CN114748428A - 一种高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，公开了一种高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，其包含盐酸卡利拉嗪和聚乳酸‑羟基乙酸共聚物；盐酸卡利拉嗪的含量为20～80％；所述盐酸卡利拉嗪和聚乳酸‑羟基乙酸共聚物在制备微球时溶解所用的有机溶剂为如下组合：苯甲醇和二氯甲烷，或苯甲醇和乙酸乙酯。本发明的盐酸卡利拉嗪微球长效注射剂具有长效缓释的作用，在动物体内可以实现一周到三个月的缓释，能够减少患者给药次数，提高患者的依从性，降低患者家属和国家医疗机构的看护负担。

Description

一种高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体公开了一种高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球及其制备方法。

背景技术

一、精神分裂症及双相情感障碍的发病特征

精神分裂症是(schizophrenia,SCH)是最常见、最复杂且最难做出完整定义的重度精神病，发病率低但患病率高。根据国际精神分裂症试点调查(IPSS)资料：一般人群中精神分裂症发病率在0.2‰～0.6‰，平均为0.3‰^[1]；Tusang等在2011年最新的研究结果显示：全球范围内患病率约为5‰，整体社会负担在各种疾病中的排名为第四位^[2]。根据国家卫生部提供的数字显示中国各类精神疾病患者约一千六百万人，其中精神分裂症患者有七百八十万人，因该病预后不良，约67％精神分裂症患者长期存在明显症状，如阴性症状和认知障碍等^[3]。

此外，在很长时间里，由于国内重视程度不足、诊断水平落后等，双相障碍(dipolar disorder)长期被误诊为单相抑郁或精神分裂症。双相障碍又称躁郁症，在我国被划为重型精神病之一，双相障碍按发作类型可以分为抑郁、躁狂或混合发作，I型是典型的重躁狂重抑郁。WHO 1993年所发表的全球疾病负担研究报告指出，双相障碍位列DALY(国际上推行以有效生命年的减少来评价疾病负担)减少最多的前10位疾病；中国各种疾病DALY减少超过1％的前25位中，双相障碍为第十三位。美国流行病学资料显示，该病的终生患病率为1.2％；中国流行病学数据显示国内双相障碍躁狂症状的发病率为0.042％，而青少年与中年人是高发人群，15岁到30岁是躁郁症的主要发病年龄。双相障碍不只是一种精神类疾病，更可能是器质性病变造成的，本质上是一种生理性疾病，这也意味着靠调节自己的心理或改变想法，并不能缓解、消除病情。双相障碍患者的大脑受损比单相抑郁更严重，复发率很高，很难完全治愈，对健康危害极大。

二、盐酸卡利拉嗪口服制剂

2015年9月17日，美国食品药品监督管理局(FDA)全球率先批准由匈牙利吉瑞大药厂(Gedeon Richter)开发，商品名为

的盐酸卡利拉嗪胶囊，用于治疗成人躁狂发作或躁狂与抑郁混合发作的双相情感障碍Ⅰ型以及精神分裂症。卡利拉嗪(Cariprazine)化学名为：氮-[反式-4-[2-[4-(2，3-二氯苯基)-l-哌嗪]乙基]环己基]-氮,氮-二甲基脲，CAS号为：839712-12-8，专利CN 108586389 A公开了其合成路径。卡利拉嗪是D2和D3受体的部分激动剂，能发挥认知改善效应，并可以减少阴性症状。作为D2受体部分激动剂，卡利拉嗪与阿立哌唑、依匹哌唑在理论上较其他二代抗精神药物有着先天优势，被认为已超越第二代抗精神病药(非典型抗精神病药)。盐酸卡利拉嗪胶囊(商品名为

)，必须每天按时服药，每日一次。

专利CN 107970217 A发明了一种卡利拉嗪口崩片的制备方法。通过活性成分盐酸卡利拉嗪、粘合剂及崩解剂等处方成分压制成片，使得该卡利拉嗪口崩片能够在口腔中迅速崩解、快速溶出，有效防止患者藏药、吐药、提高治疗效果。但是该专利并没有明确说明该崩解时间为多少，且60s内的崩解时间无法满足精神分裂症或者双相障碍患者，他们有充足的时间不配合服药及吐药等；另外该制剂为片剂，仍需每天按时一次或者多次服用，患者顺应性较低，无法满足当前临床需求。

