CN103079536A - 预防脱毛及促进毛发生长的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种预防脱毛或促进毛发生长，并且包含磷脂作为有效成分的组合物。更详细地，本发明涉及一种预防脱毛或促进毛发生长，并且包含从动物萃取的磷脂作为有效成分的组合物。

Description

预防脱毛及促进毛发生长的组合物

技术领域

本发明涉及用于预防脱毛及促进毛发生长的、包含磷脂作为有效成分的组合物，更具体地，涉及用于预防脱毛及促进毛发生长的、包含来源于动物的磷脂作为有效成分的组合物。

背景技术

过量的男性荷尔蒙作用、血液循环不良、由于过氧化物和细菌等导致的头皮功能下降、遗传因素、老化、压力等被认为是脱毛的原因，但是直至目前不知道脱毛的原因。近年来，由于因饮食生活改变而导致的营养不均衡、因环境污染和社会环境而导致的压力程度的增加等原因，担心脱毛的人口的比例在增加，年龄在继续降低，并且担心脱毛的女性人口的比例也逐步地增加。

为了治疗及预防此类脱毛，已经开发了具有用于刺激血液循环、强化毛囊功能、头皮保湿及抑制男性荷尔蒙的以女性荷尔蒙作为主要成分的配方，或具有米诺地尔、非那雄胺、粘多糖生长素（Trichosaccharide）等的配方。米诺地尔对毛发生长的作用机理还不明确，但是认为通过血管扩张增加营养物供应以及打开钾通道的效果来诱导毛发生长。非那雄胺是5-α还原酶抑制剂，用作治疗前列腺的药物和通过不同的剂量预防脱毛的药物。粘多糖生长素在方便性和效能方面是优良的药品。然而，由于用于制备非那雄胺的试剂是昂贵或高毒性的，所以存在制造成本高以及污染环境的问题。特别是，存在以下问题：由于难以去除副产物，所以目标产物的纯度降低；以及由于采用了其活性容易被水抑制的试剂和活性衍生物，所以难以大量生产。

发明内容

技术问题

本发明是被设计用于解决上述问题以及满足上述需求，本发明的目的是提供一种预防脱毛或促进毛发生长的组合物。

技术方案

为了实现上述目的，本发明的例示性实施方式提供了用于预防脱毛或用于促进毛发生长的组合物，其中该组合物包含作为有效成分的磷脂。

根据本发明一种实施方式，磷脂优选从动物中提取，所述动物优选是家畜，例如，牛或猪，但本发明不限于此。

根据本发明的实施方式，磷脂优选采用从肺的洗涤液或肺组织的破碎物中提取，但本发明不限于此。

根据本发明优选的实施例，磷脂优选是“具有高饱和度和相对短的烃链（尾链）长度的脂肪酸的磷脂质”，更优选烃链长度为14~16，但本发明不限于此。例如，所述磷脂包含选自由二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸和磷脂酰肌醇所组成的组中的任一种。

根据本发明的优选实施例，所述组合物更优选包含2价阳离子和含羧基的有机酸或其盐，但本发明不限于此。

以下对本发明进行描述。

本发明通过对所有脱毛症状如男性型脱毛和女性型脱毛中所体现出的一般生物化学或生理学的现象的文献的调查提出解决脱毛的新方法。对脱毛的新调查以及脱毛的解决方案如下：

Yanez Soler在他已公开的论文中提出如下假设：脱毛是由从皮脂腺分泌的皮脂流入和进入毛囊或真皮乳头导致的，即使该皮脂应该沿着毛发向外分泌。他提出在具有沿着头发轴容易向外排出皮脂的条件的情况中，例如，当毛发的厚度越厚或者毛发的密度越高时，不容易发生脱毛。解释该假设的很好例子是与枕头接触的部位不出现脱毛现象。那是因为当人们睡觉时，由于枕头毛发被压扁并相互接触，所以皮脂容易沿着毛发表面去除（Yanez Soler2004，Med.Hypotheses62:980-985）。

*本发明假设导致脱毛的根本原因与由组成中性脂肪成分的皮脂的过度分泌及积累密切相关。基于上述假设，我们尝试解释所有引起脱毛的原因。特别是，尝试简单地地解释男性随着年龄增长受脱毛之苦的理由。脱毛的生理学原因和生物化学的原因具有以下文献中的共性和理论合理性。

◎雄性激素，一种男生荷尔蒙，与体内代表性的中性脂肪的三酰甘油（TG）和胆固醇(cholesterol)的增加密切相关（Kao等人，2001，J.Int.dermatol，116:443-451）。

◎随着年龄增长，与体内的极性脂肪相比，中性脂肪的比例增加（Nazzaro-Porro等人，1979，J.Invest.Dermatol，73:112-117）。

◎皮脂的分泌和皮脂腺的活跃与根据年龄的男性荷尔蒙的含量密切相关（Pochi等人，1979，J.Invest.Demotol，73:108-111）。

◎由于压力，增加了胆固醇（一种代表性中性脂肪）的合成（O Donnell等人，1987，J.Royal Society Med，80:339-341）。

◎在一些癌症患者接受化疗后，增加了中性脂肪(特别是三酰甘油)和低密度脂蛋白(LDL)及LDL-胆固醇（Alexopoulos等人，1992，Cancer Chemother.Pharmacol，30:412-416）。

◎在组成皮脂及表皮周边脂质的不饱和脂肪酸处在通过由脂质过氧化过程产生的单线态氧(¹O₂)的氧化应激的情况时，可以发生脱毛（Naito等人，2008，International.J.Mol.Med.22:725-729）。

◎一些受脱毛之苦的患者可能表现微炎症。过度的皮脂分泌可能提供附着和增殖微生物的良好环境（Mah◎等人，2000，Internatonal J.Dermatol，39:576-584）。

由以上列出的科学依据，可以容易推理出由于男性荷尔蒙、压力及年龄增长，体内的中性脂肪的比例可能增加，并且由中性脂肪组成产生的过度皮脂分泌和合成可能引起脱毛症状。在由于遗传因素引起脱毛的情况中，可以推理出当存在对中性脂肪的机制的遗传因素时，可以诱发极性脂肪和中性脂肪之间比例的不均衡，因此可以刺激脱毛。特别是，可以预料到由于线粒体主要起到脂质机制有关的作用，所以秃头遗传是线粒体传递路径的母系遗传。一般认为秃头可以由任何与线粒体相关的突变或脂质机制不均衡产生。

一般认为作为女性不显示男性型脱毛的理由，女性显示出相对低的生理学皮脂分泌，而且通常她们与男性相比彻底洗干净她们的脸，以及在洗脸时通过使用多种化妆品有效去除她们的中性脂肪皮脂成分。此外，可以推论出化妆品中包含的多种脂肪酸、脂肪酸衍生物及多种的乳化剂成分防止中性脂肪皮脂具有高的粘度，使得她们没有显示出男性型脱毛症状。

另外，一般可以基于同样的理由来说明具有少量体毛的亚洲人与具有大量体毛的西方人之间的差别。亚洲人以碳水化合物摄取为主，当在体内开始脂肪积累时容易增加储存型的中性脂肪，使得亚洲人的体毛发育与西方人相比更低效。可以基于相同的理由来说明此现象。

