CN101717753B - 具有多脏器转移潜能的中国人肺腺癌细胞株 - Google Patents

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Abstract

本发明属微生物动物细胞系领域。采用肺腺癌患者十次化疗后产生的腹水作细胞原代培养的建系的材料，通过细胞培养，建立了具有多脏器转移高潜能的国人肺腺癌细胞株细胞株命名为CPA-Y2，保藏编号：CGMCC No.2708。所建立的细胞株，半悬浮半贴壁生长，亲代细胞的体积较SPC-A-1肺腺癌细胞小；在裸鼠皮下注射100万癌细胞，第八代50％致瘤，第十代起100％致瘤；能在骨、脑、肝、肺、肾和肾上腺多脏器转移；且该细胞对化疗耐药。所述细胞株是理想的人肺腺癌的多脏器转移研究的细胞模型，在揭示人肺腺癌的转移机制和抗转移药物筛选的应用中将有着广阔的前景。

Description

具有多脏器转移潜能的中国人肺腺癌细胞株
技术领域
本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域，具体涉及一种具有多脏器转移高潜能的中国人肺腺癌细胞株及其用途。
背景技术
肺癌是严重威胁人类生存和发展的恶性疾病之一，已成为肿瘤疾病中的头号杀手。虽然目前对肺癌的治疗已经取得长足的进展，但是肺癌死亡率仍长期居高不下，主要原因在于难以早期诊断和它的高转移性，许多患者首诊时即发现有多器官转移。所以，转移和复发仍旧是肺癌治疗的难题。然而，肺癌转移尤其是靶向转移(肿瘤细胞向特定器官进行转移)的分子机理还不清楚。肺腺癌的发病率呈逐年上升趋势，而且非常容易发生骨、脑、肝脏的转移，病人的预后很差。肿瘤转移相关分子的研究一直在开展，也发现了各种各样的分子如降解细胞基质的分子，细胞黏附分子，转移相关糖蛋白等等，但都没有对肿瘤向特定器官进行转移的机制进行说明。本专利立足于开发具有自主知识产权的中国人多器官转移的专利细胞系，旨在通过分离纯化出来的向特定器官进行转移的骨转移、脑转移、肝脏等多脏器转移细胞系进行系统地全基因组芯片和microRNA芯片分析，将基因或microRNA的表达变化与基因组的扩增或缺失相联系，并结合microRNA的靶标数据库(miRBase)，筛选那些有位于基因组上缺失或扩增区域的同时有表达变化的microRNA，将这些microRNA的调控靶标(即受这些microRNA调控的基因)与在各转移细胞中表达发生变化的且位于基因组缺失或扩增区域的基因进行比较，挑选那些重叠的基因进行研究，这样有利于发现关键的或起决定作用的与靶向转移相关的基因或microRNA，可以深入揭示肺腺癌靶向转移的分子机理，为阻断转移提供候选的分子靶标，可服务于肺腺癌病人的检测，评估其发生转移以及转移部位的风险，从而为有针对性地治疗提供依据，分子靶标功能的明确也为今后分子靶向治疗奠定基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有多脏器转移高潜能的中国人肺腺癌细胞株，所述的细胞株具有骨、脑、肝、肺、肾和肾上腺多脏器转移潜能。
本发明的进一步目的是提供该肺癌细胞株的医疗研究用途。
本发明采用取自56岁女性肺腺癌患者十次化疗后产生的腹水作细胞原代培养的材料，经细胞培养技术培养成功，建立的肺腺癌细胞株命名为CPA-Y2。经裸鼠动物实验证实，第八代细胞开始致瘤率，第十代细胞致瘤率已达到100％；体外培养细胞在显微镜下显示为贴壁生长且细胞面积较小(与SPC-A-1比较)；经裸鼠左心室种植(75-80万细胞/只)三周后陆续出现小鼠下肢不便，后经核素骨显像检测和病理确定为骨、肺、肾上腺转移达100％；同时有80％肾转移、75％肝转移、50％脑转移。(The Chinese Lung Adenocarcinoma cell with HighlyBone，Pulmonary，Brain，Liver，adrenal and kidney Metastases，CPA-Y2)。已于2008年10月8日保藏，保藏单位：CGMCC，北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No 2708，分类命名：中国人肺腺癌细胞系。
