CN103169670A

CN103169670A - 一种醋酸格拉替雷微球及其制备方法

Info

Publication number: CN103169670A
Application number: CN2013100962882A
Authority: CN
Inventors: 王博; 郑春莲; 刘建; 马亚平; 袁建成
Original assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hybio Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2013-03-22
Filing date: 2013-03-22
Publication date: 2013-06-26
Anticipated expiration: 2033-03-22
Also published as: CN103169670B

Abstract

本发明涉及一种醋酸格拉替雷微球以及制备方法。本发明的制备方法工艺简单，制成的醋酸格拉替雷微球包封率高，质量稳定。

Description

一种醋酸格拉替雷微球及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药用微球及其制备方法，具体涉及一种醋酸格拉替雷微球及其制备方法。

背景技术

醋酸格拉替雷（Glatiramer acetate，缩写为GA）为人工多肽的乙酸盐，其包含四种无规则聚合的天然氨基酸的混合物：L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-赖氨酸和L-酪氨酸。醋酸格拉替雷的平均分子量为5,000-9,000道尔顿。

醋酸格拉替雷（商品名为

）是由以色列梯瓦制药（TEVA）工业有限公司研发制造的，其于1996年获美国FDA核准用于治疗多发性硬化症，目前

有注射用水针和注射用冻干粉针两种产品，均用于皮下注射。

在具有较多多发性硬化症患者的西方国家中,

的疗效与耐受性皆获得十足的肯定。除了许多研究与临床经验证实其能大幅度地减低患者的复发率，改善失能的病况，减少脑部损伤之外，

的副作用发生率少，有助于提升患者的耐受性。

然后，由于现有的

注射剂需每日一次皮下注射给药，其最常见的副作用是注射部位的刺激反应，包括：红斑、疼痛、肿胀、搔痒、水肿、发炎与过敏反应，甚至还有局部轻度硬化症状。注射后立即发生的症状还包括：血管扩张、胸痛、呼吸困难和心悸等。频繁且长期给药及其产生的副作用，给患者带来很多痛苦与不便。

目前，关于醋酸格拉替雷的专利主要集中于其制备方法的开发和研究，例如中国专利CN102844325A、美国专利7,495,072和7,049,399，而关于其剂型的改变却鲜有报道。

微球制剂作为一种新型的给药技术，其既能通过调节和控制药物的释放速度来实现长效的目的，又能保护药物不受体内酶的影响而降解，掩盖药物的不良口味，减少给药次数和药物刺激，降低毒性和不良反应，提高疗效。此外，大多数微球制剂还可以起到靶向治疗的作用。

因此，需要开发新的剂型使醋酸格拉替雷在具有良好治疗效果的同时尽可能地降低副作用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种醋酸格拉替雷微球，其中，各组分的含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：3-6重量%；

乳化剂：25-50重量%；

聚合物载体：40-65重量%；

保护剂：3-7重量%；

以上各组分百分比之和为1。

本发明的另一个目的是提供一种醋酸格拉替雷微球的制备方法。

现有技术中的微球制备方法主要包括：单乳-液中干燥法、复乳化-溶剂挥发法、喷雾干燥法、相分离法等，本发明的醋酸格拉替雷注射用微球的制备方法采用的是W/O/W复乳化-溶剂挥发法，所述方法包括以下步骤：

（1）将醋酸格拉替雷和保护剂加入至注射用水中，搅拌至药物完全溶解，备用。

（2）称取聚合物载体溶解在有机溶剂中，备用。

（3）将步骤（1）和（2）制成的溶液混合，加入乳化剂，制成W/O初乳。

（4）将步骤（3）中的W/O初乳加入到含聚乙烯醇的水溶液中，制成W/O/W复乳。

（5）缓慢搅拌步骤（4）中的W/O/W复乳，挥干有机溶剂，然后经过滤、洗涤、离心收集、冷冻干燥得到醋酸格拉替雷微球。

本发明的又一个目的是用根据本发明的制备方法制成的醋酸格拉替雷微球来制备的醋酸格拉替雷皮下注射制剂，其每三天给药一次，给药剂量为4ml，该4ml注射液中醋酸格拉替雷的含量为56mg-60mg。

