CN103055304A

CN103055304A - 一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及其制备方法

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Publication number: CN103055304A
Application number: CN2013100322509A
Authority: CN
Inventors: 卓阳
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-01-19
Filing date: 2013-01-19
Publication date: 2013-04-24

Abstract

本发明涉及一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及其制备方法，该复方温敏凝胶剂由胰岛素和重组人表皮因子两种成分以及以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和壳聚糖中的一种或者多种为基质组成，并依次通过凝胶基质的制备、胰岛素和重组人表皮因子混合液的制备、复方温敏凝胶剂的制备以及样品观察的方法制得，本发明的复方温敏凝胶剂在制备和贮存过程中呈液体状态，易于在创口涂布或喷洒，临床使用方便；体温条件下能快速形成凝胶，不易流失，长时间滞留起效，生物利用度高，此外，凝胶剂的水性环境更易于保证两种蛋白药物的生物活性，更易于其释放；本发明的复方温敏凝胶剂的制备方法简单实用，可操作性强。

Description

一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及其制备方法。

背景技术

皮肤溃疡是局限性皮肤缺损形成的创面，可深达真皮或更深位置，其种类繁多，病因复杂：可由外伤、烧伤感染、血管性、糖尿病、压力性、放射性损伤、皮肤恶性肿瘤等原因引起。因损害常破坏基底层细胞，深达真皮或皮下组织，故溃疡愈合较慢，必须经过皮肤各层细胞的生长、增殖，且愈后可留有疤痕。目前，在临床医学上，对皮肤溃疡治疗的方法比较多，但尚未发现对皮肤各层细胞均有促生长作用的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及其制备方法，该复方温敏凝胶剂具有良好的温敏特性和稳定性，并且对皮肤的促愈合效果明显；本发明的制备方法简单、实用，可操作性强。

本发明的一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂，由胰岛素和重组人表皮生长因子两种成分形成的混合液以及以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和壳聚糖中的一种或者多种为基质组成；优选的，该复方温敏凝胶剂中含胰岛素0.5-2U/ml，重组人表皮生长因子500-2000IU/ml，并且泊洛沙姆407在该复方温敏凝胶剂中的浓度为10％-30％。

进一步的优选为，该复方温敏凝胶剂含胰岛素1U/ml，重组人表皮生长因子1000IU/ml，并且泊洛沙姆407在该复方温敏凝胶剂的浓度优选为16％-20％。

本发明的复方温敏凝胶剂的制备方法包括下列步骤：

第一步，制备普通凝胶基质：取2.5g泊洛沙姆407或者壳聚糖和2.5ml甘油混合润湿，然后加入25ml蒸馏水溶胀3小时，接着缓慢滴加三乙醇胺将PH值调至6.0-6.5，最后加蒸馏水至50ml；

第二步，制备胰岛素与重组表皮生长因子的混合液：以胰岛素与重组表皮生长因子混合液不同剂量之比及PH调节剂为三因素，以所制备混合液的外观性状、PH值、稳定性为考察指标，筛选出以下最优化方案：将40U/ml的胰岛素与2000IU/ml重组表皮生长因子以1∶2进行配比使用，并观察其外观。

第三步：制备复方温敏凝胶剂：观察所得混合液外观为透明澄清、无絮状沉积后，再与第一步制备所得的凝胶基质均匀混合，制得复方温敏凝胶剂；

第四步，样品观察：a、离心试验：称取复方凝胶剂置于10ml离心管中，以3000转速离心30min取样观察；b、留样观察：取复方凝胶剂10ml装入密闭离心管中，分别于4℃、15℃、30℃、37℃和60℃温度水浴下存放1个月，检查复合凝胶外观、pH值、霉变现象。

具体的，在上述第三步中制备复方凝胶剂的同时，从牛血清白蛋白、蔗糖和甘露醇等成份中筛选蛋白保护剂，从尼泊金酯、洗必泰和偏重亚硫酸钠中筛选抑菌剂和抗氧剂，以保证复方凝胶剂的长期稳定性。

本发明的复方温敏凝胶剂存在以下有益效果：1、由于该复方温敏凝胶剂在低温时(5-25℃)为无色透明溶液，在较高温度时(30-40℃)为无色透明、稠度适宜的半固体物质，可见其溶胶-凝胶相变有良好的可逆性，因此，该复方温敏凝胶剂具有很好的温敏特性；2、具有良好的稳定性，不易变质；3、促皮肤愈合的效果明显。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应当理解，本实施例仅用于说明本发明并具体体现本发明的有益效果，而不用于限制本发明的范围。此外，显而易见的，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员基于本发明的精神对本发明进行的相关改动或者修改，都同样落入本发明的保护范围之中。

