CN103073643A - 利用GST表达体系制备的Fertilin Beta胞外段高效价抗体及应用 - Google Patents
利用GST表达体系制备的Fertilin Beta胞外段高效价抗体及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物工程技术领域,涉及利用GST表达体系制备的Fertilin Beta胞外段高效价抗体及应用。利用基因工程技术,将Fertilin Beta基因胞外段克隆到原核表达载体中,经酶切鉴定后,用重组质粒转化大肠杆菌,并IPTG诱导产生GST-Fertilin Beta融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清并用ProteinA/G纯化。抗体的效价及特异性采用ELISA和Western blot检测,并应用免疫荧光检测了Fertilin Beta蛋白特异性定位于精子头后部。该抗Fertilin Beta多克隆抗体效价与特异性良好,可以应用于细胞中Fertilin Beta蛋白的检测并能有效检出Fertilin Beta蛋白特异性定位于精子头后部,对于系统研究Fertilin Beta蛋白功能意义重大。
Description
技术领域
本发明属于生物工程中的DNA重组技术领域,具体涉及利用GST原核表达体系制备GST-Fertilin Beta融合蛋白的多克隆抗体及应用。
背景技术
受精素β(Fertilin Beta)是一种精子表面特异性跨膜糖蛋白,定位在人类8号染色体上,其特异性的表达在人类睾丸组织和精子中,在精子发生、精子成熟、精子获能及精卵结合和融合中发挥重要作用。
Fertilin Beta蛋白功能及作用机制应深入的研究和探索:受精素在精卵结合和融合中怎样发挥作用;受精素在精子成熟过程中的促进作用等等。而研究一种新的蛋白质的功能,抗体是最有力的工具之一,在蛋白质的检测和功能研究中广泛应用的免疫组织化学、免疫印迹和免疫沉淀等一系列技术,都是基于抗原-抗体相互作用发展起来的。因此我们制备的FertilinBeta蛋白高效价抗体对于系统研究Fertilin Beta在精子发生、精子成熟、精子获能及精卵结合和融合中的作用机制意义重大。
发明内容
本发明的目的是建立一种能够用于Fertilin Beta蛋白的检测的模型,为从蛋白水平深入研究Fertilin Beta蛋白功能及相关疾病提供必要的实验工具。
利用基因工程技术,将Fertilin Beta蛋白胞外段341-373位氨基酸对应DNA片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中。经酶切和序列分析后,用重组质粒转化大肠杆菌BL21,并经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-Fertilin Beta融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,并应用ProteinA/G将其纯化,获得多克隆抗体。抗体的效价及特异性采用ELISA和Western blot检测,并应用免疫荧光检测了Fertilin Beta蛋白特异性定位于精子头后部。
本发明的GST-Fertilin Beta融合蛋白是将利用特殊序列(Fertilin Beta蛋白胞外段341-373位氨基酸对应DNA片段)构建GST-Fertilin Beta融合蛋白原核表达载体,转化BL21得到的高效表达特异性的GST-Fertilin Beta融合蛋白,这段341-373位氨基酸序列为:
Glu Ala Ile His Phe Ser Gly Val Lys Ile Phe Ser Asn Cys Ser
1 6 11
Phe Glu Asp Phe Ala His Phe Ile Ser Lys Gln Lys Ser Gin Cys
16 21 26
Leu His Asn
31
其对应核苷酸序列为:
gaagcaattc atttcagtgg tgtgaagatc tttagtaact gcagcttcga agactttgca60
cattttattt caaagcagaa gtcccagtgt cttcacaat99
这种GST-Fertilin Beta融合蛋白及其多克隆抗体制备包括以下步骤:
