备物可能是有用的。例如，此类制备物可能是具有全长重链的抗体和具有缺乏C端赖氨酸的重链的抗体、具有各种程度的糖基化的抗体、具有衍生化的氨基酸(诸如N端谷氨酸环化而形成的焦谷氨酸残基)的抗体、和/或具有重链和或轻链的脱酰胺化形式的抗体的混合物。

可以对有此需要的个体，优选地以“治疗有效量”(这足以显示对患者的益处)施用包含TGF-β抗体的组合物。这样的益处可以是至少改善特定疾病或病症的至少一种症状。施用的实际量，和施用的速率和时间过程会取决于所治疗疾病的性质和严重性。治疗的规则，例如关于剂量的决定等可以基于临床前和临床研究(其设计完全在本领域技术水平内)确定。

抗体可以通过注射(例如，皮下、静脉内、腔内(例如，在肿瘤切除后)、损伤内、腹膜内或肌肉内)、通过吸入、或者表面(例如，眼内、鼻内、直肠、进入伤口中、在皮肤上)、或口服施用。施用路径可以根据产品的物理化学特征、根据疾病的特殊考虑、根据剂量或剂量间隔或者根据优化效力或使副作用最小化的需要确定。

设想抗TGF-β治疗不需要限于健康护理专业人员的施用。因此，皮下注射(尤其是使用无针装置)可能是合适的。

确切的剂量会取决于许多因素，包括患者的状况和医疗史、抗体(例如，全抗体、片段或双抗体)的确切性质、和对抗体附着的任何可检测标记物或其它分子的性质。典型的抗体剂量会在100μg至1gm(对于系统应用)，和1μg至1mg(对于表面应用)的范围内。通常，抗体会是全抗体，优选的是IgG4同等型。这是成年患者的单次治疗的剂量，其可以针对儿童和婴儿按比例调节，而且还针对其它抗体形式与分子量和活性成比例调节。可以根据临床医生的判断每天、每周两次、每周、每月或以其它时间间隔重复治疗。

抗体通常会以药物组合物的形式施用，所述药物组合物在抗体外还可以包含至少一种组分。在活性剂外，在治疗AMI的方法中使用的药物组合物可以包含药学可接受赋形剂、载体、缓冲液、稳定剂或本领域技术人员公知的其它材料。此类材料应当是无毒的，并且不应干扰活性剂的效力。此类材料可以包括例如，生理学相容的任何溶剂、分散介质、涂层材料、抗细菌和抗真菌剂、等张和吸收延迟剂，等等。药学可接受载体的一些例子是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等等，以及其组合。在许多情况下，会优选的是组合物中包含等张剂，例如，盐、多元醇，诸如甘露醇,山梨糖醇、或氯化钠。药学可接受物质的其它例子是湿润剂或少量辅助物质，诸如湿润或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其延长抗体的保存期或效力。载体或其它材料的精确性质会取决于施用路径，其可以是口服、表面、通过吸入或通过注射，例如静脉内。在一个优选的实施方案中，通过静脉内输注或注射施用抗体。在另一个优选的实施方案中，通过肌肉内或皮下注射施用抗体。

供口服施用的药物组合物可以为片剂、胶囊、粉末或液体形式，例如，其具有惰性稀释剂或可吸收的可食用载体。片剂可以包含固体载体，诸如明胶或佐剂。一般地，液体药物组合物包含液体载体，诸如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包含生理盐水溶液、右旋糖或其它糖类溶液或甘油，诸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。抗体(及其它成分，若想要的话)也可以在硬或软壳明胶胶囊中密封，压缩成片剂，或者直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗剂施用，活性成分可以与赋形剂一起掺入，并且以可摄取的片剂、含服片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆剂、速溶片，等等的形式使用。为了通过不同于胃肠外的施用来施用化合物，可能有必要用某种材料包被化合物，或共施用化合物与某种材料以防止其失活。

对于静脉内注射，或者受累位置处的注射，活性成分会为胃肠外可接受的水溶液形式，其是无热原的，并且具有合适的pK、等张性和稳定性。本领域相关技术人员完全能够使用例如等张媒剂，诸如氯化钠注射液、林格氏注射液、和/或乳酸盐林格氏注射液来制备合适的溶液。根据需要，可以包含防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。

根据要治疗的状况，组合物可以单独或与其它治疗组合同时或序贯施用。

抗体可以配制为液体、半固体或固体形式，诸如液体溶液(例如，可注射或可输注溶液)、分散体或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。优选的形式取决于意图的施用模式、治疗应用、分子的物理化学特性和递送路径。配制剂可以包含赋形剂，或赋形剂的组合，例如：糖、氨基酸和表面活性剂。液体配制剂可以包含较宽范围的抗体浓度和pH。可以通过例如冻干、喷雾干燥、或者通过超临界流体技术进行干燥来生成固体配制剂。

治疗性组合物在制造和贮存条件下通常必须是无菌且稳定的。组合物可以配制为溶液、微乳、分散体、脂质体、或其它适合于高药物浓度的有序结构。如下制备无菌可注射溶液，即在根据需要含有上文所列举的一种成分或成分组合的合适溶剂中掺入需要量的抗体，接着进行过滤灭菌。一般而言，分散体通过将活性化合物掺入无菌媒剂中而制备，所述无菌媒剂含有基础分散介质和来自那些上文所列举的成分的所需其它成分。在供制备无菌可注射溶液用的无菌粉剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其自先前经过无菌过滤的溶液产生含有活性成分加任何别的所需成分的粉末。可以例如通过使用涂层诸如卵磷脂、在分散体的情况下通过维持所要求的粒度、及通过使用表面活性剂来维持适当的溶液流动性。可以通过在组合物中包含延迟吸收的药剂例如单硬脂酸盐和明胶来引起可注射组合物的吸收延长。

在某些实施方案中，抗体组合物的活性化合物可以与会保护该抗体免于快速释放的载体一起制备，诸如受控释放配制剂，包括植入物、经皮贴片和微囊化投递系统。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯、聚(酸)酐、聚乙醇酸、胶原、多正酯(polyorthoester)、和聚乳酸。许多用于制备此类配制剂的方法是有专利的或者本领域技术人员一般已知的。参见例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems(J.R.Robinson编,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978)。

在多个实施方案中，其它治疗方案可以与抗TGF-β抗体的施用组合。联合施用包括使用不同配制剂或单一药物配制剂的共施用，和以任意次序的顺序施用，其中优选地存在这样的时期，该时期中两种(或所有)活性剂同时发挥其生物学活性。