为充分说明本发明的复方温敏凝胶剂在临床应用中可实现的效果，本课题组对30只大鼠采取了如下自身对照法的实验：采用雌性Wistar大鼠，将其禁食24h，背部皮肤去毛，用乙醚麻醉，在其背脊柱两侧切割下直径1.0cm的圆形皮肤4块，深至皮下，止血后备用，即形成机械损伤性溃疡，达到造模目的；然后将这30只具有溃疡的大鼠随机分为胰岛素治疗组(A组，30例)、重组表皮生长因子组(B组，30例)、胰岛素与重组表皮生长因子复方溶液治疗组(C组，30例)和空白对照组(D组，30例)；各组在造模后第二天开始用药：A组给予胰岛素溶液(0.1ml)，B组给予重组人表皮生长因子溶液(0.1ml)，C组给予胰岛素与重组表皮生长因子复方溶液(0.1ml)，D组不给药；药物均匀涂于相应溃疡面，用无菌凡土林油纱及纱布包扎，并将大鼠单笼喂养，每日换药1次，治疗后3天、5天、7天、10天分别观察各组溃疡面积变化，将创面愈合程度按0-100％打分(0％表完全未愈合，100％表完全愈合)，以评价修复效果，对照如下表1所示：

表1 不同时间点各组创面愈合百分率比较(％)

如上表1的实验数据以统计学方法计算所得：用SPSSl4.0统计软件包处理，实验数据以均数±标准差表示，创面愈合程度采用重复测量方差分析(Repeated Measures)，不同时间点组间比较以及每组不同时间点比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，以P＜0.05为差异有显著性意义。

根据表1的实验数据对比可显而易见的得出该实验结果如下：结果示：第3天，各组溃疡均有少许愈合，但组间差异不大(P＞0.05)；第5天，A、B、C治疗组和D对照组有显著性差异(P＜0.05)；第7天，创面愈合率：C组＞B组＞A组，差异有统计学意义(P＜0.05)；第10天，各组溃疡基本完全愈合，整体治疗效果差异性不显著(P＞0.05)。

本实施例采用的上述实验观察到应用胰岛素与重组表皮生长因子复合剂对大鼠皮肤溃疡有促修复效应，主要表现在使创面炎症反应减轻，血管内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞等修复细胞增殖、分裂、分化能力增强，肉芽组织生长旺盛，胶原沉积加快，上皮化提前等；在实验治疗的第5天，A、B、C治疗组和D对照组有显著性差异，提示两种药物均有对皮肤溃疡有促愈合的作用；在治疗后的第7天，创面愈合率：C组＞B组＞A组，提示复方剂在治疗皮肤溃疡的肉芽生长期愈合程度高，同时表明重组人表皮生长因子溶液对皮肤溃疡的愈合作用优于胰岛素溶液；在复方溶液中重组人表皮生长因子起主要作用，胰岛素起良好的辅助作用；从而可从研究结果表明，胰岛素与重组表皮生长因子复合溶液具有对大鼠皮肤溃疡促愈合作用，尤其表现在肉芽组织生长期，局部应用是安全、有效的。

经过上述实施例的实验对照可知，胰岛素与重组表皮生长因子复合溶液在表1所示的对照组里对表皮具有最优的促愈合效果，然而，本课题组考虑到在临床中使用复方溶液剂时，药物容易流失，剂量不易控制，制成普通凝胶剂后又存在涂布给药不均匀的问题，因此，本课题组进一步的研究出一种胰岛素与重组表皮生长因子复合温敏凝胶剂，该复合温敏凝胶剂由胰岛素和重组人表皮因子两种成分以及以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和壳聚糖中的一种或者多种为基质组成。

在本实施例中，基于更加充分的说明本发明中泊洛沙姆407的浓度对复合温敏凝胶剂的凝胶温度影响，可参考如下表2所示：

表2：

同时，为充分说明胰岛素与重组表皮生长因子之间不同比例的组分组合对该复合温敏凝胶剂的促愈合效果体现，参考如下表3(机械法制备的直径约1.8cm的溃疡愈合平均天数比较)：

表3：

组合	平均愈合天数
		胰岛素0.5U/ml+生长因子500IU/ml	22
胰岛素0.5U/ml+生长因子1000IU/ml	19
		胰岛素0.5U/ml+生长因子2000IU/ml	17
胰岛素1.0U/ml+生长因子500IU/ml	20
		胰岛素1.0U/ml+生长因子1000IU/ml	18
胰岛素1.0U/ml+生长因子2000IU/ml	16
		胰岛素2.0U/ml+生长因子500IU/ml	20
胰岛素2.0U/ml+生长因子1000IU/ml	16
		胰岛素2.0U/ml+生长因子2000IU/ml	15

在本实施例中，结合表2和表3，显而易见的可推导出优选方案如下：所述复方温敏凝胶剂中含胰岛素0.5-2U/ml，重组人表皮生长因子500-2000IU/ml，并且泊洛沙姆407在该复方温敏凝胶剂中的浓度为10％-30％；作为进一步的优选，该复方温敏凝胶剂含胰岛素1U/ml，重组人表皮生长因子1000IU/ml，并且泊洛沙姆407在该复方温敏凝胶剂的浓度优选为16％-20％。