本发明的醋酸格拉替雷微球及其制备方法有以下优势：

1）现有技术中的单乳-液中干燥法制备的微球表面往往存在药物的晶体；喷雾干燥法制备醋酸格拉替雷微球时由于聚合物的分子量大，溶液粘度较大，流体难以在剪切力作用下形成液滴，喷雾干燥样品往往成丝状，对辅料选择有很大限制；相分离法制备微球时有较多量有机溶媒残留，病人使用后会有较多不良反应。与之相比，采用W/O/W复乳化-溶剂挥发法制成的微球不具有上述缺点。

2）本发明采用的W/O/W复乳化-溶剂挥发法，工艺简单，可制备出包封率高、质量稳定的注射用缓释微球，病人每隔3天皮下注射一次即可，这显著地降低了用药频率，减少了患者注射部位刺激反应、提高了患者用药的顺应性，因此可更有效地稳定患者的病况，进而进一步降低硬化症的复发频率。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的醋酸格拉替雷微球的扫描电镜图片。

图2为理论释放度曲线以及实施例1-7制备的醋酸格拉替雷微球在0.5h、24h、48h、72h以及72h的累积释放曲线。

图3为8-1批产品0个月和6个月的累积释放百分率。

图4为8-2批产品0个月和6个月的累积释放百分率。

图5为8-3批产品0个月和6个月的累积释放百分率。

具体实施方式

本发明的一个方面，提供了一种醋酸格拉替雷微球，其中，各组分的含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：3-6重量%；

乳化剂：25-50重量%；

聚合物载体：40-65重量%；

保护剂：3-7重量%；

以上各组分百分比之和为1。

本发明的醋酸格拉替雷微球，粒径为1-100μm，包封率为90%-95%，载药量为4.1%-4.4%。

其中，保护剂是指在微球制备领域众所周知的可起到保护多肽或蛋白质的空间构象的多元醇、糖类或表面活性剂，实例为甘露醇、明胶、羟丙甲纤维素（HPMC，黏度不大于10cp）、羧甲基纤维素钠（NaCMC）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）中的一种或两种，优选羟丙甲纤维素。

所述聚合物载体为乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）或聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物（PLGA-PCL），优选PLGA，其中PLGA（poly(lactic-co-glycolic acid)）是由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域；并且PLGA中乳酸-羟基乙酸共聚物需满足以下的条件：分子量8000-31000，乳酸与羟基乙酸的比例为80:20至50:50，优选60:40。

所述乳化剂为聚乙烯醇、泊洛沙姆188、司盘60或司盘80中的任意一种，优选司盘80。

在一个优选的实施方案中，本发明的醋酸格拉替雷微球的各组分含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：3.5-5重量%；

乳化剂：28-45重量%；

聚合物载体：45-62重量%；

保护剂：4-6.5重量%；

以上各组分百分比之和为1。

在一个更优选的实施方案中，本发明的醋酸格拉替雷微球的各组分含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：4.1-4.4重量%；

乳化剂：32-39重量%；

聚合物载体：54-59重量%；

保护剂：4.5-5.8重量%；

以上各组分百分比之和为1。

在一个最优选的实施方案中，本发明的醋酸格拉替雷微球的各组分含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：4.3重量%；

乳化剂：35重量%；

聚合物载体：55.7重量%；

保护剂：5重量%；

以上各组分百分比之和为1。

本发明另一方面，提供了一种醋酸格拉替雷微球的制备方法，所述方法包括：

（2）称取聚合物载体溶解在有机溶剂中，备用。

其中

步骤（1）中的保护剂选自甘露醇、明胶、羟丙甲纤维素（HPMC，黏度不大于10cp）、羧甲基纤维素钠（NaCMC）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）中的一种或两种，优选羟丙甲纤维素。