第一步,克隆载体的构建
从人Fertilin Beta基因全长上应用PCR技术以基因组为模板,扩增得到的目的片段与pMD18-T载体连接,经转化、提取等步骤得到重组质粒后,酶切鉴定并测序。
第二步,原核表达载体pGEX-4T-1的构建
将克隆质粒和质粒pGEX-4T-1双酶切后,利用回收试剂盒获得Fertilin Beta基因该区片段和载体连接。经转化、提取等步骤获得重组的表达载体。酶切鉴定重组体,并且测序进一步确定。
第三步,GST-Fertilin Beta融合蛋白的诱导表达和纯化
重组质粒PGEX-4T-1/Fertilin Beta转化大肠杆菌BL21,利用IPTG诱导,GST-Fertilin Beta融合蛋白的表达。以SDS-PAGE进行鉴定,并优化表达条件,进行大量扩增诱导。用超声裂解细菌,所获蛋白用Glutathione-Sepharose4B柱纯化,SDS-PAGE鉴定纯化产物。
第四步,兔抗Fertilin Beta抗血清的制备及纯化
以纯化的Fertilin Beta融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,初次免疫用500μg融合蛋白,与等体积的完全弗氏佐剂充分混匀乳化后背部皮下多点注射。免疫前取耳静脉血分离血清,作为免疫前的血清对照。2wk后进行第1次加强免疫,500μg纯化的GST-Fertilin Beta融合蛋白与不完全弗氏佐剂等体积混匀,前后四脚掌肌肉注射。之后每隔2wk加强免疫1次。于末次免疫后1wk取耳血,用ELISA法测定抗体的效价,当抗体效价达到1∶100000时,颈动脉放血,收集血清。用ProteinA/G纯化抗Fertilin Beta血清,准备蛋白A sepharose CL-4B亲和柱,亲和层析使抗体结合在柱子上,经2次洗涤后,将抗体洗脱,达到纯化目的,SDS-PAGE鉴定纯化产物,获得该发明的多克隆抗体。应用多种免疫学方法检测其效价及特异性,结果显示该抗体可特异性的与Fertilin Beta蛋白结合。
利用Fertilin Beta蛋白胞外段341-373位氨基酸基因序列成功构建GST-Fertilin Beta融合蛋白原核表达载体,转化BL21后可高效表达特异性的GST-Fertilin Beta融合蛋白。以该融合蛋白免疫兔子获得抗GST-Fertilin Beta融合蛋白的高效价抗体经多种免疫学方法检测抗体效价及特异性,结果表明抗体效价高达1∶1000000且特异性良好。抗体可应用于精子中Fertilin Beta蛋白的检测,对于系统研究Fertilin Beta蛋白在精子发生、精子成熟、精子获能及精卵结合和融合过程中的作用机制意义重大。另外,Fertilin Beta蛋白为精子表面特异性蛋白,我们制备的Fertilin Beta抗体为精子分离研究奠定了基础。
附图说明:
图1:PCR扩增出的Fertilin Beta基因341-373氨基酸片段DNA琼脂糖凝胶电泳图;
图2:双酶切质粒pGEX-4T-1;
图3:pGEX-4T-1/Fertilin Beta重组体酶切鉴定结果;
图4:纯化后的GST及GST-Fertilin Beta融合蛋白SDS-PAGE图;
图5:ProteinA/G纯化后的Fertilin Beta抗体和纯化前的抗Fertilin Beta血清SDS-PAGE图;
图6:间接ELISA法测定抗体的效价;
图7:Fertilin Beta抗体特异性的Western blot分析;
图8:免疫荧光分析Fertilin Beta蛋白在精子细胞上的定位;
具体实施方式:
实施例1:抗GST-Fertilin Beta血清的在制备
1.PCR-PMD18-T/Fertilin Beta重组质粒的构建
Fertilin Beta基因全长从Genebank得到,基因序列号为GenBank:AAC51110.1。以基因组为模板,上游引物为5’-GAA TTC GAA GCA ATT CAT TTC AGT(含EcoRI酶切位点);下游:5,-CTC GAG ATT GTG AAG ACA CTG GGA(含XhoI酶切位点)。应用PCR成功扩增出了Fertilin Beta基因胞外段314-373位氨基酸对应DNA序列长度99bp【图1】。扩增得到的片段与PMD18-T载体连接,将连接产物转入感受态大肠杆菌DH5α中,在含Amp+琼脂平板上挑选克隆,以碱裂解法小提重组质粒后,以EcoRI和SalI单酶切鉴定。