专利CN 110769815 A发明了一种口服的盐酸卡利拉嗪固体制剂，用于以低于每日给药剂量调释递送卡利拉嗪，该药物组合物包含有效剂量的卡利拉嗪和至少一种释放调节剂，该释放调节剂适合于降低C_max并且将AUC维持在有效和可耐受的治疗每日剂量的范围内，该发明能够实现14天给药一次，但是该药物组合物的高卡利拉嗪含量在体内释放时易引起局部浓度过高从而可能引起不必要的副反应及毒副作用；另外该释放调节剂包括至少一种亲水性或疏水性聚合物，所占比为15％-75％，还包括单独或者任意组合的赋形剂，多种化学成分易导致对机体的刺激性；而口服制剂的形式包括片剂、胶囊、颗粒、粉末等也无法避免精神分裂患者或者情感障碍患者不配合服药的情况发生。

盐酸卡利拉嗪在水中的溶解度(1mg/mL)较小，目前市售盐酸卡利拉嗪大部分为口服制剂，长效制剂较少，针对卡利拉嗪的适用症而言，精神疾病患者服用药物的次数越少越好，因此盐酸卡利拉嗪长效制剂的开发很有必要。

三、盐酸卡利拉嗪长效制剂

精神分裂症一般治疗周期长，患者经常存在拒绝服药，不按节律服药情况，患者顺应性差，使得病人得不到有效的治疗致使病情恶化或者重新住院。常用的解决方法是监督，这样势必增加患者家属和社会医疗机构的看护负担。因此开发一种能够满足精神疾病患者用药需求、延长给药间隔、减少给药次数、长时间维持有效的血药浓度的缓释制剂是极其必要的，缓释制剂不仅能够够延长患者给药时间，且与普通制剂相比释药平缓，能够有效避免血药浓度的明显波动，减少血药“峰谷”现象，从而减少或避免因血药浓度过高引发的不良反应或毒副作用。

专利CN 108261394 A发明了一种盐酸卡利拉嗪注射制剂，该制剂为盐酸卡利拉嗪混悬水溶液，盐酸卡利拉嗪的浓度较高，通过调整粒径分布实现1-6周长效作用。但是该混悬性注射剂需通过加入稳定剂、助悬剂等维持稳定性，长时间的放置易造成该混悬制剂的不稳定、粒径变大及可注射性变差等问题。

CN 107049932 A发明了一种小分子药物原位相变凝胶缓释系统及其制备方法，该发明主要通过一种简单的方法将磷脂、司盘、药物活性成分及不同浓度的乙醇溶液制备成磷脂司盘缓释制剂，其制剂生物相容性良好、能够延长释放时间。但是凝胶剂在贮存过程中由于遇水即发生固化易对溶液的稳定性产生影响；原位相变凝胶在注射部位易引起局部浓度过高、乙醇等有机溶剂导致刺激性；另外，专利中表明该制剂虽然可以抑制突释，但半衰期最长也达不到一周，仍然无法满足精神疾病患者需要减少给药次数、增加患者依从性等方面的需求。

四、微球

微球为药物溶解或分散于高分子材料中(生物可降解)形成的微小球体或类球体。长效缓释微球能显著延长药物制剂的释放和作用时间，减少用药次数；长时间提供平稳血药浓度，避免过高达峰药物浓度引发的副作用。精神病患者的治疗周期较长，患者经常存在拒绝服药和漏服药情况，常用的解决方法是加强监督，在特殊情况下还要施加强制措施，患者服药顺应性差。与口服相比，精神类药品长效注射制剂可减少给药次数，一周到几个月注射一次，提高患者用药依从性，减轻监护人的负担。

