CN103191151A - 一种小牛血去蛋白提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，它涉及一种小牛血去蛋白提取物的制备方法。本发明是要解决现有方法会破坏小牛血去蛋白提取物中天然的分子活性并且在提取工艺中引入不必要的外源性无机离子的问题，方法为：一、制备小牛血清；二、热处理；三、超滤；四、纳滤浓缩。本发明在提取工艺中既不使用蛋白酶，保证了天然的分子活性不遭到破坏，同时，在提取工艺中不添加任何化学物质，又克服了引入不必要的外源性无机离子，而且工艺简单，易于生产化。本发明应用于制药领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种小牛血去蛋白提取物的制备方法。
背景技术
牛血去蛋白提取物，是由小牛血中分离得到的一组小分子生物活性物质，含有寡糖、核酸衍生物、氨基酸和小分子肽类等有机物和磷、钙等无机物。小牛血去蛋白提取物能改善氧和葡萄糖的吸收及利用(不依赖于胰岛素)，从而提高ATP的周转，为细胞提供较高的能量。在脑功能降低(低血氧)和能量需求增加(修复，再生)等情况下，本品可增进与能量有关的功能代谢，保持细胞功能，促使供血量增加。适用于脑卒中、脑外伤。周围血管病及腿部溃疡。可用于皮移植、烧伤、烫伤、糜烂、创伤、褥疮的伤口愈合，放射所引起的皮肤、黏膜损伤。
小牛血去蛋白提取物现行的提取方法大致有以下几种工艺方法，一类是较早期工艺路线，在提取工艺中的步骤中使用蛋白酶类，目的是将大分子蛋白水解成小分子肽类，这种工艺虽然可以提高小分子肽的含量，但缺点是，原有的天然小分子肽类也会被酶破坏，降低或是去除原有的生物活性，如国内发明专利CN100374123C、和CN1062135C等，另一类是在分离提取工艺中采用PH值调酸、调碱的方式，利用酸和碱使大分子蛋白变性而去除，再采用超滤法进行分子分级而获得小分子物质，此种工艺的缺点是调酸、调碱过程引入了较多的外源性无机离子，如国内发明专利CN101366727B等。
发明内容
本发明是要解决现有方法会破坏小牛血去蛋白提取物中天然的分子活性并且在提取工艺中引入不必要的外源性无机离子的问题，提供了一种小牛血去蛋白提取物的制备方法。
本发明一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，是按以下步骤进行：一、制备小牛血清：取小牛血，搅拌20～30min，在3000转/分钟的条件下离心15～20min，收集上清液，即得小牛血清；二、热处理：将步骤一得到的小牛血清用水浴加热到80℃，恒温保持15min，然后用水浴冷却至0～30℃，装入容器中，置于-20℃的条件下，冷冻24～28h，再在30～40℃的水浴中融化，然后在14000转/分钟的条件下离心5～10min，收集上清液；三、超滤：依次用截留分子量为100000道尔顿、10000道尔顿和5000道尔顿的超滤器对步骤二得到的上清液进行超滤，收集分子量小于5000道尔顿的超滤液；四、纳滤浓缩：用NF90型纳滤膜对步骤三得到的分子量小于5000道尔顿的超滤液进行浓缩，浓缩至原体积的20％，收集浓缩液，经0.22μm滤膜除菌过滤，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
本发明在提取工艺中既不使用蛋白酶，保证了天然的分子活性不遭到破坏，保留原有生物活性。同时，在提取工艺中不添加任何化学物质，又克服了引入不必要的外源性无机离子，而且工艺简单，易于生产化。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，是按以下步骤进行：一、制备小牛血清：取小牛血，搅拌20～30min，在3000转/分钟的条件下离心15～20min，收集上清液，即得小牛血清；二、热处理：将步骤一得到的小牛血清用水浴加热到80℃，恒温保持15min，然后用水浴冷却至0～30℃，装入容器中，置于-20℃的条件下，冷冻24～28h，再在30～40℃的水浴中融化，然后在14000转/分钟的条件下离心5～10min，收集上清液；三、超滤：依次用截留分子量为100000道尔顿、10000道尔顿和5000道尔顿的超滤器对步骤二得到的上清液进行超滤，收集分子量小于5000道尔顿的超滤液；四、纳滤浓缩：用NF90型纳滤膜对步骤三得到的分子量小于5000道尔顿的超滤液进行浓缩，浓缩至原体积的20％，收集浓缩液，经0.22μm滤膜除菌过滤，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
本实施方式在提取工艺中既不使用蛋白酶，保证了天然的分子活性不遭到破坏，保留原有生物活性。同时，在提取工艺中不添加任何化学物质，又克服了引入不必要的外源性无机离子，而且工艺简单，易于生产化。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同的是：步骤一中搅拌25min。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二的不同的是：步骤一中在3000转/分钟的条件下离心18min。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一的不同的是：步骤二中在14000转/分钟的条件下离心8min。其它与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一的不同的是：小牛血去蛋白提取物溶液制成注射液，制备方法为：将小牛血去蛋白提取物灌装于安瓿中，经湿热灭菌，即得到小牛血去蛋白提取物注射液。其它与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一的不同点是：小牛血去蛋白提取物溶液制成片剂，制备方法为：将小牛血去蛋白提取物溶液经过减压干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉，以小牛血去蛋白提取物粉为主药，以淀粉、蔗糖和硬脂酸镁为辅料；其中小牛血去蛋白提取物粉∶淀粉∶蔗糖∶硬脂酸镁的比例为1.8∶1.0∶1.0∶0.4。其它与具体实施方式一至五之一相同。