2.原核表达载体pGEX-4T-1的构建
将含有Fertilin Beta基因胞外段341-373位氨基酸片段的pMD18-T质粒经EcoRI和XhoI双酶切后(片段约0.1kbp),利用回收试剂盒获得Fertilin Beta基因该区片段,同时用相同的 酶处理质粒pGEX-4T-1(约5kbp)【图2】。然后将回收的Fertilin Beta基因胞外段341-373位氨基酸片段和经酶切的载体pGEX-4T-1在T4DNA连接酶作用下于16℃连接过夜。酶切鉴定重组体,结果显示该Fertilin Beta基因胞外段341-373位氨基酸片段正确【图3】。
3.GST-Fertilin Beta融合蛋白的诱导表达和纯化
重组质粒PGEX-4T-1/Fertilin Beta转化大肠杆菌BL21,挑取单菌落接入LB/Amp+培养基中,37℃振摇培养过夜。次日,将培养物按1∶50的比例转接于含Amp+的LB培养基中,继续在37℃摇床培养至对数生长中期。在培养液的A600为0.5~0.6时,加入IPTG至终浓度为0.08mmol/L,不加入IPTG者为阴性对照,置25℃继续培养4~5h。离心收集菌体,以SDS-PAGE进行鉴定GST-Fertilin Beta融合蛋白的表达,并优化表达条件,进行大量扩增诱导。以5000r/min于4℃离心5min,收集菌体,用60mL冰预冷的NETN悬浮1L菌液的沉淀。用超声裂解细菌,再以9600rpm,于4℃离心15min,取上清,过Glutathione-Sepharose4B柱,先以等体积洗脱缓冲液1(含20mM谷胱甘肽、50mM Tris-Cl,pH=8.0)洗脱,收集洗脱液,再以等体积洗脱缓冲液2(含100mM谷胱甘肽)洗两遍,收集洗脱液,SDS-PAGE鉴定纯化产物【图4】。
4.兔抗Fertilin Beta抗血清的制备
以纯化的GST-Fertilin Beta融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,初次免疫用500μg融合蛋白,与等体积的完全弗氏佐剂充分混匀乳化后背部皮下多点注射。免疫前取耳静脉血分离血清,作为免疫前的血清对照。2wk后进行第1次加强免疫,500μg纯化的GST-Fertilin Beta融合蛋白与不完全弗氏佐剂等体积混匀,前后四脚掌肌肉注射。之后每隔2wk加强免疫1次。于末次免疫后1wk取耳血,用ELISA法测定抗体的效价,当抗体效价达到1∶1000000时,颈动脉放血,收集血清。
5.ProteinA/G纯化抗Fertilin Beta血清
将ProteinA/G sepharose CL-4B填料缓慢装柱,平衡柱子后加入经过稀释的抗血清,控制流速保证抗血清与填料的结合,即亲和层析使抗体结合在柱子上,经2次洗涤后,加pH2.7洗脱缓冲溶液将抗体洗脱,收集洗脱液并测定各收集管的280nm光密度,将含抗体的收集管混合,纯化后的抗体与纯化前的抗血清用SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色鉴定。染色结果显示纯化效果明显,纯化后的样品有清晰的轻、重链带【图5】。
实施例2:GST-Fertilin Beta抗体的分析及应用
1.GST-Fertilin Beta抗体效价的测定
用GST-Fertilin Beta融合蛋白免疫前的新西兰大白兔血清作为对照,将纯化后的GST-Fertilin Beta抗体先稀释10倍再倍比稀释后,用间接ELISA测定抗体的效价。结果显示, 免疫前的兔血清未测出抗融合蛋白GST-Fertilin Beta的抗体,GST-Fertilin Beta抗体的滴度高达1∶1000000以上【图6】。
2.GST-Fertilin Beta抗体应用于组织中Fertilin Beta蛋白的检测
收集小鼠睾丸组织和培养的特异性不表达Fertilin Beta蛋白的细胞,裂解超声后用BCA蛋白定量试剂盒对其进行蛋白定量,之后将样品等蛋白量进行SDS-PAGE,再电转移至硝酸纤维素膜上。以5%脱脂奶粉封闭1h,依次滴加兔抗Fertilin Beta抗体(室温2h、PBS洗3次)及山羊抗兔IgG2HRP(室温反应1h、PBS洗涤3次),最后加底物DAB显色,并拍照。结果显示【图7】,我们制备的Fertilin Beta抗体与小鼠睾丸组织所表达的Fertilin Beta蛋白发生了抗原-抗体反应而,在Marker指示的82KD处出现了一条特异的蛋白带,而特异性不表达FertilinBeta蛋白的细胞没有出现,证明Fertilin Beta抗体特异性好。
