CN103130787A

CN103130787A - 嘧啶酮酰胺类化合物及其制备方法、抗hiv活性和抗tmv活性

Info

Publication number: CN103130787A
Application number: CN2011103768118A
Authority: CN
Inventors: 汪清民; 王兹稳; 李悦; 谈娟; 王明晓; 姚雪; 乔文涛; 耿运琪; 刘玉秀; 王力钟
Original assignee: Nankai University
Current assignee: Nankai University
Priority date: 2011-11-24
Filing date: 2011-11-24
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2031-11-24
Also published as: CN103130787B

Abstract

本发明涉及嘧啶酮酰胺类化合物I以及它们的制备、抗HIV活性和抗TMV活性。通式I具有很好的抗艾滋病病毒活性和抗烟草花叶病毒活性，能很好地抑制艾滋病病毒(HIV)和烟草花叶病毒(TMV)。

式中取代基R¹和R²具体所指代的内容见说明书。

Description

嘧啶酮酰胺类化合物及其制备方法、抗HIV活性和抗TMV活性

技术领域

本发明涉及嘧啶酮酰胺类化合物I及其制备方法、抗HIV活性和抗TMV活性。

背景技术

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)引起的具有传染性的疾病。自1981年美国研究人员发现世界首例艾滋病病例以来，艾滋病已累计夺走了2700多万人的生命，逐渐成为人类的头号杀手。预计至2020年，将有2亿人感染HIV(2010，UNAIDS/10.11E|JC1958E.)。因此艾滋病被称为“世纪癌症”。HIV病毒是一个直径大约为10 nm的圆球体，核心有两个单股正链RNA和由病毒编码的逆转录酶、整合酶和蛋白酶(J.Mol.Biol.，1999，285，1-32.)。

1995年，美籍华裔科学家何大一教授发明了目前临床上常用的“鸡尾酒疗法”，即应用蛋白酶抑制剂和逆转录酶抑制剂组合，全面阻止病毒复制，降低HIV中单个点突变的可能性，从而延缓耐药性。尽管“鸡尾酒疗法”在诞生时给AIDS的治疗带来了一场革命，使得AIDS发病率和死亡率都有所下降，但仍有一部分病人对其中一种或多种药物产生抗药性，特别是这种疗法不能根除低水平状态下病毒持续进行的复制，HIV仍然存在于某些机体组织中，需要使用药物进行长期治疗；此外，组合使用治疗药物价格非常昂贵，限制了它们在不发达国家的应用(Science，2002，296，2320-2324.)。由于存在上述问题，人们希望通过对HIV的生命周期及其致病机制进行更为深入的研究，寻找作用于HIV生命周期中其他靶点的抗AIDS药物，从而在“鸡尾酒疗法”中添加一种具有新功能的药物，达到增加组合治疗的效果。

HIV-1整合酶催化病毒cDNA与宿主细胞基因组的整合，是HIV病毒复制周期中必需的关键酶。人体内无整合酶功能类似物。因此，整合酶是抗艾滋病药物研发的理想靶点。2007年10月默克公司优化筛选出来的小分子药物雷特格韦(raltegravir，图1)获得美国FDA批准，成为第一个也是目前唯一的整合酶抑制剂。针对整合酶的抗病毒研究成为了治疗AIDS的热点。2010年，Stephen Hare等人发表了一篇名为《Retroviral intasome assembly and inhibition of DNA strand transfer》的文章(Nature，2010，464，232-236)。研究人员培育出原型泡沫病毒(PFV)的整合酶晶体。他们通过对晶体的X射线衍射，得到其三维构型。这篇文章的意义在于PFV的整合酶与HIV整合酶是高度同源的，这相当于得到了非常近似于HIV整合酶的完整三维构型，而这一难题困扰了科学家20多年。通过对该整合酶结构的研究，有望设计出更安全有效的HIV整合酶抑制剂，解决病毒耐药性问题，改善治疗AIDS的方法与效果。

