CN103052404A - 神经毡蛋白作为贝伐单抗联合疗法的生物标志物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于改善患有胃癌，特别是胃或胃-食管接合(“GEJ”)腺癌的患者中的治疗效果的方法，其通过相对于患有胃癌，特别是胃或胃-食管接合(“GEJ”)腺癌的患者中测定的对照水平测定神经毡蛋白的表达水平通过与化学疗法方案组合用贝伐单抗
Figure DDA00002816075900011
治疗来进行。改善的治疗效果可以是改善的总体存活或改善的无进展存活。本发明进一步提供了用于评估患者对与化学疗法方案组合的贝伐单抗

Description

神经毡蛋白作为贝伐单抗联合疗法的生物标志物
本发明提供了用于改善患有胃癌，特别是胃或胃-食管接合(“GEJ”)腺癌的患者中的治疗效果的方法，其通过相对于患有胃癌，特别是胃或胃-食管接合(“GEJ”)腺癌的患者中测定的对照水平测定神经毡蛋白的表达水平通过与化学疗法方案组合用贝伐单抗(bevacizumab,)治疗来进行。改善的治疗效果可以是改善的总体存活或改善的无进展存活。本发明进一步提供了用于评估患者对与化学疗法方案组合的贝伐单抗
Figure BDA00002816075700012
的敏感性或响应性的方法，其通过相对于患有胃癌，特别是胃或胃-食管接合(“GEJ”)腺癌的患者中测定的对照水平测定神经毡蛋白的表达水平来进行。
因而，本发明涉及胃癌，特别是胃或胃-食管接合(“GEJ”)腺癌的一种或多种生物标志物的鉴定和选择，所述生物标志物与对与化学治疗方案，诸如基于卡培他滨(capecitabine)或5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)的化学疗法组合的血管发生抑制剂，例如贝伐单抗
Figure BDA00002816075700013
的敏感性或响应性相关联。在某些方面，本发明涉及使用相对于患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中确立的对照测定的神经毡蛋白的肿瘤特异性表达，来鉴定对向标准化学疗法添加血管发生抑制剂，例如贝伐单抗
Figure BDA00002816075700014
敏感或响应的患者。本发明还涉及用于改善患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中的治疗效果的方法，其通过相对于患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中确立的对照测定神经毡蛋白的肿瘤特异性表达水平通过向标准化学疗法，例如基于卡培他滨或5-氟尿嘧啶的化学疗法添加血管发生抑制剂，例如贝伐单抗
Figure BDA00002816075700015
来进行。治疗效果包括临床参数总体存活和无进展存活。本发明还提供了用于鉴定对血管发生抑制剂，特别是贝伐单抗
Figure BDA00002816075700016
敏感或响应的患者的试剂盒和组合物，所述患者依照本文中描述的方法确定并限定。
血管发生对于癌症形成是必需的，其不仅调节原发性肿瘤大小和生长，而且还影响侵入性和转移性潜力。因而，已经调查了介导血管发生过程的机制作为用于定向抗癌疗法的潜在靶物。早先在血管发生调控物的研究中，发现了血管内皮生长因子(VEGF)信号传导途径优先调节多种癌症类型中的血管发生活性，并且已经开发出多种治疗剂来在多个点调控此途径。这些疗法包括贝伐单抗、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)和瓦他拉尼(vatalanib)等。虽然血管发生抑制剂在临床中的使用已经显示成功，但是，不是所有患者都响应或不能完全响应血管发生抑制剂疗法。此类不完全响应根本的机制是未知的。因此，不断需要鉴定对抗血管发生癌症疗法敏感或响应的患者亚组。
虽然许多血管发生抑制剂是已知的，但是最主要的血管发生抑制剂是贝伐单抗
Figure BDA00002816075700021
贝伐单抗是一种重组人源化单克隆IgG1抗体，其特异性结合VEGF(血管内皮生长因子)并阻断它的生物学效果。VEGF是肿瘤血管发生(肿瘤生长和转移，即肿瘤散布至身体的其它部分需要的一种必需过程)的一种至关重要的驱动物。
Figure BDA00002816075700022
在欧洲批准用于治疗晚期阶段的四种常见癌症类型：结肠直肠癌、乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和肾癌，这些癌症每年共同引起超过250万例死亡。至今已经用
