CN103063830B - 一种elisa预包被酶标板的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种ELISA预包被酶标板的制备方法，属诊断试剂技术领域，包括制备包被液和包被两个步骤，还包括以下步骤：a、封闭：弃包被液，加入封闭液每孔100-300ul，室温封闭4小时；b、制备固定液：在磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，pH=7.2-7.4的PBS缓冲液中加入蔗糖和海藻糖，使蔗糖的质量分数为5%-30%，海藻糖的质量分数为5%-30%，得到固定液；c、固定：弃封闭液，加入所述固定液每孔100-300ul，室温固定0.5小时；d、干燥：弃固定液，室温过夜晾干；铝箔袋抽真空，加入干燥剂，4度保存，得到ELISA预包被酶标板。本发明能使ELISA预包被酶标板在4度保存3年以上。
Description
技术领域
本发明是一种ELISA预包被酶标板的制备方法，属于生物体外诊断试剂技术领域。
背景技术
酶联免疫吸附（ELISA）实验因其灵敏度高，样本容易获得，操作简单已成为国际公认的蛋白定量金标准。ELISA试剂盒制备的关键技术之一就是抗体固相载体酶标板的制备。预包被酶标板常规的制备方法是包被液在酶标孔中孵育一定时间后弃掉包被液，置于4℃可保存1个月，置于-20℃，可保存3个月；再进行加干燥剂，抽真空处理，在4℃可保存1年左右，但这不能满足ELISA试剂盒长期保存的需要，ELISA预包被酶标板需要更长的蛋白活性保持时间。
如专利号为200910192897.1，名称为一种链霉亲和素预包被酶标板的制备方法与应用中公开的方法，传统ELISA预包被酶标板的制备步骤为：制备包被液、包被、干燥。近年来，在包被步骤之后有封闭步骤，封闭之后再干燥；但目前，在封闭和干燥步骤之间没有使用专门用于固定蛋白活性的固定液，使得保存时间不够长，造成ELISA试剂盒因预包被酶标板过期而报废，产生不小的经济损失。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能使ELISA预包被酶标板在4度保存3年以上的ELISA预包被酶标板的制备方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该ELISA预包被酶标板的制备方法在包括制备包被液和包被两个步骤，还包括以下步骤：
a、封闭：弃包被液，加入封闭液每孔100-300ul，室温封闭4小时；
b、制备固定液：在磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，pH=7.2-7.4的PBS缓冲液中加入蔗糖和海藻糖，使蔗糖的质量分数为5%-30%，海藻糖的质量分数为5%-30%，得到固定液；
c、固定：弃封闭液，加入所述固定液每孔100-300ul，室温固定0.5小时；
d、干燥：弃固定液，室温过夜晾干；铝箔袋抽真空，加入干燥剂，4度保存，得到ELISA预包被酶标板。
作为优选，所述a步中封闭液为磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，BSA质量分数为1%，pH=7.2-7.4的1%BSA-PBST封闭液，加入封闭液每孔300ul。
作为优选，所述b步中PBS缓冲液pH=7.3，蔗糖的质量分数为30%，所述海藻糖的质量分数为30%。
作为优选，所述c步加入所述固定液每孔300ul。
本发明捕获抗体在传统的制备封闭和干燥两步骤间增加了用固定液固定的步骤，在固定液的作用下，对捕获抗体的蛋白活性进行固定，最终得到使蛋白活性稳定，保存时间长的ELISA预包被酶标板。
本发明与现有技术相比具有的优点是：用固定液对捕获抗体ELISA的蛋白活性进行固定，最终制得的ELISA预包被酶标板可以在4度条件下长期保存。增加了ELISA试剂盒的保存时间和稳定性，减少了ELISA试剂盒因预包被酶标板活性降低或丧失而报废，减少经济损失。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。
实施例1：HumanIL-6预包被酶标板的制备步骤：
a、制备包被液：将抗HumanIL-6捕获抗体用磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，pH=7.2的PBS缓冲液稀释到2ug/ml，得到包被液；
b、包被：在酶标孔中加入100ul的包被液，4℃包被过夜；
c、封闭：弃包被液，加入pH=7.3的1%BSA-PBST封闭液300ul/孔，室温封闭4小时；
d、制备固定液：在磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，pH=7.3的PBS缓冲液作中加入蔗糖和海藻糖，使蔗糖的质量分数为30%，海藻糖的质量分数为30%，得到固定液。
e、固定：弃封闭液，加入上述固定液每孔300ul，室温固定0.5小时；
f、晾干：弃固定液，室温过夜晾干；
g、加入干燥剂，铝箔袋抽真空，4℃保存，得到HumanIL-6预包被酶标板。
上述HumanIL-6预包被酶标板经过37度加速试验，可以保存28天。根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存1天相当于4度保存48天，因此得出本实施例HumanIL-6预包被酶标板在4度可保存3年以上。
其他实施例：以HumanIL-6捕获蛋白为例制成HumanIL-6预包被酶标板后进行保存时间测试，所述的固定液中蔗糖和海藻糖的质量分数是以下表格中的配比，步骤与实施例1相同，不同配比对应的37度加速试验测得的保存天数如下表：
| 蔗糖 | 海藻糖 | 保存天数（37度） |
| 5% | 5% | 23天 |
| 10% | 10% | 24天 |
| 15% | 15% | 25天 |
| 20% | 20% | 26天 |
| 25% | 25% | 27天 |
| 30% | 30% | 28天 |
根据阿伦尼乌斯公式结论，37度保存1天相当于4度保存48天，表中37度时最低可保持23天，因此得出用本发明所述方法制得的HumanIL-6预包被酶标板在4度可保存3年以上。
此外，需要说明的是，本说明书中所描述的具体实施例，其配比、工艺所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
虽然本发明已以实施例公开如上，但并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该项技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰，均应属于本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种ELISA预包被酶标板的制备方法，包括制备包被液和包被两个步骤，其特征在于还包括以下步骤：
a、封闭：弃包被液，加入封闭液每孔100-300ul，室温封闭4小时；
b、制备固定液：在磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，pH=7.3的PBS缓冲液中加入蔗糖和海藻糖，使蔗糖的质量分数为30%，海藻糖的质量分数为30%，得到固定液；
c、固定：弃封闭液，加入所述固定液每孔100-300ul，室温固定0.5小时；
d、干燥：弃固定液，室温过夜晾干；铝箔袋抽真空，加入干燥剂，4度保存，得到ELISA预包被酶标板，所述a步中的封闭液为磷酸根摩尔浓度为0.01mol/L，Tween20体积分数为1‰，BSA质量分数为1%，pH=7.2-7.4的1%BSA-PBST封闭液，加入封闭液每孔300ul。
2.根据权利要求1所述的ELISA预包被酶标板的制备方法，其特征在于：所述c步加入所述固定液每孔300ul。
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