CN104531790A - 一种磷脂dha的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种磷脂DHA的制备方法，包括：步骤一、将阴/阳离子表面活性剂溶于疏水性的烷类溶剂中制备得到微反应体系，且该烷类溶剂中含有的阴/阳离子表面活性剂的浓度为0.01～1mol/L；以及，步骤二，将甘油磷脂和DHA加入步骤一制得的微反应体系中，采用磷脂酶进行催化反应即得到磷脂DHA。依照本发明的方法具有成本低、污染小、无高温加工过程等特点，反应过程无废水排放，工艺操作简单安全，且反应副产物少，无废弃物生成，反应时间短。
Description
技术领域
本发明属于生物工程和保健品领域，特别是涉及一种磷脂DHA的制备方法。
背景技术
磷脂(简称PL)是含磷酸根的类脂化合物的总称，广泛分布于自然界中。几乎所有的细胞中都含有磷脂，它是细胞膜的基本组成成分，是重要的生命物质。磷脂对活化细胞，维持新陈代谢，及荷尔蒙的均衡分泌，增强人体的免疫力和再生力，都能发挥重大的作用。磷脂可以分解过高的血脂和过高的胆固醇，清扫血管，使血管循环顺畅，被公认为“血管清道夫”。磷脂还可以使中性脂肪和血管中沉积的胆固醇乳化为对人体无害的微粒，溶于水中而排出体外，同时阻止多余脂肪在血管壁沉积，缓解心脑血管壁的压力。磷脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)及磷脂酸(PA)等。磷脂的生理活性与其脂肪酸的组成和极性末端的性质密切相关，一些具有特定结构的磷脂有很高的药用价值。
二十二碳六烯酸(简称DHA)是主要的ω-3高度不饱和脂肪酸之一，俗称“脑黄金”，是人类大脑和视网膜组织中细胞膜的组成成分，对婴幼儿视觉和神经系统的发育有至关重要的作用，同时能够降低心血管疾病的发病率，并具有一定的抗癌和抗炎的功效。DHA人体自身不能合成，只能靠外源补充。DHA从存在形态上主要分为：甘油三酯型、甲酯型、乙酯型和卵磷脂型，DHA的结构差异或者存在状态对DHA在人体内的消化吸收会产生巨大影响。不管是乙酯型和甲酯型或者是甘油三酯型，在体内都是以被动扩散的方式被吸收的。乙酯型DHA吸收率仅为20％左右，天然形态存在的甘油三酯型DHA吸收率远高于乙酯型，也只有50％左右。而近几年科学研究发现，磷脂型DHA在体内以主动吸收的方式被吸收，吸收率接近100％。磷脂型DHA具有细胞分化诱导的作用，引起研究人员的高度关注，所以磷脂型DHA作为食品添加剂、保健品及药品具有极高的商业价值。
目前获得磷脂型DHA的途径主要有通过喂食鸡的过程中添加含有DHA的饲料的富集法以及酶合成法，如中国专利申请103815434A一种富含蛋黄卵磷脂DHA的蛋黄粉制作工艺中就是通过制作DHA营养精华素粉剂作为蛋鸡饲料的添加成份，进而制得蛋黄卵磷脂DHA。富集法受原料限制，步骤复杂，而且时间较长。中国专利申请102181498B酶法制备磷脂酰胆碱型Ω-3不饱和脂肪酸，以海豹油为原料，在酶非水相催化作用下，与溶血磷脂酰胆碱反应得到磷脂酰胆碱型Ω-3不饱和脂肪酸。该方法中海豹油不易得，成本较高，且酶在非水相下，催化效率比较低，并且产物为混合物，不能实现磷脂型DHA的单独生产，且其脂肪酶多是采用微生物产的脂肪酶，不利于进行大量推广。中国专利申请101818179A一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，先利用磷脂酶A和磷脂酶其中一种或两种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂；再利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸。该方法需要先分离得到富含多不饱和脂肪酸的磷脂，反应过程和需要的条件较复杂，造成的原料损失也较多；并且，其只适用于磷脂酰丝氨酸，对甘油磷脂的原料要求较高，方法的适用性比较窄。因此，为适应市场需要，迫切需要找到一种快速高效地利用多种磷脂来合成纯度很高的磷脂DHA的方法。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明的另一个目的在于解决现有技术难以产业化的不足，便于工业化生产，提供一种成本低、制作方法简单地获得磷脂DHA的方法。
本发明的又一个目的是提供一种微反应体系，其能够提高甘油磷脂和DHA的反应效率。
本发明的再一个目的是提供一种磷脂DHA的制备方法，提高甘油磷脂和DHA的反应效率，降低生产成本，以快速生产大量磷脂DHA。
本发明提供的技术方案为：
一种磷脂DHA的制备方法，包括：
步骤一、将阴/阳离子表面活性剂溶于疏水性的烷类溶剂中制备得到微反应体系，且该烷类溶剂中含有的阴/阳离子表面活性剂的浓度为0.01～1mol/L；以及，
步骤二，将甘油磷脂和DHA加入步骤一制得的微反应体系中，采用磷脂酶进行催化反应即得到磷脂DHA。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法，在所述步骤一之后和所述步骤二之前还包括：