当皮脂（一种中性脂肪）不沿着毛发往外排出，而是转移到毛囊方向，然后累积时，在被毛细管提供营养物的毛囊细胞及周边细胞会存在问题。由于细胞增殖和细胞活动所需要的营养物以胶束或者脂质体（HDL或LDL，分泌囊包或者板层小体等）形式提供，所以如果皮脂（一种中性脂肪）在毛囊细胞周围累积，则以被脂质膜包围状态提供的营养物的输送会被中断。另外，由于中性脂肪挤出水（水分），所以将阻塞水溶性小分子（葡萄糖或氨基酸等）输送至毛囊细胞。可以描述为：当发生脱毛时所共同表现出的毛囊小型化现象，其是通过抑制毛囊及所有相关的周边细胞提供来自血管的良好营养物，从而收缩细胞活动及大小，然后脱落细胞。此外，可以推论出：如果根据毛囊细胞的周期毛发脱落一次，应该再生长新的毛发，但是中性脂肪的积累抑制了形成毛囊的干细胞输送到真皮乳头，由此抑制了形成新的毛发。

近年来，由受脱毛之苦的20~30岁年轻男性在增加。引起年轻男性脱毛的原因可以解释为与如下的中性脂肪代谢有关。在20世纪80年代，植物油（大豆油、玉米油、葡萄籽油、棉籽油/橄榄油等）以廉价的价格大量流通，因此各种饮食生活中增加了油炸类或加油食物摄取。商业化的植物油主要通过采用中性溶剂（例如，正己烷等）的萃取法大量制备。由于用中性溶剂的萃取法不给包含于植物的极性脂质包含到产品的条件或机会，因此几乎纯粹的中性脂肪组成的清晰且透明的油进入市场。其结果是，可以推理出现代人摄取许多包含不饱和脂肪酸的植物中性脂肪，有了高的中性脂肪代谢依存度，还具有高水平的中性脂肪在体内的累积和中性脂肪成分的皮脂分泌。如以上所述的，过多的中性脂肪可以引起脱毛。另外，由于来源于植物的中性脂肪包含大量不饱和脂肪酸，当暴露在空气中时，中性脂肪将通过一系列的化学反应，即当暴露在空气中时通过与氧分子结合的“脂质过氧化”。通过过氧化过程产生的氧化应激可能引起脱毛加速。年轻人脱毛可以通过个人的精神压力产生，但脱毛能够由中性脂肪有关的一系列生理学作用来解释。另外，认为存在部分植物不饱和脂肪酸转化为花生四烯酸，由此增加炎症反应的可能性。

当皮脂的分泌具有过多的中性脂肪成分以及皮脂逆向移动到毛囊引起脱毛时，可以通过使用现有已知的传统方法减轻脱毛的症状。例如，可以采取如下方法：例如，使用抑制雄性激素活性的方法来降低皮脂合成和皮脂分泌的方法；或者使用防止由胆固醇合成雄性激素的抑制剂来降低雄性激素活性的方法。例如，使用米诺地尔（血管扩张剂的）和5α-还原酶（非那雄胺）的方法作为毛发生长的解决方案。然而，众所周知当长期使用上述两种药物时才能获得效果，并且还众所周知在某些使用者中没有预防脱毛的效果。已有报道长期服用非那雄胺可能产生如性功能障碍、精液减少及性欲减少等副作用（Kaufman等人，1998，J.Am.Acad.Dermatol，39：578-589），米诺地尔对一些患者可能伴随如接触性皮肤炎、湿疹等症状，或引起头痛（Oslen等人，2002，J.Am Acd.Dermatol，47:377-385)。

作为预防脱毛的其它方法，有用具有强力洗涤效果的洗涤剂、洗发剂等连续不断地去除皮脂的方法。连续地去除皮脂的方法具有防止皮脂反向移动到毛囊的可能性。然而，会存在如下机会：如果用强力的洗涤剂或洗发剂，可能产生对头皮或表皮的化学刺激，或可能损坏它们天然固有的保护功能，从而产生相反的效果。

因此，存在一种稳定的方法，其不是减少产物或皮脂分泌物、或者简单地去除皮脂累积的方法，而将皮脂的物性转换为容易排出，由此预防脱发；并且还产生容易将营养物供应给毛囊细胞和周围细胞的条件以促进毛发生长。

根据本发明，发现当将包含从动物肺中提取后提纯的磷脂、2价阳离子、以及有机酸（关于防止通过采用有机酸、有机酸盐和2价阳离子的pH缓冲液来防止磷脂结块的现象；例如，柠檬酸、柠檬酸盐，pH值为5.8）的组合物局部应用于小鼠的表皮时，该组合物除了缓和表皮的发炎之外，可以促进毛囊的分化和毛发生长。

本发明的观察结果显示出与传统结果所观测的不同类型的毛囊细胞活动（毛囊形成的典型过程，即由表皮基底细胞层的发育开始，之后在新的膨胀部形成毛囊）。由观察组织学检查的结果，可以确定：分布在皮下组织层的已有的毛囊细胞快速分化并且生长，与在传统论文中已经公开的大量结果相比产生了大量的毛囊（参见图7和图8）。由以上结果，我们考虑了用于毛发生长的组合物的功能，然后创立了引起脱毛相关的新理论。

因此，本发明是关于预防脱毛和促进毛发生长的组合物。本发明创立关于脱毛原因的新理论，并且作为新概念提出了用于防止和促进毛发生长的组合物。包含通过去除来源于动物的肺组织的中性脂肪和蛋白质而提纯的磷脂、2价阳离子（钙离子和/或镁离子）和/或有机酸（例如，柠檬酸和柠檬酸盐）的组合物促进了毛发生长。本发明的特征在于：使用从动物和人的肺组织向体外分泌的特定磷脂，其不同于从鸡蛋或者大豆中提取的磷脂（一般称为“软磷脂”），其中，由于从动物或人分泌的磷脂对磷脂的氧化具有稳定性，所以当其应用于暴漏在空气中的头皮和表皮部位时，是有利的。

用在本申请说明书的术语“提取物”的意思是指其通常为上述技术领域中熟知的粗提取物，然而在广义上包括上述的溶剂组分。

本发明的肺提取物通过使用溶剂来获得，并且通过进一步应用提纯工艺来获得。例如，作为本发明的肺提取物，包括从提取物中通过具有某些分子截留值（cut-off value）的超滤膜所获得的组分，和通过进一步进行的多种提纯方法，例如，通过使用各种色谱的分离（通过根据大小、电荷、疏水性或亲和力分离而制造的）所获得的组分。

根据本发明的肺提取物或者其馏分可以通过进一步的工艺如真空蒸馏以及冷冻-干燥或喷雾干燥来制备成粉末类型。

本发明的组合物起到非常有效地预防脱毛及促进毛发生长的作用。在申请说明书中所使用的术语“预防脱毛”和“促进毛发生长”用作相同的含义，并且与本技术领域中使用的其它术语、毛发生长具有相同的含义。

