CN103181947A - 一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物及其制备方法，4组分按每公斤体重计分别为:虫草粗多糖180～350mg、虫草脂溶性组分0.06～0.82ml、绞股蓝皂苷2～68mg、绞股蓝多糖3～12mg。制备包括：（1）分别提取虫草粗多糖、虫草脂溶性组分、绞股蓝皂苷和绞股蓝多糖：（2）按配伍剂量，制成植物药组分原液和各种临床所用制剂。本发明可明显提高疗效，减少副作用，具有良好的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明属于治疗肝纤维化植物药组分组合物及其制备，特别涉及一种治疗肝纤维化的4组分组合物及其制备方法。
背景技术
我国是世界上慢性乙型病毒性肝炎等肝脏疾病的高发地区，长期以来慢性肝病对我国人民的健康造成重大危害。但是，到目前肝纤维化治疗还是慢性肝病治疗中的一大难点。自上世纪80年代起，上海中医药大学成功创制抗肝纤维化国家中药新药“扶正化瘀胶囊”（国药准字20020073），该药由丹参、虫草菌丝、桃仁、绞股蓝、松花粉、五味子组成，功效为活血祛瘀、益精补虚。多年研究证实扶正化瘀胶囊可有效改善慢性乙型肝炎肝纤维化，肝组织纤维化分期的逆转率（较治疗前下降1期或1期以上）达52％，通过为期2年的临床观察，显示该药可降低肝硬化门脉高压患者的上消化道出血率。
但是目前扶正化瘀胶囊的制剂比较落后，一次服药5颗胶囊，引起部分患者胃肠道反应，虽然已经开发的片剂可以减少胃部不适，但仍然有进一步提高治疗肝纤维化临床疗效的需求。《药理学》记载，桃仁中的苦杏仁苷经肠道消化酶分解后可产生大量的氢氰酸，出现氢氰酸中毒。虽然在临床上从未发生过患者因服用扶正化瘀复方出现中毒的事件，但是如何防止潜在的严重毒副作用非常必要。因此，进一步二次开发扶正化瘀中药复方，在现有逆转肝纤维化52%的基础上再提高疗效，减少毒副作用是仍然需要努力的方向。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物及其制备方法，可明显提高疗效，减少副作用，具有良好的临床应用前景。
本发明的一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物，原料由虫草菌丝和绞股蓝组成。
所述4组分原液的配伍剂量,按每公斤体重计分别为:虫草粗多糖180～350mg、虫草脂溶性组分006～0.82ml、绞股蓝皂苷2～68mg、绞股蓝多糖3～12mg。
优选的按每公斤体重计分别为虫草粗多糖230～250mg、虫草脂溶性组分0.1～0.2ml、绞股蓝皂苷10～30mg和绞股蓝多糖7～8mg。
进一步优选的按每公斤体重计分别为虫草粗多糖240mg、虫草脂溶性组分0.1ml、绞股蓝皂苷20mg和绞股蓝多糖7.3mg。
本发明中的一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物的制备方法，包括：
（1）提取所述的4组分,虫草粗多糖、虫草脂溶性组分、绞股蓝皂苷和绞股蓝多糖：
①虫草脂溶性组分：取虫草菌丝体粉，以20%乙醇水溶液制粒后放入超临界萃取仪的萃取釜 中，萃取条件：温度为45℃,压力为30MPa,时间为2h,流量为35kg/h。分离条件为：第一级分离压力为10MPa,温度为50℃，第二级分离压力为6MPa,温度为40℃。收集分离解析出来的油状物，得到虫草脂溶性组分。
②虫草粗多糖：将经超临界萃取后的虫草菌丝体渣在pH=8的10倍NaOH水溶液中煮沸3小时，共2次，合并后，离心去渣，上清液浓缩，加乙醇至终浓度为75%，温度0-3℃，析出多糖，过滤，洗净干燥
③绞股蓝皂苷：称取绞股蓝药材1kg，加入20倍量的60％乙醇，回流提取2h，过滤。滤液减压浓缩至浸膏状。加30%乙醇至料液比1：3，超声溶解15min，离心，上清液过大孔吸附树脂。取预处理好的HZ-816树脂2L，湿法装柱，用去离子水冲洗至无醇味。将绞股蓝提取液以1/4BV/h流速上柱，以1/2BV/h流速用2BV水冲洗，弃去淋洗液。再在相同流速下，以2BV30%乙醇冲洗，弃去淋洗液。最后以3BV95%乙醇洗脱绞股蓝皂苷，收集95%乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥，得淡黄色固体粉末。绞股蓝皂苷类组分的得率约为1%，其中绞股蓝总皂苷含量约为40%。