步骤(A)、向步骤一中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液，其中，所述磷酸缓冲液和所述微反应体系的体积比为100∶0.5～2，之后再进行所述步骤
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，在所述步骤(A)中，首先将0.5×106～5×106U的所述磷脂酶与所述磷酸缓冲液混匀，之后再将所述磷脂酶和所述磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中，利用该磷脂酶催化步骤二中的甘油磷脂和DHA进行反应。本发明的方法中，磷酸缓冲液中含有水，水能促进酶促反应，有机溶剂影响微反应体系的大小，从而影响水增溶的能力，所以可以利用因溶剂作用引起的不同微反应体系结构实现选择性增溶生物分子的目的。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述阴/阳离子表面活性剂包括丁二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲胺或溴化十二烷基二甲铵中的任意一种，所述烷类溶剂为主链含有六或七个碳的烷类，该烷类溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲胺或溴化十二烷基二甲铵的浓度为0.03～0.07mol/L。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述烷类溶剂为异辛烷或正庚烷。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述步骤二中，甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度40～55℃和搅拌转速180～200rpm条件下密闭反应12～20h，其中所述甘油磷脂和所述DNA的质量比为3∶1～5∶1。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，磷脂DHA都具有下式(I)的结构：
其中，R″是选自胆碱(PC)、乙醇胺、肌醇、丝氨酸或氢中的任意一种或几种化学结构的部分；R和R′之一为DHA酰基，另一个R和R′为氢或DHA酰基。即甘油磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)及磷脂酸(PA)中的任意一种或几种。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A1和磷脂酶B中的任意一种。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法中，所述甘油磷脂来源于植物、动物或微生物中的任一种。
优选的是，所述的磷脂DHA的制备方法，还包括在步骤二之后进行步骤三，步骤三的具体过程包括：(1)向步骤二中制得的磷脂DHA的溶液中加入树脂以回收磷脂酶，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积相同的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
本发明的有益效果为：
本发明的优点在于利用表面活性剂和有机溶剂构成的反应体系为制备磷脂DHA提供了一种温和的、适于酶促反应的微环境。与传统的提取纯化技术相比，本发明的生物酶法具有成本低、污染小、无高温加工过程等优势，反应过程无废水排放，工艺操作简单安全，且反应副产物少，无废弃物生成，反应时间短，配制好微反应体系后，一次性加入原料甘油磷脂和DHA，即可在磷脂酶的催化下，经过一次操作即可快速得到大量合成的磷脂DHA；并且，本发明的各种原料价格低廉，也易得到，同时适用于采用多种甘油磷脂作为底物骨架反应，可大大降低成本，有利于市场大规模的推广。
附图说明
图1为本发明的其中一个实施例中的磷脂DHA气相色谱图；
图2为本发明的其中另一个实施例中的磷脂DHA气相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本发明提供了一种磷脂DHA的制备方法，属于生物工程技术领域。本发明是利用表面活性剂和有机溶剂构成的体系作为微反应体系，以DHA藻油为原料，经磷脂酶A1、磷脂酶A2或磷脂酶B选择性酶解，加入磷脂，在酶催化下得到磷脂DHA。本发明的优点在于表面活性剂和有机溶剂构成的体系能极大地提高反应界面，而且表面活性剂层的刚性缓冲了酶分子结构的波动对催化构象的扰动，能够使酶保持催化活性和稳定性。反应过程无废水排放，产品质量好，工艺操作安全，无废弃物生成。生产工艺简单，规模化生产容易，为制备磷脂DHA提供了一种良好可行的方法。本发明中采用的表面活性剂为阴/阳离子表面活性剂。
本发明的磷脂酶购自诺维信制剂公司；