在步骤（1）中，醋酸格拉替雷和保护剂的加入量的比例以重量比计为5-15:1，优选6-9:1；其中注射用水的加入量没有特殊限定，只要能将醋酸格拉替雷和保护剂完全溶解即可。

在步骤（2）中，所述聚合物载体为乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）或聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物（PLGA-PCL），优选PLGA。在本发明中使用的PLGA需满足以下的条件：分子量8000-31000，乳酸与羟基乙酸的比例为80:20至50:50，优选60:40；并且步骤（2）中的聚合物载体与步骤（1）中的醋酸格拉替雷的加入比例以重量比计为8-15:1，优选为12-13:1。

在步骤（2）中，所述有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、丙酮、或其混合溶剂，优选二氯甲烷或乙酸乙酯。

在步骤（3）中，所述乳化剂为聚乙烯醇，泊洛沙姆188，司盘60或司盘80中的任意一种，优选司盘80；乳化剂的加入浓度为每100ml混合溶液0.1-0.8g乳化剂，优选每100ml步骤（1）和（2）的混合溶液0.2g乳化剂；形成初乳的方法可以为高速搅拌、涡旋或超声，优选使用高速匀质机进行的高速搅拌，转速为7000转/分钟-10000转/分钟，优选9000转/分钟，所述高速匀质机可采用本领域已知的任意型号的高速匀质机，例如型号为ESB-500的高速匀质机。

在步骤（4）中，聚乙烯醇的水溶液的浓度以g/ml计为0.1%-0.5%，优选0.3%；形成复乳的方法可以为高速搅拌、低速搅拌或静置混合，优选使用高速匀质机进行的高速搅拌，转速为5000转/分钟-8000转/分钟，优选6000转/分钟。

在步骤（5）中所述的缓慢搅拌步骤（4）中的W/O/W复乳的时间为3-7小时，进一步地，在离心收集的步骤后，还可以包括加入6%（g/ml）甘露醇溶液进行分散的过程；其中的冷冻干燥设备可采用本领域已知的任意冷冻干燥机，例如LGJ-18A型冷冻干燥机。

本发明的又一个方面，还提供了用根据本发明的制备方法制成的醋酸格拉替雷微球来制备的醋酸格拉替雷皮下注射制剂，其每三天给药一次，给药剂量为4ml，该4ml注射液对应于注射用微球的重量为1.36～1.46g，其对应于醋酸格拉替雷的含量为56mg-60mg。

实施例

为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，应理解，下述实施例意在说明，不对本发明构成限制。

原材料

醋酸格拉替雷（来自深圳翰宇药业股份有限公司，20111109批）

PLGA（购自济南岱罡生物科技有限公司）

羟丙甲纤维素（购自安徽山河药用辅料股份有限公司）

羧甲基纤维素钠（购自安徽山河药用辅料股份有限公司）

聚乙烯醇（购自西安藻露堂药业集团康复医药有限公司）

司盘80（购自西安悦来医药科技有限公司）

聚乙烯吡咯烷酮（购自山东聊城阿华制药有限公司）

甘露醇（购自青岛明月海藻集团有限公司）

明胶（购自沧州市金箭明胶有限公司）

测试方法

粒径采用型号为Mastersizer2000的激光衍射粒度分析仪测定。

载药量和包封率：

精密称取载药微球20mg溶于二氯甲烷（2mL）中，加入5mL去离子水提取药物，涡旋萃取10分钟，用10000转/分钟的速度离心10分钟，吸取上清液，进样20μL，然后用HPLC法分析，按下式计算微球中药物含量（即载药量）：