二酮酸类化合物是第一个机理确证的HIV-1整合酶抑制剂，它选择性地抑制整合酶的链转移功能，并且具有高效的细胞内抗病毒活性，也是第一个进入临床试验的HIV-1整合酶抑制剂结构类型。1999年，Merck公司Hazuda研究小组通过高通量筛选组合化合物库的方法，从25万个化学药品中筛选出2个二酮酸类化合物L-731988和L-708906(图1)，发现这2个化合物能够选择性抑制整合酶的链转移过程，并且具有很好的细胞内活性(Science，2000，287，646-650.)。这一发现，开创了二酮酸类化合物作为HIV-1整合酶抑制剂的新纪元。随着研究的深入，嘧啶酮类模板(图1)成为研究的热点。其中，百时美-施贵宝(Bristol Myers-Squibb)制药公司(WO2004062613A2，WO2007064316A1，WO2008306051A1)和默克公司(WO2005061501A2，WO2006060712A2，WO2010042392A2)成果显著。尤其是默克公司开发出了整合酶抑制剂raltegravir。美国私人公司Concert制药公司(WO2009009531A2)在raltegravir的基础上进行了氘代改性发展了氘代模板(图1)。氘是氢的一种同位素，但质量大于氢，因而在分子中会与碳原子形成稳定的化学键，这可能会大大改进药物的代谢特性，使药物产生更好的安全性、耐受性及疗效。

尽管raltegravir的开发给艾滋病患者带来了福音，但随着艾滋病患者生存和用药时间不断延长，药物不良反应、患者依从性、病毒耐药性等问题逐渐出现。解决这一问题的最好办法就是新药的研发。

结构式1

烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus，TMV)是一种植物正链RNA病毒。病毒粒体杆状，大小300×18nm(见附图)，有一中央空洞区，半径2nm。病毒粒体主要由衣壳蛋白和RNA组成(Annu.Rev.Phytopathol.，2004，42，13-34)。

TMV生命力相当顽强，在钝化温度90-93℃条件下经10分钟，稀释限点1百万倍，体外保毒期可达72-96小时。在无菌条件下致病力达数年，在干燥病组织内存活30年以上。该病毒有不同株系，我国主要有普通株系、番茄株系、黄斑株系和珠斑等4个株系，因致病力差异及与其他病毒的复合侵染而造成症状的多样性。

TMV可浸染38个科268种植物，该病毒病阻碍了烟草产量和品质的进一步提高，对烟草生产危害极大，一般年份发病率约为25％，严重的达50％以上，经济损失惨重。目前开发出的植物病毒防治剂在最佳施药浓度下防效一般都低于60％，其防治效果不理想，远远满足不了农业的需求。

发明内容

本发明的目的是提供嘧啶酮酰胺类化合物I(结构式2)以及它们的制备方法、抗HIV活性和抗TMV活性。本发明提供了一种简易的制备嘧啶酮酰胺类化合物I的方法。本发明发现嘧啶酮酰胺类化合物I具有很好的抗HIV活性，同时具有抗TMV活性。

本发明的嘧啶酮酰胺类化合物是具有如下通式I所示结构的化合物：

结构式2

本发明的嘧啶酮酰胺类化合物I的制备(方程式1)如下：

首先，以廉价易得的α-氨基异丁酸为原料，经Cbz保护和酰胺化后得2，再经三氟乙酐脱水得3，经羟胺加成得4，再与丁炔二酸二甲酯加成然后在二甲苯中回流得到合环产物5，在吡啶中与苯甲酸酐反应可以单保护羟基得6，再经硫酸二甲酯甲基化可得到氮甲基化产物7，在等当量的稀盐酸存在下经钯碳氢气还原得胺盐8，再与相应的酰氯R¹-Cl反应得到9，与对氟苄胺反应得10，再与相应的酰氯R²-Cl反应得嘧啶酮酰胺类化合物I。

a：Cbz-Cl，K₂CO₃；b：ClCO₂C₂H₅，NH₃·H₂O；c：(CF₃CO)₂O，NEt₃；d：NH₂OH HCl，KOH；e：DMADC，CHCl₃；f：xylene，reflux；g：pyridine，(PhCO)₂O；h：Me₂SO₄，LiH，1，4-Dioxane；i：Pd/C H₂，HCl；j：R¹-Cl，NEt₃；k：4-Fluorobenzylamine，MeOH；l：R²-Cl，NEt₃，CH₂Cl₂.