④绞股蓝多糖：将③绞股蓝药渣自然晾干。称取药渣500g，以15倍量去离子水回流提取1h，过滤。滤液减压浓缩至料液比1:1。加95%的乙醇900ml，至含醇量约70%，醇沉过夜。过滤，滤饼用95%乙醇两次，烘干，粉碎。得黄色绞股蓝多糖粉末。绞股蓝皂多糖组分的得率约为4%，其中绞股蓝多糖含量约为15%。
（2）按所述配伍剂量，制成组分原液。
所述组分原液应用于肠道的特定部位缓释的制剂，用量根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等调整，可以一次或多次施用。
所述植物药组合物可制成固体制剂，如片剂或胶囊。
所述植物药组合物可制成微胶囊。
研究发现虫草菌丝中的虫草多糖等组分、桃仁中的苦杏仁苷和丹参中的丹参酚酸A、B有显著抗肝纤维化作用。如虫草多糖能促进Ⅰ、Ⅲ型胶原降解，明显降低免疫性肝纤维化大鼠肝脏组织TGF-β1及其TBRI的含量；桃仁中的苦杏仁苷可显著抑制HSC的增殖与胶原基质成分的合成代谢，促进其分解代谢；丹参酚酸B有显著的抗四氯化碳（CCl4）以及二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝纤维化作用，抑制传代肝星状细胞（HSC）增殖及胶原生成，抑制TGF-β1的HSC胞内信号转导，从而减少传代HSC分泌TGF-B1的总量并抑制其活化。而丹参酚酸A可通过显著的抗脂质过氧化损伤作用抑制胶原合成。曾用扶正化瘀方治疗CCl4诱导的已成型的大鼠肝纤维化，发现扶正化瘀方中的各味药物主要有以下特点：1)桃仁是方中抗肝纤维化、促进肝内胶原纤维降解的主药；2)丹参对改善肝功能，促白蛋白合成及降低 血清胆红素含量起主要作用；3)冬虫夏草菌丝是降低血清总胆红素含量的影响因子；4)绞股蓝是该方保护肝细胞、降低血清ALT活性的主药。
本发明从扶正化瘀原方中挑选了具有“扶正”功效的虫草，具有“清热解毒”作用的绞股蓝，从中提取并纯化了4种有效组分：绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖（绞股蓝），虫草粗多糖、虫草菌丝体CO2超临界提取物（虫草菌丝体）。采用均匀设计的方法，对这4种提取组分进行筛选，并用NONMEN法进行分析，筛选出扶正化瘀方的有效组分群最优配伍剂量为：虫草粗多糖（240mg·kg-1）、虫草脂溶性组分（0.1ml·kg-1）、绞股蓝多糖（7.3mg·kg-1）、绞股蓝皂苷（20mg·kg-1）。
有益效果
本发明植物药组分组合物经动物实验具有抗肝纤维化和其他脏器的抗纤维化治疗作用，组合物药物的物质清楚,疗效较原植物药复方有增效的趋势，有利于临床药代动力学和药理学的研究，具有良好的应用前景。
附图说明
以下附图中A组为扶正化瘀原方浸膏组；E组为本发明；
图1为正常组、模型组、A组和E组大鼠肝脏HE染色图（×200）；
图2为正常组、模型组、A组和E组大鼠肝脏天狼猩红染色图（×100）；
图3为正常组、模型组、A组和E组大鼠肝脏胶原沉积面积变化；
图4为正常组、模型组、A组和E组大鼠肝组织Hyp的含量变化；
图5为正常组、模型组、A组和E组大鼠血清ALT活性；
图6为正常组、模型组、A组和E组大鼠血清AST活性；
图7为正常组、模型组、A组和E组大鼠血清Alb含量；
图8为正常组、模型组、A组和E组大鼠血清TBiL含量。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
扶正化瘀复方有效组分复方的抗肝纤维化疗效：
1.1动物：
Wistar雄性大鼠59只，SPF级，体重150±10g，中科院上海实验动物中心提供，许可证号：SCXK(沪)：2007-0005。所有大鼠饲养于上海中医药大学实验动物中心SPF实验室，普通饮 食，自由饮水。
1.2主要试剂：