通过以下试验验证本发明的有益效果：
试验1、本试验一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，是按以下步骤进行：一、制备小牛血清：取检疫合格的小牛血1000L，搅拌25min，在3000转/分钟的条件下离心18min，收集上清液，即得小牛血清920L；二、热处理：将步骤一得到的小牛血清用水浴加热到80℃，恒温保持15min，然后用水浴冷却至0～30℃，装入容器中，置于-20℃的条件下，冷冻24h，再在30～40℃的水浴中融化，然后在14000转/分钟的条件下离心8min，收集上清液900L；三、超滤：依次用截留分子量为100000道尔顿、10000道尔顿和5000道尔顿的超滤器对步骤二得到的上清液进行超滤，收集分子量小于5000道尔顿的超滤液700L；四、纳滤浓缩：用NF90型纳滤膜对步骤三得到的分子量小于5000道尔顿的超滤液进行浓缩，浓缩至原体积的20％，收集浓缩液140L，经0.22μm滤膜除菌过滤，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
对本试验制备的小牛血去蛋白提取物溶液进行检验，结果显示本试验制备的小牛血去蛋白提取物溶液总固体物含量为5.5％。游离氨基酸含量为每1ml中含1.2mg，符合现有国家标准。
试验2、本试验一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，是按以下步骤进行：一、制备小牛血清：取检疫合格的小牛血1000L，搅拌30min，在3000转/分钟的条件下离心20min，收集上清液，即得小牛血清920L；二、热处理：将步骤一得到的小牛血清用水浴加热到80℃，恒温保持15min，然后用水浴冷却至0～30℃，装入容器中，置于-20℃的条件下，冷冻24h，再在30～40℃的水浴中融化，然后在14000转/分钟的条件下离心10min，收集上清液900L；三、超滤：依次用截留分子量为100000道尔顿、10000道尔顿和5000道尔顿的超滤器对步骤二得到的上清液进行超滤，收集分子量小于5000道尔顿的超滤液700L；四、纳滤浓缩：用NF90型纳滤膜对步骤三得到的分子量小于5000道尔顿的超滤液进行浓缩，浓缩至原体积的20％，收集浓缩液140L，经0.22μm滤膜除菌过滤，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
将本试验制得的140L小牛血去蛋白提取物溶液，放入减压干燥机中，在温度不超过60℃的情况下减压干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉8.08公斤(含水5％)。
处方：
制备方法：将小牛血去蛋白提取物粉、淀粉、蔗糖按照上述配方比例称量后过100目筛，混合均匀，加入淀粉浆，20目筛制粒并干燥，18目筛整粒，混合均匀后加入硬脂酸镁，压片机制片，得片剂。
小牛血去蛋白提取物片的国家标准为氨基氮为6.5mg，总氮为15mg片，对本试验得到的片剂进行化验，每片含总氮为16mg；氨基氮为6.8mg，因此本试验制备的小牛血去蛋白提取物片符合国家标准。
Claims (6)
1.一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物的制备方法按以下步骤进行：一、制备小牛血清：取小牛血，搅拌20～30min，在3000转/分钟的条件下离心15～20min，收集上清液，即得小牛血清；二、热处理：将步骤一得到的小牛血清用水浴加热到80℃，恒温保持15min，然后用水浴冷却至0～30℃，装入容器中，置于-20℃的条件下，冷冻24～28h，再在30～40℃的水浴中融化，然后在14000转/分钟的条件下离心5～10min，收集上清液；三、超滤：依次用截留分子量为100000道尔顿、10000道尔顿和5000道尔顿的超滤器对步骤二得到的上清液进行超滤，收集分子量小于5000道尔顿的超滤液；四、纳滤浓缩：用NF90型纳滤膜对步骤三得到的分子量小于5000道尔顿的超滤液进行浓缩，浓缩至原体积的20％，收集浓缩液，经0.22μm滤膜除菌过滤，即得到小牛血去蛋白提取物溶液。
2.根据权利要求1所述的一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，其特征在于步骤一中搅拌25min。
3.根据权利要求1所述的一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，其特征在于步骤一中在3000转/分钟的条件下离心18min。
4.根据权利要求1所述的一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，其特征在于步骤二中在14000转/分钟的条件下离心8min。
5.根据权利要求1所述的一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物溶液制成注射液，制备方法为：将小牛血去蛋白提取物灌装于安瓿瓶中，经湿热灭菌，即得到小牛血去蛋白提取物注射液。
6.根据权利要求1所述的一种小牛血去蛋白提取物的制备方法，其特征在于小牛血去蛋白提取物溶液制成片剂，制备方法为：将小牛血去蛋白提取物溶液经过减压干燥，制得小牛血去蛋白提取物粉，以小牛血去蛋白提取物粉为主药，以淀粉、蔗糖和硬脂酸镁为辅料；其中小牛血去蛋白提取物粉∶淀粉∶蔗糖∶硬脂酸镁的比例为1.8∶1.0∶1.0∶0.4。
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