CN103131670B

CN103131670B - 一种高潜能脑转移中国人肺腺癌细胞株

Info

Publication number: CN103131670B
Application number: CN201110383689.7A
Authority: CN
Inventors: 杨顺芳
Original assignee: Shanghai Chest Hospital
Current assignee: Shanghai Chest Hospital
Priority date: 2011-11-26
Filing date: 2011-11-26
Publication date: 2015-08-19
Anticipated expiration: 2031-11-26
Also published as: CN103131670A

Abstract

本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域，涉及一种具有脑转移潜能的中国人肺腺癌细胞株及其用途。本发明采用源自肺腺癌患者化疗十次、放疗一次后产生的胸、腹水为细胞原代培养的材料，通过裸鼠体内外筛选的方法，获得人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M，保藏编号：CGMCC No.5405。本发明的脑转移潜能的中国人肺腺癌细胞株具有贴壁生长，多脏器转移、快速生长和代谢旺盛的特性，为理想的人肺腺癌的脑转移研究的细胞模型，可为药物干预、系统研究肺腺癌脑转移提供良好的技术平台。

Description

一种高潜能脑转移中国人肺腺癌细胞株

技术领域

本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域，具体涉及一种高潜能脑转移中国人肺腺癌细胞株及其用途。

背景技术

据报道，肺癌是严重威胁人类生存和发展的恶性疾病之一，已成为肿瘤疾病中的头号杀手；虽然目前对肺癌的临床治疗已经取得长足的进展，但是肺癌死亡率仍长期居高不下，而且，肺腺癌的发病率呈逐年上升趋势，且非常容易发生骨、脑、肝脏的转移，患者预后很差，其主要原因在于难以早期诊断和其高转移性。临床实践显示，若干患者首诊时即发现有多器官转移；因此，转移和复发仍旧是肺癌治疗的难题。尤其是，肺癌转移尤其是靶向转移(肿瘤细胞向特定器官进行转移)的分子机理还不清楚。

目前临床治疗中，中国人肺腺癌脑转移始终是困扰医学界的一道难题，也是肺腺癌治疗失败及患者致死的关键原因之一。近年来，随着肺癌发病率的增高，癌症诊疗手段的提高与改善以及患者生存期的延长，肺癌脑转移的发病率也随之升高；手术切除的非小细胞肺癌(NSCLC)约有1/3因脑转移而失败，尸检报告则高达50％以上，且主要是肺腺癌；即使术后病理证实为无胸内淋巴结转移的I期NSCLC，术后亦有5％在3个月内出现脑转移症状，表明术前已有无症状的微小脑转移灶存在。

研究显示，肺癌脑转移瘤倾向于多发。据统计肺癌脑转移瘤中多发者占70％～86％，单发者仅占14％-30％；其中80％～85％转移灶位于大脑，小脑转移灶占10％～15％，脑干转移灶仅占2％～3％。研究证实，肺癌脑转移是由于血行转移所致，一旦病人发生脑转移患者往往表现出头痛严重，呕吐，精神和运动异常，视力和听力异常等症状，切严重影响患者的生理、心理健康。

目前，国内外有关肿瘤转移模型研究的报道中，尚未见对中国人肺腺癌患者中脑转移细胞和动物模型研究的报道，究其原因是现有的建株、建模技术在多个环节存在一定的局限性，从而导致了细胞及其动物模型建立及后期筛选效率低，难以获得理想的高转移肿瘤细胞株。

发明内容

本发明的目的是提供一种高潜能脑转移中国人肺腺癌细胞株。

本发明的进一步目的是提供该细胞株的医用用途。

本发明建立的具有高潜能脑转移的国人肺腺癌细胞株，能对国人肺腺癌转移进行早期诊断提供参考数据，还可进一步建立相关基因芯片技术，评估探索各种药物包括化学、生物、免疫、中医药、放射性药物等治疗疗效，为探索诊疗国人肺癌转移提供了技术平台；同时，进一步分析肺癌转移相关的功能基因组以及多脏器转移的相关基因，可加深对肺癌转移分子机理的认识，为肺癌转移的早期诊断、评估疗效提供一种有效的分子检测方法。

具体而言，本发明采用源自56岁女性肺腺癌患者化疗十次、放疗一次后产生的胸、腹水为细胞原代培养的材料，经细胞培养，获得人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M(TheChinese Lung Adenocarcinoma cell with Highly Brain Metastases，Yang2-Brain M)，已于2011年10月28日保藏，保藏单位：中国科学院微生物保藏中心CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC No.5405，分类命名：人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M。