制备微球常用的方法主要有乳化-溶剂挥发法、喷雾干燥法、相分离法、超临界流体法、超声雾化法及电喷射法等。微球的制备方法一般根据药物及载体材料的理化性质、对微球的质量要求等进行选择，并对处方工艺加以改进，以获得性能优异的载药微球，其中以乳化-溶剂挥发法最为常用。

乳化-溶剂挥发法是将药物溶解、分散或乳化于含有骨架材料的溶剂中，然后将溶剂移除，形成微球。常用有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿、甲苯或甲醇等，乳化-溶剂挥发结束时，如有机溶剂未能完全移除则会残留在微球内部，不但会影响微球的理化性质，引起微球聚集，而且超出限度会对安全性构成威胁，所以各国药典对药物制剂的有机溶剂残留量都有严格的要求。目前涉及微球制剂的专利中，原料药多为难溶性药物，在多种溶剂中溶解度较小，主要溶剂包括卤代烃、脂肪酸酯及芳香烃，卤代烃主要包括二氯甲烷、氯仿、氯乙烷、氟烃等；脂肪酸酯主要包括乙酸乙酯、乙酸丁酯等；而芳香烃主要包括苯、甲苯、苯甲醇等，专利中多采用上述一种或者多种溶剂的混合溶剂溶解微球制剂中的原料药及生物可降解高分子材料。

已授权专利CN 101653422 B提供了一种利培酮缓释微球包括其制备方法和用途。该微球含有利培酮或9-羟基利培酮或其盐和未封端的丙交酯-乙交酯共聚物，所制备微球载药量高、体内无突释。目前制备利培酮微球通常使用以下一种或几种溶剂混合：二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、环己烷、苯甲醇等。而该专利实施例中所体现的有机溶剂均为二氯甲烷，我们知道卤代烃毒性较大以及具有潜在的致癌性，在最终产品中残留卤代烃对人体是十分不利的，而且在制备过程中，二氯甲烷的挥发也会对实验人员的身心健康产生影响，因此控制的该制剂的质量合格需要严格监管及把控，无疑对药企及监督部门提出了更高的要求。

已授权专利CN 103338752 B同样提供了一种利培酮微球，该微球制剂包含利培酮或9-羟基利培酮或其盐、以及两种封端/未封端的丙交酯-乙交酯共聚物，该发明适合大规模工业生产，质量稳定。同样在实施例中所用溶剂均为二氯甲烷，其潜在致癌性同样无法忽略。专利CN 106822043 A公开了一种利培酮缓释组合物及其制备方法，该发明包括利培酮、水难溶性聚合物和释放调节剂，该释放调节剂包括有机亲油性物质(脂肪酸、脂肪酸酯、油脂中的至少一种)和有机亲水性物质(醇、糖、氨基酸、蛋白、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种)，从而保证该微球制剂无明显释放延迟期或突释，具有良好的缓释性能。而从实施例中可知，该微球的制备所用有机溶剂多为氯仿、二氯甲烷、且有实施例提到二氯甲烷苯甲醇混合溶剂、二氯甲烷乙酸乙酯混合溶剂，同样卤代烃的毒性及潜在致癌性也不容忽视。相比卤代烃，苯甲醇及乙酸乙酯均为3类溶剂，基本无毒，但是在该微球的制备过程中均有释放调节剂的加入，因此即使通过增加无毒溶剂的用量降低卤代烃的含量，释放调节剂的使用对于人体也有一定影响，在保证缓释的前提下，微球制剂辅料添加的越多，质量越难控制、毒性也是越需要探讨的内容。

已授权专利CN 105169366 B公开了一种醋酸曲普瑞林微球的制备方法。该制剂减少了由于突释作用大导致的药物不良反应，制备出的微球可平稳释放28天。在实施例中提到乙酸乙酯、二氯甲烷、苯甲醇乙酸乙酯或者苯甲醇二氯甲烷作为混合溶剂，通过乳化-溶剂挥发法制备微球，如实施例1理论载药量为40％，实测载药量为10.3％，1天的突释量为9％，虽然微球孔洞连续完整，且可以平稳释放28天，但是理论载药量和实际载药量相差较大，原料利用率较低，且第一天突释量较高，体内血药浓度不易控制，因此仍需要进一步研究考察以改善上述现象。