方程式1

上述通式和方程式中，R¹代表1-6碳烷基、1-6碳含氮/氧杂环羰基、1-6碳草酰胺基、5-15碳糖取代基；

R²代表氢、1-10碳烷基、1-10碳烷基羰基、1-10碳烷氧基羰基、1-10碳烷胺基羰基、1-10碳烷胺基硫羰基、5-15碳糖取代基。

本发明提供的嘧啶酮酰胺类化合物I具有很好的抗HIV活性，能很好地抑制细胞感染，同时具有抗TMV活性。

附图说明：TMV结构示意图1、RNA；2、衣壳体；3、衣壳。

具体实施方式

下述的实施例和生测试验结果可用来进一步说明本发明，但不意味着限制本发明。

实施例1：嘧啶酮酰胺类化合物I-5和I-6的合成(见方程式2)

方程式2

Cbz-2-氨基异丁酰胺2的合成：

在反应瓶中，加入50g 2-氨基异丁酸1，二氧六环，200.97g无水K₂CO₃，搅拌下，加入124.15g氯甲酸苄酯，反应10h，加入乙醚，分液，乙醚相再用饱和Na₂CO₃溶液萃取，水相调酸性，萃取，干燥，脱溶得油状粗产品Cbz-2-氨基异丁酸124.10g，收率大于100％，熔点65-66℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：9.24(brs，1H，COOH)，7.35(s，5H，ArH)，5.39(brs，1H，NH)，5.10(s，2H，ArCH₂)，1.58(s，6H，C(CH₃)₂)；未进行进一步提纯直接用于下一步反应。

在反应瓶中，加入上步制备的酸粗品124.10g，THF，三乙胺63.74g，搅拌下，加入氯甲酸乙酯63.22g，反应1h，加入氨水99g，反应10h，脱溶得白色固体，加饱和食盐水，抽滤烘干得白色固体产品107.12g，两步收率93.5％，熔点112-114℃，¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：7.36(s，5H，ArH)，5.41(brs，1H，NH)，5.10(s，2H，ArCH₂)，1.73(s，2H，NH₂)，1.55(s，6H，C(CH₃)₂).

Cbz-2-氨基异丁腈3的合成：

在反应瓶中，加入22.7g酰胺2，二氯甲烷，21.4g三乙胺，22.2g三氟乙酐，反应10h，加碳酸氢钠水溶液，分液，水相以二氯甲烷萃取，合并有机相分别用碳酸氢钠水溶液、水和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，脱溶得白色固体产品19.9g，收率95％，熔点75-77℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：7.36(s，5H，ArH)，5.14(s，2H，ArCH₂)，5.03(brs，1H，NH)，1.69(s，6H，C(CH₃)₂).

[2-氨基-2-(羟基亚氨基)-1，1-二甲基乙基]氨基甲酸苄酯4的合成：

在反应瓶中，加入21.8g原料腈3，异丙醇，磁力搅拌，加入羟胺，反应4h，加入正戊烷，搅拌2h，抽滤，食盐水洗涤得白色固体产品21.6g，收率86％，熔点162-163℃，¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：9.09(brs，1H，NOH)，7.35(s，5H，ArH)，7.11(brs，1H，NH)，5.22(brs，2H，ArCH₂)，4.98(s，2H，NH₂)，1.38(s，6H，C(CH₃)₂).

