CN103145660B - 穿心莲内酯及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及穿心莲内酯及其制备方法。具体地说，本发明提供的穿心莲内酯其中包含低于2%的脱水穿心莲内酯以及高于95%的穿心莲内酯。此外，本发明提供的制备穿心莲内酯的方法包括以下步骤：(1)将穿心莲药材用乙醇提取，滤取提取液；(2)将滤液用活性炭脱色，过滤；(3)浓缩，浓缩液冷置，弃去上清液，收集析出物；(4)析出物用乙醇洗涤得粗晶；(5)粗晶用乙醇溶解、活性炭脱色、过滤；(6)滤液浓缩、重结晶，干燥，即得。本发明方法提取效率高，杂质含量低，特别适用于工业生产。

Description

穿心莲内酯及其制备方法

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种穿心莲内酯以及该穿心莲内酯的制备方法。

背景技术

穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andrographispaniculata(Burm.F.)Nees)的干燥地上部分，秋初茎叶茂盛时采割，晒干。穿心莲又名春莲秋柳，一见喜，榄核莲、苦胆草、金香草、金耳钩、印度草，苦草等。有清热解毒、消炎、消肿止痛作用。主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种。该品种己收载于中华人民共和国2010版药典一部。

已知穿心莲中包含以下化学组成：穿心莲内酯(又名穿心莲乙素，Andrographolide)、脱氧穿心莲内酯(又名穿心莲甲素，deoxyandrographolide)、新穿心莲内酯(又名穿心莲丙素，Neoandrographolide)、脱水穿心莲内酯(又名穿心莲丁素，deoxydidehydroandrographolide)。此外人们还将这些化合物经结构改造制备成它们的衍生物，例如：

穿心莲内酯—(脱羟、脱氢)—>脱水穿心莲内酯—(双琥珀酸酯化、成盐)—>穿琥宁(半K盐)或炎琥宁(K-Na盐)，它们的化学结构区别如下：

穿心莲内酯    脱水穿心莲内酯    穿琥宁(半K盐)或炎琥宁(K-Na盐)

穿心莲内酯(Andrographolide)为爵床科植物穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物，是中药穿心莲的主要有效成分之一，具有清热解毒、凉血消肿等功能。是治疗上呼吸道感染、急性菌痢、病毒性感冒等常用中成药穿心莲制剂的主要有效成分。20世纪70年代初，国内开始将穿心莲的茎叶或全草提取后，制成了穿心莲片等普通口服制剂。普通制剂对细菌、病毒虽然县有一定的抑制作用，但因其主要有效成分不溶于水而威力不足。

由于穿心莲内酯是从穿心莲中提取的有效成分，单体纯度高，产品质量和药理作用较穿心莲更具有优势。目前SFDA己批准生产穿心莲内酯片剂、胶囊、软胶囊、滴丸等口服剂型。其缺点是穿心莲内酯为二萜类内酯化合物，难溶于水，通常仅能口服给药。针对临床上病毒感染急症的需求，将其结构中引入不同的亲水基团，增强其水溶性制备成注射剂，提高疗效。在我国，自七十年代开始对穿心莲内酯水溶性衍生物进行研究，开发了一系列注射剂，其中最主要产品为穿琥宁和炎琥宁。

穿心莲内酯对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。目前，国家食品药品监督管理局批准生产销售的穿心莲内酯制剂主要有片剂、胶囊、滴丸剂等。

穿心莲内酯的制备和功效文献报道很多，例如在中国专利申请号200710142800.7中描述了一种醇提后用树脂分离的方法。医药导报2006年1月第25卷第1期关于穿心莲内酯的研究进展描述了穿心莲内酯的功效。中医药信息2002年第19卷第3期关于穿心莲内酯工艺改进探讨描述了一种穿心莲内酯的纯化方法。离子交换与吸附2002年第18卷第1期关于大孔吸附树脂提取穿心莲总内酯的研究，描述了一种醇提用石油醚萃取后过大孔树脂柱的穿心莲内酯的制备方法。大孔树脂法洗脱时使用不同醇度乙醇洗脱物均不同程度的含有穿心莲内酯，80%乙醇洗脱物含量较高，但收率较低。