载药量=实际药量/微球质量；

包封率=实际载药量/理论载药量×100%。

理论载药量=主药量/（主药量+辅料量（乳化剂、载体和保护基））×100%

累积释放度：

精密称定格拉替雷载药微球0.8g(n=4)，分别置于5ml EP管中，加入2ml羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液(pH7.4)，涡旋使微球充分浸润在释放介质中,置于恒温水浴摇床中，在37℃、100次/分钟的振荡速度条件下进行微球的体外释放度测定。分别在0.5、24、48、72小时取出离心管(n=4),用10000转/分钟的速度离心10分钟，弃去全部释放介质,剩余物经冷冻干燥后按上述载药量和包封率的测定方法来测定残留物的含量,计算累积释放率,以累积释放率对时间t作图，获得药物累积释放曲线。

制备实施例1

(1)将6g醋酸格拉替雷和0.5g HPMC加入200ml注射用水中，搅拌使药物完全溶解，备用。

(2)称取70g聚合物载体PLGA（乳酸与羟基乙酸的比例为60:40）溶解在500ml二氯甲烷中。

(3)将(1)和(2)制备溶液混合，加入0.2%（g/ml）司盘80并用匀质机高速搅拌下制成W/O初乳。

(4)将W/O初乳注入含有0.3%（g/ml）聚乙烯醇（PVA）的水溶液15L中，在6000r/min转速下制成W/O/W复乳。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥，得微球冻干产品125.65g。

制备实施例2

(1)将6g醋酸格拉替雷和1g明胶加入200ml注射用水中，搅拌使药物完全溶解，备用。

(2)称取70g聚合物载体PLGA（乳酸与羟基乙酸的比例为50:50溶解在500ml二氯甲烷中。

(4)将W/O初乳注入含有0.3%的聚乙烯醇（g/ml）（PVA）水溶液15L中，在6000r/min转速下制成W/O/W复乳。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品122.36g。

制备实施例3

(2)称取70g聚合物载体PLGA（乳酸与羟基乙酸的比例为80:20）溶解在500ml二氯甲烷中。

(4)将W/O初乳注入含有0.3%（g/ml）的聚乙烯醇（PVA）水溶液15L中，6000r/min转速下制成W/O/W复乳。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品120.0g。

制备实施例4

(1)将6g醋酸格拉替雷和0.5g NaCMC加入200ml注射用水中，搅拌使药物完全溶解，备用。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品124.7g。

制备实施例5

(2)称取70g聚合物载体PLGA（乳酸与羟基乙酸的比例为60:40）溶解在500ml乙酸乙酯中。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品121.29g。

制备实施例6

(2)称取70g聚合物载体PLGA（乳酸与羟基乙酸的比例为75:25）溶解在500ml二氯甲烷中。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品121.1g。

制备实施例7

(2)称取70g聚合物载体PLGA-PCL（乳酸与羟基乙酸的比例为75:25）溶解在500ml二氯甲烷中。

(3)将(1)和(2)制备溶液混合，加入0.2%（g/ml）司盘80并用匀

质机高速搅拌下制成W/O初乳。

(4)将W/O初乳注入含有0.5%（g/ml）的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）水溶液15L中，6000r/min转速下制成W/O/W复乳。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液100ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品124.6g。

制备实施例8

按照实施例1的处方放大三批：8-1、8-2和8-3

(1)将60g醋酸格拉替雷和5g HPMC加入2000ml注射用水中，磁力搅拌使药物完全溶解，磁力搅拌均匀完全溶解，备用。

(2)称取700g聚合物载体PLGA（乳酸与羟基乙酸的比例为60:40）溶解在5000ml二氯甲烷中。

(4)将W/O初乳注入含有0.3%（g/ml）的聚乙烯醇（PVA）水溶液150L中，6000r/min转速下制成W/O/W复乳。

(5)缓慢搅拌上述乳剂4小时，挥干有机溶剂，制备出半固态微球，过滤，用水洗涤3次，离心（3000r/min）收集，用6%甘露醇溶液1000ml分散后，冷冻干燥,得微球冻干产品1223.0g