为了预防或治疗心肌梗死的后果，TGF-β拮抗剂的合适剂量会取决于患者的状况、梗死形成的严重性和过程、出于预防还是出于治疗目的施用抗体、先前疗法、患者的临床史和对抗体的响应、和主治内科医生的判断。可以在缺血事件后第0天(例如，在约8、12或24小时内)、第1天、第2天、第3天、第4天、或第5天，优选地，在第0天、第3天、或第5天开始一次性或在一系列治疗里对患者施用拮抗剂。也就是说，在一些实施方案中，在急性心肌缺血发作约120小时、约96小时、约72小时、约48小时内、在约24小时、约12小时内或甚至在约8小时内或更早开始TGF-β拮抗剂的施用。根据状况的类型和严重性，约5mg/kg抗体是对患者施用的初始候选剂量，无论例如通过一次或多次分开的施用，还是通过MI后的连续输注进行。根据上文提及的因素，一种典型的每日剂量可以等于5mg/kg或更小。为了在几天或更长里重复施用，根据状况，维持治疗，直到发生对疾病症状的期望阻抑。抗体的优选剂量会是5mg/kg或更小静脉内施用。如此，可以对患者施用1个或多个约5mg/kg或更小的剂量(或其任何组合)。然而，可能可以使用其它剂量方案。通过常规技术和测定法容易地监测此疗法的进展。

抗TGF-β抗体在与肾素-血管紧张肽-醛固酮系统拮抗剂组合时可用于治疗AMI，肾素-血管紧张肽-醛固酮系统拮抗剂包括但不限于：肾素抑制剂、血管紧张肽转化酶(ACE)抑制剂、Ang II受体拮抗剂(又称为“Ang II受体阻断剂”)、和醛固酮拮抗剂。抗TGF-β抗体在与包括但不限于下组的β-肾上腺素能系统拮抗剂组合时也可用于治疗AMI：阿普洛尔(alprenolol)、布新洛尔(bucindolol)、卡替洛尔(carteolol)、卡维地洛(carvedilol)、拉贝洛尔(labetalol)、纳多洛尔(nadolol)、氧烯洛尔(oxprenolol)、喷布洛尔(penbutolol)、吲哚洛尔(pindolol)、普萘洛尔(propranolol)、索他洛尔(sotalol)、噻吗洛尔(timolol)、阿替洛尔(atenolol)、倍他洛尔(betaxolol)、比索洛尔(bisoprolol)、塞利洛尔(celiprolol)、艾司洛尔(esmolol)、美托洛尔(metoprolol)、和奈必洛尔(nebivolol)。此外，抗TGF-β抗体在与包括但不限于下组的脂质管理剂(lipidmanagement agent)组合时可用于治疗AMI：由洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、瑞舒伐他汀(resuvastatin)组成的他汀类(statins)组、由考来烯胺(chlestyramine)、考来替泊(celestipol)、考来维仑(colesevalam)组成的胆汁酸螯合剂组、由吉非贝齐(gemfibrozil)、非诺贝特(fenofibrate)、氯贝丁酯(clofibrate)组成的纤维酸(fibric acid)组、包括烟酸和Niaspan的组、包括胆固醇降低剂依泽替米贝(ezetimibe)和依泽替米贝和辛伐他汀的组合的组。在另一个方面，抗TGF-β抗体在与包括但不限于下组的抗血小板剂/抗凝血药组合时可用于治疗AMI：阿司匹林(aspirin)、由氯吡格雷(clopidogrel)、普拉格雷(prasugrel)、替卡格雷(ticagrelor)、噻氯匹定(ticlopidine)、和抗凝血药华法林(warfarin)组成的ADP受体抑制剂组。

治疗中使用的抗体的治疗性配制剂可以在可用于静脉内治疗的容器中提供。也可以通过将具有期望纯度的抗体与任选的生理学可接受载体、赋形剂、或稳定剂(包括但不限于那些在Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980)中的)混合来制备配制剂，以冻干配制剂或水溶性形式贮存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵、苯索氯铵；酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；金属复合物；和/或非离子表面活性剂。

依据治疗的具体适应症的需要，配制剂还可含有超过一种活性化合物。优选地，具有互补活性的化合物彼此没有不利影响。或者/另外，组合物可以进一步包含细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、TGF-β靶向药物、抗血管生成剂、和/或保心药。此类分子以对于意图的目的有效的量适当地组合存在。

“细胞因子”是由一种细胞群释放，作为细胞间介质作用于另一细胞的蛋白质的通称。此类细胞因子的例子有淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子中包括生长激素，诸如人生长激素、N-甲硫氨酰人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松驰素；松驰素原；糖蛋白激素类，诸如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和促黄体激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；促乳素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α和-β；穆勒氏(Mullerian)抑制性物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，诸如NGF-β；血小板生长因子；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子(osteoinductive factor)；干扰素，诸如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，诸如巨噬细胞CSF(M-CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)，诸如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；肿瘤坏死因子，诸如TNF-α或TNF-β；及其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。在用于本文时，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质及天然序列细胞因子的生物学活性等效物。

“保心药”是防止或降低与对患者施用药物，诸如抗TGF-β抗体有关的心肌功能障碍(即，心肌病和/或充血性心力衰竭)的化合物或组合物。例如，保心药可以阻断或降低自由基介导的心脏中毒效应和/或预防或降低氧化应激损伤。

活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中（例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊）、在胶状药物投递系统中（例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊）、或在粗滴乳状液中。这些技术公开于Remington’s PharmaceuticalSciences16th edition,Osol,A.编(1980)。

可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子可以包括含有抗体的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质为定型产品的形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括但不限于聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物、及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。要用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这通过过滤流过无菌滤膜容易实现。

可以提供含有如上文所描述的可用于治疗MI的材料的制品，其一般含有容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。“包装插页”包含治疗产品的商业包装中通常包含的用法说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、施用、禁忌证的信息和/或关于使用此类治疗产品的警告。

合适的容器包括但不限于瓶、管形瓶、IV溶液袋、容器、注射器，等等。容器可以由多种材料，诸如玻璃或塑料形成。容器容纳有效抑制TGF-β信号传导的组合物，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有由皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶)。组合物中的至少一种活性成分可以是抗TGF-β抗体。标签或包装插页可以指示组合物用于治疗心肌梗死、急性心肌梗死、或降低心肌梗死的后果。在一个实施方案中，标签或包装插页指示包含抗体的组合物可以在心肌梗死的急性阶段期间施用。

此外，制品可以包含容器，该容器包含抗TGF-β抗体的组合物，和除抗体外的治疗剂。制品可以进一步包含包装插页，其指示可以组合使用第一和第二组合物来治疗心肌梗死。此治疗剂可以是前述部分中描述的任何辅助疗法(例如，抗血管生成剂、抗激素化合物、保心药、和/或哺乳动物免疫功能调节剂，包括细胞因子)。或者/另外，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其含有药学可接受缓冲剂，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲液盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、滤器、针头、和注射器。

为了方便，抗TGF-β抗体可以在试剂盒(即预定量的试剂及用法说明书的包装组合)中提供。另外，可以包含其它添加剂，诸如稳定剂、缓冲剂(例如，封闭缓冲剂或裂解缓冲剂)。特别地，抗体可以以干燥粉末(通常是冻干的)提供，所述干燥粉末包含赋形剂，其在溶解后会提供具有适当浓度的溶液。