根据本发明的优选实方式，本发明的组合物可以作为药物组合物、化妆品组合物或食品组合物的形式提供。

在其中本发明的组合物作为药物组合物制备的情况中，本发明的药物组合物包括药学上可接受的载体。包含于本发明的药物组合物中的药学上可接受的载体包括：作为在制备时常见使用的载体，乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸、镁及矿物油，但本发明不限于此。本发明的药物组合物可以进一步包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、乳剂、悬浮液、防腐剂等。适合的药学上可接受的载体或配方在雷明顿的制药科学（1995，第十九版）（Remington’s Pharmaceutical Sciences(19^th ed.,1995))中有详细描述。

本发明的药物组合物可以口服或非肠道给药，优选地非肠道给药。更优选地，通过以局部应用型进行施用。

根据本发明的药物组合物的合适剂量可以根据诸如配制方法、给药方法、患者年龄、患者体重、患者性别、患者病态、饮食、给药期间、给药途径、排泄率、以及反应灵敏度等因素进行多种规定。基于成人，包含于本发明的药物组合物中的磷脂（一种生物活性物质）的剂量在0.001~1000mg/kg范围内，优选在0.001~100mg/kg，更优选在0.01~50mg/kg。

本发明的药物组合物可以被制备为单位容量型，或者通过根据由熟知本发明相关技术领域的技术人员可以容易进行的方法，用药学上可接受的载体和/或赋形剂将其放入高容量的容器来制备。此时，剂型可以是溶液、悬浮液、糖浆剂、或在油或水介质中的乳剂；或者可以是提取物、消散剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或者胶囊剂的类型。另外，可以进一步包括分散剂和稳定剂。

在其中本发明的组合物作为化妆品组合物制备的情况中，本发明组合物包含上述肺提取物和由此分离的磷脂，以及还包含通常用于化妆品组合物的成分，其中所述成分包括：例如，辅剂如抗氧化剂、稳定剂、溶解剂、维生素、染料、调味品以及载体。此外，除了上述肺提取物和由此分离的磷脂之外，本发明的组合物可以使用与将不破坏本发明功能（毛发生长功能）范围内通常使用的毛发生长促进剂和生发油混合的混合物。

作为载体，可以使用净化水、单价醇（乙醇或丙醇）、多价醇（甘油、1,3-丁二醇、或丙二醇）、高级脂肪酸（棕榈酸或亚麻酸）、油脂（麦胚芽油、山茶油、希蒙得木油（jojoba oil）、橄榄油、角鲨烯、葵花油、澳洲坚果油（macadamianut oil）、鳄梨油、大豆添加水的卵磷脂、脂肪酸甘油酯）等，但本发明不限于此。另外，如果必要的话，可以添加表面活性剂、抗微生物剂、抗氧化剂、紫外线吸附剂、抗炎剂和清凉剂。

表面活性剂可以包含选自聚氧乙烯、氢化的蓖麻油、聚氧乙烯、油基醚、单油酸聚氧乙烯醚、聚氧乙烯、单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸山梨糖醇、单油酸聚氧乙烯醚、山梨糖醇、蔗糖脂肪酸酯、单月桂酸六聚甘油酯、聚氧乙烯还原的羊毛脂、POE、甘油焦谷氨酸酯、异硬脂酸、二酯、N-乙酰谷胺和异硬脂酸酯中的一种。

抗菌剂可以包含选自扁柏酚、三氯生、双氯苯双胍己烷葡萄糖酸盐、苯氧基乙醇、间苯二酚、异丙基甲基苯酚、甘葡环烃、水杨酸和巯氧毗啶锌中的一种。

作为抗氧化剂，可以使用由丁羟基茴香醚、五倍子酸、五倍子酸丙酯和异抗坏血酸盐中的任一种

作为紫外线吸附剂，可以使用二苯甲酮如二羟基二苯甲酮、黑色素、对氨基苯甲酸乙基酯（paraaminobenzoic acid ethyl）、对二甲氨基苯甲酸2-乙基己酯、西诺赛特（cynocite）、对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、2-(2-羟基-5-甲苯基)苯并三唑、咪唑丙烯酸和金属氧化物颗粒中的任一种。

作为抗炎剂，可以使用格利蒂利汀酸二钾（glythylic acid dipotassium）或尿囊素；作为清凉剂，可以使用辣椒酊或1-薄荷醇。

所述组合物的剂型是能够结合肺提取物和由此分离的磷脂作为有效成分的任意剂型，以及作为预防脱毛和促进毛发生长的化妆品类型，它可以被制成各种类型如生发油、发乳、润发油、粉剂、溶液如凝胶、溶胶凝胶、乳液、油、蜡和气溶胶，但本发明不限于此。

本发明组合物可以进一步包含用于促进毛发生长的辅助成分。促进毛发生长的辅助成分包括5α-还原酶抑制剂、毛囊和毛囊活化剂、增加毛囊血液流量的成分、杀菌成分、头皮屑防止剂、角蛋白软化剂、清凉剂、保湿剂等。关于每个功能成分的实例如下：

1）5α-还原酶抑制剂

绿茶提取物、非那雄胺、黄金侧柏科籽提取物、苦参根狭叶提取物（sophoraangustifolia root extract）、亚麻酸、γ-亚麻酸、希蒙得木油、橄榄油、葵花油、鳄梨油、添加大豆的卵磷脂、丁香提取物、薏苡仁提取物、盐肤木提取物（rhus semialata gall extracts）、姜黄提取物、槟榔提取物、黑儿茶提取物、牵牛子提取物、车前子提取物、降香黄檀提取物、甘草提取物、补骨脂提取物（bogolji extract）、沙巴棕、苹果提取物等。

2）毛囊和毛囊活性剂

獐牙菜提取物、人参提取物、红参提取物、软枣猕猴桃果提取物（actinidiaarguta fruit extract）、丁香提取物、薏苡仁提取物、地黄根提取物、何首乌根提取物、黄精提取物、泛酰乙醚（pantothenylethylether）、二泛酰醇（dipantothenol）、指甲花提取物、菖蒲提取物、扁柏酚、烟酰胺、L-薄荷醇等。

3）增加毛囊血流的成分

米诺地尔、银杏提取物、红参提取物、辣椒酊、醋酸生育酚酯、烟碱酸苄酯等。

4）杀菌及角蛋白溶解剂

水杨酸、指甲花提取物、菖蒲提取物、吡罗克酮乙醇胺等。

5）头皮屑防止剂

酮康唑、绿茶提取物等。

6）清凉剂

L-薄荷醇等。

7）保湿剂

橄榄油、希蒙得木油、山茶油、葵花油、澳洲坚果油、鳄梨油等。

以下对本发明进行详细说明。

本发明中提出的关于脱毛的解决方案如下：

1.用极性脂肪改变皮脂（一种中性脂肪）的性质。

一种代表性极性脂肪的磷脂是特定的两性材料，并且可以与中性脂肪很好的混合，同时也可以很好地与水混合。通过使用此类性质的磷脂改变皮脂的性质。皮脂可以很好地与水混合，因此该皮脂可以容易地排出，并且可能使皮脂不向后流到毛囊且不积累。因此，积累的皮脂不会阻塞输送至血管的营养物。磷脂是组成细胞膜的脂质，并且可以作为毛囊细胞和周围相关细胞所需要的细胞膜构成物提供。肥皂或者洗发剂可以相对容易地去除皮脂成分中具有小极性的脂肪酸或胆固醇，但很难去除完全中性的脂肪如三酰甘油或胆固醇。因此，如果频繁地使用肥皂或洗发剂，会逐渐降低脂肪酸、胆固醇等的比例，所以存在可能产生皮脂凝固的担心。由于使用磷脂质改变皮脂的性质的方法可以防止固化，所以期待皮脂容易被排出，并且在用肥皂或洗发剂时容易被去除。