3.精子表面膜蛋白定位分析
将人精子(约105个精子/孔)均匀涂于十二孔板中后置于孵箱干燥,4%多聚甲醛固定(室温2h、PBS洗3次),此次滴加PBS(对照组)或兔抗抗Fertilin Beta抗体(室温2h、PBS洗3次),及避光处理异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔IgG(室温反应1h、PBS洗涤3次)和DAPI(室温1min、PBS洗3次),荧光显微镜观察,并拍照。结果显示【图8】,Fertilin Beta蛋白特异性表达于精子头后部,与报道相符,证明Fertilin Beta抗体具有良好的特异性。
<110>东北师范大学
<120>利用GST表达体系制备的Fertilin Beta胞外段高效价抗体及应用
<160>2
<210>1
<211>99
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>1
gaagcaattc atttcagtgg tgtgaagatc tttagtaact gcagcttcga agactttgca 60
cattttattt caaagcagaa gtcccagtgt cttcacaat 99
<210>2
<211>33
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>2
Glu Ala Ile His Phe Ser Gly Val Lys Ile Phe Ser Asn Cys Ser
1 6 11
Phe Glu Asp Phe Ala His Phe Ile Ser Lys Gln Lys Ser Gln Cys
16 21 26
Leu His Asn
31
Claims (2)
1.利用GST表达体系制备的Fertilin Beta蛋白胞外段高效价抗体,其特征在于利用GST表达体系以Fertilin Beta蛋白胞外段341-373位氨基酸对应DNA片段作为特异序列制备的GST-Fertilin Beta融合蛋白作为抗原免疫动物产生抗血清而获得,该抗血清中抗GST-FertilinBeta抗体的滴度高达1∶1000000,并经过Western blot鉴定该Fertilin Beta抗体具有较好的特异性,其中,341-373位氨基酸序列为:
Glu Ala Ile His Phe Ser Gly Val Lys Ile Phe Ser Asn Cys Ser
1 6 11
Phe Glu Asp Phe Ala His Phe Ile Ser Lys Gln Lys Ser Gln Cys
16 21 26
Leu His Asn
31
其对应核苷酸序列为:
gaagcaattc atttcagtgg tgtgaagatc tttagtaact gcagcttcga agactttgca 60
cattttattt caaagcagaa gtcccagtgtcttcacaat 99。
2.如权利要求1所述的原核表达GST-Fertilin Beta融合蛋白的多克隆抗体的制备方法,其特征在于利用GST表达系统获得GST-Fertilin Beta融合蛋白,再经免疫兔获得抗GST-FertilinBeta抗血清,具体包括四步:
第一步,PCR-PMD18-T/Fertilin Beta重组质粒的构建
Fertilin Beta基因全长从Genebank得到,基因序列号为AAC51110.1,以基因组为模板,上游引物为5’-GAA TTC GAA GCA ATT CAT TTC AGT(含EcoRI酶切位点);下游:5’-CTC GAG ATT GTG AAG ACA CTG GGA(含XhoI酶切位点),扩增得到的片段与pMD18-T载体连接,将连接产物转入感受态大肠杆菌DH5α中,在含Amp+琼脂平板上挑选克隆,以碱裂解法小提重组质粒后,以EcoRI和SalI单酶切鉴定;
第二步,原核表达载体pGEX-4T-1的构建