在上文发明概述和发明详述中所描述的方法外，也涵盖以下实施方案。治疗患有心肌梗死、急性心肌梗死的患者或者在患者中降低急性心肌梗死的不良后果的方法可以包括在心肌梗死的急性阶段期间对患者施用TGF-β拮抗剂。TGF-β拮抗剂可以选自下组：包含针对一种或多种TGF-β同等型的抗体片段的抗体或蛋白质；TGF-β受体；包含针对一种或多种TGF-β受体的抗体片段的抗体或蛋白质；潜活相关(latency associated)肽；大的潜活TGF-β，即一种抑制蛋白聚糖的TGF-β；促生长素抑制素;甘露糖-6-磷酸；甘露糖-1-磷酸；促乳素；胰岛素样生长因子II；IP-10；含有arg-gly-asp的肽；植物、真菌、或细菌提取物；反义或干扰RNA寡核苷酸；和牵涉TGF-β信号传导的蛋白质。

在优选的实施方案中，TGF-β拮抗剂是人源化抗TGF-β抗体或抗TGF-β抗体的片段或抗原结合位点。TGF-β拮抗剂可以是能够结合并中和TGF-β的超过一种同等型的抗体或抗体片段。抗体可以是包含TGF-β结合部分和剩余部分的嵌合单克隆抗体，所述TGF-β结合部分包含单克隆抗体1D11.16的抗原结合部分，而剩余部分源自一种或多种人抗体。针对TGF-β的超过一种同等型的抗体可以是单克隆抗体1D11.16的人或人源化形式。TGF-β拮抗剂可以是中和人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的抗体或抗体片段。

可以在急性心肌缺血发作的约120、约80、约72、约48、或约24小时内开始TGF-β拮抗剂的施用。在一些例子中，在急性心肌缺血发作的约12小时内开始TGF-β拮抗剂的施用。可以在受心肌梗死影响的组织的实质性巨噬细胞和单核细胞浸润前开始TGF-β拮抗剂的施用。在其它例子中，在以受心肌梗死影响的组织的嗜中性粒细胞浸润为特征的时期内开始TGF-β拮抗剂的施用。此外，在一些例子中，在以受心肌梗死影响的组织的坏死为特征的时期内开始TGF-β拮抗剂的施用。

所述方法还可以包括在心肌梗死的急性阶段期间对诊断为急性心肌梗死的患者施用能够选择性修复TGF-β的期望功能的化合物，例如，消炎药和/或TNF-α拮抗剂。所述方法可以在人和兽医医学中使用，从而患者可以是人或非人哺乳动物。

就TGF-β拮抗剂而言，在一些实施方案中，拮抗剂是如下的抗体，其中和人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，并且包含抗体的抗原结合域，其中所述抗原结合域包含CDR的组HCDR1、HCDR2和HCDR3，且其中所述抗原结合域利用人VH1家族基因，且其中所述HCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQID NO:5、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:25。人VH1家族基因可以是人VH1-2基因，其在一些例子中可以是DP-10或DP-88基因。抗原结合域可以进一步包含CDR的组LCDR1、LCDR2和LCDR3，且其中所述抗原结合域利用人Vκ3家族基因，且其中所述LCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:30。HCDR3和LCDR3可以选自下组：(a)分别为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:10；(b)分别为SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:20；和(c)分别为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:30。

在一些实施方案中，人Vκ3家族基因可以是人VK DPK22基因。VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3可以包含在种系重链框架内，或者VH域的HCDR1,HCDR2和HCDR3在来自种系氨基酸序列的包含多至12处突变的框架内。Vκ域的LCDR1、LCDR2和LCDR3可以包含在种系重链框架内。在一些例子中，Vκ域的LCDR1、LCDR2和LCDR3可以在来自种系Vκ氨基酸序列的包含多至5处突变的框架内。

TGF-β拮抗剂可以是如下的抗体，其中和人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，并且包含抗体的抗原结合域，其中所述抗原结合域利用人VH DP-10基因或人VH DP-88基因，并且包含含有SEQ ID NO:31中的氨基酸序列的FR4氨基酸序列。抗原结合域可以利用人VH DP-10基因或人VH DP-88基因，并且包含CDR的组HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:25，而且进一步包含含有SEQ ID NO:31中的氨基酸序列的FR4氨基酸序列。抗原结合域可以进一步利用人Vκ3家族基因和人Jκ5基因。利用人Vκ3家族基因和人Jκ5基因的抗原结合域可以包含CDR的组LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述LCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:30。

在一些实施方案中，TGF-β拮抗剂中和人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，并且包含抗体的抗原结合域，其中所述抗原结合域包含：(a)SEQ ID NO:3氨基酸序列的HCDR1、SEQ ID NO:4氨基酸序列的HCDR2、SEQ ID NO:5氨基酸序列的HCDR3；(b)SEQ ID NO:13氨基酸序列的HCDR1、SEQ ID NO:14氨基酸序列的HCDR2、SEQ ID NO:15氨基酸序列的HCDR3；或(c)SEQ IDNO:23氨基酸序列的HCDR1、SEQ ID NO:24氨基酸序列的HCDR2、SEQ IDNO:25氨基酸序列的HCDR3。抗原结合域可以进一步包含抗体VL域。抗原结合域可以包含选自下组的LCDR：(a)SEQ ID NO:8氨基酸序列的LCDR1、SEQ ID NO:9氨基酸序列的LCDR2、SEQ ID NO:10氨基酸序列的LCDR3；(b)SEQ ID NO:18氨基酸序列的LCDR1、SEQ ID NO:19氨基酸序列的LCDR2、SEQ ID NO:20氨基酸序列的LCDR3；和(c)SEQ ID NO:28氨基酸序列的LCDR1、SEQ ID NO:29氨基酸序列的LCDR2、SEQ ID NO:30氨基酸序列的LCDR3。在一些例子中，VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3可以包含在种系重链框架，例如人VH1家族框架内。VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3可以在种系人重链框架VH1DP-10或DP-88内。VL域的LCDR1、LCDR2和LCDR3可以在种系轻链框架内。种系轻链框架可以是人Vκ3家族框架。抗原结合域可以进一步包含人Jκ5基因。人Vκ3家族基因可以是VκDPK22基因。

在一些变型中，TGF-β拮抗剂可以是包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)及多至5处突变，或其抗原结合部分的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含具有至多5处突变的PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)，或其抗原结合部分的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含具有至多5处突变的PET1287A10VH域(SEQ IDNO:22)，或其抗原结合部分的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含具有至多5处突变的PET1073G12VL域(SEQ ID NO:7)，或其抗原结合部分的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含具有至多5处突变的PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)，或其抗原结合部分的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含具有至多5处突变的PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)，或其抗原结合部分的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)和PET1073G12VL域(SEQID NO:7)的抗体。TGF-β拮抗剂可以是包含PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)和PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)的抗体。或者，TGF-β拮抗剂可以是包含PET1287A10VH域(SEQ ID NO:22)和PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)的抗体。还涵盖如本文中所描述的其它变型。

SEQ ID NO指参见所附序列表的序列，其构成本公开内容的一部分。虽然方法已经参照其某些实施方案详细描述，但是本领域技术人员会容易想到的是，可以在背离本公开内容或所附权利要求书的范围的前提下进行各种改变及采用等同方案。此外，呈现以下实施例作为方法的各方面的例示，而不应解释为限制性的。