2.应选择磷脂，然后使用。

由于植物磷脂包含大量不饱和脂肪酸，当在应用于头皮或表皮时通过暴露在空气中从而与氧气接触时，它们会经受脂类过氧化过程。通过脂质过氧化过程产生的单线氧(¹O₂)离子可能负面地影响（氧化应激）表皮细胞和毛囊细胞。先前报道有脂类过氧化可能引起脱毛（Naito等人，2008，International J.Mol.Med，22:725-729）或斑秃症状（Koca等人，2005，Med.Sci.Monit.11:296-299）。

为了在身体的表皮上使用磷脂，不饱和脂肪酸的含量低或者不饱和脂肪酸不包含于磷脂中。在生理学方面与氧高度接触的肺是仅有的包含大量不饱和脂肪酸的器官。一般认为肺的该特性是用于降低肺表面的表面张力以容易呼吸的方法，而且还由于在呼吸时连续暴露于氧气中是不可避免，肺的该特性是防止脂质过氧化的副作用的进化结果之一。其结果是，包括人类的所有动物的肺具有大量的“含大量饱和脂肪酸的磷脂”，并且在肺的表面连续分泌这样的磷脂。因此，最优选采用来自动物肺的磷脂作为能够应用在表皮或头皮的磷脂。

存在采用植物提取油或特定脂肪酸作为一些与脱毛相关的产品的情况。植物提取油或来源于植物的脂肪酸可以允许皮脂液化（增加流动性）。另外，它们可以通过容易排出而显示出对预防脱毛及促进毛发生长的效果。然而，不能充分地认为相反的效果是由不饱和脂肪酸-氧化引起的。

3.用于使磷脂效果最大化的辅助因子，二价阳离子。

难以通过给头皮简单地提供磷脂来预防脱毛或期望毛发快速生长。2价阳离子，特别是钙离子（Ca²⁺离子）是供应由外部提供给到真皮乳头和相关周围细胞的磷脂所必不可少的。通常，钙离子（Ca²⁺离子）或镁离子（Mg²⁺离子）用于细胞-细胞间识别，并且是用于胶束或脂质融合至所选择的细胞膜所必不可少的因素。为了在活体中表现出所选择的磷脂的效果，2价阳离子应该实质上共存的。另外，期待这样的2价阳离子中和磷脂的磷酸酯基团的负极性，以便磷脂可以确定它们的取向，或者具有稳定的结构。用于本发明中的非限制性实例的2价阳离子钙的浓度仿效了在活体中的肺表面的钙离子浓度，然后应用它。

4.为了磷脂的有效功能的有机酸辅助因子。

由于脂质极性端部具有极强的极性，所以磷脂表现出通过2价阳离子强烈聚集的现象。通过2价阳离子聚集的磷脂不容易分散在表皮上，由于聚集物的尺寸大，所以不容易渗透到表皮里，使得难以期待预防脱毛或者促进毛发生长的良好效果。为了使磷脂通过2价阳离子随机聚集最小化，可以在组合物中使用表现出强烈负极性的有机酸（例如，与TCA周期有关的有机酸如柠檬酸盐/柠檬酸、琥珀酸盐/琥珀酸）。这些有机酸通过2价阳离子在涉及磷脂聚集的相互作用中发挥作用。该作用是通过代表性的螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)固定2价金属离子的不同方式。另外，存在如下优点：有机酸以共轭酸或共轭碱（例如，柠檬酸或柠檬酸钠）类型存在，使得有机酸可以用作控制应用于头皮上的液体制剂的pH值的缓冲液。

本发明的原创性

使用磷脂促进毛发生长的方法的实例在现有的专利中有公开。

美国专利第4,828,837号和美国专利第4,761,288号公开了通过采用磷脂制备的脂质体以使米诺地尔的效果最大化。这些专利使用了采用磷脂（卵磷脂）和合成的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、大豆或蛋黄的脂质体包封米诺地尔。另外，为了稳定磷脂结构，该专利提出了另外使用胆固醇的实例。本发明的目的是采用从动物肺中提取，然后提纯后的纯化的磷脂促进毛发生长，而不是传送促进毛发生长的成分如米诺地尔。利用公知常识，难以判断活体中的构成成分磷脂刺激了分布在基底层的干细胞，使得该干细胞可以分化为毛囊细胞。因此，本发明的原理是通过使用从动物的肺组织中提纯的纯磷脂改变皮脂（一种中性脂肪成分的）的性质来防止皮脂固化，以及容易地排出或去除。皮脂的顺利消除可以预防脱毛，并且有助于毛囊细胞能够容易地接受来自于毛细管的营养物，使得它可以活化毛囊细胞和相关的周围细胞，由此促进毛发生长。

从蛋黄或大豆中提取的磷脂包含大量不饱和脂肪酸，使得存在通过氧接触的容易过氧化而将氧化应激施加于毛囊细胞和相关的周围细胞的高可能性。因此，如果可以，优选使用包含大量饱和脂肪酸的从动物肺中提纯的磷脂，代替使用包含不饱和脂肪酸的磷脂（卵磷脂）。

本发明涉及一种使用有机酸或有机酸盐（共轭酸或共轭碱）以防止由钙引起的磷脂聚集、以及2价阳离子的组合物。因此，本发明具有完全不同于任何常见的磷脂相关产品的原创性。通过同时使用这样的2价离子、以及有机酸和有机酸盐，不利于制备出结构稳定的脂质体。其原因是具有强极性的磷脂的端基相互推出极性基。由于二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)的含量高，结构稳定的脂质体是不利的。例如，已报道当在4度下储存纯DPPC脂质体，在2周内完全被破碎（Launois-Surpas等人，1992，Colloid Polym.Sci.270:901-911）。

为了改变存在于头皮或表皮上的皮脂的性质，本发明优选采用简单悬浮液型磷脂。这是因为当传送的脂质体结构稳定时，可以理解为不容易与暴露在头皮或在皮脂腺里的皮脂混合。

为了改变皮脂的性质而采用磷脂的方法比采用多种脂肪酸的毛发生长解决方法具有更好的优势（美国专利号US2007/0154432A1）。因为脂肪酸可能对细胞脂类膜结构有不利影响，并且还可以容易地用作为细菌或真菌的能量来源。另外，脂肪酸的中间代谢物具有表现出不好气味的特性（例如，丁酸、丙酸等），使得存在很多不利点。此外，亚油酸通过人类细胞的新陈代谢变成花生四烯酸，然后最终成为白三烯-B4（leukotriene-B4）或前列腺素E2。这两种物质起到增加炎症反应的作用，使得当长期使用它们时，这具有刺激脱毛的潜力（Mahet等人，2000，Inernational.Dermatol.，39：576-584）。使用脂肪酸的毛发生长产品可以起初通过与皮脂良好融合的皮脂软化特性而表现出毛发生长效果。然而，不能忽略当由于长期使用它们而聚集时，这具有表现负面功能的潜力。