以上实施例中冻干所得微球微球收率为90～95%，计算公式为：

收率=实际冻干微球样品的重量/制备微球所用主药和辅料的重量总和×100%

测试实施例9——扫描电镜图片

从图1可以看出，根据本发明的方法制成的醋酸格拉替雷微球制剂的球形度良好，粒度较均匀。

测试实施例10——测试载药量，包封率和粒径（参见表1）

表1实施例的载药量、包封率和粒径测定结果

由表1可看出，根据本发明的方法的实施例1-7处方制备的微球载药量以及包封率均表现良好，尤其是实施例1中制成的微球优于其余处方。

测试实施例11——累积释放度的测定

其中理论累积释放度是根据现有上市以色列TEVA公司生产的醋酸格拉替雷注射液普通针剂

批次:P53475）的每日用药剂量设计出的释放度。

具体过程如下：

首先将本发明的醋酸格拉替雷微球制备成注射剂，制备过程如下：

微球制备过程在无菌环境中进行，在根据实施例的方法冻干制备成微球后，根据如下所述的用药规格及载药量将冻干的微球分装至5ml西林瓶中，加塞，压盖即得。每瓶分装量=60mg/载药量。临用前将注射用水注入所述西林瓶中，振摇使微球分散均匀即可。

醋酸格拉替雷针剂

仅用于皮下注射，在大腿、腹部、臀部和上臂皮下注射给药，每次注射剂量为1ml，含药量20mg，每日一次，由此可知该药物的半衰期为24小时，考虑到注射剂量太大容易引起病人不适，因此，本发明的注射用微球的给药量为每三天给药1次，每次皮下注射剂量为4ml，注射用微球的给药量为1.36g（由于载药量及包封率在制备过程中会有所差异，因此，注射用微球的给药量稍有波动（±5%），但是该波动不影响测试的总体效果），其对应于醋酸格拉替雷的含量为56mg-60mg。根据该药的半衰期24小时，理想的缓释药物初始应很快释放以达到有效治疗浓度，24小时释放量应为普通剂型每日用药量的一半，补充由于代谢损失的药量，以维持平稳的血药浓度。如表2所示：

表2理论药物累积释放度

时间	0.5h	24h	48h	72h
					累积释放度	33.3%	66.7%	83.3%	100%

各实施例的累积释放度见表3，累积释放曲线参见图2，相似因子参见表4：

表3理论药物累积释放度

表4各实施例累积释放曲线与理论释放曲线的相似因子f2

由图2、表3和表4可看出本发明的实施例1-7中的微球的累积释放度均与理论累积释放度曲线相似，其中实施例1的相似度最高。说明聚合物PLGA中不同乳酸与羟基乙酸的比例对药物的释放有不同影响。而且，本发明采用次/三天的剂量达到了与现有技术中的给药剂量几乎相同的累积释放度，因此，可代替现有技术中的注射制剂以提高患者用药的顺应性。

测试实施例12——稳定性测试

将实施例8制备的三批样品8-1、8-2和8-3各自在25℃，60%相对湿度的条件下放置1，3，6个月，通过测定样品微球粒径分布范围，含量，杂质含量及释放度的变化考察三批样品的稳定性，结果参见表5和图3、4、5。由结果知，将本发明的方法放大量得到的样品质量稳定，稳定性合格。

表5各批样品的稳定性考察结果

综上，可以看出，本发明采用的W/O/W复乳化-溶剂挥发法，不仅工艺简单，而且可制备出包封率高、质量稳定的微球，因此病人每隔3天皮下注射一次即可，这可显著地降低了用药频率，减少患者注射部位刺激反应、提高患者用药的顺应性，具有良好的商业应用前景。

虽然已参照特定实施方案对本发明进行了说明，但本领域技术人员应认识到的是，在不偏离本发明主旨和范围的情况下，可对所述实施方案进行改变或改进，本发明范围通过所附权利要求书限定。

Claims

1.一种醋酸格拉替雷微球，其中，各组分的含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：3-6重量%；