此外，鹿萍等的文献(穿心莲内酯的超声波提取法研究，赤峰学院学报(自然科学版)第24卷第2期，2008)中公开了以穿心莲茎杆粉末为原料，采用超声波震荡法来提取穿心莲内酯，针对三个实验因素分别设计了三个实验水平，包括：(1)超声波振荡时间因素设计了20分钟、40分钟、80分钟、120分钟；(2)原料与溶剂体积比因素设计了1:5、1:10、1:15、1:20；(3)四种不同溶剂提取:水、75%乙醇、乙酸乙酯、石油醚.通过比色法测定提取液的光吸收值，并进行比较，选出最佳的提取方法。结论:实验结果表明最理想溶剂是75%乙醇，固体粉末与溶剂比为1:20，超声时间控制在40分钟的提取效果最佳。此外，梁月丽等的文献(NaOH水溶液提取穿心莲内酯工艺研究，安徽农业科学，2009，37(9):4112)中公开了探索低成本高含量的穿心莲内酯的提取工艺。以穿心莲茎叶为材料,粉碎后在不同pH值的NaOH溶液中，利用超声波法提取穿心莲内酯。测定了提取的浸膏中穿心莲内酯的含量和回收率。结果NaOH溶液的pH值为7.5时,穿心莲内酯浸膏的得率最低，为3.57%，浸膏中穿心莲内酯的含量最高，为9.5%。当NaOH溶液的pH值为9.5时，穿心莲内酯浸膏的得率最高，为6.71%，浸膏中穿心莲内酯的含量最低，为0.019%。该检测方法的平均回收率为99.9%。pH值为7.5的NaOH溶液中，超声波法提取的穿心莲内酯总量最多；在pH值为9.5的NaOH溶液中提取的穿心莲内酯总量最少。尽管这些方法提供的方法在某些条件下具有某些积极的效果，然而令人遗憾的是这些方法难以应用于工业化大生产，例如在生产上超声处置是不可取的。

因此，本领域仍然期待有新的方法来制备穿心莲内酯。

发明内容

本发明的目的在于提供一种穿心莲内酯，本发明的另一目的在于提供一种制备穿心莲内酯的方法，使用该方法制备具有如下的突出优点：转移率较高，成本低；制备过程中不使用大孔树脂；不使用氯仿、丙酮、石油醚等有机溶剂；反应条件温和，节约能源；产品更安全有效，便于“三废”处理，利于环境保护；制得的产品纯度高，穿心莲内酯含量可达97%以上；工艺过程操作简便，适合产业化生产。