嘧啶酮甲酸酯5的合成：

在反应瓶中加入20.8g原料4，氯仿，磁力搅拌下加入12.9g丁炔二酸二甲酯 (DMADC)，反应11h，加水洗涤，无水硫酸镁干燥，脱溶，加入二甲苯，回流反应16h。脱溶，甲醇重结晶得浅黄色固体12.6g，两步收率42％，熔点182-183℃，¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：12.61(brs，1H，NH)，10.27(brs，1H，OH)，7.48(brs，1H，NH)，7.35(s，5H，ArH)，4.98(s，2H，ArCH₂)，3.82(s，3H，CO₂CH₃)，1.47(s，6H，C(CH₃)₂).

嘧啶酮单苯甲酰酯6的合成：

在反应瓶中加入18.92g原料5，吡啶，13.03g苯甲酸酐，反应10h，脱溶，加入乙酸乙酯，盐酸，分液，无水硫酸镁干燥，脱溶，柱层析得白色固体产品23.23g，收率：95.32％，熔点56-58℃，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：12.32(brs，1H，NH)，8.14(d，J＝7.2Hz，2H，ArH)，7.62-7.67(m，1H，ArH)，7.42-7.58(m，2H，ArH)，7.31(s，5H，ArH)，5.55(brs，1H，NH)，5.04(s，2H，ArCH₂)，3.82(s，3H，CO₂CH₃)，1.66(s，6H，C(CH₃)₂).甲基嘧啶酮7的合成：

在反应瓶中，加入23.23g原料6，无水1，4-二氧六环，0.6g氢化锂，反应1h，加入12.59g硫酸二甲酯，反应3h，脱溶，加乙酸乙酯溶解，分别以饱和碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，脱溶，柱层析得氮甲基化产物7：白色固体15.55g，收率65％，熔点141-142℃，¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：8.19(d，J＝7.5Hz，2H，ArH)，7.64(t，J＝6.9Hz，1H，ArH)，7.51(t，J＝7.2Hz，2H，ArH)，7.33(s，5H，ArH)，5.42(brs，1H，NH)，5.04(s，2H，ArCH₂)，3.80(s，3H，CO₂CH₃)，3.65(brs，3H，NCH₃)，1.74(s，6H，C(CH₃)₂).

盐酸盐8的合成：

在反应瓶中，加入3g原料7，无水甲醇，6N的盐酸1.04mL，氢气氛围中加入10％的Pd/C(0.6g)，反应3h，抽滤回收Pd/C，滤液脱溶，重结晶得白色固体2.25g，收率94％，熔点227-229℃(dec.)，¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.79(brs，3H，HCl，NH₂)，8.09(d，J＝7.7Hz，2H，ArH)，7.81(t，J＝7.2Hz，1H，ArH)，7.65(t，J＝7.7Hz，2H，ArH)，3.79(s，3H，CO₂CH₃)，3.63(s，3H，NMe)，1.82(s，6H，C(CH₃)₂).

化合物9-1的合成：

在反应瓶中，加入3.2g原料8，二氯甲烷，2.12g三乙胺，2.1g N，N-二乙基氯草酰胺，反应8h，加入碳酸氢钠水溶液，分液，水相以乙酸乙酯萃取，合并有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，脱溶，柱层析得白色固体产品3.4g，收率86％，熔点158-160℃；¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：7.17(d，J＝8.2Hz，2H，ArH)，7.92(s，1H，NH)，7.61-7.68(m，1H，ArH)，7.47-7.54(m，2H，ArH)，3.81(s，3H，CO₂CH₃)，3.67-3.73(m，2H，NCH₂CH₃)，3.66(s，3H，NMe)，3.35-3.46(m，2H，NCH₂CH₃)，1.81(s，6H，C(CH₃)₂)，1.14-1.23(m，6H，NCH₂CH₃)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：163.6，163.3，160.4，160.1，159.5，158.5，139.7，136.9，133.9，130.6，128.6，57.7，52.8，43.4，42.5，42.3，38.3，33.3，27.2，14.8，14.0，12.6，12.5；Anal.Calcd.for C₂₃H₂₈N₄O₇：C，58.47；H，5.97；N，11.86.Found：C，58.27；H，6.04；N，11.87.