Figure BDA00002816075700023
治疗了超过50万名患者，并且具有超过450项临床试验的全面临床项目正调查在不同背景(例如，晚期或早期阶段疾病)的多种癌症类型(包括结肠直肠、乳腺、非小细胞肺、脑、胃、卵巢和前列腺)的治疗中进一步使用Avastin。重要地，已经显示了有希望作为共治疗剂，其在与一大批化学疗法和其它抗癌治疗组合时表明效力。已经发表了多项III期研究，其表明组合贝伐单抗与标准的化学治疗方案的有益效果(见例如，Kang等,2010,J.Clin.Oncol.,28:18s(增刊摘要LBA4007);Saltz等,2008,J.Clin.Oncol.,26:2013-2019;Yang等,2008,Clin.Cancer Res.,14:5893-5899;Hurwitz等,2004,N.Engl.J.Med.,350:2335-2342)。然而，如在血管发生抑制剂的先前研究中的，这些中的一些III期研究已经显示了一部分患者经历对向其化学治疗方案添加贝伐单抗
Figure BDA00002816075700025
的不完全响应。
因而，需要确定那些如下的患者的方法，所述患者响应或有可能响应包含血管发生抑制剂，特别是贝伐单抗的联合疗法。如此，本发明根本的技术问题是提供用于鉴定患有或易于患上胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者的方法和手段，所述患者可以受益于对化学治疗方案，例如基于卡培他滨或5-氟尿嘧啶的抑制剂添加血管发生抑制剂，特别是贝伐单抗
Figure BDA00002816075700027
通过提供权利要求书中表征的实施方案来解决该技术问题。
因此，本发明提供了通过对化学疗法方案添加贝伐单抗来改善患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中的治疗效果的方法，所述方法包括：
(a)测定患者样品中神经毡蛋白的表达水平；并
(b)对相对于患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中测定的对照水平具有降低的神经毡蛋白水平的患者施用与化学疗法方案组合的贝伐单抗。
改善的治疗效果可以是临床参数总体存活或者可以是无进展存活。
在其它实施方案中，本发明涉及用于鉴定对向化学疗法方案添加贝伐单抗响应或敏感的患者的体外方法，所述方法包括测定来自怀疑患有或易于患上胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者的样品中神经毡蛋白的表达水平，其中相对于患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中测定的对照水平降低的神经毡蛋白水平指示该患者对向所述方案添加贝伐单抗的敏感性。
因而，本发明解决了鉴定的技术问题，因为令人惊讶地，显示了相对于在诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中测定的对照水平，给定患者中神经毡蛋白的肿瘤特异性表达水平与施用与化学疗法方案组合的血管发生抑制剂的那些患者中的治疗效果相关联。令人惊讶地，肿瘤特异性神经毡蛋白表达水平的变化鉴定为响应向基于卡培他滨或5-氟尿嘧啶的化学治疗方案添加贝伐单抗
Figure BDA00002816075700031
的胃癌患者的改善的无进展存活和/或改善的总体存活的标志物/预测物。特别地，展现出对向化学疗法方案添加贝伐单抗
Figure BDA00002816075700032
的响应或敏感性的胃癌患者鉴定为相对于从患有或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者获得的样品中确立的对照水平具有降低的神经毡蛋白表达。术语“标志物”和“预测物”可以互换使用，并且指神经毡蛋白的表达水平，如本文中描述并限定的。