本发明第一方面提供了一种制备穿心莲内酯的方法，包括以下步骤：

(1)将穿心莲药材用乙醇提取，滤取提取液；

(2)将滤液用活性炭脱色，过滤；

(3)浓缩，浓缩液冷置，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用乙醇洗涤得粗晶；

(5)粗晶用乙醇溶解、活性炭脱色、过滤；

(6)滤液浓缩、重结晶，干燥，即得。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中所述乙醇是浓度为60～99%的乙醇，例如为70～99%的乙醇，例如为80～99%的乙醇，例如为80～95%的乙醇。提取液的用量是本领域技术人员根据具体工艺容易确定的，例如当使用浸渍工艺时，提取液通常是没过药材液面10-20cm即可，并且可凭经验调整。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中所述乙醇中含有0.01-0.5%(w/v)碱金属氢氧化物，例如碱金属氢氧化物含量为0.01-0.25%(w/v)，例如碱金属氢氧化物含量为0.01-0.1%(w/v)，例如碱金属氢氧化物含量为0.02-0.1%(w/v)。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中所述碱金属氢氧化物选自氢氧化钠、氢氧化钾，优选氢氧化钠。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中所述提取是选自下列的提取工艺：浸渍工艺、渗漉工艺、温浸工艺、回流提取工艺。本发明人已经发现，在这些工艺中，穿心莲内酯转移率大小的排列顺序为：浸渍工艺>渗漉工艺>温浸工艺>回流提取工艺。浸渍工艺可以是间歇式单罐提取，也可以是多级连续提职，多级连续逆流提取的技术应用到穿心莲提取，可以获得更高的提取效率，更大限度地节省溶剂，同时方便了后续操作。因此在本发明第一方面所述方法的一个实施方案中，步骤(1)中所述提取是浸渍工艺。浸渍工艺是本领域技术人员公知的，在众多药剂学教科书上亦有记载，通常而言是在室温下特别是在25-30℃的温度下浸渍，每批物料浸渍的时间通常根据具体药材性质确定，并且通常浸渍时间为6-48小时，例如可以为12-36小时。通常而言，还可以根据药材中的活性成分的提取程度确定浸渍时间。本发明出人意料地发现，在乙醇中加入一定量(例如约0.02-0.1%(w/v))的氢氧化钠时，可以在比较短的时间内浸出较大量的穿心莲内酯。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述脱色操作中使用的活性炭的量是步骤(1)中穿心莲药材投料量的5-10%，例如6-10%，例如7-9%。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述脱色操作是在高温下进行。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述脱色操作是在70～95℃下进行，例如在75～90℃下进行，例如在80～85℃下进行。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中所述脱色操作是在70～95℃下进行10-60分钟，例如20-45分钟，例如约30分钟。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中，向所述提取液中添加有0.1-2%有机酸，例如添加有0.2-1%有机酸，例如添加有0.2-0.5%有机酸。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中，向所述提取液中添加有0.1-2%有机酸，所述有机酸选自甲酸、乙酸(即冰乙酸)、醋酐、丁二酸。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中可以随时检查脱色效果，直至合格(判断工艺中脱色合格的方法是：取一定量脱色液用滤纸过滤至纳氏比色管中，与中国药典2010年版二部附录IX A第一法所述黄色2号标准比色液比较，比该标准比色液更浅则脱色合格)。本发明人出人意料地发现，在步骤(2)所述提取液中添加0.2-0.5%乙酸时，经该脱色处理所得提取液中穿心莲内酯显著高于不加该有机酸进行脱色时所得提取液，但乙酸用量过高时杂质量会增加终产物中杂质的含量。最终，本发明所得终产物穿心莲内酯中，作为杂质的脱水穿心莲内酯含量低于2%，例如低于1.5%，例如低于1%。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下进行，例如在50-60℃下进行，例如在55℃下进行。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下减压浓缩。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下减压浓缩至浑浊。已经发现，当浓缩至浑浊时，即可停止浓缩，将自然放冷，此后会析出大量的析出物，弃去上清液，收集析出物。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(4)中，所述析出物是用乙醇溶液，加热或不加热，搅拌洗涤1-5次。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(4)中，所述析出物用浓度为70%～100%的乙醇溶液洗涤，用量为析出物重量0.2倍～2倍体积(L/kg)的乙醇溶液。优选的是使用1倍体积的80%乙醇在室温下搅拌15分钟进行洗涤一次；在本发明下文的实验中，如未另外说明，步骤(4)中使用此洗涤工艺。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(5)的粗晶是用其重量30倍～60倍体积的90%以上的乙醇溶液，加热搅拌使溶解。步骤(5)中后续的脱色是使用本领域常用的条件采用活性炭进行脱色。

本发明所述的穿心莲内酯的制备方法，其中步骤(6)的浓缩是减压浓缩至浑浊。在一个实施方案中，该浓缩操作可以采用步骤(3)所述浓缩条件进行。在一个实施方案中，步骤(6)中所述浓缩和重结晶可以采用步骤(3)及其后步骤所述方式行。本领域技术人员理解，步骤(5)和(6)可以重复进行，以便获得令人满意的成品。

本发明第一方面提供了一种制备穿心莲内酯的方法，包括以下步骤：

(1)将穿心莲药材用含有0.01-0.5%(w/v)碱金属氢氧化物的80～95%乙醇采用浸渍工艺提取12-36小时，滤取提取液；

(2)向滤液中添加0.2-0.5%有机酸，再添加穿心莲药材投料量的5-10%活性炭，在70～95℃下进行脱色20-45分钟，过滤；

(3)在40-70℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用其重量0.2倍～2倍体积(L/kg)的70%～100%乙醇溶液洗涤，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量30倍～60倍体积的90%以上的乙醇溶液，加热搅拌使溶解、活性炭脱色、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。

本发明第一方面提供了一种制备穿心莲内酯的方法，包括以下步骤：

(1)将穿心莲药材用含有0.05%(w/v)氢氧化钠的85%乙醇采用浸渍工艺提取15小时，滤取提取液；

(2)向滤液中添加0.25%乙酸，再添加穿心莲药材投料量的8%活性炭，在85℃下进行脱色30分钟，过滤；

(3)在55℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用其重量1倍体积(L/kg)的80%乙醇溶液搅拌15分钟进行洗涤，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量40倍体积的95%的乙醇溶液，60℃加热搅拌使溶解、活性炭脱色30min、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。