已授权专利CN 104107165 B提供了一种艾塞那肽微球制剂的制备方法及其应用。该微球制剂成分包括氨基酸、脂肪族聚酯化合物和微球保护剂，采用乳化溶剂挥发法制备微球，所应用的溶剂包括二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氧杂环己烷、四氢呋喃、甲基乙基酮、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇及其混合物或其两种混合物。在具体实施例中提到二氯甲烷甲醇以及二氯甲烷乙酸乙酯混合溶剂，所制备微球包封率在90％以上，粒径均一，且艾塞那肽微球各成分含量均在发明范围内。

盐酸卡利拉嗪为二代抗精神疾病药物，一项发表于第28届欧洲神经精神药理学会(ECNP)年会的3期临床试验中，盐酸卡利拉嗪展现出针对精神分裂症阴性症状，包括退缩、情感缺乏及淡漠的显著疗效。在该项纳入461名患者的随机双盲对照研究中，经过26周的治疗，盐酸卡利拉嗪组受试者的阴性症状及个人/社会功能改善均显著优于利培酮组。因此盐酸卡利拉嗪长效微球制剂的开发对于精神分裂症患者尤其是阴性症状具有很深远的意义。

发明内容

目前市售盐酸卡利拉嗪口服制剂，就适应症而言，需要精神疾病患者每天服用或者几天服用一次，患者顺应性较差，因此盐酸卡利拉嗪的长效制剂亟待开发。

本发明提供了一种高载药量的盐酸卡利拉嗪微球制剂，该盐酸卡利拉嗪微球制剂采用独特的溶剂系统，以该溶剂系统为基础制备盐酸卡利拉嗪微球，可制备得到圆整光滑的微球、载药量高、长期缓释且无突释及延释现象。

本发明研究了盐酸卡利拉嗪在不同溶剂中的溶解度，详见下表。

表1盐酸卡利拉嗪在不同溶剂中的饱和溶解度测定值(室温)

通过上表数据可见，盐酸卡利拉嗪在二氯甲烷、乙醇溶解度较低，在乙酸乙酯中不溶，这种特性也就决定了盐酸卡利拉嗪在制备微球时所能够选用有机溶剂的范围较窄。而我们研究发现，只有当苯甲醇存在时才能够成功制备盐酸卡利拉嗪微球，且只有在苯甲醇--二氯甲烷(乙酸乙酯)系统中能够制备出外观圆整光滑、冻干粉疏松、载药量高且释放合格的微球。

本发明的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球包含盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物；盐酸卡利拉嗪的含量为20～80％；所述盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物在制备微球时溶解所用的有机溶剂为如下组合：苯甲醇和二氯甲烷，或苯甲醇和乙酸乙酯。

优选的，所述的苯甲醇和二氯甲烷的体积比为10-90％∶90-10％，进一步优选20-79％∶.80-21％，更优选30％-70％∶70％-30％，更进一步优选40～60％∶60～40％。

优选的，所述的苯甲醇和乙酸乙酯的体积比为10-90％∶90-10％，进一步优选25-75％∶75-25％、更优选40-60％∶60-40％，最优选50％∶50％。

优选的，所述的盐酸卡利拉嗪的含量为40～70％。

优选的，所述卡利拉嗪长效缓释微球的D10粒径为0.1～100μm，D90粒径与D10粒径之差为1～500μm；进一步优选的，D10粒径为1～20μm；更进一步优选的，D90粒径与D10粒径之差为5～300μm更优选50～100μm。其中，D10粒径、D90粒径是指颗粒累积分布为10％、90％的粒径。

优选的，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的数均分子量为5000～200000，进一步优选10000～100000，更优选20000～70000，更进一步优选45000～55000。