本发明的磷酸缓冲液为pH为6.98的磷酸缓冲液；如无特别说明，本发明所采用的试剂和器材均为常规实验用品，可通过各种商业途径购买得到。
实施例1：
称取11.12g丁二酸二酯磺酸钠(AOT)加入到500ml的异辛烷溶液中配成0.05M的AOT异辛烷溶液。准确量取50ml磷脂酶即磷酸酶A1(20000U/ml)溶于1.125血pH为6.98的磷酸缓冲液中配成酶溶液，三角瓶置于混合仪上振荡混匀得到磷脂酶溶液。移取100ml 0.05M的AOT异辛烷溶液加入三角瓶中，振荡混匀，依次加入5.6g大豆磷脂，2.4g DHA含量为55％的藻油，然后在45℃密闭条件下磁力搅拌反应12h。在反应后得到的溶液中加入阴离子交换树脂D380，阴离子交换树脂D380与磷脂酶的质量比为1∶2～1∶5，将磷脂酶固定回收。然后再把滤液在60℃水浴中减压蒸馏，再将20mL丙酮加入到剩下的溶液中，油脂和游离脂肪酸会溶解在丙酮中，而磷脂却不溶解，于是出现沉淀，然后过滤，将沉淀在干燥箱中干燥得到反应产物。
取0.5g左右的待测物放入100mL的烧瓶中，再加入40mL甲醇，0.5mL的0.5％的KOH-CH3OH溶液，在沸腾的水浴中磁力搅拌10min。不用冷却，转移烧瓶内容物于250mL分液漏斗中，用20mL正庚烷冲洗烧瓶，倒入分液漏斗，加入40mL水，摇动，使其倾析。酯聚在上层正庚烷相。再用20mL正庚烷萃取水相，倾析。合并两份正庚烷萃取液，用20mL水洗涤两次，倾析。然后用无水Na2SO4干燥正庚烷相，取上层溶液进行气相分析。
气相条件为：
仪器：岛津公司GC-2010气相色谱仪
检测器：氢火焰离子检测器(FID)；
检测条件：氮气为载气，初始柱温165℃保持5min后，5℃/min升温至180℃保持5min，然后以8℃/min升温至240℃，保持13min。进样口温度为250℃，检测器温度260℃，分流进样，分流比为1∶10，进样量为1μL。通过与标准品的保留时间进行对照，对油脂的成分进行定性，采用面积归一法对DHA进行定量分析。经气相色谱法检测，如图1所示，图中峰A显示的是DHA的测量峰，可知该合成的磷脂DHA中DHA含量很高。
实施例2
称取11.12g丁二酸二酯磺酸钠(AOT)加入到500ml的异辛烷溶液中配成0.05M的AOT异辛烷溶液。准确量取100ml磷脂酶(20000U/ml)溶于1.8ml pH为6.98的磷酸缓冲液中配成酶溶液，三角瓶置于混合仪上振荡混匀得到磷脂酶溶液。移取100ml 0.05M的AOT异辛烷溶液加入三角瓶中，振荡混匀，依次加入7.5g卵磷脂(磷脂酰胆碱)，5.2g含DHA40％的裂殖壶菌藻油，然后在55℃密闭条件下磁力搅拌反应18h。在反应后得到的溶液中加入树脂，将磷脂酶固定回收。然后再把滤液在60℃水浴中减压蒸馏，再将20mL丙酮加入到剩下的溶液中，油脂和游离脂肪酸会溶解在丙酮中，而卵磷脂却不溶解，于是出现沉淀，然后过滤，将沉淀在干燥箱中干燥得到反应产物。
取0.5g左右的待测物放入100mL的烧瓶中，再加入40mL甲醇，0.5mL的0.5％的KOH-CH3OH溶液，在沸腾的水浴中磁力搅拌10min。不用冷却，转移烧瓶内容物于250mL分液漏斗中，用20mL正庚烷冲洗烧瓶，倒入分液漏斗，加入40mL水，摇动，使其倾析。酯聚在上层正庚烷相。再用20mL正庚烷萃取水相，倾析。合并两份正庚烷萃取液，用20mL水洗涤两次，倾析。然后用无水Na2SO4干燥正庚烷相，取上层溶液进行气相分析。
气相条件为：
仪器：岛津公司GC-2010气相色谱仪
检测器：氢火焰离子检测器(FID)；
检测条件：氮气为载气，初始柱温165℃保持5min后，5℃/min升温至180℃保持5min，然后以8℃/min升温至240℃，保持13min。进样口温度为250℃，检测器温度260℃，分流进样，分流比为1∶10，进样量为1μL。通过与标准品的保留时间进行对照，对油脂的成分进行定性，采用面积归一法对DHA进行定量分析。经气相色谱法检测，如图2所示，图中峰B显示的是DHA的测量峰，可知该合成的磷脂DHA中DHA含量很高。
实施例3：
一种磷脂DHA的制备方法，包括如下步骤：
(1)将溴化十六烷基三甲胺溶于正庚烷溶剂中制备得到的微反应体系，且该正庚烷溶剂中含有的溴化十六烷基三甲胺的浓度为0.01mol/L。
(2)首先将0.5×106U的磷脂酶A2与磷酸缓冲液混匀，之后再将磷脂酶A2和磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中。向步骤(1)制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液和磷脂酶A2，其中，磷酸缓冲液和微反应体系的体积比为100∶0.5，之后再进行以下步骤。
(3)将来源于植物的甘油磷脂和DHA加入步骤(2)反应溶液中，利用该磷脂酶A2进行催化甘油磷脂和DHA反应合成磷脂DHA。甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度40℃和搅拌转速180rpm条件下密闭反应12h，其中甘油磷脂和DNA的质量比为3∶1。