作为本发明的组合物中的成分，所述组合物包含通过去除动物肺中的中性脂肪和肽（蛋白质）的纯磷脂、2价阳离子（例如，钙离子和/或镁离子）、或有机酸（例如，柠檬酸柠檬酸盐、琥珀酸/琥珀酸盐、或苹果酸/苹果酸盐）和用于线粒体的三羧酸循环中的有机酸（共轭酸或共轭碱）。另外，本发明的目的是通过改变由皮脂腺分泌的皮脂的性质而容易地去除或排出皮脂，然后预防脱毛和促进毛发生长。

组合物的各种用途

作为本发明的组合物，所述组合物对分布在表皮上的干细胞给予任何作用或刺激以形成新的毛囊细胞，然后促进毛发生长，这在理论上或实验上都是没有根据或者根据足。然而，在理论上或在实验上已经证明了本发明的组合物改变了皮脂的性质而容易地排出或去除皮脂，由此促进毛发快速生长。

作为通过传统的动物实验找出毛发生长的机制的结果，发现毛囊细胞的分化和产生是在被受伤、然后治愈后自然产生的（Cheng-Ming Chuong，2007，Nature447:265-266和Ito等人，2007，Nature447:316-320）。当本专利的组合物应用于在形成轻伤后的轻伤处时，在伤口愈合过程期间新分化的毛囊细胞可以快速生长，然后可以稳定生长毛发。促进毛发生长的目的更强于预防脱毛的目的。

作为另一种方法，期待在应用米诺地尔或非那雄胺后表现出细毛发生长的情况中，当应用本发明的组合物时，可以快速诱导毛发生长，由此计划毛发的稳定生长。

在其中脱毛进行中的人的头皮上存在细毛发（称作细软毛）的情况下，预料到在头皮上应用本发明的组合物，使得它通过细毛发的快速生长有助于缓和脱毛症状。

此外，预料的是在对癌症患者进行化疗之前或者之后，当应用本发明组合物时，可以防止由化疗的副作用而导致的脱毛，以及当在完成化疗后生长新的毛发时，还可以使新的毛发快速生长，所以所述组合物有助于患者的恢复。

发明效果

由本发明的说明书可以看出，本发明通过采用从动物中提纯的磷脂改变中性脂肪成分的皮脂的特性可以防止皮脂固化以及容易地排出或去除皮脂。顺利地消除皮脂可以预防脱毛，并且帮助毛囊细胞容易接受来自毛细血管的营养物以活化毛囊细胞和相关的周围细胞，由此毛发快速生长。

附图说明

图1是从猪肺中提取并提纯的磷脂的薄层色谱分析的照片。在图1中，1道的试样是在二氧化硅色谱柱之前从猪肺中提取的磷脂，2道的试样是从猪肺中提取的纯化磷脂，3道的试样是PC（左旋-阿尔法-磷酸卵磷脂，西格玛#P3556）；4道的试样是PI（磷脂酰肌醇钠盐，Fluka#79403）；5道的试样是PS（3-顺-磷脂酰-左旋-丝氨酸钠盐,西格玛#P5660）；6道的试样是PA（3-顺式-磷脂酸钠盐，西格玛#P9511）；7道的试样是PE（左旋-阿尔法-磷脂酰乙醇胺，西格玛#P7943）；8道的试样是DPPC（1-2-二棕榈酰基-顺式-丙三醇-3-胆碱磷酸，西格玛#P4329)；9道的试样是大豆卵磷脂(纯正化学#86015-1201，日本)。通过使用薄层色谱确认了特定磷脂的类型。通过使用薄层色谱确认的磷脂是DPPC、PC、PS、PI和PE。用于薄层色谱的显色剂是氯仿:甲醇:水（65:25:4，体积比）。在喷射5%的硫酸盐溶于乙醇的溶液后，在190度下加热以碳化和确认每个成分。

在图2中，1道的试样是由猪肺中提纯的磷脂；2道的试样是由大豆提取的磷脂（大豆卵磷脂，纯正化学#86015-1201，日本）；以及3道试样是由蛋黄提取的磷脂（鸡蛋卵磷脂，东京化学工业株式会社#L0022，日本）。从薄层色谱的方法，确认了由猪肺中提取的磷脂与众所周知的常见磷脂具有完全不同的成分。

图3~8是证实了毛囊的活化现象的照片。

在使用DNFB(2,4-二硝基氟苯)敏化功能引起发炎的小鼠背部表皮上应用通过由猪肺中提取的磷脂，进行了确认降低发炎的实验。其结果是，偶然地证实了活化毛囊细胞的生长。

图3是表皮组织的正常背部；图4是仅用DNFB治疗的小鼠表皮组织；图5是应用他克莫司（商品名，普特皮，日本安斯泰来制药有限公司）之后的表皮组织；图6是应用地塞米松（0.1%地塞米松乙醇溶液）之后的表皮组织；图7应用由猪肺中提取的磷脂（10mg/ml）后的表皮组织；以及图8是以15天为应用期应用由猪肺磷脂（10mg/ml）中提取的磷脂（20mg/ml）后的表皮组织。在椭圆形红色虚线内存在大量活化的毛囊细胞。部分观察到典型类型的脱毛（表现为细胞基层凹陷和毛囊细胞分化的现象）（图5中应用他克莫司）。在应用本发明的组合物（图7和8）之后，在细胞基层下存在活化的毛囊细胞，其中活化的毛囊细胞显示出与常见类型的毛发生长相比不同类型的毛发生长。

图9-11是本发明的组合物对促进小鼠毛发生长的效果的照片图。

图9是在去除实验用小鼠（balb/c）的毛发后应用盐溶液2周后的结果的照片图。图10是在去除同种同龄的小鼠的毛发后应用所述组合物2周之后的小鼠状态。通过肉眼可以发现明确的小鼠毛发生长。

图11是在去除实验用小鼠(C3H)的毛发后比较应用蒸馏水的小鼠和应用组合物的小鼠之间长度。确认了应用所述组合物的小鼠的毛发（右侧）快速生长。刻度尺间距为1mm。

图12~16是在将本发明的组合物应用于人体的实例的照片图。

将含有浓度为5mg/ml的磷脂的组合物应用于显示脱毛的志愿者之后，然后观测结果。将一滴（分别为50~60ml）所述组合物应用于2cm×2cm脱毛区域每天两次，并揉擦约20秒。图12是志愿者A在应用之前的外观；图13是应用后15周的外观；图14是应用后20周的外观；图15是志愿者B应用之前的外观；以及图16是应用后15周的外貌；甚至使用肉眼也可以容易和清楚地观察到所述组合物的效果。

图17-24是含各种浓度的有机酸的组合的本发明组合物的效果的照片图。

通过实验用小鼠(C3H)的去除毛发面积为基准计算毛发生长面积的比例，将毛发生长效果转换成数据化（实验例4:毛发生长效果实验）；参见动物实验例3的内容（有机酸效果和大豆卵磷脂效果）和表格。