化合物I-5的合成：

在反应瓶中，加入2.70g原料9-1，甲醇，2.14g对氟苄胺，回流反应20h，脱溶，加NaOH溶液，乙醚萃取除去杂质，水相用盐酸调酸性析出大量白色固体，以二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，脱溶得浅粉色固体产品1.84g，收率70％，熔点108-110℃；¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)：12.21(s，1H，OH)，9.37(s，1H，NH)，9.09(t，J＝5.6Hz，1H，NH)，7.40(t，J＝7.3Hz，2H，ArH)，7.17(t，J＝8.7Hz，2H，ArH)，4.51(d，J＝5.9Hz，2H，ArCH₂)，3.56(s，3H，NMe)，3.21-3.33(m，4H，NCH₂CH₃)，1.67(s，6H，C(CH₃)₂)，1.05-1.12(m，6H，NCH₂CH₃)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d6)：168.4，163.6，163.4，162.5，160.1，158.5，152.0，145.6，134.9，129.5，129.5，124.4，115.2，115.0，56.6，41.6，38.2，32.7，26.9，14.1，12.5；HRMS(ESI)calcd for C₂₂H₂₉FN₅O₅(M+H)⁺：462.2147，found：462.2140.

化合物I-6的合成：

在反应瓶中，加入0.2g(0.43mmol)原料I-5，二氯甲烷，0.13g三乙胺，0.07g乙酰氯，搅拌3h，分别以碳酸氢钠，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，脱溶，柱层析得浅黄色泡沫固体0.19g，收率87％，熔点76-78℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：7.99(s，1H，NH)，7.96(s，1H，NH)，7.30(s，2H，ArH)，7.02(s，2H，ArH)，4.54(s，2H，ArCH₂)，3.63(s，3H，NMe)，3.33-3.72(m，4H，CH₃CH₂)，2.41(s，3H，CH₃CO₂)，1.75(s，6H，NHC(CH₃)₂)，1.13-1.23(m，6H，CH₃CH₂)；HRMS(ESI)calcd for C₂₄H₃₀FN₅NaO₆(M+Na)⁺：526.2072，found：526.2077.

实施例2：部分嘧啶酮酰胺类化合物I的化学结构式和物理常数，见表1：

表1.部分嘧啶酮酰胺类化合物I的化学结构式和物理常数

实施例3：抗HIV活性的测定，测定程序如下：

1测试材料：

①TZM细胞：可响应HIV-1病毒感染的一种细胞系；

②HIV-1假病毒：由HIV-1包膜缺失的质粒和提供VSVG包膜的质粒(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993，90，8033-8037)转染后组装而成，实验中是制备成病毒储液备用；

③检测药物：正对照药物AZT，正对照药物Raltegravir(NIH提供)，化合物I-1到I-9。

2测试方法

1、MTT法细胞毒测试(J.Immunol.Methods 1983，65，55-63)：接种TZM-BL细胞到96孔板中，每孔铺10⁴个细胞，待细胞长到50％-60％汇合度时加入一定浓度的待测药物，48h后检测细胞存活率。本实验采用SRB(磺酰罗丹明)染色法检测细胞存活率。细胞培养48h后，用50％TCA(三氯乙酸)固定1h(4℃)，然后用水洗5次，室温晾干；加入0.4％SRB染色，室温0.5h，1％乙酸洗涤5次，室温晾干；加入未缓冲的10mM的Tris溶液溶解结合的染料，490nm-530nm下测光吸收值。

细胞毒＝(只加药物的OD₄₉₀/不加药的细胞本底的OD₄₉₀)×100％。

2、病毒抑制实验：将TZM指示细胞系接种96孔细胞培养板；24h后加入待测药物；药物孵育4h后加入HIV-1假病毒感染；感染48h后检测报告基因表达，指示病毒感染情况(如果药物对病毒有抑制作用，病毒感染下降，报告基因活性则降低)。