本发明人已经出人意料地发现，在步骤(2)所述提取液中添加0.2-0.5%乙酸时，经该脱色处理所得提取液中作为杂质的脱水穿心莲内酯显著低于不加该有机酸进行脱色时所得提取液。最终，本发明所得终产物穿心莲内酯中，作为杂质的脱水穿心莲内酯含量低于2%，例如低于1.5%，例如低于1%；和/或作为主成分的穿心莲内酯含量高于95%，例如高于96%，例如高于97%。

因此，本发明第二方面提供了一种穿心莲内酯，其中包含低于2%，例如低于1.5%，例如低于1%的脱水穿心莲内酯。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中包含高于95%，例如高于96%，例如高于97%的穿心莲内酯。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其是由本发明第一方面任一实施方案所述方法制备得到的。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其是由包括以下步骤的方法制备得到的：

(1)将穿心莲药材用乙醇提取，滤取提取液；

(2)将滤液用活性炭脱色，过滤；

(3)浓缩，浓缩液冷置，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用乙醇洗涤得粗晶；

(5)粗晶用乙醇溶解、活性炭脱色、过滤；

(6)滤液浓缩、重结晶，干燥，即得。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(1)中所述乙醇是浓度为60～99%的乙醇，例如为70～99%的乙醇，例如为80～99%的乙醇，例如为80～95%的乙醇。提取液的用量是本领域技术人员根据具体工艺容易确定的，例如当使用浸渍工艺时，提取液通常是没过药材液面10-20cm即可，并且可凭经验调整。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(1)中所述乙醇中含有0.01-0.5%(w/v)碱金属氢氧化物，例如碱金属氢氧化物含量为0.01-0.25%(w/v)，例如碱金属氢氧化物含量为0.01-0.1%(w/v)，例如碱金属氢氧化物含量为0.02-0.1%(w/v)。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(1)中所述碱金属氢氧化物选自氢氧化钠、氢氧化钾，优选氢氧化钠。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(1)中所述提取是选自下列的提取工艺：浸渍工艺、渗漉工艺、温浸工艺、回流提取工艺。本发明人已经发现，在这些工艺中，穿心莲内酯转移率大小的排列顺序为：浸渍工艺>渗漉工艺>温浸工艺>回流提取工艺。浸渍工艺可以是间歇式单罐提取，也可以是多级连续提职，多级连续逆流提取的技术应用到穿心莲提取，可以获得更高的提取效率，更大限度地节省溶剂，同时方便了后续操作。因此在本发明第二方面所述穿心莲内酯的一个实施方案中，步骤(1)中所述提取是浸渍工艺。浸渍工艺是本领域技术人员公知的，在众多药剂学教科书上亦有记载，通常而言是在室温下特别是在25-30℃的温度下浸渍，每批物料浸渍的时间通常根据具体药材性质确定，并且通常浸渍时间为6-48小时，例如可以为12-36小时。通常而言，还可以根据药材中的活性成分的提取程度确定浸渍时间。本发明出人意料地发现，在乙醇中加入一定量(例如约0.02-0.1%(w/v))的氢氧化钠时，可以在比较短的时间内浸出较大量的穿心莲内酯。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中所述脱色操作中使用的活性炭的量是步骤(1)中穿心莲药材投料量的5-10%，例如6-10%，例如7-9%。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中所述脱色操作是在高温下进行。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中所述脱色操作是在70～95℃下进行，例如在75～90℃下进行，例如在80～85℃下进行。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中所述脱色操作是在70～95℃下进行10-60分钟，例如20-45分钟，例如约30分钟。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中，向所述提取液中添加有0.1-2%有机酸，例如添加有0.2-1%有机酸，例如添加有0.2-0.5%有机酸。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中，向所述提取液中添加有0.1-2%有机酸，所述有机酸选自甲酸、乙酸(即冰乙酸)、醋酐、丁二酸。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(2)中可以随时检查脱色效果，直至合格(判断工艺中脱色合格的方法是：取一定量脱色液用滤纸过滤至纳氏比色管中，与中国药典2010年版二部附录IX A第一法所述黄色2号标准比色液比较，比该标准比色液更浅则脱色合格)。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下进行，例如在50-60℃下进行，例如在55℃下进行。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下减压浓缩。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下减压浓缩至浑浊。已经发现，当浓缩至浑浊时，即可停止浓缩，将自然放冷，此后会析出大量的析出物，弃去上清液，收集析出物。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(4)中，所述析出物是用乙醇溶液，加热或不加热，搅拌洗涤1-5次。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(4)中，所述析出物用浓度为70%～100%的乙醇溶液洗涤，用量为析出物重量0.2倍～2倍体积(L/kg)的乙醇溶液。优选的是使用1倍体积的80%乙醇在室温下搅拌15分钟进行洗涤一次；在本发明下文的实验中，如未另外说明，步骤(4)中使用此洗涤工艺。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其中步骤(5)的粗晶是用其重量30倍～60倍体积的90%以上的乙醇溶液，加热搅拌使溶解。步骤(5)中后续的脱色是使用本领域常用的条件采用活性炭进行脱色。