本发明经实验裸鼠动物实验，结果证实，所述肺腺癌细胞株其骨、肺、肾上腺转移率达100％，同时有80％肾转移、75％肝转移、50％脑转移。

本发明中，采用肺腺癌脑转移的亲代细胞进行实验裸鼠左心室种植试验后，结果显示实验裸鼠出现好嗜睡、不好动的特征，或癌细胞通过眼管神经转移至眼部进而生长肿瘤；本发明进一步分离脑转移灶做细胞原代培养，脑转移细胞长出后扩增再进行实验裸鼠左心室种植，经过三个循环体内种植(脑转移发生、检出；原代培养、扩增)后，获得脑转移达60％的人肺腺癌脑转移亚株。

与现有技术的肺腺癌细胞具有明显区别的是，本发明所述的具有脑转移潜能的人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M具有以下生物学特性：贴壁生长，其具有多脏器转移、快速生长和代谢旺盛的特性；其中，其骨、肺、肾上腺转移率达100％，同时有80％肾转移、75％肝转移、50％脑转移；其人肺腺癌脑转移亚株的脑转移率达60％。

本发明通过分离纯化出来的向特定器官进行转移的脑转移细胞系，进行系统地全基因组芯片和microRNA芯片分析，将基因或microRNA的表达变化与基因组的扩增或缺失相联系，并结合microRNA的靶标数据库(miRBase)，筛选有位于基因组上缺失或扩增区域，同时有表达变化的microRNA，将上述microRNA的调控靶标(即受所述microRNA调控的基因)与在各转移细胞中表达发生变化、且位于基因组缺失或扩增区域的基因进行比较，挑选重叠的基因进行研究，发现关键或起决定作用的与靶向转移相关的基因或microRNA，深入揭示肺腺癌靶向转移的分子机理，为阻断转移提供候选的分子靶标，可用于肺腺癌病人的检测，评估其发生转移以及转移部位的风险，从而为有针对性地治疗提供依据，明确分子靶标功能，也为今后分子靶向治疗奠定基础。

本发明所述的具有脑转移潜能的中国人肺腺癌细胞株Yang2-脑M，是一个理想的人肺腺癌的脑转移研究的细胞模型，为系统研究肺癌脑转移提供了技术平台，在揭示人肺腺癌的转移机制和抗转移药物筛选的应用中有广阔的前景。

附图说明

图1显示CPA-Yang2亲代细胞。

图2显示了通过眼管神经形成脑转移的情况，其中，左侧为眼球伴肿瘤，右侧为脑，中间连接部分为眼管神经。

图3显示了micro CT情况，其中，左图为横断面，右图为冠状面。

图4为X ray。

图5显示了Yang2脑转移细胞×100的形态。

图6显示了Yang2脑转移病理HE×100的形态。

图7显示了荧光定量PCR和国人肺腺癌细胞SPC-A-1比较情况。

图8显示了荧光定量PCR和自身亲代人肺腺癌细胞CPA-Yang2比较情况。

具体实施方式

实施例1

取国人肺腺癌患者十次化疗，放疗一次后产生的胸、腹水为细胞原代培养的材料，经细胞培养，获得人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M(The Chinese Lung Adenocarcinoma cellwith Highly Brain Metastases，Yang2-Brain M)，已于2011年10月28日保藏，保藏单位：中国科学院微生物保藏中心CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC No.5405，分类命名：人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M。

其中，所采用的培养基为含10％小牛或胎牛血清RPMI1640或DMEM培养基，pH＝7，培养温度为37℃，5％CO₂。

经裸鼠左心室注射实验后发现有骨、脑、肝、肾上腺、肺多发转移；取出脑转移灶作为体外细胞培养和病理检测，经裸鼠体内外筛选三个cycles，获得脑转移率60％以上的亚株，裸鼠脑转移的特征为嗜睡、少动；脑转移小鼠能存活2个月左右；

荧光定量PCR验证所述的人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M，其表达的相关癌转移基因IL-6、IL-8、VEGFc、VEGFd、SVIL、ESM1、GJB5较CPA-Yang2细胞呈现高表达，证实该细胞株为高潜能脑转移肺腺癌细胞系，可作为良好的中国人肺腺癌脑转移细胞模型，可为药物干预、系统研究肺腺癌脑转移提供良好的技术平台。

Claims

1.一种高潜能脑转移中国人肺腺癌细胞株，其特征在于，所述细胞株的分类命名：人肺腺癌脑转移细胞株Yang2-脑M，保藏编号：CGMCC No.5405，保藏日期2011年10月28日。

2.权利要求1所述的高潜能脑转移中国人肺腺癌细胞株在筛选治疗人肺腺癌转移药物中的用途。