且磷脂DHA具有下式(I)的结构：
其中，R″选自的部分；R′为DHA酰基，R为氢。
(4)向步骤(3)中制得的含有磷脂DHA的溶液中加入阴离子交换树脂D380，其与磷酸酶A2的质量比为1∶2，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积大致相等的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
实施例4：
一种磷脂DHA的制备方法，包括如下步骤：
(1)将丁二酸二酯磺酸钠溶于2-甲基已烷溶剂中制备得到的微反应体系，且该2-甲基已烷溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠的浓度为1mol/L。
(2)首先将5×106U的磷脂酶B与磷酸缓冲液混匀，之后再将磷脂酶B和磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中。向步骤(1)中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液和磷脂酶B，其中，磷酸缓冲液和微反应体系的体积比为100∶2，之后再进行以下步骤。
(3)将来源于动物的甘油磷脂和DHA加入步骤(2)的反应溶液中，利用该磷脂酶B进行催化甘油磷脂和DHA反应合成磷脂DHA。甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度55℃和搅拌转速200rpm条件下密闭反应20h，其中甘油磷脂和DNA的质量比为5∶1。
且磷脂DHA都具有下式(I)的结构：
其中，R″选自肌醇的部分；R′为DHA酰基，R为DHA酰基。
(4)向步骤(3)中制得的含有磷脂DHA的溶液中加入阴离子交换树脂D380，其与磷酸酶B的质量比为1∶5，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积大致相等的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
实施例5：
一种磷脂DHA的制备方法，包括如下步骤：
(1)将溴化十二烷基二甲铵溶于正庚烷溶剂中制备得到的微反应体系，且该正庚烷溶剂中含有的溴化十二烷基二甲铵的浓度为0.03mol/L。
(2)首先将3×106U的磷脂酶B与磷酸缓冲液混匀，之后再将磷脂酶B和磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中。向步骤(1)中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液和磷脂酶B，其中，磷酸缓冲液和微反应体系的体积比为100∶1，之后再进行以下步骤。
(3)将来源于微生物的甘油磷脂和DHA加入步骤(2)的反应溶液中，利用该磷脂酶B进行催化甘油磷脂和DHA反应合成磷脂DHA。甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度45℃和搅拌转速190rpm条件下密闭反应15h，其中甘油磷脂和DNA的质量比为4∶1。
且磷脂DHA都具有下式(I)的结构：
其中，R″选自丝氨酸的部分；R′为DHA酰基，R为DHA酰基。
(4)向步骤(3)中制得的磷脂DHA的溶液中加入阴离子交换树脂D380，其与磷酸酶B的质量比为1∶10，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积大致相等的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
实施例6：
一种磷脂DHA的制备方法，包括如下步骤：
(1)将丁二酸二酯磺酸钠溶于正庚烷溶剂中制备得到的微反应体系，且该正庚烷溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠的浓度为0.07mol/L。
(2)首先将4×106U的磷脂酶B与磷酸缓冲液混匀，之后再将磷脂酶B和磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中。向步骤(1)中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液和磷脂酶B，其中，磷酸缓冲液和微反应体系的体积比为100∶1.5，之后再进行以下步骤。
(3)将来源于动物的甘油磷脂和DHA加入步骤(2)的反应溶液中，利用该磷脂酶B进行催化甘油磷脂和DHA反应合成磷脂DHA。甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度50℃和搅拌转速200rpm条件下密闭反应18h，其中甘油磷脂和DNA的质量比为3.5∶1。
且磷脂DHA都具有下式(I)的结构：
其中，R″选自氢的部分；R′为DHA酰基，R为DHA酰基。