本发明所述的穿心莲内酯，其制备方法的步骤(6)的浓缩是减压浓缩至浑浊。在一个实施方案中，该浓缩操作可以采用步骤(3)所述浓缩条件进行。在一个实施方案中，步骤(6)中所述浓缩和重结晶可以采用步骤(3)及其后步骤所述方式行。本领域技术人员理解，步骤(5)和(6)可以重复进行，以便获得令人满意的成品。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其是由包括以下步骤的方法制备得到的：

(1)将穿心莲药材用含有0.01-0.5%(w/v)碱金属氢氧化物的80～95%乙醇采用浸渍工艺提取12-36小时，滤取提取液；

(2)向滤液中添加0.2-0.5%有机酸，再添加穿心莲药材投料量的5-10%活性炭，在70～95℃下进行脱色20-45分钟，过滤；

(3)在40-70℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用其重量0.2倍～2倍体积(L/kg)的70%～100%乙醇溶液洗涤，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量30倍～60倍体积的90%以上的乙醇溶液，加热搅拌使溶解、活性炭脱色、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。

根据本发明第二方面所述的穿心莲内酯，其是由包括以下步骤的方法制备得到的：

(1)将穿心莲药材用含有0.05%(w/v)氢氧化钠的85%乙醇采用浸渍工艺提取15小时，滤取提取液；

(2)向滤液中添加0.25%乙酸，再添加穿心莲药材投料量的8%活性炭，在85℃下进行脱色30分钟，过滤；

(3)在55℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用其重量1倍体积(L/kg)的80%乙醇溶液搅拌15分钟进行洗涤，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量40倍体积的95%的乙醇溶液，60℃加热搅拌使溶解、活性炭脱色30min、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。

下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

在本发明中，“%”的含义可根据具体使用环境而定，特别是其具有如2010年版中国药典二部凡例中“计量”项下第二十八条(4)款所述含义。

在本发明中，确定各种物料(例如提取液、浸膏、粗晶、终产物)中穿心莲内酯或者其它杂质例如脱水穿心莲内酯的含量时，以及确定这些物料中的色谱纯度时，可以采用2010年版中国药典一部“穿心莲内酯”品种的含量测定项下的高效液相色谱法进行测定。

本发明使用特别的工艺条件制备穿心莲内酯，具有收率高，终产物纯度高的诸多优点，并且所用工艺环保。

具体实施方式

下面通过具体的实例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

实施例1、制备穿心莲内酯

1、制备过程：

(1)将穿心莲药材(预先经粉碎成粗粉，每批次投料量10kg)用含有0.05%(w/v)氢氧化钠的85%乙醇采用浸渍工艺提取15小时，滤取提取液(具体操作是：将药材投入浸渍罐中，加入乙醇至淹没叶面约10-20cm为止，加盖浸渍，控制浸渍温度在25-30℃，并用电机将浸渍罐底部液体抽到浸渍罐顶部，使浸渍液循环，保持罐体内每个位置浸渍液浓度一致)；

(2)向步骤(1)获取的滤液中添加0.25%乙酸(通过添加冰醋酸至滤滤液中乙酸含量为0.25%(w/v)，本发明其它处的类似操作中亦有类似的操作方式)，再添加穿心莲药材投料量的8%(w/w)活性炭，在85℃加热下进行脱色30分钟(使用本发明上文所述方法确定脱色合格，必要时适当延长时间；试验中，在此条件下30分钟均可达到合格)，过滤；