二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN），购自东京化成工业株式会社，批号：MAL05；柠檬酸，分析纯，批号：F20080916；无水乙酸钠，分析纯，批号：F20080714；柠檬酸三钠（Tri-sodium citrate）,分析纯，批号：F20070110；对二甲基氨基苯甲醛（4-Dimethylamino benzaldehyde）,批号：F20090516；氯氨-T(chloramines-T)，分析纯，批号：T20061130；无水乙醇，分析纯，批号：20090716；二甲苯，分析纯，批号20100123；甲醛（Formal dehyde solution），批号：20071019；异丙醇(Iso-propanol)，分析纯，批号：T20070815；浓盐酸，分析纯，批号：T20090312，以上均购自中国医药集团上海化学试剂公司。中性树胶，批号：60090715,购自上海懿洋仪器有限公司。0.9%氯化钠注射液（Sodium Chloride Injection），批号：090903，购自安徽双鹤药业有限责任公司。戊巴比妥钠（Pentobarbital Sodium，Lot.No.WS20090920,德国分装。羟脯氨酸(hydroxyproline，Hyp)标准品，分析纯，Sigma-Aldrich Chemie GmbH,Germany产品。高氯酸(Perchloric acid)，分析纯，批号:20070807购自上海桃浦化工厂。血清肝功能试剂盒，包括谷丙转氨酶(alanine aminotransamine,ALT)、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、白蛋白（albumin,Alb）、总胆红素(total bilirubin,T.Bil)，均购自南京建成生物工程研究所。
1.3药物：
虫草粗多糖、虫草脂溶性组分、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖同第一部分。扶正化瘀复方的浸膏干粉由上海现代中医药股份有限公司提供，批号：100306。主要质控指标（HPLC测定）：丹参素钠10.48mg/g；腺苷2.5mg/g；丹参酚酸B12.4mg/g；水份：6.9%。应用时稀释为94.5mg/ml的溶液灌胃液。
1.4主要仪器：
FIM20制冰机，荷兰菲利浦公司产品。上菱生化专用冰箱，购自上海上菱公司。低温冰箱（-70℃），Forma scientific公司产品。台式离心机(microfuge lite)，Beckman公司产品。AA-200分析天平，倒置显微镜（37×B）美国Denver仪器公司产品。纯水系统(HPLC/UP),Labconco公司产品。CQX25-12超声波清洗器，上海必能超声有限公司产品。轮转切片机（RM2035）、HI1220烤片机、HI1210恒温水浴锅，LEICA ASP300自动脱水机、LEICA EG1160石蜡包埋机，均购自德国Leica公司。一次成像照相机，Polariod公司产品。XW-80A型旋涡混合器，江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司。ML-902定时恒温磁力搅拌器，上海浦江分析仪器厂生产。pH计（
）,Beckmanwc公司产品。1000μl、200μl、20μl加样器，法国Gilson公司制造。M5多功能酶标仪，美国Molecular Devices公司生产。Precellys24均质器，法国 Bertin公司生产。
2.1模型制备
Wistar雄性大鼠59只，适应环境3天后，用随机数字表的方法随机分为正常组（10只）和造模组（49只）。造模组用0.5％DMN按2ml·kg-1体重腹腔注射，首次注射全剂量的2/3，每天1次，连续注射3d后休息4d，共3周，第4周的前3天分别注射0.5％DMN全量、2/3量和1/2量。正常组大鼠予相同的时间和部位腹腔注射等量的氯化钠注射液。
2.2给药