实施例1：抗体纯化

通过蛋白A-Sepharose层析(Goding,J Immunol Meth(1976)42;17)(Pharmacia Fien Chemicals,Uppsala,Sweden)从培养物上清液或腹水纯化单克隆抗体1D11和GC1008。通过添加商业制备的结合缓冲液(BioRad,Richmond,Calif.)增强gamma(γ)1亚类和gamma(γ)4亚类单克隆抗体1D11和GC1008对蛋白A的结合。将抗体用0.05M甘氨酸-HCl及0.15M NaCl缓冲液(pH2.3)从蛋白A-Sepharose洗脱，针对PBS和NaCl缓冲液(pH2.3)透析过夜，针对PBS透析过夜，并于-20摄氏度贮存。将自上清液纯化的gamma(γ)1和gamma(γ)4亚类抗体浓缩，并通过硫酸铵沉淀(50%饱和)部分纯化，之后进行蛋白A-层析。

实施例2：心肌缺血再灌注的大鼠模型中TGF-β抑制剂的效果

将12至14周龄雌性Lewis大鼠分配到5个处理组。在第0天(D0)，所有动物经历心肌缺血，接着是再灌注规程(I/R)。通过将心脏左心室上的左前降冠状动脉短暂结扎60分钟来产生心肌缺血。然后解开结扎，容许心脏缺血部分再灌注。I/R后3或5天开始，通过静脉内(IV)注射施用5mg/kg1D11或对照商品(阴性对照抗体13C4或媒剂)，然后每隔两天再施用，直到第28天。

为了分析风险区(AAR)，将15μm直径微球用黄色荧光染料标记，并注射到心脏的左心室中，之后立即解开左降冠状动脉的暂时结扎(D0)。微球在血液中均匀分布，并且驻留在心脏及其它器官和组织的毛细管中。心脏中的AAR定义为在结扎期期间没有接受任何微球(或血液)的心肌组织区。在第28天，将动物用异氟烷轻微麻醉，并将心率维持于350±50bpm。然后，在长轴视图中实施超声心动图以评估局部和全局心脏功能。在超声心动图显象检查后，用过度剂量的戊巴比妥钠对动物实施安乐死。然后，切出心脏以进行组织学分析。

对AAR评估，随后指配定性得分。从研究分析中剔除具有小的AAR(占LV的小于约20%)或没有AAR的动物。利用组织学方法并利用心脏重量评估LV中的心脏纤维化，并表示为纤维化重量/总LV重量的百分比。然后，通过评估前壁增厚(AWT)，并与风险区中的后壁增厚(PWT)比较来评估局部心脏功能。壁增厚是心缩期时的壁厚与心舒期时的壁厚的差。还通过评估射血分数(EF)和缩短分数(FS)评估全局功能。

每日目测临床观察所见在整个研究期间是不显著的。在图1中，与媒剂和阴性对照抗体13C4相比，1D11施用显著降低LV中纤维化的百分比。无论1D11处理在I/R后3天(D3)[1D11-D3]还是I/R后5天(D5)[1D11-D5]开始，此纤维化降低均发生。与对照13C4处理组相比，在D5时开始1D11处理的组达到了统计学显著性(P<0.05)。

通过I/R后4周时的超声心动图显象评估心脏功能参数，如表1中所看到的。射血分数和缩短分数代表全局心脏功能。AWT、PWT和AWT/PWT(局部壁运动得分)代表局部心脏功能。在正常的啮齿类中，AWT大致等于，且可以大于PWT。由此可见正常动物中的AWT/PWT比率(我们称作局部壁运动得分的)会是≥1。在表1中，正常动物组显示大于PWT的AWT，及1.7±0.2的局部壁运动得分(AWT/PWT)。

表1

+p＜0.05VS.13C4

在I/R后4周时，经历I/R的所有组中的心脏功能小于正常动物组中观察到的心脏功能。AWT和PWT在1D11-D3和1D11-D5组中是相似的(表1和图2)，并且局部壁运动得分在1D11-D3和1D11-D5组中分别是0.91±0.2和1.01±0.15(表1和图3)。进一步值得注意的是，与正常动物值≥1相比，局部壁运动得分与局部功能的最小限度损失一致。相比之下，AWT在阴性对照13C4和媒剂组中明显小于PWT(表1和图2)，且局部壁运动得分在13C4和媒剂组中分别是0.7±0.1和0.51±0.2，这与1D11处理组和正常动物相比与显著损失一致。值得注意的是，与媒剂和阴性对照抗体13C4组相比，1D11处理组中局部心脏功能损失的相对缺乏与这些组中观察到的纤维化降低一致。

虽然1D11处理组中的局部功能与媒剂和13C4组相比有所改善，但是射血分数和缩短分数在这些组间是相似的。这可能可归因于13C4和媒剂组中未梗死的LV的功能代偿。这些组中观察到的PWT升高(与肥大一致)与这种解释相符。此实施例为评估在I/R后第3天或第5天时启动TGF-β拮抗是否会导致梗死中的纤维化降低和改善的心脏功能提供了条件。与媒剂和13C4处理组相比，两个1D11处理组中在LV中的纤维化百分比上有显著的降低。虽然1D11-D3和1D11-D5组中的纤维化水平是相似的，但是1D11-D5组与阴性对照13C4组相比达到统计学显著性(p<0.05)。已经在MI模型中显示了MI后纤维化的形成与TGF-β的上调、经由smad途径的TGF-β信号传导和TGF-β调节的基因有关。啮齿类心脏I/R模型中施用1D11减弱I/R后TGF-β和TGF-β关联基因，包括与纤维化有关的胶原3和纤连蛋白的上调。在1D11施用的情况下观察到的纤维化降低与此模型中1D11对TGF-β介导的纤维化的减弱一致。

1D11处理组中纤维化的降低与心脏局部功能的最小限度损伤一致，而阴性对照13C4和媒剂组显示局部功能的显著损失。AWT、PWT、和局部壁运动得分在1D11-D3和1D11-5组两者中是相似的。这提示了在经1D11处理的动物中纤维化的降低导致了心肌膜的保护(sparing)或挽救(salvaging)，这有助于MI后局部心脏功能的保护。虽然1D11处理组与13C4和媒剂组相比具有改善的局部功能，但是射血分数和缩短分数在组间是相似的。这与心脏在功能上代偿13C4和媒剂组中的局部功能损失的能力一致。此研究的终点是I/R后28天。有可能的是，13C4和媒剂组中的代偿不会在此模型中长期得到维持，并且经1D11、13C4和媒剂处理的动物之间的全局功能差异经过长时间会变得明显。

I/R后第3天或第5天开始的1D11介导的TGF-β拮抗导致心脏纤维化的降低，这在1D11-D5组中达到显著性。与接收阴性对照抗体13C4或媒剂的动物相比，纤维化的降低与改善的局部心脏功能一致，并且提示了经1D11处理的动物中心肌膜的保护或挽救。

实施例3：TGF-β抑制剂施用时机在心肌缺血再灌注的大鼠模型中的效果

在心肌缺血后再灌注(I/R)的大鼠模型中观察1D11(一种TGF-β抑制剂抗体)的不同施用时机对心肌纤维化的影响。在心脏I/R后0、1或5天启动1D11施用。心肌纤维化的降低效果导致的心脏功能的改善，如通过超声心动图显象测量的。