(3)在55℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用其重量1倍体积(L/kg)的80%乙醇溶液搅拌15分钟进行洗涤，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量40倍体积的95%的乙醇溶液，60℃加热搅拌使溶解、活性炭脱色30min、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。

2、检测方法：

(i)步骤(1)的残渣中穿心莲内酯的残余百分量：照2010年版中国药典一部“穿心莲”品种的含量测定项下的高效液相色谱法，测定投料的药材中的穿心莲内酯含量(在此可简称为含量A)；将步骤(1)残渣用水冲洗一次，减压干燥至水分含量低于5%，同上法测定该残渣中的穿心莲内酯含量(在此可简称为含量B)，以下式计算残渣中穿心莲内酯的残余百分量：残余百分量(%)=[(含量A—含量B)÷含量A]×100%。该残余百分量越低，表明穿心莲内酯提取越完全。

(ii)步骤(2)脱色所得提取液(在本发明中可称为“脱色液”)中的穿心莲内酯含量：照2010年版中国药典一部“穿心莲”品种的含量测定项下的高效液相色谱法，样品直接用流动相稀释，记录色谱图至穿心莲内酯峰保留时间的3倍，用面积归一化法计算，测定脱色液中的穿心莲内酯色谱纯度(在此可简称为脱色液色谱纯度)；

(iii)步骤(6)所得终产物的穿心莲内酯含量：照2010年版中国药典一部“穿心莲”品种的含量测定项下的高效液相色谱法，样品直接用流动相溶解/稀释，用对照品同法测定，计算终产物中的穿心莲内酯含量(在此可简称为终产物含量)以及终产物中脱水穿心莲内酯含量；

(iv)穿心莲内酯总收率=(终产物中的穿心莲内酯量÷投料药材中穿心莲内酯量)×100%。

3、结果：残余百分量16%；脱色液色谱纯度81%；终产物穿心莲内酯含量98.8%；终产物脱水穿心莲内酯含量0.85%；穿心莲内酯总收率82%。

实施例2、制备穿心莲内酯

参照实施例1进行，不同的仅是在步骤(1)中使用80%或95%的乙醇；得到两批穿心莲内酯试样。

结果：残余百分量在14-17%之间；脱色液色谱纯度79-83%之间；终产物穿心莲内酯含量98.3-98.8%之间；终产物脱水穿心莲内酯含量0.81-0.84%之间；穿心莲内酯总收率79-83%。表明乙醇浓度在80%至95%范围内均适用于对本发明方法。

实施例3、制备穿心莲内酯

参照实施例1进行，不同的仅是在步骤(1)中浸渍工艺提取12小时或36小时，得到两批穿心莲内酯试样。经测定，步骤(1)残渣中穿心莲内酯的残余百分量分别为14%和18%，表明时间延长对于促进提取率无影响。

实施例4、制备穿心莲内酯

参照实施例1进行，不同的仅是氢氧化钠的用量为0%(即为乙醇)、0.01%、0.02%、0.075%、0.1%、0.2%、0.5%、1%、2.5%，或者改用0.05%的碳酸钠；或者是直接使用0.02%氢氧化钠水溶液(不含乙醇)作为浸渍提取液。

结果：氢氧化钠的用量为0.02%、0.075%、0.1%三种情况下步骤(1)残渣中穿心莲内酯的残余百分量分别为15%、16%和14%，脱色液色谱纯度80-82%，终产物穿心莲内酯含量98.3-99.1%，终产物脱水穿心莲内酯含量0.77-0.81%,穿心莲内酯总收率78-84%，表明使用浓度范围为0.02-0.1%的氢氧化钠均适用于对本发明方法。

氢氧化钠的用量为0、0.01%及0.05%(碳酸钠)三种情况下步骤(1)残渣中穿心莲内酯的残余百分量分别为41%、34%、39%，表明使用浓度低于0.01%的氢氧化钠或者改用碳酸钠均不适用于对本发明方法；此外还发现，使用这些浓度的碱时，延长浸渍时间至60小时时，残渣中穿心莲内酯的残余百分量仍30%以上。