本发明的目的还在提供所述高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

(a)将盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解于有机溶剂中，得油相；以0.5～5wt％的聚乙烯醇的水溶液作为水相；搅拌条件下将油相加入水相中，制成微球乳液；有机溶剂为如下组合：苯甲醇和二氯甲烷，或苯甲醇和乙酸乙酯

(b)继续搅拌，调整温度至15～45℃，减压固化搅拌2小时以上，过滤收集微粒，洗涤、冷冻、干燥。

优选的，步骤(a)中，以0.5～5wt％更优选1～2wt％的聚乙烯醇的水溶液作为水相。

优选的，步骤(a)中，盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物质量比为1～3∶1，优选1～2∶1。

优选的，步骤(a)中，盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物质量之和与有机溶剂体积的比为1g∶5～30mL，优选1g∶10～20mL。

优选的，步骤(a)中，油水比为1∶10～500，优选1∶100-300。

优选的，步骤(a)中，苯甲醇和二氯甲烷的体积比为10-90％∶90-10％，进一步优选25-75％∶75-25％，更优选30％-70％∶70％-30％，更进一步优选40～60％∶60～40％。

或者优选的，步骤(a)中，苯甲醇和乙酸乙酯的体积比为10-90％∶90-10％，进一步优选25-75％∶75-25％、更优选40-60％∶60-40％，最优选50％∶50％。

优选的，步骤(b)中，调整温度至35～45℃，减压固化搅拌8～16小时。

本发明的积极进步效果在于：

本发明的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球作为卡利拉嗪微球长效注射剂具有长效缓释的作用，在动物体内可以实现一周到三个月的缓释，能够减少患者给药次数，提高患者的依从性，降低患者家属和国家医疗机构的看护负担。

附图说明

图1为实施例2微球的显微镜照片。

图2为实施例3微球的显微镜照片。

图3为实施例1-4及实施例8的体外缓释结果示意图。

图4为实施例12微球的显微镜照片。

图5为实施例16微球的显微镜照片。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1-9

(1)以苯甲醇-二氯甲烷溶剂系统制备盐酸卡利拉嗪长效缓释微球

制备步骤如下：

将盐酸卡利拉嗪与PLGA溶解于有机溶剂中，得油相；将聚乙烯醇(PVA)溶解于纯化水中，制备浓度为0.5～5wt％的溶液，然后溶液经滤膜过滤，得水相；在25℃下，搅拌转速350转/分钟，将油相加入水相中，制成微球乳液；继续搅拌10min，调整转速200转/分钟，调整温度至40℃，控制真空度为-0.095MPa，减压固化搅拌12小时，过滤收集微粒，以纯化水洗涤，冷冻干燥。

其中，有机溶剂为苯甲醇和二氯甲烷的混合，实施例1～9，盐酸卡利拉嗪的用量、PLGA的用量以及数均分子量，苯甲醇和二氯甲烷的用量，水相PVA的含量，以及油水比如下表2所示。

表2实施例1～9的原料配比

实施例1～9制备结果及制得的微球外观如下表3所示，实施例2-3的显微镜照片如图1-2所示，微球外观圆整、光滑且粒径相对均一。

表3实施例1～9的微球外观

(3)载药量的测定

采用高效液相色谱法进行微球中载药量(含药量)的测定，色谱条件为：流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液pH值7.0-乙腈(30∶70)(v/v)；色谱柱：Waters Xbridge C184.6*150mm*3.5um或相类似的色谱柱；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；检测波长：220nm；进样量：20μL。测得实施例1-9的微球载药量如下表4所示。

表4实施例1-9的微球载药量

(4)体外释放实验

采用摇瓶法实施释放度实验，并用高效液相色谱法进行测定。

计算方法如下：

含药量mg＝W样*载药量

累积释放量％＝(Cn*Vn+Vs*(Cn-1+…+C1))/含药量*100

式中，W样：每份微球的称样量，mg；

载药量：每批微球样品测得的含量，％；

Cn：当前点的浓度mg/mL；

Vn：当前点的介质体积mL，(本释放实验为200mL)；

Cn-1：前一个时间点的浓度mg/mL；

Vs：每一个时间点的取样体积mL(本释放实验取样体积为170mL)。

色谱测试条件：流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液pH值7.0(称取1.36g磷酸二氢钾加水稀释至1000mL，用氢氧化钾溶液调节pH值为7.0)-乙腈(30∶70)；色谱柱：WatersXbridge C18 4.6*150mm*3.5um或相类似的色谱柱；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：220nm；进样量：100μL；运行时间：8分钟。