将12至14周龄雌性Lewis大鼠分配到7个不同处理组。所有动物经历心肌缺血，继之以再灌注程序(I/R)。通过将心脏左心室上的左前降冠状动脉短暂结扎60分钟来产生心肌缺血。然后，解开结扎，容许心脏缺血部分的再灌注。I/R后0(再灌注后2小时)、1或5天开始，通过静脉内(IV)注射施用5mg/kg1D11或对照商品(阴性对照抗体13C4或媒剂)，然后每隔两天再施用，直到第28天。

为了分析风险区，将15微米直径微球用黄色荧光染料标记，并注射到心脏的LV中。这在即将解开左降冠状动脉的暂时结扎前完成。微球在血液中均匀分布，并且驻留在心脏及其它器官和组织的毛细管中。心脏中的AAR定义为在结扎期期间没有接受任何微球(或血液)的心肌组织区。

在第28天，将动物用异氟烷轻微麻醉，并将心率维持于350±50bpm。然后，以长轴切面实施超声心动图显象分析局部和全局心脏功能。在超声心动图显象检查后，用过度剂量的戊巴比妥钠对动物实施安乐死。然后，切出心脏，称重，然后处理以进行组织学分析。对AAR指配定性得分。从研究分析中剔除具有小的AAR(占LV的小于约20%)或没有AAR的动物。

利用组织学方法并利用心脏重量评估LV中的心脏纤维化，并表示为纤维化重量/总LV重量的百分比。通过与风险区中的后壁增厚(PWT)比较评估前壁增厚(AWT)来评估局部心脏功能。壁增厚是心缩期时的壁厚与心舒期时的壁厚的差。通过评估射血分数(EF)和缩短分数(FS)评估全局功能。

与媒剂和阴性对照抗体13C4处理组相比，在第0天或第5天开始的1D11施用显著降低LV中的纤维化百分比(图4)。在D1时开始的1D11施用显示了与匹配的13C4或媒剂对照相比纤维化的降低趋势。

表2显示了通过I/R后4周时的超声心动图显象评估心脏功能参数。射血分数和缩短分数代表全局心脏功能。AWT、PWT和AWT/PWT(局部壁运动得分)代表局部心脏功能。在正常的啮齿类中，AWT大致等于，且可以大于PWT。然后，由此可见正常动物中的AWT/PWT比率(我们称作局部壁运动得分的)会是≥1。在表2中，正常动物组显示大于PWT的AWT，及1.7±0.2的局部壁运动得分(AWT/PWT)。

表2

^＊p＜0.05对.媒剂，＋p＜0.05对.13C4，$p＜0.05AWT对PWT

在I/R后4周时，经历I/R的所有组中的心脏功能低于正常动物组中观察到的心脏功能。AWT和PWT在1D11-D0、1D11-D3和1D11-D5组中是相似的(表2和图5)。局部壁运动得分在1D11-D0、1D11-D1和1D11-D5中分别是1.38±0.2、0.79±0.1和0.92±0.18(表2和图3)。与正常动物值≥1相比，局部壁运动得分与局部功能的最小限度损失相符。相比之下，AWT在阴性对照13C4和媒剂组中明显小于PWT(表2和图5)。局部壁运动得分在13C4-D0、13C4-D1、13C4-D5和媒剂组中分别是0.52±0.08、0.58±0.19、0.54±0.12和0.6±0.13(表2和图6)，并且与1D11处理组和正常动物相比与显著损失相符。与媒剂和匹配的阴性对照抗体13C4组相比，1D11处理组中局部心脏功能损失的相对缺乏与这些组中观察到的纤维化降低一致。

与媒剂对照相比，1D11-D5组也显示射血分数和缩短分数的全局心脏功能参数的显著改善(表2)，这与纤维化和局部心脏功能评估一致。然而，与媒剂和匹配的13C4组相比，其它1D11处理组没有显示全局功能的变化。在先前的研究中也观察到，在全局心脏功能上没有显著改善的经1D11处理的动物中，纤维化降低且相对缺乏局部功能损失，其可能是由于匹配的13C4和媒剂组中未梗死的LV的功能代偿，使得此时间点的组间变化难于检测。这些组中观察到的PWT升高(与肥大一致)与这种解释相符。

此实施例在心肌梗死的大鼠模型中比较了心肌梗死后不同时间点时开始的抗TGF-β抗体1D11的生物活性，其中动物经历心肌缺血，然后是再灌注。可能的是，TGF-β在D0、D1时及在D5时在修复应答中发挥不同作用，而且在这些不同时间点时启动的TGF-β拮抗导致不同的应答。1D11-D1组显示趋向纤维化降低和心脏功能改善的趋势。

I/R后第0天、第1天或第5天开始的1D11介导的TGF-β拮抗导致心脏纤维化的降低，这与媒剂和匹配的13C4对照抗体组相比在1D11-D0和1D11-D5组中达到显著性。在1D11-D0和1D11-D5组中，与接收阴性对照抗体13C4或媒剂的动物相比，纤维化的降低与显著改善的局部心脏功能一致，以及1D11-D5组中与媒剂对照相比显著改善的全局心脏功能。这些结果提示了经1D11处理的动物中心肌膜的保护或挽救。

实施例4：TGF-Β抑制剂1D11在心肌缺血后心肌重塑的啮齿类模型中的效果

1D11(一种TGF-β抑制剂)的施用降低纤维化的形成，随后以剂量依赖性方式改善心脏功能。在第0天，将左升冠状动脉结扎60分钟(冠状动脉阻塞或CAO)，然后解开以容许再灌注(冠状动脉再灌注或CAR)。在第5天，IV施用媒剂、1D11和13C4(对照抗体)，并且每3天继续进行，直到第28天(第4周)处死。在CAR后2周和4周时实施超声心动图显象以测定左心室功能。在CAR后4周时，实施末端手术程序(terminal surgical procedure)以使用压力-容积(PV)血流动力学直接测量LV功能。还实施了多巴酚丁胺(dobutamine)应激测试。在完成所有上述程序后，对大鼠实施安乐死，并收集来自缺血和非缺血带的心肌组织以进行病理学分析。使用9只大鼠的亚组以评估梗死大小，并在CAO/CAR后7天时实施安乐死。然后，将心脏灌注并染色。测量风险区和梗死大小，并比较媒剂和1D11(25mg/kg)组。

此实施例的结果指示与媒剂相比，1D11在5mg/kg剂量时显著降低左心室瘢痕体积。令人感兴趣的是，与对照相比，在25mg/kg剂量时，LV瘢痕体积是增加的(图6)。组织学分析表明在5mg/kg剂量的1D11的情况下与瘢痕相邻的区域中凋亡的显著降低。在接受25mg/kg1D11的组中有升高的凋亡(图7)。所有组间与瘢痕相邻的区域中心外膜下间质性纤维化没有差异(数据未显示)。