在本发明的上下文中，“神经毡蛋白”指神经毡蛋白-1蛋白，即一种也称为NRP-1的I型膜蛋白，并且以在图3中显示的氨基酸序列SEQ ID NO:1例示(NRP-1前体氨基酸序列以UniProt登录号O14786也可获得)。如本文中使用的，“神经毡蛋白”也可以指神经毡蛋白-2(也称为NRP-2)，其与NRP-1共享约44%同源性，如本领域中已知的。因而，本发明的方法没有区分NRP-1和NRP-2。在本发明的上下文中，术语“神经毡蛋白”还涵盖NRP-1和/或NRP-2的同源物、变体和同等型，只要所述同源物、变体和同等型受到如本文中描述的和/或如本领域中已知的一种或多种抗神经毡蛋白抗体特异性识别。术语“神经毡蛋白”进一步涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:1，或与NRP-1和/或NRP-2同源物、变体和同等型(包括剪接同等型)中的一种或多种的序列，及所述序列的片段具有至少85%、至少90%或至少95%同源性的蛋白质，只要变体蛋白质(包括同等型)、同源蛋白质和/或片段受到一种或多种NRP-1和/或NRP-2特异性抗体识别，所述NRP-1和/或NRP-2特异性抗体诸如可购自R&D Systems,Inc.(Minneapolis,Minnesota,U.S.A.)的克隆446915，以产品目录编码sc-5307可购自Santa Cruz Biotechnology,Inc.(Santa Cruz,California,U.S.A.)的或其它本领域中已知的。
因而，本发明涵盖测定蛋白质，包括但不限于如本文中所描述的氨基酸序列的表达水平。在某些方面，本发明涵盖检测神经毡蛋白的同源物、变体和同等型；所述同等型或变体包含等位变体或剪接变体等。还涵盖的是检测与如本文中所描述的神经毡蛋白或其片段同源，例如与氨基酸序列SEQ IDNO:1或其片段具有至少60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的蛋白质。或者/另外，本发明涵盖检测由如下的核酸序列或其片段编码的蛋白质的表达水平，所述核酸序列与编码SEQ ID NO:1或其片段、变体或同等型的核酸序列至少60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。在此上下文中，术语“变体”意指神经毡蛋白氨基酸序列、或编码所述氨基酸序列的核酸序列与以SEQ ID NO:1鉴定和/或以上文所鉴定的UniProt登录号可获得的独特序列差别在于突变，例如，删除、添加、替代、倒位等。另外，术语“同源物”指与如SEQ ID NO:1中所显示的一种或多种多肽或其片段具有至少60%，更优选地至少80%且最优选地至少90%序列同一性的分子。
为了测定氨基酸或核酸序列与如本文中所描述的氨基酸或核酸序列是否具有某种程度的同一性，技术人员可以手工或者通过使用本领域中已知的或本文中所描述的计算机程序使用本领域中公知的手段和方法，例如比对。
依照本发明，术语“相同”或“百分比同一性”在两种或更多种氨基酸或核酸序列的上下文中指相同的，或者如使用如本领域中已知的序列比较算法，或者通过手动比对和视觉检查测量的，为了在比较窗里，或在指定区里得到最大对应而比较和比对时具有规定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸(例如，与例如SEQ ID NO:1的氨基酸序列的60%或65%同一性，优选地，70-95%同一性，更优选地，至少95%同一性)的两种或更多种序列或亚序列。认为具有例如60%至95%或更大序列同一性的序列是基本上相同的。此类定义也适用于测试序列的互补物。优选地，所描述的同一性存在于长度为至少约15至25个氨基酸或核苷酸的区域里，更优选地，在长度为约50至100个氨基酸或核苷酸的区域里。本领域技术人员会知道如何使用例如算法，诸如那些基于CLUSTALW计算机程序(Thompson Nucl.Acids Res.2(1994),4673-4680)或FASTDB(Brutlag Comp.App.Biosci.6(1990),237-245)的算法来测定序列间的百分比同一性，如本领域中已知的。
虽然FASTDB算法在其计算中通常不考虑序列中的内部不匹配删除或添加，即缺口，但是这可以手动校正以避免%同一性的过度评估。然而，CLUSTALW在其同一性计算中确实考虑序列缺口。本领域技术人员也可用的是BLAST(基本局部比对搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool))和BLAST2.0算法(Altschul,1997,Nucl.Acids Res.25:3389-3402;Altschul,1993J.Mol.Evol.36:290-300;Altschul,1990,J.Mol.Biol.215:403-410)。用于核酸序列的BLASTN程序使用字长度(W)为11、预期(E)为10、M=5、N=4、和两条链的比较，作为缺省。对于氨基酸序列，BLASTP程序使用字长度(W)为3、和预期(E)为10。BLOSUM62评分矩阵(Henikoff(1989)PNAS89:10915)使用比对(B)为50、预期(E)为10、M=5、N=4、和两条链的比较，作为缺省。