实施例1-4及实施例8的微球的缓释结果如图3所示。

综合上述不同处方微球的外观、载药量及体外释放结果，实施例3及实施例4不仅微球外观圆整光滑，且30天释放最多，且释放速度平稳；当苯甲醇含量在80％以上时，所制备微球出现析晶情况，既无法成功制备微球，也就无法测定微球载药量；另外，如实施例7和实施例9，采用小分子量PLGA制备微球，同样出现析晶情况，也就是说低分子量PLGA对于微球的成球性有一定影响；另外实施例8采用较大分子量PLGA，所制备微球外观圆整光滑，且载药量符合要求，但是释放速度过慢，无法满足一个月的释放要求，因此我们可以知道盐酸卡利拉嗪微球的释放速度受PLGA的分子量影响较大。通过体外释放速度的横向对比，我们发现在苯甲醇含量在30-70％时，能够满足释放要求，实施例3和实施例4对此加以佐证。

实施例10～17

以苯甲醇-乙酸乙酯溶剂系统制备盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，制备步骤如下：将盐酸卡利拉嗪与PLGA溶解于有机溶剂中，得油相；将聚乙烯醇(PVA)溶解于纯化水中，制备浓度为0.5～5wt％的溶液，然后溶液经滤膜过滤，得水相；在25℃下，搅拌转速350转/分钟，将油相加入水相中，制成微球乳液；继续搅拌10min，调整转速200转/分钟，调整温度至40℃，控制真空度为-0.095MPa，减压固化搅拌12小时，过滤收集微粒，以纯化水洗涤，冷冻干燥。

其中，有机溶剂为苯甲醇和乙酸乙酯的混合，实施例10～17，盐酸卡利拉嗪的用量、PLGA的用量以及数均分子量，苯甲醇和乙酸乙酯的用量，水相PVA的含量，以及油水比如下表5所示。

表5实施例10～17的原料配比

参照实施例1-9的测试方法，测试实施例10-17的微球载药量，表6示出了实施例10-17的微球载药量。

表6实施例10-17的微球载药量

制得结果显示：实施例10中所用苯甲醇不能完全溶解盐酸卡利拉嗪，油相制备失败即无法成功制备微球；实施例11-13可成功制备微球，且显微镜观察湿微球边缘稍显模糊，出现部分空球，而且干燥后微球比较黏，因此载药量测定结果较低；另外当采用70％苯甲醇时、降低油水比或降低PLGA的分子量时，微球开始析晶；换用高分子量PLGA后如实施例16，微球没有出现析晶，但是干燥粉末仍旧较粘连，虽降低PVA的浓度，但由于高分子量PLGA其黏度也有所提高，还是未能改善其粉末粘连度。因为上述微球的粉末均较粘连，无法在溶剂中分散均匀，故释放度无法测定。

苯甲醇乙酸乙酯为油相制备微球整体出现冻干粉末粘连现象，图4和图5分别为实施例12和16的显微镜照片，微球冻干粉末较粘连，显微镜图片中也可观察到粘连较严重，图4边缘模糊，图5微球大小不均一，且有部分空球。

体内释放实验

动物：雄性SD大鼠，体重250-300g

样品配制：采用20mL注射针头、2mL注射器吸取1mL溶媒，将溶媒缓慢注入样品瓶中，将混悬液轻轻左右振摇使混悬均匀

给药方式：皮下注射

取血：设置多个取样点，检测不同时间大鼠体内血药浓度

分析方法：LC-MS/MS

以实施例2、实施例3及实施例12为例，进行体内体内释放实验，考察该盐酸卡利拉嗪微球的体内血药浓度，研究发现该微球在体内释放数据良好，能够在实现1周-3个月的缓释。