在第2周和第4周时报告左心室射血分数(LVEF)(全局收缩功能的量度)(图8)。与经媒剂处理的动物相比，第4周时的LVEF在5mg/kg剂量的1D11的情况下显著改善。然而，用25mg/kg1D11处理导致EF的显著降低。这与图6中报告的瘢痕体积数据一致。从第2周到第4周，1D115mg/kg组中LVEF的百分比变化有显著改善(图9)。

与对照组和高剂量的1D11相比，LV等容舒张时间(IVRT)(即舒张功能的测量)在1D115mg/kg组中也显著改善。与假手术动物(sham animal)相比，存在着舒张功能的明显正常化(图10)。以前壁百分比增厚显示的局部壁运动表明，与媒剂组相比1D115mg/kg组中有显著改善(图11)。

左心室舒张期末压体积关系(即通过PV血液动力学评估的舒张功能的测量)表明1D115mg/kg组中显著的改善，其中数据与假手术动物相当(图12)。多巴酚丁胺应激测试指示1D115mg/kg组(数据未显示)中存在着趋向改善的趋势。

较低剂量(5mg/kg)的1D11表现出清楚且显著的有益效果。第一，第4周时的LV瘢痕体积是最低的，表明来自梗死的残留损伤较少。第二，与其它组相比，在瘢痕相邻的区域中有显著较少的凋亡。第三，通过LV射血分数评估的LV功能在此组中显著高于其它组，表明LV功能的最佳挽救作用。最后，这一组是唯一展现LV射血分数在2-4周间的改善的。第4周时LV舒张期末压-容积关系的斜率在此组中是最低的，指示降低的LV僵硬和改善的LV舒张功能。这佐证了IVRT结果(一种舒张功能的超声心动图量度)，后者显示了此组是唯一显示第4周时保护舒张功能的。多巴酚丁胺应激测试显示了趋向心脏功能改善的趋势，尽管与回波数据相比，麻醉和导管插入的固有问题增加了变异性，使得该数据的可靠性降低。对照抗体实验没有显示与经媒剂处理的大鼠的很大差异。

另一方面，高剂量的1D11表现了不良作用。在4周时的瘢痕大于其它组，包括经媒剂处理的组。在相邻的区域中有更多的凋亡。在通过LV射血分数评估LV功能时，它在第4周时低于所有其它组。由此可见，TGF-β拮抗(利用5mg/kg剂量的1D11)有效防止了大鼠中心肌梗死后重塑的不良作用。LV瘢痕体积和凋亡的显著降低与此模型中心脏收缩和舒张功能的改善一致。然而，高剂量的药物对组织学和功能终点引发了相反的不利影响。

实施例5：TGF-β抑制剂1D11对在心肌缺血后再灌注的啮齿类模型中的心肌保护的影响

1D11(一种TGF-β抑制剂)的施用在2种不同剂量下降低纤维化，保护心肌膜，并改善心脏功能。在第0天，降左升冠状动脉结扎60分钟，然后解开以容许再灌注(I/R)。在第5天，IV施用两种不同剂量(1或5mg/kg)的两种不同1D11配制剂(第一和第二配制剂)之任一种、媒剂和13C4(阴性对照抗体)，并每3天继续进行，直到第28天。

为了分析风险区，将用黄色荧光染料标记的15微米直径微球注射到心脏的LV中。这在即将解开左降冠状动脉的暂时结扎前完成。微球在血液中均匀分布，并且驻留在心脏及其它器官和组织的毛细管中。心脏中的AAR定义为在结扎期期间没有接受任何微球(或血液)的心肌组织区。

在第28天，将动物用异氟烷轻微麻醉，并将心率维持于350±50bpm。然后，以长轴切面实施超声心动图显象以评估局部心脏功能。在超声心动图显象检查后，用过度剂量的戊巴比妥钠对动物实施安乐死。然后，切出心脏，称重，然后处理以进行组织学分析。对心脏切片上形态计量并利用心脏重量评估AAR，并表示为AAR重量/总LV重量的百分比。从研究分析中剔除具有小的AAR(小于20%)或没有AAR的动物。

利用组织学方法并利用心脏重量评估LV中的心脏纤维化，并表示为纤维化重量/总LV重量的百分比。通过与风险区中的后壁增厚(PWT)比较评估前壁增厚(AWT)来评估局部心脏功能。壁增厚是心缩期时的壁厚与心舒期时的壁厚的差。

此实施例中的结果表明I/R后4周时，与13C4和媒剂对照相比，来自两种不同配制剂的1和5mg/kg剂量的1D11显著降低LV中的百分比纤维化(图14)。另外，与13C4和媒剂对照相比，来自两种配制剂的两种1D11剂量都显著降低AAR中的百分比纤维化(图15)。重要的是，与对照相比，来自两种配制剂的两种1D11剂量都显著提高了AAR中的心肌膜百分比(图16)。此结果表明I/R后的1D11处理不仅降低纤维化，而且还保护AAR中的心肌膜。

I/R后4周时，与13C4和媒剂对照相比，以局部壁运动得分(AWT/PWT)表示的心脏功能在所有1D11处理组(来自两种配制剂的1和5mg/kg剂量)中显示较小的损失(图17)。

此实施例评估了在心肌缺血后再灌注后5天启动的两种剂量(1和5mg/kg)的来自两种不同配制剂的TGF-β拮抗剂抗体1D11的生物活性。与阴性对照相比，来自两种配制剂的1和5mg/kg1D11剂量都显著降低了纤维化，且更重要的是，保护了AAR中的心肌膜。与这些改善一致的是，与阴性对照相比，局部心脏功能也得到改善。

实施例6：TGF-β抑制剂1D11对在心肌缺血，接着再灌注的啮齿类模型中的TGF-β和相关基因的心脏表达的影响

1D11(一种TGF-β抑制剂)的施用降低TGF-β和相关基因的心脏表达，这与其对心肌重塑、心肌保护和心肌功能的影响一致，如在先前的实施例中观察到的。在第0天，将左升冠状动脉结扎60分钟，然后解开以容许再灌注(I/R)。在第3天，经由IV施用两种不同剂量(5或50mg/kg)的1D11，并且每3天继续进行，直到第7天或第12天(对于接受5mg/kg1D11的动物)，或者直到第12天(对于接受50mg/kg1D11的动物)。另一组经历I/R的动物没有接受任何处理。

根据研究组不同，在第7天或第12天通过过度剂量的戊巴比妥钠对动物实施安乐死。将血液收集到血清分离器管中，并收集血清以分别使用1D11或骨桥蛋白ELISA来分析1D11和骨桥蛋白(1D11对纤维化降低的影响的一种潜在的血清生物标志物)的水平。然后，切出心脏，修剪掉心房和右心室，并经过风险区(在左升冠状动脉结扎期间没有接受血液的心脏区)中心纵向分割左心室。将心室的一半快速冷冻以通过逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析TGF-β和相关基因表达。对于RT-PCR分析，将心室的此部分进一步细分成包含风险区的顶端部分，和没有进行缺血处理的基底部分。将心室的另一半在福尔马林中固定，供后来分析用。通过过度剂量的戊巴比妥钠对一组正常大鼠实施安乐死，并进行血清和心脏收集，如上文所描述的。