如上文所讨论的BLAST算法产生氨基酸和核苷酸序列两者的比对以测定序列相似性。由于比对的局部性质，BLAST特别可用于测定精确匹配或鉴定相似序列。BLAST算法输出的基本单元是高得分区段对(High-scoringSegment Pair,HSP)。HSP由任意的但相等长度的两个序列片段组成，所述序列片段比对是局部最大的，并且对于所述序列片段，比对得分满足或超过用户设置的阈值或截留得分。BLAST方法寻找询问序列与数据库序列间的HSP，以评估找到的任何匹配的统计学显著性，并且仅报告那些满足用户选定的显著性阈值的匹配。参数E建立用于报告数据库序列匹配的统计学显著性阈值。E解读为整个数据库搜索的背景内的HSP(或HSP组)的偶然发生的预期频率的上界。在程序输出中报告其匹配满足E的任何数据库序列。
使用BLAST的类似计算机技术可以用于搜索蛋白质或核苷酸数据库诸如GenBank或EMBL中的相同或相关分子。此分析比基于膜的多重杂交快得多。另外，可以改良计算机搜索的灵敏性以测定任何特定匹配是否分类为精确的或类似的。搜索的基础是乘积得分，其定义为：
Figure BDA00002816075700051
并且考虑两个序列间的相似性程度和序列匹配长度两者。例如，在乘积为40的情况中，匹配在1-2%的误差内会是精确的；而在70时，匹配会是精确的。虽然较低的得分可以鉴定相关分子，但是通常通过选择那些显示15和40间乘积得分的分子来鉴定相似的分子。关于能够产生序列比对的程序的另一个例子是CLUSTALW计算机程序(Thompson,1994,Nucl.Acids Res.2:4673-4680)或FASTDB(Brutlag,1990,Comp.App.Biosci.6:237-245)，如本领域中已知的。
依照本发明，令人惊讶地，在AVAGAST群体(参见例如Kang等,2010,J.Clin.Oncol.,28:18s(增刊摘要LBA4007))中发现较大的贝伐单抗治疗效果与较低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达有关。具体地，相对较低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达与在化学治疗方案外还接受贝伐单抗的患者中改善的总体存活和/或改善的无进展存活有关。
神经毡蛋白(例如，NRP-1、NRP-2、或其变体、同源物、截短物或片段)的表达水平可以通过本领域中已知的任何适用于测定患者样品中特定蛋白质水平的方法来评估，并且优选地，通过采用对神经毡蛋白特异性的抗体的免疫组织化学(“IHC”)方法测定。这类方法是本领域中公知的且常规执行的，并且相应的商业抗体和/或试剂盒是容易地可获得的。例如，对如本文中描述并限定的神经毡蛋白特异性的商品化抗体可以从R&D Systems,Inc.(Minneapolis,Minnesota,U.S.A.)以克隆446915以及从Santa CruzBiotechnology,Inc.(Santa Cruz,California,U.S.A.)以产品目录编号sc-5307获得。优选地，使用抗体或试剂盒制造商的试剂和/或方案推荐来评估本发明的标志物/指示物蛋白质的表达水平。技术人员还会知道通过IHC方法来测定神经毡蛋白的表达水平的其它手段。因此，本领域技术人员无需过度负担便可以常规并可再现地确定神经毡蛋白和/或如本领域中已知的其它标志物/指示物的表达水平。然而，为了确保精确的且可再现的结果，本发明还涵盖在可以确保测试规程的有效性的专门实验室中测试患者样品。
优选地，神经毡蛋白的表达水平在含有或怀疑含有癌细胞的生物学样品中评估，并且以肿瘤特异性方式测定。样品可以包含癌细胞(即肿瘤细胞)和非癌性细胞(例如内皮或非恶性细胞)两者。在一些方面，测定神经毡蛋白的肿瘤特异性表达指与可能存在于肿瘤样品中的其它细胞类型，例如内皮或非癌性/非恶性细胞形成对比，仅测定癌细胞的表达水平。在其它方面，测定神经毡蛋白的肿瘤特异性表达指测定癌细胞以及可能存在于肿瘤样品中的任何其它细胞类型(例如内皮细胞)的表达水平。熟练技术人员例如病理学家可以容易地区分癌细胞与非癌性细胞，例如内皮细胞。样品可以是从患有、怀疑患有或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者获得的胃组织切除或胃组织活组织检查。样品也可以是从患有、怀疑患有或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者获得的转移性损伤的切除或活组织检查。