(4)向步骤(3)中制得的含磷脂DHA的溶液中加入阴离子交换树脂D380，其与磷酸酶B的质量比为1∶6，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积大致相等的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
实施例7：
一种磷脂DHA的制备方法，包括如下步骤：
(1)将丁二酸二酯磺酸钠溶于正庚烷溶剂中制备得到的微反应体系，且该正庚烷溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠的浓度为0.06mol/L。
(2)首先将24×106U的磷脂酶B与磷酸缓冲液混匀，之后再将磷脂酶A1和磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中。向步骤(1)中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液和磷脂酶A1，其中，磷酸缓冲液和微反应体系的体积比为100∶0.875，之后再进行以下步骤。
(3)将来源于动物的甘油磷脂和DHA加入步骤(2)的反应溶液中，利用该磷脂酶A1进行催化甘油磷脂和DHA反应合成磷脂DHA。甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度50℃和搅拌转速200rpm条件下密闭反应18h，其中甘油磷脂和DHA的质量比为3.5∶1。
且磷脂DHA都具有下式(I)的结构：
其中，R″选自胆碱、乙醇胺、肌醇、丝氨酸及氢中的任意几种化学结构的组合的部分；R′为氢，R为DHA酰基。
(4)向步骤(3)中制得的磷脂DHA溶液中加入阴离子交换树脂D380，其与磷酸酶A1的质量比为1∶6，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积大致相等的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
本发明的甘油磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)及磷脂酸(PA)中的任意一种或者是它们的组合。
本发明的方法中，磷酸缓冲液中含有水，水能促进酶促反应，有机溶剂影响微反应体系的大小，从而影响水增溶的能力，所以可以利用因溶剂作用引起的不同微反应体系结构实现选择性增溶生物分子的目的。
本发明的方法，与其他酶法相比提供了一种适于酶促反应的微环境，成本低，操作简单，与传统的提取纯化技术相比，生物酶法具有成本低、污染小、无高温加工过程等优势，有利于市场大规模的推广。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (10)
1.一种磷脂DHA的制备方法，包括：
步骤一、将阴/阳离子表面活性剂溶于疏水性的烷类溶剂中制备得到微反应体系，且该烷类溶剂中含有的阴/阳离子表面活性剂的浓度为0.01～1mol/L；以及，
步骤二，将甘油磷脂和DHA加入步骤一制得的微反应体系中，采用磷脂酶进行催化反应即得到磷脂DHA。
2.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，在所述步骤一之后和所述步骤二之前还包括：
步骤(A)、向步骤一中制备的微反应体系中加入磷酸缓冲液，其中，所述磷酸缓冲液和所述微反应体系的体积比为100∶0.5～2，之后再进行所述步骤二。
3.如权利要求2所述的磷脂DHA的制备方法，其中在所述步骤(A)中，首先将0.5×106～5×106U的所述磷脂酶与所述磷酸缓冲液混匀，之后再将所述磷脂酶和所述磷酸缓冲液加入到所述微反应体系中，利用该磷脂酶催化步骤二中的甘油磷脂和DHA进行反应。
4.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述阴/阳离子表面活性剂包括丁二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲胺或溴化十二烷基二甲铵中的任意一种，所述烷类溶剂为主链含有六或七个碳的烷类，该烷类溶剂中含有的丁二酸二酯磺酸钠、溴化十六烷基三甲胺或溴化十二烷基二甲铵的浓度为0.03～0.07mol/L。
5.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述烷类溶剂为异辛烷或正庚烷。
6.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述步骤二中，甘油磷脂和DHA在微反应体系中反应的具体过程为：将甘油磷脂和DHA加入该微反应体系中，于温度40～55℃和搅拌转速180～200rpm条件下密闭反应12～20h，其中所述甘油磷脂和所述DNA的质量比为3∶1～5∶1。
7.如权利要求1至6任一项所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述磷脂DHA都具有下式(I)的结构：