本细胞株具有以下生物学特性：
1，亲代细胞的体积较小(和SPC-A-1肺腺癌细胞比)。
2，致瘤率在裸鼠皮下注射100万癌细胞，第八代50％致瘤；第十代起100％。
3，具有骨、脑、肝、肺、肾和肾上腺多脏器转移的中国人肺腺癌细胞系。
4，第一代肺转移细胞经左心室注射裸鼠形成多脏器转移的时间为2-3周。
5，亲代细胞转移部位出现的比率，以肺、骨、肾上腺为突出。
6，荧光定量PCR测定，癌转移相关基因IGF、ETV5高表达。
7，患者十次化疗后产生大量胸、腹水提示该细胞对化疗耐药。
表1是细胞生物特性表。
表1
注：皮下滞瘤率系指每只裸鼠皮下注射百万细胞后统计。
本发明建立了一个具有多脏器高潜能转移的国人肺腺癌亲代细胞株。
本发明通过下述方法建立具有多脏器高潜能转移的国人肺腺癌亲代细胞株，
取肺腺癌患者十次化疗后产生的腹水作细胞原代培养的材料，采用实验动物免疫缺陷小鼠(nude mice，SCID mice，NIH-III BNX mice)，通过在免疫缺陷小鼠尾静脉注射1月后出现肺结节，取肺结节培养细胞，经实验小鼠注射后形成多脏器转移，经实验和病理证实是个良好的中国人肺腺癌多脏器转移细胞模型，为系统研究肺癌多发转移提供了技术平台。经网上查询，目前国内外未见有肺癌肝、脑转移模型的报道。
本发明建立了高潜能多脏器转移国人肺腺癌细胞系，能对国人肺腺癌转移进行早期诊断提供参考数据，还可进一步建立相关基因芯片技术，评估探索各种药物包括化学、生物、免疫、中医药、放射性药物等治疗疗效。为探索诊疗国人肺癌转移提供了技术平台。同时，进一步分析肺癌转移相关的功能基因组以及多脏器转移的相关基因，可加深对肺癌转移分子机理的认识，为肺癌转移的早期诊断、评估疗效提供一种有效的分子检测方法。
附图说明
图1是CPA-Y2早期细胞照片×100。
图2是2，CPA-Y2肝转移细胞×100。
图3是CPA-Y2脑转移细胞×100。
图4是4，CPA-Y2左肱骨转移细胞×100。
图5是CPA-Y2脑转移病理HE×100。
图6是6，CPA-Y2肝转移病理HE×100。
具体实施方式
实施例1
取肺腺癌患者十次化疗后产生的腹水作细胞原代培养的材料，采用实验动物免疫缺陷小鼠(nude mice，SCID mice，NIH-III BNX mice)，通过在免疫缺陷小鼠尾静脉注射1月后出现肺结节，取肺结节培养细胞，经细胞培养技术培养成功，建立了肺腺癌细胞命名为CPA-Y2。经裸鼠动物注射后实验显示，第八代细胞开始致瘤率，第十代细胞致瘤率已达到100％；体外培养细胞在显微镜下显示为贴壁生长且细胞面积较小(与SPC-A-1比较)；经裸鼠左心室种植(75-80万细胞/只)三周后陆续出现小鼠下肢不便，后经核素骨显像检测和病理确定形成多脏器转移，骨、肺、肾上腺转移达100％；同时有80％肾转移、75％肝转移、50％脑转移。实验和病理结果证实，所述的肺腺癌细胞CPA-Y2是良好的中国人肺腺癌多脏器转移细胞模型，为系统研究肺癌多发转移提供了技术平台。
实施例2
国人肺腺癌细胞(CPA-Y2)75×104，注入免疫缺陷小鼠血液系统，两周后隔天称重，第三周起每周进行核素骨显像检测，能证实该亲代细胞是高潜能多脏器转移肺癌细胞系。
所述的培养基为含10％小牛或胎牛血清RPMI1640或DMEM培养基，pH＝7，培养温度为37℃，5％CO2。
实施例3
免疫缺陷小鼠经左肺、左心室注射CPA-Y2人肺腺癌细胞后形成多脏器转移后再筛选建立单脏器转移各亚型细胞。
综合运用基因芯片、实时定量PCR、蛋白印迹(Western Blotting)等技术，进一步分析肺癌转移相关的功能基因组以及转移的相关基因。

Claims (1)

1.一种具有多脏器转移高潜能的国人肺腺癌细胞株，其特征在于，所述细胞分类命名为中国人肺腺癌细胞系，CPA-Y2，保藏编号：CGMCC No.2708。
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