优选地，样品是胃组织或胃-食管接合组织的样品，或者胃或胃-食管接合腺癌的切除或活组织检查。样品也可以是已知的或怀疑的转移性胃癌损伤或切片的样品，或已知或怀疑包含循环的癌细胞，例如胃癌细胞的血液样品，例如外周血样品。依照本发明方法对样品的分析可以是手动的，如由熟练技术人员例如病理学家实施的，如本领域中已知的，或者可以使用商品化软件来自动化，该商品化软件设计用于加工并分析病理学图像，例如用于在组织活组织检查或切除中分析(例如MIRAX SCAN,Carl Zeiss AG,Jena,Germany)。获得生物学样品，包括组织切除、活组织检查和体液，例如包含癌/肿瘤细胞的血液样品的方法是本领域中公知的。
在本发明的上下文中，要在一种或多种化学治疗剂外或作为与一种或多种化学治疗剂的共疗法或共治疗施用贝伐单抗，所述化学治疗剂作为如本领域中已知的标准化学疗法方案的一部分施用。此类化学治疗剂的例子包括5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、伊立替康(irinotecan)、吉西他滨(gemcitabine)-厄洛替尼(erlotinib)、卡培他滨和基于铂的化学治疗剂，诸如帕利他塞(paclitaxel)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)。如在所附实施例中证明的，向基于卡培他滨或5-氟尿嘧啶的化学治疗方案添加贝伐单抗在依照神经毡蛋白的表达水平限定并选择的，具体地，相对于类似情况的患者中确立的对照水平在肿瘤样品中具有更低的神经毡蛋白表达的胃癌患者和/或患者群中实现无进展存活延长，并且与总体存活相关联。
贝伐单抗可以与基于卡培他滨或5-氟尿嘧啶的化学疗法方案联合。治疗内科医生基于本领域中完善确立的标准最好地确定卡培他滨和5-氟尿嘧啶之间的选择。基于卡培他滨的化学疗法方案的例子包括与顺铂联合施用的卡培他滨(或5-氟尿嘧啶)的组合。卡培他滨/顺铂疗法的典型周期可以是在第1天至第14天里每天两次(bid)以1000mg/m2的剂量口服施用卡培他滨，接着是1周休息，以及在该周期的第1天在高度水合(hyper-hydration)和麻醉前用药(premedication)(类固醇和止吐剂；3次/周)的情况中以2小时输注以80mg/m2的剂量i.v.施用顺铂；持续顺铂和卡培他滨周期，直到疾病进展或不可管理的毒性，顺铂施用限制为最多6个周期。因而，在本发明的某些方面，用与卡培他滨/顺铂组合的贝伐单抗治疗依照本文中的方法鉴定的患者。贝伐单抗的常见施用模式包括在固定的一段时间里以推注剂量或以输注的胃肠外施用，例如，在10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟、75分钟、90分钟、105分钟、120分钟、3小时、4小时、5小时或6小时里施用总的每日剂量。例如，可以在每个卡培他滨周期的第1天以静脉内输注在15至30分钟里对胃癌患者施用7.5mg/kg贝伐单抗
Figure BDA00002816075700081
如上文描述的。技术人员会认可，本发明涵盖贝伐单抗的其它施用模式，如由特定患者和化学疗法方案确定的，而且治疗内科医生依照本领域中已知的方法最佳地确定特定的施用模式和治疗剂量。
与化学疗法方案组合用贝伐单抗治疗依照本发明的方法选定的患者，并且可以用一种或多种别的抗癌疗法进一步治疗。在某些方面，所述一种或多种别的抗癌疗法是辐射。
在优选的实施方案中，收集自患者获得的样品，之后开始任何其它化学治疗方案或疗法，例如，用于治疗癌症或管理或改善其症状的疗法。因此，在优选的实施方案中，在施用化学治疗剂或开始化学疗法方案前收集样品。
本发明还涉及包含适用于测定神经毡蛋白的肿瘤特异性表达水平的寡核苷酸或多肽的诊断组合物或试剂盒。如本文中详述的，寡核苷酸诸如DNA、RNA或DNA和RNA探针的混合物可以用于检测标志物/指示物蛋白质，特别是神经毡蛋白的mRNA水平，而多肽可以用于经由特异性蛋白质-蛋白质相互作用来直接检测标志物/指示物蛋白质的蛋白质水平。在本发明的优选方面，作为针对神经毡蛋白的表达水平的探针涵盖的，并且包含在本文中描述的试剂盒或诊断组合物中的多肽是对神经毡蛋白特异性的，或对其同源物、变体和/或截短物特异性的抗体。
因而，本发明进一步的实施方案提供了可用于实施本文中描述的方法的试剂盒，其包含能够测定神经毡蛋白的表达水平的寡核苷酸或多肽。优选地，寡核苷酸包含对编码如本文中限定并描述的神经毡蛋白的mRNA特异性的引物和/或探针，而多肽包含能够与神经毡蛋白特异性相互作用的蛋白质，例如标志物/指示物特异性抗体或抗体片段。