经实验观察可知，在本实施例中取复方温敏凝胶剂5ml，采用试管倒置法测定时，该复合温敏凝胶剂在4℃低温时为无色透明溶液，在水浴中加热至30℃时为无色透明、稠度适宜的半固体物质，如此实验操作反复3次，证明其溶胶-凝胶相变有良好的可逆性；另取该复方温敏凝胶剂5ml于离心管，转速3000r/min，离心30min，未观察到分层等现象，证明其初步稳定；综上所述可知，本发明的胰岛素与重组表皮生长因子的复方温敏凝胶剂的相变行为稳定，温敏特性良好。

为提供充分的实验依据来证实经过凝胶的胰岛素与重组表皮生长因子复合温敏凝胶剂不会对胰岛素与重组表皮生长因子的复合溶液的促愈合性能产生变异，本课题组对复合温敏凝胶剂和复合溶液再次分别进行了实验研究对照，过程如下：采用机械法在Wistar大鼠背部制备直径约1.8cm的皮肤溃疡模型共30个，随机将溃疡分为复方温敏凝胶剂治疗组(A组)、复方溶液治疗组(B组)、空白温敏凝胶剂对照组(C组)。，实验结构对照如下表4所示：

表4不同时间点各组创面愈合百分率比较(％)

表4的实验研究结果表明，胰岛素与重组表皮生长因子复方温敏凝胶剂对于皮肤创伤的初期效果非常明显，在治疗第3天即可达到30％左右，治疗第7天可达到70％左右，治疗头7天的愈合速度明显快于复方溶液组和对照组，这其中可能的原因是胰岛素与重组表皮生长因子复方温敏凝胶剂可以保证药物不易流失，而给予创面复方溶液时，药物难免会有部分流失，且复方温敏凝胶剂不易挥发，可以保持溃疡创面的湿润环境，以利于伤口的快速愈合；但治疗7天以后，Ins/rhEGF复方温敏凝胶剂治疗组的愈合速度要慢于复方溶液组和对照组，这其中的原因有待进一步探讨；但本实验可初步证实胰岛素与重组表皮生长因子复方温敏凝胶剂对创伤愈合的初期具有显著的效果，并不会导致其促愈合的性能变异。

综上所述可知，本实施例的复方温敏凝胶剂在制备和贮存过程中呈液体状态，易于在创口涂布或喷洒，临床使用方便；并且体温条件下快速成凝胶，不易流失，长时间滞留起效，生物利用度高；此外，凝胶剂的水性环境更易于保证两种蛋白药物的生物活性，更易于其释放。

本发明实施例中关于所述胰岛素与重组表皮生长因子复合温敏凝胶剂的优化制备方法如下：

第二步，制备胰岛素与重组表皮生长因子的混合液：以胰岛素与重组表皮生长因子混合液不同剂量之比及PH调节剂为三因素，以所制备混合液的外观性状、PH值、稳定性为考察指标，筛选出以下优化方案：将40U/ml的胰岛素与2000IU/ml重组表皮生长因子以1∶2进行配比使用，并观察其外观。

第三步：制备复方温敏凝胶剂：观察第二步中所得混合液外观为透明澄清、无絮状沉积后，再与第一步制备所得的凝胶基质均匀混合，制得复方温敏凝胶剂；

本实施例中，在上述第三步中制备复方凝胶剂的同时，从牛血清白蛋白、蔗糖和甘露醇等成份中筛选蛋白保护剂，从尼泊金酯、洗必泰和偏重亚硫酸钠中筛选抑菌剂和抗氧剂，以保证复方凝胶剂的长期稳定性。

本发明实施例中胰岛素与重组表皮生长因子复合温敏凝胶剂的制备工艺简单、工序设计合理、可操作性强。

Claims

1.一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂，其特征在于由胰岛素和重组人表皮生长因子两种成分形成的混合液以及以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和壳聚糖中的一种或者多种为基质组成，所述复方温敏凝胶剂中含胰岛素0.5-2U/ml，重组人表皮生长因子500-2000IU/ml，并且泊洛沙姆407在该复方温敏凝胶剂中的浓度为10％-30％。

2.根据权利要求2所述的一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂，其特征在于：所述复方温敏凝胶剂中优选为含胰岛素1U/ml，重组人表皮生长因子1000IU/ml，并且泊洛沙姆407在该复方温敏凝胶剂的浓度优选为16％-20％。

3.根据权利要求1所述的一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂的制备方法，包括以下几个步骤：

4.根据权利要求3所述的一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂的制备方法，其特征在于：所述第三步中制备复方凝胶剂的同时，从牛血清白蛋白、蔗糖和甘露醇等成份中筛选蛋白保护剂，从尼泊金酯、洗必泰和偏重亚硫酸钠中筛选抑菌剂和抗氧剂，以保证复方凝胶剂的长期稳定性。