造模第4周，随机取3只大鼠处死观察肝脏病变情况，证实有肝纤维化改变后将剩余的46只大鼠用随机数字表的方法分为1个模型组（18只）和2个治疗组（A、D），A为扶正化瘀原方浸膏组；E为本发明，每组14只。E治疗组分别用对应的各组组分水溶液按照表1配制剂量，以5ml·kg-1体重灌胃。虫草脂溶性组分由于不能很好溶于水中，且每100g大鼠体重需用量很小，所以用食用油稀释后按0.5ml·kg-1体重另外灌胃。A组给药扶正化瘀浸膏，给药剂量5ml·kg-1体重，正常组和模型组用等剂量的饮用水和食用油灌胃，每天1次共4周。
表1中药组分组灌胃组分提取物配伍剂量
2.3标本留取
实验结束后大鼠禁食不禁水，24h后称取大鼠体重，用3%戊巴比妥钠2ml·kg-1体重的剂量腹腔注射，麻醉后的大鼠完全打开腹腔，如有腹水，以称过重的干棉球吸干液体后称取腹水重量。然后用10ml注射器经下腔静脉采血，4℃下静置2小时后，3000rpm，15min离心，取上清分装于1.5ml离心管，-70℃低温保存。动物取血处死后，取下肝脏和脾脏称其重量记录，然后取约1.0cm×0.8cm×0.3cm大小肝组织2块，于10%中性甲醛缓冲液中固定。
2.4血清生化学检测
ALT活性采用赖氏法；AST活性采用赖氏法；Alb含量采用溴甲酚绿法；TBiL含量采用苯甲酸钠-咖啡因比色法。
2.5肝组织羟脯氨酸（Hydroxyproline，Hyp）含量测定
采用Jamall氏法测定
2.6肝组织学观察
2.6.1染色
甲醛固定的肝组织，24h后逐级酒精脱水，二甲苯透明，56℃石蜡包埋，4μm厚切片，用于HE、天狼猩红染色，光镜观察。
2.6.2肝组织出血坏死程度分级标准
DMN诱导的模型大鼠的肝损伤，以出血坏死为主。自定标准，在光镜（200×）下观察分级。（见表2）
表2肝组织出血坏死程度分级
2.6.3肝组织胶原纤维沉积程度的半定量标准
按照相关文献的半定量标准，观察肝脏纤维化程度。
表3肝组织胶原纤维沉积程度分期
2.6.4肝组织胶原纤维沉积面积图像处理半定量分析
每张天狼猩红染色片分别取四角和中央共5个部位拍摄图片，采用image-pro plus6.1软件计算出每张图片胶原沉积面积，取平均值。
2.7统计学方法
采用SPSS18.0软件统计系统进行统计处理。计量资料以表示，采用ANOVA程序进行单因素方差分析，进行方差齐性检验，并用LSD程序进行两两比较；等级资料用Ridit 法检验。（以α=0.05为显著水准进行统计检验）。
3结果
3.1大鼠一般情况
各组大鼠造模情况：造模4周结束时无大鼠死亡。8周实验结束时正常组大鼠无死亡，模型组死亡2只，A组死亡2只，E组死亡1只，死亡时大鼠精神状态很差，体重下降明显，进食减少，可能系肝衰竭死亡。8周实验结束时发现模型组11只大鼠有腹水，腹水发生率为68.8%。(见表4)
表4各组大鼠死亡及腹水发生情况
3.2各组大鼠体重、肝体比、脾体比比较
与正常组比较,模型组大鼠体重显著降低，脾重明显增加，脾体比增大；与模型组比较，各组大鼠体重均有回复，其中A组的幅度较大，有统计学差异。其余各指标变化在A、E组与模型组间无明显差异。（见表5）
表5各组大鼠肝重、脾重、肝体比、脾体比的比较
| 分组 | N | 体重(g) | 肝重(g) | 脾重(g) | 肝体比 | 脾体比 |
| 正常组 | 10 | 324±23.3 | 8.95±1.02 | 0.71±0.074 | 0.028±0.0019 | 0.0022±0.0003 |
| 模型组 | 16 | 256±43.9＃＃ | 7.54±1.96 | 1.44±0.263＃ | 0.029±0.0040 | 0.0059±0.0017＃ |
| A组 | 12 | 290±36.9* | 8.56±2.01 | 1.34±0.278 | 0.029±0.0043 | 0.0047±0.0011 |
| E组 | 13 | 254±44.6 | 7.30±2.12 | 1.47±0.272 | 0.028±0.0044 | 0.0059±0.0013 |
与正常组比较：＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05