在又一个实施方案中，本发明提供了贝伐单抗用于改善患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中的治疗效果的用途，包括下列步骤：
(a)测定患者样品中神经毡蛋白的表达水平；并
(b)对相对于患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中测定的对照水平具有降低的神经毡蛋白水平的患者施用与化学疗法方案组合的贝伐单抗。
改善的治疗效果可以是改善的总体存活或改善的无进展存活。
如在所附实施例中证明的，本发明解决了鉴定的技术问题，因为令人惊讶地，可以显示相对于在诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中测定的对照水平，给定患者中神经毡蛋白的表达水平与施用与基于卡培他滨或5-氟尿嘧啶的化学疗法方案组合的贝伐单抗的患者中的治疗效果相关联。
短语“响应”在本发明的上下文中指患有，怀疑患有或易于患上，或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的受试者/患者显示对包括贝伐单抗添加的化学疗法方案的响应。技术人员会容易地能够确定依照本发明的方法用贝伐单抗治疗的人是否显示响应。例如，响应可以通过来自胃癌的痛苦降低，诸如降低和/或停止的肿瘤生长、肿瘤大小的缩小、和/或胃癌的一种或多种症状(例如，胃肠出血、疼痛、贫血)的改善得到反映。优选地，响应可以通过胃癌的转移性转化的指数的降低或减少，例如，预防转移的形成或转移的数目或大小降低得到反映。
短语“对…敏感”在本发明的上下文中指患有，怀疑患有或易于患上，或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的受试者/患者以某种方式显示对与化学疗法方案组合用贝伐单抗治疗的正面反应。患者的反应在与如上文所描述的“响应”的患者相比时可以是不太明显的。例如，患者可以经历较少的与疾病有关的痛苦，尽管可能没有测量到肿瘤生长或转移性指示物的降低，和/或患者对与化学疗法方案组合的贝伐单抗的反应可以仅是瞬时性质的，即肿瘤和/或转移的生长可以仅是暂时降低或停止的。
依照本发明的短语“患有…的患者”指显示胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的临床体征的患者。胃癌可以是转移性的、不能手术的和/或局部晚期胃或胃-食管接合(“GEJ”)的腺癌。短语“易受”或“易于”在胃癌的上下文中指基于例如，可能的遗传素因、预先或最终暴露于危险的和/或致癌的化合物，或暴露于致癌性物理危险，诸如辐射，患者中的适应症疾病。
短语“治疗效果”在本发明的上下文中涵盖短语“无进展存活”和“总体存活”。
短语“无进展存活”在本发明的上下文中指治疗期间和治疗后，依照治疗内科医生或调查人员的评估，患者的疾病不变坏，即不进展的时间长度。如技术人员会领会的，若与类似情况的患者的对照组的平均或均值无进展存活时间相比，患者经历更长的疾病不进展的时间长度，则患者的无进展存活得到改善或增强。
短语“总体存活”在本发明的上下文中指患者组内的患者平均存活。如技术人员会领会的，如果患者属于与另一个患者亚组相比具有统计学显著更长的均值存活时间的患者亚组，那么患者的总体存活得到改善或增强。改善的总体存活在一个或多个患者亚组中可以是明显的，但是在将患者群作为整体分析时并不明显。
如本文中所使用的，术语“施用”意指通过本领域中已知的适合于施用治疗性抗体的任何手段对需要此类治疗或医学干预的患者施用血管发生抑制剂，例如，贝伐单抗
Figure BDA00002816075700101
和/或包含血管发生抑制剂，例如，贝伐单抗
Figure BDA00002816075700102
的药物组合物/治疗方案。非限制性施用路径包括通过口服、静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、表面、皮内、鼻内或支气管内施用(例如如通过吸入实现的)。在本发明的上下文中特别优选的是胃肠外施用，例如，静脉内施用。就用于治疗结肠直肠癌的贝伐单抗
Figure BDA00002816075700103
而言，依照EMEA的优选剂量是每2周给予一次的5mg/kg或10mg/kg体重或每3周给予一次的7.5mg/kg或15mg/kg体重(关于详情，见http://www.emea.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/avastin/emea-combined-h582en.pdf)。