图17是仅应用蒸馏水的实验组；图18是仅应用米诺地尔(5%)的实验组；图19是应用由猪肺中提取的磷脂＋1.5mM CaCl₂＋2.5mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）的实验组；图20是应用由猪肺中提取的磷脂＋1.5mM CaCl₂＋5mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）的实验组；图21是应用由猪肺中提取的磷脂＋1.5mM CaCl₂＋7mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）的实验组；图22是应用由猪肺中提取的磷脂＋1.5mM CaCl₂＋5mM柠檬酸盐/柠檬酸＋5mM苹果酸盐/苹果酸（pH值为5.8）的实验组；图23是应用由猪肺中提取的磷脂＋1.5mM CaCl₂＋2.5mM柠檬酸盐/柠檬酸＋2.5mM苹果酸盐/苹果酸（pH值为5.8）的实验组；以及图24是应用由大豆卵磷脂中提取的磷脂＋1.5mM CaCl₂＋5mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）的实验组。确认了当组合物含有有机酸的浓度为5mM的柠檬酸时，观察到最有效的结果，在含有与其他柠檬酸循环相关的有机酸（例如，苹果酸）组合的情况中，表现出相当优秀的毛发生长效果。

图25~27是本发明的组合物中所含有的2价阳离子的效果的照片图。

采用5mM琥珀酸盐/琥珀酸(pH值为5.8）代替了组合物中所含有的5mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）。在应用该组合物之后，观察到改变后的组合物对毛发生长的效果。图25是仅应用蒸馏水的实验组；图26是应用含有1.5mM CaCl₂＋5mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）的组合物（应用2.5周）的实验组。以及图27是应用含有1.5mM CaCl₂＋5mM琥珀酸盐/琥珀酸（pH值为5.8）的组合物的实验组。发现应用含琥珀酸的组合物的小鼠的毛发生长没有规律，而且与应用含柠檬酸的组合物的小鼠的毛发生长状态相比具有粗糙的结构。可以确认琥珀酸盐最优选作为包含于所述组合物中的有机酸，并且琥珀酸盐也具有促进毛发生长的效果。

图28-29是作为包含于本发明组合物中的2价阳离子镁离子的效果的照片图。

将包含1.5mM MgCl₂代替1.5mM CaCl₂的组合物应用于实验用小鼠（Balb/c）2周。控制实验用动物组（图28）应用了蒸馏水，并且在效果组应用了由猪肺提取的20mg/ml磷脂质，1.5mM MgCl₂和5mM柠檬酸盐。其中包含镁离子的组合物单独表现了不同类型的毛发生长。发现包含于组合物的2价阳离子中钙离子最有效的促进毛发生长，并且镁离子对毛发生长也有效果。

图30和31是与本发明组合物的剂型相关的实验。

图30中的中间试管显示由于1.5mM氯化钙而聚集的纯化磷脂的现象。图30中的右边试管显示由于加入5mM柠檬酸盐/柠檬酸（pH值为5.8）没有产生因钙而导致的聚集磷脂的状态。图30中的左边试管是将所述组合物分散于蒸馏水中的浑浊结果。由上述结果可以确定：包含于所述组合物中的有机酸对促进毛发生长起重要的作用，并且有机酸是保持浑浊的均匀化组合物的状态所必不可少的因素。通过确认在蒸馏水中形成半透明的奶色溶液来确定脂质体的形成。然而，混合有5mM柠檬酸/柠檬酸盐+1.5mM氯化钙的溶液（右边试管）具有均匀化的浑浊状态，并且存在不透明的絮凝颗粒，使得它可以被确定为未形成脂质体（参考照片，可以通过右边不透明的试管来区别）。

图31是为了形成脂质体结构采用从肺中提取的磷脂在圆形烧瓶上形成脂质膜后通过剧烈漩涡尝试形成脂质体的实验结果。将经过同样过程的大豆卵磷脂维持透明的脂质溶液状态（图31的左侧图），但当从动物肺中提取的磷脂放置约1小时时，会产生很多气泡和许多的沉淀物（图31的右侧图）。可以确定磷脂和用于本发明的溶液的条件不利于形成脂质体。

下面由非限定的实施例来更详细地说明本发明。

然而下面的实施例仅是说明本发明，但是本发明的范围不限于下述的实施例。

实施例1：从猪肺中提纯磷脂

在由危害分析临界控制点(HACCP)授权的屠宰场屠宰猪后，立即获取肺组织，然后储存于冰水浴中。屠宰后，在5小时内使用猪肺组织，或者在不立即使用的情况下，将其储存在-20度下，然后必要时解冻且使用它。

磷脂质的提取过程如下：

1）研磨猪肺组织；2)去除肺组织中的血液；3)沉淀全部脂质；4)用有机溶剂提取全部脂质；5)用中性溶剂去除中性脂肪；6）为了去除剩下的中性脂肪、肽和蛋白质，采用二氧化硅色谱柱提纯；7)去除溶剂并干燥。

1）研磨猪肺组织

从猪肺组织中去除坚硬的组织（例如，器官）或粗血管（例如，主动脉和肺动脉），切割成4×4×4cm大小，然后采用磨机研磨猪肺。将冷生理盐水（700ml）加入到研磨后的组织中（250g），然后使用带金属叶片的搅拌机（HMF-390，韩一电机公司，韩国）进一步研磨1分钟。

2）去除肺组织中的血液

将用混合机研磨后的肺组织放置于冰水浴1小时以使其冷却。将冷却后的肺组织在4度、4500g下离心分离40分钟（Component-R，韩一电机公司，韩国）以收集沉淀物，然后去除稀释的血上清液。

3）沉淀全部脂质

将包含5mM CaCl₂的储存溶液（70mM NaCl）添加到所获得的沉淀物中，然后放入冰水浴中1小时以使其冷却。冷却后的试样在4度、4500g下离心分离45分钟以获得沉淀物。使用钙离子诱导肺组织中的独特蛋白质和磷脂的聚集，然后即使在较低的离心加速度(g)下也容易诱导沉淀。

4）用有机溶剂提取全部脂质

将4倍体积的二氯甲烷:乙醇（2:1的体积比）混合溶液倾倒入所获得的沉淀物中以去除含水材料溶液，然后获得有机酸-可溶解材料（全部脂质包含磷脂）。使用真空旋转蒸发仪去除溶剂，然后浓缩所包含的脂质材料。

5）用中性溶剂去除中性脂肪

将浓缩后的含磷脂组分再溶解于二氯甲烷，然后应用于二氧化硅色谱柱以去除包含于试样中的胆固醇、三酰甘油、脂肪酸等，然后获得纯磷脂。采用直径长度比为1:4的玻璃色谱柱，以及采用默克230-400目（Merck230-400mesh）目作为硅胶。起初采用无极性或中性的溶剂，然后逐渐采用高极性度的显色剂，以首先洗提中性脂肪，最后洗提极性脂肪，由此容易提纯。依次使用1体积硅胶的丙酮以及1体积硅胶的二氯甲烷；为了得到磷脂，采用7体积硅胶的二氯甲烷:乙醇:水（6:8:1的体积比）运行色谱柱。将洗提后的组分应用于薄层色谱（TLC）以确认磷脂的洗提。从薄层色谱挑选并获得具有0.3~0.7的Rf值（磷脂Rf值）的脂质组分。使用三氯甲烷:甲醇：水（65:25:4体积比）作为薄膜色谱的显色剂。