氢氧化钠的用量为0.2%、0.5%、1%、2.5%四种情况下步骤(1)残渣中穿心莲内酯的残余百分量分别为15%、16%、11%、12%，终产物穿心莲内酯含量91.4-93.6%，终产物脱水穿心莲内酯含量3.8-6.2%，表明使用浓度大于0.2%的氢氧化钠对于提取完全程度无大的改善，出人意料的是在此情况下终产物的品质大大降低，穿心莲内酯含量降低，杂质含量升高，表明使用浓度大于0.2%的氢氧化钠不适用于对本发明方法。

当用0.02%氢氧化钠水溶液(不含乙醇)作为浸渍提取液时，残渣中穿心莲内酯残余百分量34%；脱色液色谱纯度67%；终产物穿心莲内酯含量94.3%；终产物脱水穿心莲内酯含量4.8%。

实施例5、制备穿心莲内酯

参照实施例1进行，不同的仅是在步骤(2)中，向所述提取液中添加0%、0.1%、0.2%、0.35%、0.5%、0.75%、1%、1.5%、2%、5%的冰乙酸，或者向其中添加0.25%的甲酸或醋酐。

结果：冰乙酸用量为0.2%、0.35%、0.5%三种情况下步骤(2)脱色液中穿心莲内酯峰色谱纯度79%-84%，脱色液中脱水穿心莲内酯相对于穿心莲内酯的含量为5.3-6.8%，终产物穿心莲内酯含量98.6-99.2%；终产物脱水穿心莲内酯含量0.54-0.82%；穿心莲内酯总收率81-83%。

冰乙酸用量为0%、0.1%、甲酸三种情况下步骤(2)脱色液中穿心莲内酯峰色谱纯度分别为41%、54%，脱色液中脱水穿心莲内酯相对于穿心莲内酯的含量为17.5-21.4%，表明乙酸用量较低或者改用甲酸时脱色处理效果不理想。

冰乙酸用量为0.75%、1%、1.5%、2%、5%各种情况下步骤(2)脱色液中穿心莲内酯峰色谱纯度在77-89%范围内；但在终产物中脱水穿心莲内酯相对于穿心莲内酯的含量在9-16%范围内，并且乙酸用量越大时终产物中脱水穿心莲内酯相对含量越高；用醋酐与用2%冰乙酸的结果基本相同。表明乙酸用量较高或者改用醋酐时脱色处理效果较好，但无法解释的是对终产物品质有不良影响。

实施例6、制备穿心莲内酯

参照实施例1的方法，不同之处在于以下操作：在步骤(2)中，添加穿心莲药材投料量的5%的活性炭，在95℃下进行脱色20分钟；在步骤(3)中，在40℃下减压浓缩处理；在步骤(4)中，析出物用其重量0.2倍100%乙醇溶液洗涤，得粗晶；在步骤(5)中，粗晶加至其重量30倍100%的乙醇溶液中处理。结果：浸渍残渣中穿心莲内酯残余百分量15%，脱色液色谱纯度82%，终产物穿心莲内酯含量99.3%，终产物脱水穿心莲内酯含量0.48%，穿心莲内酯总收率85%。

实施例7、制备穿心莲内酯

参照实施例1的方法，不同之处在于以下操作：在步骤(2)中，添加穿心莲药材投料量的10%的活性炭，在70℃下进行脱色45分钟；在步骤(3)中，在70℃下减压浓缩处理；在步骤(4)中，析出物用其重量2倍70%乙醇溶液洗涤，得粗晶；在步骤(5)中，粗晶加至其重量60倍90%的乙醇溶液中处理。结果：浸渍残渣中穿心莲内酯残余百分量13%，脱色液色谱纯度80%，终产物穿心莲内酯含量99.0%，终产物脱水穿心莲内酯含量0.65%，穿心莲内酯总收率82%。

实施例8、制备穿心莲内酯

取穿心莲药材(10kg投料)，用90%乙醇多级连续提取(提取3罐)，每罐提取2次，保持4倍量提取溶媒，每次提取8小时；收集浸提液，加入适量的水，调节至乙醇浓度为50%，过滤；滤液加热至70℃，加入8%(w/w，相对于药材计)活性炭，搅拌30min脱色，过滤；滤液70℃浓缩至混浊，浓缩液冷置，弃去上清液，收集析出物；析出物加入0.3倍乙醇，70℃搅拌，静置，固液分离，收集固体；再加入0.3倍乙醇，搅拌，静置，固液分离，得粗晶；粗晶加入30倍的90%的乙醇溶液，70℃加入适量活性炭，搅拌30min，过滤；滤液70℃减压浓缩至混浊，重结晶，干燥，即得。2010102686760。