术语“抗体”在本文中以最广义使用，并且包括但不限于单克隆和多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、嵌合抗体、CDR嫁接的抗体、人源化抗体、骆驼源化(camelized)抗体、单链抗体和抗体片段及片段构建体，例如，F(ab’)2片段、Fab片段、Fv片段、单链Fv片段(scFv)、双特异性scFv、双抗体、单域抗体(dAb)和微型抗体，其展现出期望的生物学活性，特别是对VEGFA、HER2、神经毡蛋白和CD31中的一种或多种，或对其同系物、变体、片段和/或同等型的特异性结合。
如本文中所使用的，“化学治疗剂”包括可以提供抗癌治疗效果，并且可以是化学药剂或生物学药剂，特别是能够干扰癌或肿瘤细胞的化学药剂或生物学药剂的任何活性剂。优选的活性剂是那些充当抗赘生物(化学毒性或化学抑制性)药剂的，其抑制或阻止恶性细胞的形成、成熟或增殖。化学治疗剂的非限制性例子包括烷化剂(alkylating agents)诸如氮芥类(nitrogenmustards)(例如，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、美法仑(melphalan)和苯丁酸氮芥(chlorambucil))、亚硝脲类(nitro soureas)(例如，卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、和司莫司汀(semustine)(甲基-CCNU))、乙撑亚胺类(ethylenimines)/甲基蜜胺类(methylamelamines)(例如，三乙撑蜜胺(thriethylenemelamine)(TEM)、三乙烯(triethylene)、硫代磷酰胺(thiophosphoramide)(塞替派(thiotepa))、六甲蜜胺(hexamethylmelamine)(HMM，六甲蜜胺(altretamine)))、磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)(例如，白消安(busulfan))、和三嗪(triazines)(例如，达卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC))；抗代谢物诸如叶酸类似物(例如，甲氨蝶呤(methotrexate)、三甲曲沙(trimetrexate))、嘧啶类似物(例如，5-氟尿嘧啶、氟脱氧尿嘧啶(fluorodeoxyuridine)、吉西他滨、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)(AraC，阿糖胞苷)、5-氮胞苷(azacytidine)、2,2’-二氟脱氧胞苷(2,2’-difluorodeoxycytidine)、和嘧啶类似物前药，例如卡培他滨)、嘌呤类似物(例如，6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫唑嘌呤(azathioprine)、2’-脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)(喷司他丁(pentostatin))、红羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine,EHNA)、磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)、和2-氯脱氧腺苷(克拉屈滨(cladribine)，2-CdA))；自天然产物开发的抗有丝分裂药物(例如，帕利他塞、长春花生物碱类(vinca alkaloids)(例如，长春碱(vinblastine,VLB)、长春新碱(vincristine)、和长春瑞滨(vinorelbine))、泰索帝(taxotere)、雌莫司汀(estramustine)、和磷酸雌莫司汀)、表鬼臼毒素类(epipodophylotoxins)(例如，依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide))、抗生素(例如，放射菌素(actimomycin)D、道诺霉素(daunomycin)(柔红霉素(rubidomycin))、多柔比星(doxorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、伊达比星(idarubicin)、博来霉素(bleomycin)、普卡霉素(plicamycin)(光神霉素(mithramycin))、丝裂霉素(mitomycin)C、放线菌素(actinomycin))、酶(例如，L-门冬酰胺酶)、和生物反应修饰剂(biological