其中，R″是选自胆碱、乙醇胺、肌醇、丝氨酸或氢中的任意一种或几种化学结构的部分；R和R′之一为DHA酰基，另一个R和R′为氢或DHA酰基。
8.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述磷脂酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2和磷脂酶B中的任意一种。
9.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，其中所述甘油磷脂来源于植物、动物或微生物中的任一种。
10.如权利要求1所述的磷脂DHA的制备方法，还包括在步骤二之后进行步骤三，步骤三的具体过程包括：(1)向步骤二中制得的磷脂DHA的溶液中加入树脂以回收磷脂酶，之后过滤得滤液，将该滤液在60℃水浴中减压蒸馏，之后再向该滤液中加入与其体积相同的丙酮，再次过滤得沉淀，将沉淀干燥后即得到所述磷脂DHA。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991000918A1 (en) * | 1989-07-12 | 1991-01-24 | Berol Nobel Ab | A METHOD FOR THE PREPARATION OF A PHOSPHOLIPID WITH A CARBOXYLIC ACID RESIDUE IN THE 2-POSITION AND A PHOSPHOLIPID WITH AN φ-3-FATTY ACID RESIDUE IN THE 2-POSITION |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991000918A1 (en) * | 1989-07-12 | 1991-01-24 | Berol Nobel Ab | A METHOD FOR THE PREPARATION OF A PHOSPHOLIPID WITH A CARBOXYLIC ACID RESIDUE IN THE 2-POSITION AND A PHOSPHOLIPID WITH AN φ-3-FATTY ACID RESIDUE IN THE 2-POSITION |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AN NA 等: "Synthesis of Phosphatidylcholine with (N-3) Fatty-Acids by Phospholipase A2 in Microemulsion", 《JOURNAL OF THE AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY》 * |
| CHRISTOPHER OLDFIELDA: "Enzymes in water-in-oil microemulsions (‘reversed micelles’): principles and applications", 《BIOTECHNOLOGY AND GENETIC ENGINEERING REVIEWS》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106609286A (zh) * | 2015-10-22 | 2017-05-03 | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 | 含长链多不饱和脂肪酸的磷脂的制备方法 |
| CN106609286B (zh) * | 2015-10-22 | 2022-01-25 | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 | 含长链多不饱和脂肪酸的磷脂的制备方法 |
| CN105400838A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-16 | 厦门金达威集团股份有限公司 | 一种生物酶催化制备磷脂型dha的方法 |
| CN112899317A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-06-04 | 山东禹王制药有限公司 | 一种酶法制备Omega-3脂肪酸磷脂的方法 |
| CN113735897A (zh) * | 2021-08-25 | 2021-12-03 | 安徽天凯生物科技有限公司 | 磷脂型dha的制备工艺 |
| CN118006701A (zh) * | 2024-03-25 | 2024-05-10 | 南京工业大学 | 一种磷脂dha的制备方法 |
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