结果：浸渍残渣中穿心莲内酯残余百分量24%，脱色液色谱纯度63%，终产物穿心莲内酯含量96.5%，终产物脱水穿心莲内酯含量2.7%，穿心莲内酯总收率71%。

Claims (15)

1.制备穿心莲内酯的方法，包括以下步骤：

(1)将穿心莲药材用乙醇提取，滤取提取液；

(2)将步骤(1)过滤所得提取液用活性炭脱色，过滤；

(3)浓缩，浓缩液冷置，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用乙醇洗涤得粗晶；

(5)粗晶用乙醇溶解、活性炭脱色、过滤；

(6)滤液浓缩、重结晶，干燥，即得，

其中：

步骤(1)中，所述乙醇是80~99%乙醇，并且其中含有0.02-0.1%w/v碱金属氢氧化物，

步骤(2)中，所述提取液中添加有0.2-0.5%乙酸。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于：步骤(1)中所述乙醇是浓度为80~95%的乙醇。

3.根据权利要求2的方法，其中步骤(1)中所述乙醇中含有0.02-0.1%w/v碱金属氢氧化物。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)中所述提取是选自下列的提取工艺：浸渍工艺、渗漉工艺、温浸工艺、回流提取工艺。

5.根据权利要求1的方法，其中所述碱金属氢氧化物选自氢氧化钠、氢氧化钾。

6.根据权利要求1的方法，其特征在于：步骤(2)中所述脱色操作中使用的活性炭的量是步骤(1)中穿心莲药材投料量的5-10%。

7.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述脱色操作是在70~95℃下进行10-60分钟。

8.根据权利要求1的方法，其特征在于：步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下进行。

9.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下减压浓缩。

10.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)中的浓缩是在40-70℃下减压浓缩至浑浊。

11.根据权利要求1的方法，其中步骤(4)中，所述析出物是用乙醇溶液，加热或不加热，搅拌洗涤1-5次。

12.根据权利要求1的方法，其中步骤(4)中，所述析出物用浓度为70～100%的乙醇溶液洗涤，乙醇溶液体积用量为析出物重量的0.2倍～2倍，其中析出物重量以千克计，乙醇溶液体积以升计。

13.根据权利要求1的方法，其中步骤(5)的粗晶是用其重量30倍～60倍体积的90%以上的乙醇溶液，加热搅拌使溶解。

14.根据权利要求1的方法，其中步骤(6)的浓缩是减压浓缩至浑浊。

15.根据权利要求12的方法，包括以下步骤：

(1)将穿心莲药材用含有0.01-0.1%w/v碱金属氢氧化物的80~95%乙醇采用浸渍工艺提取12-36小时，滤取提取液；

(2)向滤液中添加0.2-0.5%乙酸，再添加穿心莲药材投料量的5-10%活性炭，在70~95℃下进行脱色20-45分钟，过滤；

(3)在40-70℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用70～100%乙醇溶液洗涤，乙醇溶液体积用量为析出物重量的0.2倍～2倍，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量30倍～60倍体积的90%以上的乙醇溶液，加热搅拌使溶解、活性炭脱色、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。

16．根据权利要求12的方法，包括以下步骤：

(1)将穿心莲药材用含有0.05%w/v氢氧化钠的85%乙醇采用浸渍工艺提取15小时，滤取提取液；

(2)向滤液中添加0.25%乙酸，再添加穿心莲药材投料量的8%活性炭，在85℃下进行脱色30分钟，过滤；

(3)在55℃下减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却，弃去上清液，收集析出物；

(4)析出物用80%乙醇溶液搅拌15分钟进行洗涤，乙醇溶液体积用量为析出物重量的1倍，得粗晶；

(5)粗晶加至其重量40倍体积的95%的乙醇溶液，60℃加热搅拌使溶解、活性炭脱色30min、过滤；

(6)滤液减压浓缩至浑浊，浓缩液静置、冷却、重结晶，干燥，即得。