6）为了去除剩余的中性脂肪、肽和蛋白质采用二氧化硅色谱柱提纯

采用真空旋转蒸发仪从最后获得的磷脂组分中去除有机溶剂。此外，向所获得的磷脂固体中加入纯乙醇，然后进行再蒸发过程以去除剩余的二氯甲烷。最后，采用冷冻干燥器在-85度下去除剩余的水分以获得粉末型磷脂。

7）去除有机溶剂并干燥

通过使用薄层色谱（TLC）确认纯化后的磷脂的纯度。在薄层色谱上存在的脂质上喷射5%的溶于乙醇的硫酸溶液，然后在190度进行炭化以显色。采用三氯甲烷:甲醇:水（65:25:4的体积比）作为薄层色谱显色剂。显色溶液有很强的极性；中性脂肪如脂肪酸和胆固醇具有高的运转率（Rf值为0.8以上）；但是蛋白质或肽不会从打点处（dotting point）移动（Rf值为0.1以下）。磷脂具有0.3~0.76的Rf值。证实了DPC（二棕榈酰磷脂酰胆碱）、PC（磷脂酰胆碱）、PS（磷脂酰丝氨酸）、PE（磷脂酰乙醇胺）、PI（磷脂酰）以及PA（磷脂酸）包含于采用薄层色谱提纯的磷脂中（图1）。

由薄层色谱分析证实了从肺部提取的磷脂（卵磷脂）具有完全不同于在大豆卵磷脂或鸡蛋卵磷脂中所包含的成分（图2）。

通过在薄层色谱上喷射0.2%的溶于乙醇的茚三酮溶液，确认了包含于试样中的蛋白质或肽是否存在。在用茚三酮染色的薄层色谱上未检测到蛋白质或肽（未提供该结果）。

试样中所包含的全部磷脂的浓度是通过使用Fiske-Subbarow试剂改良的巴氏实验（Miller KJ，1985，细菌学期刊，162:263-270）定量分析的。通过采用HPLC-ELS（蒸发光散色）检测系统（Water e2695模块系统，美国），定量分析在肺试样中所包含的独特磷脂DPPC的含量。购买L-a-二棕榈酰磷脂酰胆碱（西格玛化学有限公司，美国）用于浓度分析。在全部试样中包含的DPPC的含量被确认为约32%（该结果未提供）。

实施例2：组合物的制备

由于提纯的磷脂以粉末类型存在，为了应用于表皮，将磷脂分散在水中。在磷脂质分散在水后，在121度和15Ib/cm²压力下进行15分钟高压灭菌。作为辅助因子使用的2价阳离子（氯化钙或氯化镁）和有机酸（柠檬酸、马来酸等）被制备成浓缩溶液、分别进行高压灭菌、加入到分散的磷脂溶液中、以及然后至所需的浓度。有机酸的制备物是通过混合酸形式（例如，柠檬酸）和钠盐形式（例如，柠檬酸三钠）的pH值为5.8的缓冲溶液。为了验证效果，采用磷脂的浓度分别为5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml，2价阳离子浓度为1.5mM，有机酸的浓度（有机酸和有机酸盐的总浓度）最终为5mM。

实验例1：毛发生长效果的测试：动物实验1（观察毛发生长效果）

为了制备特应性皮炎、或接触性皮肤炎和过敏性皮炎的动物样本，用DNFB敏化处理1周后，然后将DNFB以每2周共10次应用于小鼠的背部以人为诱发过敏性炎症。根据先前出版的文献（论文）（Inagaki等人，Eur JPharmacol，546：189-196）进行给药显示出效果的材料和精制剂的方法、以及制备动物样本的表述。自从应用DNFB5次后，将本发明的组合物、他克莫司软膏（商品名，普特皮阿斯特拉制药有限公司，韩国）、以及地塞米尔（西格玛化学有限公司，美国，0.1%溶于乙醇的溶液）以60ml量每天两次分别应用于发生炎症的小鼠的背部。在应用后10天，收集小鼠组织检测实验。

在应用本发明组合物（磷脂的浓度为10mg/ml（图7）和20mg/ml（图8））的小鼠组织上观察到积极的毛囊生长，而在应用地塞米松（图6）的小鼠组织上并没有观察到。在小鼠背部治愈的过程中，

应用他克莫司的小鼠组织上观测到通过将基底细胞的干细胞分化成毛囊细胞而形成新的毛囊细胞以及凹陷的现象（图5），但是在应用本发明组合物的小鼠组织的基底细胞膜下存在毛囊细胞的生长。此结果是能够推论出本发明的组合物具有毛发生长功能，胜于预防脱毛功能的根据。

实验例2：毛发生长效果测试：动物测试2（毛发生长的生长速率的测试）

购买（韩国京畿道三南市东方生物（Oriental Bio.SungNam-si,Kyunggi-do,Korea）同年龄的雄性实验用小鼠（5周龄，白变种实验室小鼠（balb/c）），并且在新环境下适应一周。自由提供食物和水并通过调整成上午8点开灯并下午8点关灯，调整了昼夜规律。为了饲养采用动物饲养机（DJ-201，Daejong Lab,Seoul,Korea），调节湿度、温度、空气清洁和循环为25度和50%湿度。以5只小鼠为一组进行了测试。

去除同龄（6周）的雄性小鼠的毛发后，应用本发明的组合物，然后观察毛发生长。作为对比组，采用相等量的蒸馏水代替所述组合物，并以同样次数揉擦（图9）。所述组合物通过混合将20mg/ml磷脂与包含1.5mM的CaCl₂和5mM柠檬酸/柠檬酸盐（柠檬酸、无盐和柠檬酸三钠盐）的溶液混合来简单地制备。将60ml的组合物按每日2次使用2周（除星期六和星期日，共10天）（图10）。2周后，两组之间存在明显的差异（图9和图10）。

除了Balb/c实验用小鼠外，通过采用C3H实验用小鼠比较了毛发生长的生长速率。通过将仅使用蒸馏水和所述组合物的小鼠毛发拔下，比较了它们的长度。图11是由两实验组拔出的毛发的长度，并且每刻度表示1mm间距。

实验例3：用于毛发生长效果的测试：志愿者测试

选择正在进行脱毛或者已经进行了相当多脱毛的志愿者，然后应用包含浓度为5mg/ml磷脂的本发明组合物。排除了给药影响脱毛的药物或在头皮上应用该药物的志愿者。选择13位志愿者并且进行志愿者实验。7位志愿者参加直到15~20周实验完成为止。平均年龄是37岁。将一滴（约50~70ml）本发明的组合物以每天2次滴到脱毛部位（2cm×2cm），然后揉擦20秒。没节制或推荐使用洗发剂、洗涤剂、食物、酒类或抽烟。在日常生活期间应用所述组合物。在应用所述组合物后的志愿者有4个问题，其中所述问题涉及脱毛减少的变化、毛发增加、毛发的生长速率以及毛发的厚度。志愿者选择他们满意的标准，最大0~5分涉及上述每个问题。

[表1]