3.3大鼠肝脏病理学观察
3.3.1大体观察
正常组大鼠肝脏颜色鲜红，质嫩软，表面光滑，边缘锐利；脾脏色暗红，质中等。模型组大鼠肝脏质地较硬，色暗红，缘钝，表面粗糙，与正常组相比肝脏体积明显缩小，脾脏明显增大。治疗各组与模型组相比肝脏大小、色泽和质地都有改善，脾脏有不同程度的缩小。
3.3.2肝组织HE染色观察
正常组大鼠肝小叶结构清晰，肝细胞沿肝索由中央静脉向四周呈放射状排列，无变性坏死，肝窦未见狭窄和扩张。与正常组相比，模型组正常结构破坏，汇管区辐凑；肝细胞排列紊乱，虽然肝细胞变性不严重，但是有5例有明显的出血坏死伴炎症细胞浸润，有2例还有明显淤胆；肝窦狭窄。上述各种病理改变在各治疗组也有存在，但是较模型组有不同程度的减轻。各治疗组之间比较，A组肝窦狭窄、肝细胞变性坏死程度较轻，E组出血坏死的例数较多，纤维增生比较明显。（见图1，表6）
表6各组大鼠肝组织出血坏死程度分级
3.3.3肝组织天狼猩红染色观察
观察结果显示，正常组大鼠肝脏仅在汇管区和中央静脉周围有少量胶原纤维沉积。模型组大鼠汇管区扩大肝脏胶原纤维沉积，纤维间隔明显形成，部分包绕形成假小叶。与模型组相比，各治疗组胶原纤维增生、沉积程度明显减轻。（见图2）
3.4各组大鼠肝脏胶原沉积半定量分析
各组大鼠肝脏纤维化按标准半定量分级，并用Ridit进行分析显示，与正常组相比，模型组有显著意义（P＜0.01），各组无明显差异。治疗组中，各组与模型组相比无明显差异。（见表7）
表7各组大鼠肝脏胶原沉积半定量Ridit分析
与正常组比较：＃＃P＜0.01。
3.5各组大鼠肝脏胶原沉积面积图像处理
模型组大鼠胶原沉积面积与正常组相比有明显的增加（P＜0.01），E组有明显的减轻，（P＜0.05）。(见表8，图3)
表8组分配方对大鼠肝脏胶原沉积的影响
与正常组比较：##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05
3.6大鼠肝组织羟脯氨酸含量变化
与同期正常组相比，模型组大鼠肝组织的Hyp含量明显增高（P＜0.01）；与模型组相比，A组大鼠肝组织的Hyp含量明显降低（P＜0.01），E组与模型组相比大鼠肝组织的Hyp含量有明显降低（P＜0.05）。（见表9，图4）
表9组分配方对大鼠Hyp的影响
与正常组比较：＃＃P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
3.7大鼠肝脏生化指标
3.7.1组分配方对肝硬化大鼠血清ALT、AST活性的影响
与同期正常组相比，模型组大鼠血清ALT活性显著升高，（P＜0.01）；药物治疗的各组与模型组相比，A组、E组大鼠血清ALT活性显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。（见表10，图5）。与同期正常组相比，模型组大鼠血清AST活性显著升高，（P＜0.05）；各治疗组与同期模型组相比E组大鼠血清ALT活性显著降低（P＜0.05）。（见表10，图6）
表10组分配方对大鼠肝功能ALT、AST的影响
与正常组比较：＃P＜0.05；＃＃P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
3.7.2组分配方对肝硬化大鼠血清Alb、TBiL活性的影响
与同期正常组相比，模型组大鼠血清Alb活性显著降低（P＜0.01）；予药物治疗的各组与同期模型组相比有不同程度的改善，其中A组有显著统计学意义（P＜0.01），E组对大鼠血清Alb活性的影响无显著改变。与正常组相比，模型组大鼠血清TBiL活性显著升高，（P＜0.05）；予药物治疗的各组与同期模型组相比有不同程度的改善，其中A组大鼠血清TBiL活性都显著降低（P＜0.01），E组对大鼠血清TBiL活性的影响无显著改变。（见表11，图7、8）。
表11组分配方对大鼠肝功能Alb、TBiL活性的影响
与正常组比较：＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型组比较：**P＜0.01。
Claims (7)