乳化剂：25-50重量%；

聚合物载体：40-65重量%；

保护剂：3-7重量%；

以上各组分百分比之和为1；

优选地，各组分的含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：3.5-5重量%；

乳化剂：28-45重量%；

聚合物载体：45-62重量%；

保护剂：4-6.5重量%；

以上各组分百分比之和为1；

更优选地，各组分的含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：4.1-4.4重量%；

乳化剂：32-39重量%；

聚合物载体：54-59重量%；

保护剂：4.5-5.8重量%；

以上各组分百分比之和为1；

最优选地，各组分的含量以微球总重量计为：

醋酸格拉替雷：4.3重量%；

乳化剂：35重量%；

聚合物载体：55.7重量%；

保护剂：5重量%；

以上各组分百分比之和为1。

2.根据权利要求1的醋酸格拉替雷微球，其中，保护剂为甘露醇、明胶、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或两种，优选羟丙甲纤维素；所述乳化剂为聚乙烯醇，泊洛沙姆188，司盘60或司盘80中的任意一种，优选司盘80；所述聚合物为乳酸-羟基乙酸共聚物或聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物，优选乳酸-羟基乙酸共聚物，其中乳酸-羟基乙酸共聚物需满足以下的条件：分子量8,000-31,000，乳酸与羟基乙酸的比例为80:20至50:50，优选60:40。

3.根据权利要求1或2的醋酸格拉替雷微球，其粒径为1-100μm，包封率为90-95%，载药量为4.1%-4.4%。

4.一种醋酸格拉替雷微球的制备方法，所述方法包括：

（1）将醋酸格拉替雷和保护剂加入至注射用水中，搅拌至药物完全溶解，备用；

（2）称取聚合物溶解在有机溶剂中，备用；

（3）将步骤（1）和（2）制成的溶液混合，加入乳化剂，制成W/O初乳；

（4）将步骤（3）中的W/O初乳加入到含聚乙烯醇的水溶液中，制成W/O/W复乳；

5.根据权利要求4的制备方法，其中，在步骤（1）中保护剂为甘露醇、明胶、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或两种，优选羟丙甲纤维素。

6.根据权利要求4或5的制备方法，其中，在步骤（1）中醋酸格拉替雷和保护剂的加入量的比例以重量比计为5-15:1，优选6-9:1。

7.根据权利要求4或5的制备方法，其中，在步骤（2）中所述聚合物为乳酸-羟基乙酸共聚物或聚乳酸-羟基乙酸-聚己内酯共聚物，优选乳酸-羟基乙酸共聚物，其中乳酸-羟基乙酸共聚物需满足以下的条件：分子量8000-31000，乳酸与羟基乙酸的比例为80:20至50:50，优选60:40；步骤（2）中的聚合物与步骤（1）中的醋酸格拉替雷的加入比例以重量比计为8-15:1，优选为12-13:1。

8.根据权利要求4或5的制备方法，其中，在步骤（3）中所述乳化剂为聚乙烯醇，泊洛沙姆188，司盘60或司盘80中的任意一种，优选司盘80；乳化剂的加入浓度为每100ml步骤（1）和（2）的混合溶液0.1-0.8g乳化剂，优选每100ml混合溶液0.2g乳化剂；在步骤（3）中形成初乳的方法可以为高速搅拌、涡旋或超声，优选使用高速匀质机进行高速搅拌，转速为1000转/分钟-10000转/分钟，优选9000转/分钟。

9.根据权利要求4或5的制备方法，其中，在步骤（4）中聚乙烯醇的水溶液的浓度以g/ml计为0.1%-0.5%，优选0.3%；形成复乳的方法可以为高速搅拌、低速搅拌或静置混合，优选使用高速匀质机进行高速搅拌，转速为5000转/分钟-8000转/分钟，优选6000转/分钟；在步骤（5）中的离心收集的步骤后，还包括加入以g/ml计的6%甘露醇溶液进行分散的步骤。

10.醋酸格拉替雷皮下注射制剂，含有根据权利要求1或2的醋酸格拉替雷微球，其中醋酸格拉替雷的含量为56mg-60mg。