在应用所述组合物后，由志愿者他们自己评价所得到的结果是主观的评价，由此不能保证普遍的精确度。但是，由此可以发现志愿者对所述组合物的效果的满意度是高的。从志愿者评价的结果可以确认本发明人推理出的所述组合物有效促进毛发生长的结果。应用于志愿者的结果可以通过肉眼容易地由照片确认。

实验例4：毛发生长的测试：动物测试3（有机酸效果和大豆提取的磷脂 的效果）

为了确认包含于本发明的组合物中的有机酸（例如，柠檬酸（无盐）和柠檬酸三钠盐）对毛发生长的效果进行了实验。另外，所述组合物通过采用大豆卵磷脂（由大豆提取的磷脂，#86015-1201，纯正化学，日本）制备，然后比较所述组合物对毛发生长的效果。作为实验用小鼠购买了7周龄的C3H/HeNCrljBgi种作为实验用小鼠，然后用于测试。为了显示出实验结果的明显差异，给全部小鼠（除了组1）应用了60ml米诺地尔（5%溶液，Minoxyl,Hyndaipharm，韩国），然后在30分钟后应用本发明的组合物。应用本发明的组合物2.5周，并且将60ml的所述组合物每天2次应用于去毛的小鼠的背部。采用的磷脂的浓度是20mg/ml。作为小鼠毛发生长的测量，分别地获取每个实验组的小鼠的照片，然后计算毛发生长区域在去毛的部位中的比例。其结果如下表所示。

[表2]

为了加快实验用小鼠的毛发生长速率，优选采用从猪肺中提取的组合物，并且发现所述组合物中采用5mM浓度的柠檬酸给出了最好的效果（图20）。确认了由大豆提取的磷脂（大豆卵磷脂）有助于促进毛发生长，但是认为与从猪肺中提取的磷脂对促进毛发生长的效果相比，这些卵磷脂的效果没有大的意义。

此外，调查了通过进一步添加苹果酸盐/苹果酸的组合物的效果。可以确定与线粒体TCA循环有关的有机酸有助于毛发生长。另外，可以基于其推论出与脂质代谢密切相关的线粒体的生理活性可能涉及毛发生长的假设的结果。

实验例5：毛发生长效果的测试：动物测试4（柠檬酸盐与琥珀酸盐的比 较）

添加相同浓度（5mM）的琥珀酸二钠/琥珀酸（即一种线粒体的柠檬酸循环的其它代表性有机酸（pH值为5.8），代替包含于本发明组合物中的柠檬酸以调查毛发生长的效果。使用9周龄Balb/c实验用小鼠，通过采用与上述相同的方法，用2.5周作为应用时间。与柠檬酸一样，琥珀酸盐表现出促进小鼠的毛发生长（图27）。然而包含琥珀酸的组合物表现出不规则的毛发生长，并且与包含柠檬酸的组合物相比毛发具有粗的结构（图26）。然而与包含柠檬酸的组合物相比，应用包含琥珀酸的组合物的小鼠有时候部分地表现出更快的毛发生长。确认了包含于所述组合物中的有机酸对防止因钙而导致的磷脂聚集是必不可少的，并且同时是控制毛发生长的重要因素。

实验例6：毛发生长效果的测试：动物测试5（2价阳离子、钙离子和镁 离子）

代替包含于本发明组合物中的2价阳离子钙离子，调查了镁离子对小鼠毛发生长速率的效果。采用了6周龄的Balb/c实验用小鼠，并且按每日2次使用3周（15天），将50ml所述组合物应用于小鼠的背部部。制备所述组合物以包括20mg/ml磷脂、1.5mM MgCl₂和5mM柠檬酸/柠檬酸钠盐（pH值为5.8）。

由应用所述组合物3周后所观察的结果，确认了镁离子也刺激小鼠的毛发生长速率。然而，与包含钙离子的组合物相比，其没有显示出满意的效果。在全部实验组的小鼠中包含钙离子的组合物表现出规则的毛发生长，而包含镁离子的组合物则表现出依赖于个体的不规则毛发生长。由该实验，可以得出结论：钙离子作为包含所述组合物中的2价阳离子是最适合于促进毛发生长，镁离子具有促进小鼠的毛发生长的作用的可能性。

实验例7：观测组合物的剂型的测试（钙离子和有机酸的组合）

本发明组合物包含从肺中提取的磷脂、氯化钙和有机酸（柠檬酸+柠檬酸盐）。特别是，有机酸是加快毛发生长的重要因素；同时起到防止因钙离子而导致的磷脂聚集的作用。为了验证包含于所述组合物中的有机酸抑制了因钙离子而导致的磷脂聚集的现象，进行了该实验。可以清楚地确定有机酸必须包含于所述组合物中，使得可以容易进行皮肤应用。

制备10mg/ml的磷脂分散在蒸馏水的状态（图30的左图）、磷脂分散液中仅添加氯化钙使分散液浓度为1.5mM（图30的中间图）的状态、以及向磷脂分散溶液中添加1.5mM氯化钙和5mM柠檬酸盐/柠檬酸的状态。仅包含氯化钙的试管中存在磷脂聚集的现象，而包含有机酸和钙的试管中均匀地分散磷脂的状态。

调查了从猪肺中提取的磷脂形成脂质体的条件。添加三氯甲烷:甲醇（体积比为1:2）到从肺中提取的磷脂中，然后使用真空旋转蒸发器（Eyela N-1000，旋转真空蒸发器，日本）在烧瓶壁形成薄层脂质膜。将本发明的复合物1.5mM氯化钙和5mM柠檬酸/柠檬酸三钠盐（pH值为5.8）加入到圆底烧瓶并形成磷脂膜，然后剧烈摇动30分钟以使其形成脂质体。在形成脂质体时，通过每隔一定时间加热使烧瓶维持约60度。从肺中提取的磷脂表现出气泡形成，其不同于大豆提取的磷脂（大豆卵磷脂），并且当从肺中提取的磷脂在室温下保持1小时时，从肺中提取的磷脂容易沉淀。可以确定用于本发明组合物的条件是不利的。这是因为从肺中提取的磷脂具有高的饱和度，使得烃链尾部流动性低，磷脂的头部具有高极性，使得它们相互表现出强烈的静电排斥。可以期待本发明的组合物推荐从健康动物肺中提取的磷脂以单纯的浑浊状态使用，并且包含具有这样非脂质体结构的磷脂的组合物容易与高粘度的皮质混合，使得皮质粘度可以快速降低，且容易被去除。

Claims (9)

1.一种用于预防脱毛或促进毛发生长的组合物，该组合物包含磷脂作为有效成分。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述磷脂从动物中提取。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述磷脂从牛或猪中提取。

4.根据权利要求2或3所述的组合物，其中，所述磷脂从动物肺中提取。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中，所述磷脂选自由二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸和磷脂酰肌醇所组成的组中。

6.根据权利要求1所述的组合物，进一步包括选自由2价阳离子、和含羧基的有机酸或其盐所组成的组中的一种或多种成分。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物是药物组合物。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物是化妆品组合物。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述化妆品组合物是生发油、发乳、头发洗剂、洗发香波、染发液、护发素、发胶、气雾剂、润发油、粉剂或凝胶剂。

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