接受1D11的动物在血清中显示1D11，而没有接受1D11的I/R组在其血清中没有可检出的1D11(图18)。在接受5mg/kg1D11的动物中，在第7天实施安乐死的动物的1D11血清水平比在第12天实施安乐死的动物中观察到的1D11血清水平高。这是预料之中的，因为在第7天实施安乐死的动物的血清是在其最后一剂1D11后一天收集的，而在第12天实施安乐死的动物的血清在其最后一剂1D11后3天收集的。接受50mg/kg1D11剂量并且在第12天实施安乐死的动物中的血清1D11水平是接受5mg/kg1D11并在同一天实施安乐死的动物的血清1D11水平的约1.5倍。1D11血清水平与剂量相比缺乏比例性，这可能归因于接受高剂量(50mg/kg)1D11的动物中1D11的较快清除。这些数据指示1D11的IV投递导致循环中1D11的剂量依赖性水平，以及可能的1D11对心脏的暴露。

骨桥蛋白是心脏I/R中1D11介导的纤维化调控的一种潜在的血清标志物。血清骨桥蛋白水平在正常动物、没有接受任何处理并且在第12天实施安乐死的I/R动物、和接受两剂5mg/kg1D11并第7天实施安乐死的I/R动物中是相似的(图19)。在接受三剂5mg/kg1D11并在第12天实施安乐死，或三剂50mg/kg1D11并在第12天实施安乐死的I/R动物中有趋向骨桥蛋白水平降低的趋势。

在左心室的包含风险区的顶端部分和未经受缺血处理LV的基底部分中通过RT-PCR分析TGF-β和相关基因的表达。在LV的基底部分中，评估的所有基因的表达水平与正常动物中观察到的表达水平相似。关于心脏基因表达的描述的其余部分聚焦于心室的顶端部分中观察到的变化。

所有TGF-β同等型TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的心脏表达在没有接受任何处理并在第12天实施安乐死的I/R动物中升高。与正常动物相比，TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的表达分别升高约2.3倍、5倍、和6倍(图20-22)。以5mg/kg施用1D11降低了TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的表达(图20-22)。与接受2剂并在第7天实施安乐死的动物相比，接受三剂5mg/kg1D11并在第12天实施安乐死的动物具有TGF-β1和TGF-β2表达的更大降低(图20,21)。在接受两个或三个5mg/kg剂量的1D11的动物中TGF-β3表达有相似的降低(图22)。接受三剂50mg/kg1D11并在第12天实施安乐死的动物也显示所有三种TGF-β同等型的表达降低。然而，TGF-β1和TGF-β2表达的降低稍微不如接受2剂5mg/kg1D11并在第7天实施安乐死的动物中观察到的降低稳健(图19-21)。这些结果展现了1D11对所有TGF-β同等型表达的剂量依赖性阻抑。令人感兴趣的是，与5mg/kg剂量相比，更高的1D11剂量(50mg/kg)所致的对TGF-β表达的阻抑似乎较少。

胶原是一种主要的纤维化组分，并且已知其表达受到TGF-β调节。与正常动物相比，胶原3的心脏表达在没有接受任何处理的I/R动物中升高约14倍。5mg/kg1D11的施用降低胶原3的表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物在胶原3表达上具有更大的降低(图23)。接受50mg/kg1D11的动物也表明胶原3表达的降低，其与在接受两剂5mg/kg1D11的动物中观察到的降低相当。与I/R后心脏纤维化的1D11介导的降低一致，心脏胶原3表达有1D11介导的剂量依赖性降低。与1D11介导的对TGF-β表达的阻抑相似，与5mg/kg剂量相比，更高的1D11剂量(50mg/kg)所致的对胶原3的阻抑似乎较少。

内皮缩血管肽-1(ET-1)是有力的血管收缩剂，其表达受到TGF-β调节。与正常动物相比，ET-1的心脏表达在没有接受任何处理的I/R动物中升高约5.5倍。5mg/kg1D11的施用降低ET-1的表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物具有ET-1表达的更大降低(图24)。三剂5mg/kg1D11几乎使ET-1表达正常化。接受50mg/kg1D11的动物也表现ET-1表达的降低，其与接受两剂5mg/kg1D11的动物中观察到的降低相当。1D11介导的对I/R后ET-1表达的抑制可以帮助受损的心肌膜中的灌注改善，并且有助于I/R后降低的重塑和心肌保护。令人感兴趣的是，与5mg/kg剂量相比，50mg/kg1D11导致对ET-1表达的阻抑似乎较小。

纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)是组织型纤溶酶原激活物的主要抑制剂，并且受到TGF-β调节。升高的PAI-1水平已经被与增加的动脉粥样硬化血栓形成事件和血管疾病联系起来。与正常的动物相比，PAI-1的心脏表达在没有接受任何处理的I/R动物中升高约6倍。5mg/kg1D11的施用降低PAI-1的表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物具有大得多的PAI-1表达降低(图25)。接受50mg/kg1D11的动物显示PAI-1表达的微小降低。可能是1D11介导的I/R后PAI-1表达的降低促成重塑和心肌保护的改善。与5mg/kg剂量相比，50mg/kg1D11剂量降低PAI-1表达的效果似乎远不如5mg/kg剂量稳健。

最近，已经认可内皮-间充质转变可以有助于心脏纤维化。转录因子Snail1和Snail2(Slug)牵涉内皮-间充质转变，而且这些转录因子被TGF-β诱导。与正常动物相比，Snail1和Snail2的心脏表达在没有接受任何处理的I/R动物中分别升高约4倍和3倍。5mg/kg1D11的施用降低了Snail1和Snail2两者的表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物具有大得多的Snail1和Snail2表达降低(图26和27)。三剂5mg/kg1D11似乎使Snail2表达正常化。接受50mg/kg1D11的动物也表现Snail1和Snail2表达降低，其与接受两剂5mg/kg1D11的动物中观察到的降低相当。I/R后Snail1和Snail2表达升高强烈提示内皮-间充质转变在对I/R的修复应答中有助于心脏纤维化。1D11介导的I/R后Snail1和Snail2表达降低可能是一种对观察到的心脏纤维化降低和重塑改善的贡献机制。令人感兴趣的是，与5mg/kg剂量相比，50mg/kg1D11剂量降低Snail1和Snail2表达的效果似乎不如5mg/kg稳健。

在内皮-间充质转变中观察到的间充质细胞标志物a-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。与正常动物相比，心脏表达α-SMA在没有接受任何处理的I/R动物中升高约4倍。5mg/kg1D11的施用了降低α-SMA的表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物具有大得多的α-SMA表达降低(图28)。接受50mg/kg1D11的动物也表现α-SMA表达降低，其与接受两剂5mg/kg1D11的动物中观察到的降低相当。与1D11介导的I/R后Snail1和Snail2降低一致，1D11降低α-SMA的表达。与5mg/kg剂量相比，50mg/kg1D11剂量降低α-SMA表达的作用似乎不如前者稳健。