将含有Fertilin Beta基因胞外段341-373氨基酸片段的pMD18-T质粒经EcoRI和XhoI双酶切后,利用回收试剂盒获得Fertilin Beta基因该区片段,同时用相同的酶处理质粒pGEX-4T-1,然后将回收的Fertilin Beta基因胞外段341-373氨基酸片段和经酶切的载体pGEX-4T-1在T4DNA连接酶作用下于16℃连接过夜,酶切鉴定重组体,并且测序进一步确定;
第三步,GST-Fertilin Beta融合蛋白的诱导表达和纯化
重组质粒PGEX-4T-1/Fertilin Beta转化大肠杆菌BL21,挑取单菌落接入LB/Amp+ 培养基中,37℃振摇培养过夜。次日,将培养物按1∶50的比例转接于含Amp+的LB培养基中,继续在37℃摇床培养至对数生长中期。在培养液的A600为0.5~0.6时,加入IPTG至终浓度为0.08mmol/L,不加入IPTG者为阴性对照,置25℃继续培养4~5h。离心收集菌体,以SDS-PAGE进行鉴定GST-Fertilin Beta融合蛋白的表达,并优化表达条件,进行大量扩增诱导。以5000r/min于4℃离心5min,收集菌体,用60mL冰预冷的NETN悬浮1L菌液的沉淀。用超声裂解细菌,再以9600rpm,于4℃离心15min,取上清,过Glutathione-Sepharose4B柱,先以等体积洗脱缓冲液1(含20mM谷胱甘肽、50mM Tris-Cl,pH=8.0)洗脱,收集洗脱液,再以等体积洗脱缓冲液2(含100mM谷胱甘肽)洗两遍,收集洗脱液,SDS-PAGE鉴定纯化产物;
第四步,兔抗Fertilin Beta抗血清的制备及纯化
以纯化的Fertilin Beta融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,初次免疫用500μg融合蛋白,与等体积的完全弗氏佐剂充分混匀乳化后背部皮下多点注射,免疫前取耳静脉血分离血清,作为免疫前的血清对照,2wk后进行第1次加强免疫,500μg纯化的Fertilin Beta融合蛋白与不完全弗氏佐剂等体积混匀,前后四脚掌肌肉注射,之后每隔2wk加强免疫1次,于末次免疫后1wk取耳血,用ELISA法测定抗体的效价,当抗体效价达到1∶1000000时,颈动脉放血,收集血清,将ProteinA/G sepharose CL-4B填料缓慢装柱,平衡柱子后加入经过稀释的抗血清,控制流速保证抗血清与填料的结合,即亲和层析使抗体结合在柱子上,经2次洗涤后,加pH2.7洗脱缓冲溶液将抗体洗脱,收集洗脱液并测定各收集管的280nm光密度,将含抗体的收集管混合,纯化后的抗体与纯化前的抗血清用SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色鉴定;
第五步,Fertilin Beta抗体的免疫学检测
用GST-Fertilin Beta融合蛋白免疫前的新西兰大白兔血清作为对照,将纯化后的GST-Fertilin Beta抗体先稀释10倍再倍比稀释后采用间接ELISA方法测定抗体的效价,并采用Western blot方法分析Fertilin Beta抗体特异性,将纯化的融合蛋白GST-FertilinBeta样品,经SDS-PAGE分离后再电转移至硝酸纤维素膜上,以5%脱脂奶粉封闭1h,依次滴加兔抗Fertilin Beta抗体,室温2h、PBS洗3次,山羊抗兔IgG2HRP,室温反应1h、PBS洗涤3次,最后加底物DAB显色,并拍照。
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《万方中国学位论文全文数据库》 20090902 丽娜 绵羊受精素beta去整合素结构域的表达及其特异性抗体的制备 全文 1-2 , * |
丽娜: "绵羊受精素β去整合素结构域的表达及其特异性抗体的制备", 《万方中国学位论文全文数据库》, 2 September 2009 (2009-09-02) * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN104892758A (zh) * | 2014-03-06 | 2015-09-09 | 东北师范大学 | 利用gst表达体系制备aqp7胞外段抗体及应用 |
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