注：每次每孔中接种的细胞量相同(10⁴个)，待测药物设3孔重复，假病毒每孔加入15个TCID₅₀的量。

抑制率＝(只加病毒的荧光素酶活性-加病毒加药物荧光素酶活性)/(只加病毒的荧光素酶活性-本底荧光素酶活性)×100％。

首先对嘧啶酮酰胺类化合物进行细胞毒性测试，在10μM浓度下，均未表现出细胞毒性。

表2为部分化合物的抑制活性测试结果。

表2部分嘧啶酮酰胺类化合物I的抗HIV活性测试结果

从表2中数据可见，嘧啶酮酰胺类化合物I表现出很好的抗HIV活性；在上述测试条件下抑制活性明显优于商品化品种MK-0518和AZT；尤其是化合物I-3对HIV整合酶的抑制活性达到pM级别(0.04pM)，同等测试条件下是商品化品种MK-0518的20万倍。

实施例4：抗TMV活性的测定，测定程序如下：

1、病毒提纯及浓度测定：

病毒提纯及浓度测定参照南开大学元素所生测室编制烟草花叶病毒SOP规范执行。病毒粗提液经2次聚乙二醇离心处理后，测定浓度，4℃冷藏备用。

2、化合物溶液配制：

称量后，原药加入DMF溶解，制得1×10⁵μg/mL母液，后用含1‰吐温80水溶液稀释至所需浓度；宁南霉素制剂直接兑水稀释。

3、离体治疗作用：

摩擦接种珊西烟适龄叶片，用流水冲洗，病毒浓度10μg/mL。收干后剪下，沿叶中脉对剖，左右半叶分别浸于1‰吐温水及药剂中，30min后取出，于适宜光照温度下保湿培养，每3片叶为1次重复，重复3次。3d后记录病斑数，计算防效。

4、活体保护作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1‰吐温80水溶液对照。24h后，叶面撒布金刚砂(500目)，用毛笔蘸取病毒液，在全叶面沿支脉方向轻擦2次，叶片下方用手掌支撑，病毒浓度10μg/mL，接种后用流水冲洗。3d后记录病斑数，计算防效。

5、活体治疗作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，用毛笔全叶接种病毒，病毒浓度为10μg/mL，接种后用流水冲洗。叶面收干后，全株喷雾施药，每处理3次重复，并设1‰吐温80水溶液对照。3d后记录病斑数，计算防效。

6、活体钝化作用：

选长势均匀一致的3-5叶期珊西烟，将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30min后，摩擦接种，病毒浓度20μg/mL，接种后即用流水冲洗，重复3次，设1‰吐温80水溶液对照。3d后数病斑数，计算结果。

抑制率(％)＝[(对照枯斑数-处理枯斑数)/对照枯斑数]×100％

表3为部分化合物的抑制活性测试结果。

表3部分嘧啶酮酰胺类化合物I的抗TMV活性测试结果

从表3中数据可见，大部分化合物表现出了抗TMV活性，虽不及病毒唑和宁南霉素，但可以作为先导进一步优化。

Claims

1.如下通式所示结构的嘧啶酮酰胺类化合物I(图1)，式中，R¹代表1-6碳烷基、1-6碳含氮/氧杂环羰基、1-6碳草酰胺基、5-15碳糖取代基；R²代表氢、1-10碳烷基、1-10碳烷基羰基、1-10碳烷氧基羰基、1-10碳烷胺基羰基、1-10碳烷胺基硫羰基、5-15碳糖取代基。

图1

其特征在于优选的通式I所示的化合物是：

1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基乙酰酯I-1；

1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基甲磺酰酯I-2；

1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基苯甲酰酯I-3；

1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基均三甲基苯甲磺酰酯I-4；

N-(4-氟苄基)-1-甲基-2-(2-N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-5-羟基-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-4-甲酰胺I-5；