认为纤连蛋白是上皮-间充质转变的一种标志物，并且其可能是内皮-间充质转变的一种标志物。与正常动物相比，心脏表达纤连蛋白在没有接受任何处理的I/R动物中升高约16倍。5mg/kg1D11施用降低纤连蛋白表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物具有大得多的纤连蛋白表达降低(图29)。接受50mg/kg1D11的动物也表现纤连蛋白表达的降低，其与接受两剂5mg/kg1D11的动物中观察到的降低相当。1D11介导的纤连蛋白降低与1D11介导的内皮-间充质转变标志物Snail1、Snail2和α-SMA降低相当。与5mg/kg剂量相比，50mg/kg1D11剂量降低纤连蛋白表达的效果似乎不如前者稳健。

凋亡促进心脏重塑期间心肌细胞的损失。Bax是一种公认的促凋亡基因，与正常动物相比，心脏表达Bax在没有接受任何处理的I/R动物中升高约1.8倍。5mg/kg1D11的施用降低了Bax的表达，其中与接受2剂1D11的动物相比，接受3剂1D11的动物具有更大的Bax表达降低(图30)。由于样品限制，没有对来自接受50mg/kg1D11的动物的心脏分析Bax表达。1D11介导的Bax表达降低与先前实施例中的观察结果一致，其中在来自接受5mg/kg1D11的I/R动物的心脏中有凋亡的降低，且在接受1和5mg/kg1D11的I/R动物中有升高的心肌保护。

此实施例中所描述的结果表明TGF-β拮抗剂(例如，抗TGF-β抗体)的IV施用导致1D11的剂量依赖性循环水平，以及可能的对心脏的暴露。骨桥蛋白的血清水平可能是1D11介导的心脏纤维化降低的一种标志物。TGF-β和相关基因在I/R中被诱导，并且是I/R后发生的心脏纤维化和重塑的驱动者。I/R后TGF-β拮抗剂抗体1D11的施用介导这些基因表达的降低，这提供了一种关于在1D11治疗下观察到的心脏纤维化降低、心肌保护、重塑的改善和心脏功能的改善的机制。结果还表明涉及内皮-间充质转变的基因在I/R后被诱导，而且内皮-间充质转变可以促进I/R后的心脏纤维化。就我们所知，这是一个新的发现。I/R后的1D11处理可下调这些基因，并且下调内皮-间充质转变对I/R后心脏纤维化的任何贡献。令人感兴趣的是，与50mg/kg1D11剂量相比，5mg/kg1D11剂量似乎导致I/R后TGF-β和相关基因表达的更稳健的降低。

Claims

1.一种减少患者中心肌梗死的不良后果的方法，包括在心肌梗死的急性阶段期间对所述患者施用TGF-β拮抗剂。

2.权利要求1的方法，其中所述心肌梗死是急性心肌梗死。

3.权利要求1的方法，其中在心肌缺血发作的120小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

4.权利要求1的方法，其中在心肌缺血发作的约72小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

5.权利要求1的方法，其中在心肌缺血发作的约48小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

6.权利要求1的方法，其中在心肌缺血发作的约24小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

7.权利要求1的方法，其中在心肌缺血发作的约12小时内开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

8.权利要求1的方法，其中在受所述心肌梗死影响的组织的实质性巨噬细胞和单核细胞浸润前开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

9.权利要求1的方法，其中在以受所述心肌梗死影响的组织的中性白细胞浸润为特征的时期期间开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

10.权利要求1的方法，其中在以受所述心肌梗死影响的组织的坏死为特征的时期期间开始所述TGF-β拮抗剂的施用。

11.权利要求1的方法，其中所述患者是人或非人哺乳动物。

12.权利要求1的方法，其中所述减少患者中心肌梗死的不良后果的方法是保护心肌膜的方法。

13.权利要求1的方法，其中所述TGF-β拮抗剂选自下组：

i)特异性结合一种或多种TGF-β同等型的抗体或抗体片段；

ii)TGF-β受体或其可溶性片段；

iii)特异性结合一种或多种TGF-β受体的抗体或抗体片段；和

iv)反义或干扰RNA寡核苷酸。

14.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括对所述患者施用能够选择性恢复TGF-β的期望功能的化合物。

15.权利要求14的方法，其中所述能够选择性恢复TGF-β的期望功能的化合物是消炎药。

16.权利要求14的方法，其中所述能够选择性恢复TGF-β的期望功能的化合物是TNF-α拮抗剂。

17.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括对所述患者施用ACE抑制剂。

18.权利要求17的方法，其中所述ACE抑制剂选自下组：贝那普利、卡托普利、福辛普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、Transdolapril、赖诺普利、依那普利和Ramparil。

19.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括对所述患者施用血管紧张肽II受体拮抗剂。

20.权利要求19的方法，其中所述血管紧张肽II受体拮抗剂选自下组：依普罗沙坦、替米沙坦、氯沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、坎地沙坦、和缬沙坦。

21.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括对所述患者施用β-肾上腺素能拮抗剂。

22.权利要求1的方法，其中所述β-肾上腺素能拮抗剂选自下组：阿普洛尔、布新洛尔、卡替洛尔、卡维地洛、拉贝洛尔、纳多洛尔、氧烯洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔、索他洛尔、噻吗洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、塞利洛尔、艾司洛尔、美托洛尔、和奈必洛尔。

23.权利要求13的方法，其中所述TGF-β拮抗剂是特异性结合一种或多种TGF-β同等型的抗体或抗体片段。

24.权利要求23的方法，其中所述抗体或抗体片段中和人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3。

25.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含具有至多达5处突变的PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)，或其抗原结合部分。

26.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含具有至多达5处突变的PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)，或其抗原结合部分。

27.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含具有至多达5处突变的PET1287A10VH域(SEQ ID NO:22)，或其抗原结合部分。

28.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含具有至多达5处突变的PET1073G12VL域(SEQ ID NO:7)，或其抗原结合部分。

29.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)，或其抗原结合部分。

30.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含具有至多5处突变的PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)，或其抗原结合部分。

31.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)和PET1073G12VL域(SEQ ID NO:7)。

32.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含PET1074B9VH域(SEQ ID NO:12)和PET1074B9VL域(SEQ ID NO:17)。

33.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含PET1287A10VH域(SEQ ID NO:22)和PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)。

34.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含CDR组HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:25。

35.权利要求34的方法，其中所述VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3在种系重链框架内。

36.权利要求35的方法，其中所述VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3在来自种系氨基酸序列的包含至多达12处突变的框架内。

37.权利要求24的方法，其中所述抗体或抗体片段包含CDR组LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述LCDR3具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:30。

38.权利要求37的方法，其中所述LCDR1、LCDR2和LCDR3在种系重链框架内。

39.权利要求38的方法，其中所述LCDR1、LCDR2和LCDR3在来自种系氨基酸序列的包含至多达5处突变的框架内。

40.权利要求24的方法，其中在心肌梗死的急性阶段期间对所述患者施用TGF-β拮抗剂包括施用每千克患者体重约1mg的剂量。

41.权利要求24的方法，其中在心肌梗死的急性阶段期间对所述患者施用TGF-β拮抗剂包括施用每千克患者体重约5mg的剂量。