对比例1-2

参照实施例3，以二氯甲烷单独作为有机溶剂，代替苯甲醇-二氯甲烷，具体配料如下表7所示。由于盐酸卡利拉嗪在二氯甲烷中的溶解度太小，对比例1中所用有机相二氯甲烷不能完全将盐酸卡利拉嗪溶解，因此无法成功制备微球，而在对比例2在对比例1的基础上，增加二氯甲烷用量，为使盐酸卡利拉嗪完全溶解，二氯甲烷用量较大且溶解耗时较长。因此相比苯甲醇二氯甲烷系统而言，纯二氯甲烷一种有机试剂作为溶剂，对于油相的配制难度较大，所制备出微球产量过低，难以满足实验室或者工业化研究需求。

表7对比例1～2的原料配比

对比例3

参照实施例3，以乙醇-二氯甲烷作为有机溶剂，代替苯甲醇-二氯甲烷，具体配料如下表8所示。因为在乙醇中盐酸卡利拉嗪的溶解度更小，在油相配制的过程中增加乙醇的用量并减少二氯甲烷的用量很难将盐酸卡利拉嗪及PLGA完全溶解，因此无法成功制备微球。

表8对比例3的原料配比

对比例4

参照实施例3，以苯甲醇作为有机溶剂，代替苯甲醇-二氯甲烷，具体配料如下表9所示。苯甲醇可以溶解盐酸卡利拉嗪，但是PLGA无法在苯甲醇中完全溶解，且苯甲醇溶解盐酸卡利拉嗪的过程耗时较长，油相无法成功配制，即无法进行乳化并制备微球，故单纯苯甲醇溶解并不能成功制备微球。

表9对比例4的原料配比

综上，采用苯甲醇-二氯甲烷系统和苯甲醇-乙酸乙酯系统作为油相可制备盐酸卡利拉嗪微球，而单纯的二氯甲烷或者乙醇-二氯甲烷系统由于盐酸卡利拉嗪的溶解度太小，无法成功制备微球。

苯甲醇-二氯甲烷效果最优，制得的微球的载药量及产率均远远高于苯甲醇-乙酸乙酯系统，而且微球外观最好，圆整、光滑、均一且无粘连，且能满足长效缓释的要求。

Claims (10)

1.一种高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，其包含盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物；盐酸卡利拉嗪的含量为20～80％；所述盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物在制备微球时溶解所用的有机溶剂为如下组合：

苯甲醇和二氯甲烷，或

苯甲醇和乙酸乙酯。

2.如权利要求1所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，所述的苯甲醇和二氯甲烷的体积比为10-90％∶90-10％。

3.如权利要求1所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，所述的苯甲醇和乙酸乙酯的体积比为10-90％∶90-10％。

4.如权利要求1所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，所述的盐酸卡利拉嗪的含量为40～70％。

5.如权利要求1至4任意一项所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，所述盐酸卡利拉嗪长效缓释微球的D10粒径为0.1～100μm，D90粒径与D10粒径之差为1～500μm。

6.如权利要求1至4任意一项所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球，其特征在于，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的数均分子量为5000～200000。

7.如权利要求1至6所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

(a)将盐酸卡利拉嗪和聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解于有机溶剂中，得油相；以0.5～5wt％的聚乙烯醇的水溶液作为水相；搅拌条件下将油相加入水相中，制成微球乳液；有机溶剂为如下组合：

苯甲醇和二氯甲烷，或

苯甲醇和乙酸乙酯；

(b)继续搅拌，调整温度至15～45℃，减压固化搅拌2小时以上，过滤收集微粒，洗涤、冷冻、干燥。

8.根据权利要求7所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，以0.5～3wt％的聚乙烯醇的水溶液作为水相。

9.根据权利要求7所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，调整温度至35～45℃，减压固化搅拌8～16小时。

10.根据权利要求7至9任一项所述的高载药量的盐酸卡利拉嗪长效缓释微球的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，油水比为1：10-500。

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