1-甲基-2-(2-N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基乙酰酯I-6；

1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基甲磺酰酯I-7；

1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基苯甲酰酯I-8；

1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基均三甲基苯甲磺酰酯I-9。

2.一种简易的制备嘧啶酮酰胺类化合物I的方法，在参考raltegravir制备方法(WO2006060712A2)的基础上发展了方程式1所示的合成方法：首先以α-氨基异丁酸为原料，经Cbz保护和酰胺化后得2，再经三氟乙酐脱水得3，经羟胺加成得4，再与丁炔二酸二甲酯加成然后在二甲苯中回流得到合环产物5，在吡啶中与苯甲酸酐反应可以单保护羟基得6，再经硫酸二甲酯甲基化可得到氮甲基化产物7，在等当量的稀盐酸存在下经钯碳氢气还原得胺盐8，再与相应的酰氯R¹-Cl反应得到9，与对氟苄胺反应得10，再与相应的酰氯R²-Cl反应得嘧啶酮酰胺类化合物I。

a：Cbz-Cl，K₂CO₃；b：ClCO₂C₂H₅，NH₃·H₂O；c：(CF₃CO)₂O，NEt₃；d：NH₂OH HCl，KOH；e：DMADC，CHCl3；f：xylene，reflux；g：pyridine，(PhCO)₂O；h：Me₂SO₄，LiH，1，4-Dioxane；i：Pd/CH₂，HCl；j：R¹-Cl，NEt₃；k：4-Fluorobenzylamine，MeOH；l：R²-Cl，NEt₃，CH₂Cl₂.

方程式1

其特征在于：①、按照方程式1的操作可以由2-氨基异丁酸(1)高效地制备化合物3；②、按照方程式1的操作可以由化合物10方便地制备出嘧啶酮酰胺类化合物I。

3.按照权利要求2所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的制备方法，其特征在于嘧啶酮酰胺类化合物I-5和I-6用方程式2所示的方法制备。具体包括下述步骤：首先按照方程1描述的步骤合成出盐酸盐8，与N，N-二乙基氯草酰胺反应得9-1，再与对氟苄胺反应得I-5，最后与乙酰氯反应制得I-6。

方程式2

4.权利要求1所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的应用，其特征在于它们的抗HIV活性，能在很低浓度下很好地抑制艾滋病病毒(HIV)。

5.按照权利要求4所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的应用，其特征在于1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基苯甲酰酯I-3具有很好的抗HIV活性，抑制活性达到pM级别(0.04pM)，同等测试条件下是商品化品种MK-0518的20万倍。

6.按照权利要求4所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的应用，其特征在于1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基苯甲酰酯I-8具有很好的抗HIV活性，抑制活性达到pM级别(0.08pM)，同等测试条件下是商品化品种MK-0518的10万倍。

7.按照权利要求4所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的应用，其特征在于1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基乙酰酯I-1，1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基甲磺酰酯I-2，1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基均三甲基苯甲磺酰酯I-4，N-(4-氟苄基)-1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-5-羟基-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-4-甲酰胺I-5，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基乙酰酯I-6，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基甲磺酰酯I-7，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基均三甲基苯甲磺酰酯I-9具有很好的抗HIV活性，同等测试条件下抑制活性明显优于商品化品种MK-0518和AZT。

8.权利要求1所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的应用，其特征在于它们的抗TMV活性，能够抑制烟草花叶病毒的感染。

9.按照权利要求8所述的嘧啶酮酰胺类化合物I的应用，其特征在于MK-0518，1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基乙酰酯I-1，1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基甲磺酰酯I-2，1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基苯甲酰酯I-3，1-甲基-2-(2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-2-甲酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基均三甲基苯甲磺酰酯I-4，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基乙酰酯I-6，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基甲磺酰酯I-7，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基苯甲酰酯I-8，1-甲基-2-(2-(N，N-二乙基草酰胺基)-丙-2-基)-4-(4-氟苄胺基甲酰基)-6-氧代-1，6-二氢嘧啶-5-羟基均三甲基苯甲磺酰酯I-9具有抗烟草花叶病毒活性。