1.一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物，按每公斤体重计分别为:虫草粗多糖180～350mg、虫草脂溶性组分0.06～0.82ml、绞股蓝皂苷2～68mg、绞股蓝多糖3～12mg。
2.根据权利要求1所述的一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物，其特征在于：按每公斤体重计，所述的虫草粗多糖230～250mg、虫草脂溶性组分0.1～0.2ml、绞股蓝皂苷10～30mg、绞股蓝多糖7～8mg。
3.根据权利要求1所述的一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物，其特征在于：按每公斤体重计，所述虫草粗多糖240mg、虫草脂溶性组分0.1ml、绞股蓝皂苷20mg、绞股蓝多糖7.3mg。
4.一种治疗肝纤维化的4组分植物药组合物的制备方法，包括：
（1）提取所述的4组分:虫草粗多糖、虫草脂溶性组分、绞股蓝皂苷和绞股蓝多糖：
虫草脂溶性组分：取虫草菌丝体粉，以20%乙醇水溶液制粒后放入超临界萃取仪的萃取釜中，萃取条件：温度为45℃,压力为30MPa,时间为2h,流量为35kg/h,分离条件为：第一级分离压力为10MPa,温度为50℃，第二级分离压力为6MPa,温度为40℃,收集分离解析出来的油状物，得到虫草脂溶性组分；
虫草粗多糖：将经超临界萃取后的虫草菌丝体渣在pH=8的10倍NaOH水溶液中煮沸3小时，共2次，合并后，离心去渣，上清液浓缩，加乙醇至终浓度为75%，温度0-3℃，析出多糖，过滤，洗净干燥；
绞股蓝皂苷：称取绞股蓝药材1kg，加入20倍量的60％乙醇，回流提取2h，过滤,滤液减压浓缩至浸膏状,加30%乙醇至料液比1：3，超声溶解15min，离心，上清液过大孔吸附树脂,取预处理好的HZ-816树脂2L，用去离子水冲洗至无醇味,将绞股蓝提取液以1/4BV/h流速上柱，以1/2BV/h流速用2BV水冲洗，弃去淋洗液,再在相同流速下，以2BV30%乙醇冲洗，弃去淋洗液,最后以3BV95%乙醇洗脱绞股蓝皂苷，收集95%乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥，得淡黄色固体粉末,绞股蓝皂苷类组分的得率为1%，其中绞股蓝总皂苷含量为40%；
绞股蓝多糖：将③绞股蓝药渣自然晾干,称取药渣500g，以15倍量去离子水回流提取1h，过滤,滤液减压浓缩至料液比1:1,加95%的乙醇900ml，至含醇量约70%，醇沉过夜,过滤，滤饼用95%乙醇两次，烘干，粉碎,得黄色绞股蓝多糖粉末,绞股蓝皂多糖组分的得率为4%，其中绞股蓝多糖含量为15%;
（2）按上述配伍剂量，制成植物药组分原液。
5.根据权利要求1所述的4组分植物药组合物，其特征在于：制成应用于肠道的特定部位的制剂，用量根据患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度调整，一次或多次施用。
6.根据权利要求5所述的4组分植物药组合物,其特征在于：所述制剂为片剂或胶囊。
7.根据权利要求6所述的4组分植物药组合物，其特征在于：所述胶囊制成微胶囊。
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| CN112843099A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-05-28 | 中科健康产业集团股份有限公司 | 一种具有润肺补肾功效的虫草菌丝体提取方法 |
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| 刘崇敏,徐列明: "<扶正化瘀复方有效组分群的配伍筛选和验证>", <第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编> * |
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