CN103074390A - 一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法 - Google Patents

一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法 Download PDF

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Abstract

一种由大豆混合磷脂为原料采用无水体系花生磷脂酶D酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，属于磷脂领域。本发明采用无水体系，混合磷脂与丙醇通过经处理的花生磷脂酶D催化得到了不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇产品，其产品中磷脂酰丙醇含量大于75％，从而完成了本发明。

Description

一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法
技术领域
一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，属于磷脂领域。
背景技术
磷脂主要包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸及磷脂酰丙醇等。近来研究发现磷脂酰丙醇具有重要的生物学功能及在医药工业上得到愈来愈广泛的应用，而磷脂酰丙醇在自然界中存在稀少。因而利用酶法来制备磷脂酰丙醇成为近来研究的热点。但到目前的研究为止，所有报道的酶法制备磷脂酰丙醇都是在含水体系中进行的，这种含水体系可以是有机溶剂和水的双相体系，也可以是微水体系，使得产品中含有不希望的溶血磷脂和磷脂酸。本发明一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，可以方便实现不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的制备。
发明内容
本发明的目的在于提供一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法。大豆混合磷脂溶于无水的有机溶剂中，加入丙醇，在经处理的花生磷脂酶D催化下进行碱基交换，经过48小时反应，混合磷脂转化为磷脂酰丙醇，反应物通过水洗有机相，经脱水脱溶后，用500毫升丙酮充分洗涤，分离出丙酮不溶物，干燥得产品。经过HPLC测定，产品磷脂酰丙醇的含量大于75％，而且产品中不含有溶血磷脂和磷脂酸，从而完成了本发明。
花生磷脂酶D的预处理：花生磷脂酶D在使用前进行预处理，其方法为取2.72g磷酸二氢钾溶于100mL去离子水中，加入少量磷酸氢二钠，调节pH至5.6。取1g花生磷脂酶D溶于80mL磷酸缓冲液中，得到pH5.6花生磷脂酶D酶液，加入49克氯化钾并溶解，完全冷冻后于真空度70Pa，温度-40℃条件下冻干48小时，得到经处理的花生磷脂酶D。
本发明的技术方案：一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，所用的大豆磷脂原料来自于油厂油脂加工的副产品，并经进一步加工所得到的醇溶性混合磷脂，且大豆磷脂磷脂酰胆碱含量为75％。通过处理的花生磷脂酶D在无水的有机溶剂中与丙醇进行酶促碱基交换反应，反应完成后，通过水洗有机相，经脱水脱溶，丙酮洗涤，干燥得到本产品。
所使用的有机溶剂是氯仿。
主要的工艺条件为：有机溶剂∶混合磷脂∶丙醇∶经处理的花生磷脂酶D的V∶W∶W∶W为5-20∶0.5-2∶1-10∶0.0005-0.005。反应温度在20℃-60℃，时间为24-48小时。
本发明的有益效果：一种由大豆混合磷脂为原料采用无水体系花生磷脂酶D酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，为制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇提供了一种可行的方法，使用该方法可以方便的制备在医药工业，脂质体工业及保健食品工业具有广泛用途的磷脂酰丙醇。由于该方法中没有水的存在，因而产品中不含有溶血磷脂和磷脂酸等磷脂酰丙醇产品中不希望含有的成分。
表1：该方法所得产品指标
  磷脂酰丙醇％   磷脂酰胆碱％   磷脂酰乙醇胺％   溶血磷脂％   磷脂酸％
  75.8   21.2   13.0   -   -
附图说明
本发明的工艺示意图
具体实施方式
实施例1
将100克混合磷脂加入1000毫升氯仿中于20℃溶解，加入200克丙醇搅拌恒温半小时，加入0.5克经处理的花生磷脂酶D，于20℃搅拌反应48小时，用3000毫升去离子水分三次洗涤有机相，在有机相中加入10克无水硫酸钠进行干燥，经干燥后的有机相真空脱溶，用500毫升丙酮充分洗涤，分离出丙酮不溶物，并干燥得磷脂酰丙醇含量为75.2％的不含溶血磷脂和磷脂酸的产品。
实施例2
将100克混合磷脂加入1000毫升氯仿中于20℃溶解，加入200克丙醇搅拌恒温半小时，加入0.5克经处理的花生磷脂酶D，于30℃搅拌反应48小时，用3000毫升去离子水分三次洗涤有机相，在有机相中加入10克无水硫酸钠进行干燥，经干燥后的有机相真空脱溶，用500毫升丙酮充分洗涤，分离出丙酮不溶物，并干燥得磷脂酰丙醇含量为75.8％的不含溶血磷脂和磷脂酸的产品。
实施例3
将100克混合磷脂加入1000毫升氯仿中于20℃溶解，加入200克丙醇搅拌恒温半小时，加入0.5克经处理的花生磷脂酶D，于50℃搅拌反应48小时，用3000毫升去离子水分三次洗涤有机相，在有机相中加入10克无水硫酸钠进行干燥，经干燥后的有机相真空脱溶，用500毫升丙酮充分洗涤，分离出丙酮不溶物，并干燥得磷脂酰丙醇含量为75.1％的不含溶血磷脂和磷脂酸的产品。

Claims (4)

1.一种酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，其特征是所用的大豆磷脂原料来自于油厂油脂加工的副产品，并经进一步加工所得到的醇溶性混合磷脂，且大豆磷脂磷脂酰胆碱含量为75％。通过处理的花生磷脂酶D在无水的有机溶剂中与丙醇进行酶促碱基交换反应，反应完成后，通过水洗有机相，经脱水脱溶，丙酮洗涤，干燥得中磷脂酰丙醇的含量大于75％，而且同时不含有溶血磷脂和磷脂酸的产品。
主要的工艺条件为：有机溶剂∶混合磷脂∶丙醇∶经处理的花生磷脂酶D的V∶W∶W∶W为5-20∶0.5-2∶1-10∶0.0005-0.005。反应温度在20℃-60℃，时间为24-48小时。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所用有机溶剂为氯仿。
3.一种如权利要求1所述的由大豆混合磷脂为原料采用无水体系花生磷脂酶D酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，其特征是制备了一种不含溶血磷脂和磷脂酸的高纯大豆磷脂酰丙醇产品。
4.一种如权利要求1所述的由大豆混合磷脂为原料采用无水体系花生磷脂酶D酶法制备不含溶血磷脂和磷脂酸的磷脂酰丙醇的方法，其特征是以大豆混合磷脂为原料，经过酶促反应得到产品。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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