response modifier)(例如，干扰素-α、IL-2、G-CSF、GM-CSF)；混杂的药剂，包括铂配位复合物(例如，顺铂、卡铂)、蒽二酮类(anthracenediones)(例如，米托蒽醌(mitoxantrone))、取代的脲(即，羟基脲(hydroxyurea))、甲基肼(methylhydrazine)衍生物(例如，N-甲基肼(MIH)、丙卡巴肼(procarbazine))、肾上腺皮质抑制剂(例如，米托坦(mitotane)(o,p’-DDD)、氨鲁米特(aminoglutethimide))；激素和拮抗剂，包括肾上腺皮质类固醇拮抗剂(例如，泼尼松(prednisone)和等同物，地塞米松(dexamethasone)、氨鲁米特(aminoglutethimide))、黄体酮(progestin)(例如，己酸羟孕酮(hydroxyprogesterone caproate)、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate))、雌激素(例如，己烯雌酚(diethylstilbestrol)、乙炔基雌二醇(ethinyl estradiol)及其等同物)；抗雌激素(例如，他莫昔芬(tamoxifen))、雄激素(例如，丙酸睾酮(testosteronepropionate)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)及其等同物)、抗雄激素(例如，氟他胺(flutamide)、促性腺素释放素类似物、亮丙瑞林(leuprolide))和非类固醇抗雄激素(例如，氟他胺)。
在本发明的上下文中，提及氨基酸序列的“同源性”理解为指在如本文中所提供的SEQ ID NO所限定的序列的全长里至少80%的序列同一性，特别是至少85%，优选是至少90%且仍更优选是至少95%的同一性。在本发明的上下文中，技术人员会理解同源性进一步涵盖不同群体和民族中的标志物/指示物蛋白质的别的等位变异。
如本文中所使用的，术语“多肽”指涵盖给定长度的氨基酸链的肽、蛋白质、寡肽或多肽，其中氨基酸残基通过共价肽键连接。然而，本发明还涵盖此类蛋白质/多肽的肽模拟物，其中氨基酸和/或肽键已经被功能性类似物，例如，与20种基因编码氨基酸之一不同的氨基酸残基，例如，硒代半胱氨酸替换。肽、寡肽和蛋白质可以称作多肽。术语多肽和蛋白质在本文中可互换使用。术语多肽也指，并且不排除多肽的修饰，例如，糖基化、乙酰化、磷酸化等。此类修饰在基础教科书中充分描述，并且在专著及多卷研究文献中更为详细地描述。
如本文中所使用的，术语“治疗”和“处理”指疾病或其任何参数或症状的补救、改善、严重性减轻、或时间过程的降低。优选地，患者是人患者，并且要治疗的疾病是是胃癌，特别是胃或GEJ腺癌。术语“评估”此类患者指测定神经毡蛋白的表达水平，和/或基于相对于诊断为转移性结肠直肠癌的患者中建立的对照水平的此类标志物/指示物蛋白质的表达水平来选择此类患者的方法。
在上文描述的方法外，本发明还涵盖用于评估神经毡蛋白的表达水平的别的免疫组织化学方法，诸如通过Western印迹和基于ELISA的检测来进行。如本领域中理解的，也可以通过本领域中已知的任何合适的方法，诸如Northern印迹、实时PCR、和RT PCR在mRNA水平评估本发明的标志物/指示物蛋白质的表达水平。基于免疫组织化学和mRNA的检测方法和系统是本领域中公知的，并且可以自标准的教科书，诸如Lottspeich(Bioanalytik,Spektrum Akademisher Verlag,1998)或Sambrook和Russell(Molecular Cloning:A Laboratory Manual,CSH Press,Cold Spring Harbor,NY,U.S.A.,2001)推导出。描述的方法特别可用于相对于类似情况的群体(例如其患有或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌)中确立的对照水平，测定患者或患者组中神经毡蛋白的表达水平，例如肿瘤特异性表达水平。
也可以通过利用免疫凝集、免疫沉淀(例如，免疫扩散、免疫电泳、免疫固定)、Western印迹技术(例如，(原位)免疫组织化学、(原位)免疫细胞化学、亲和层析、酶免疫测定法)等在蛋白质水平测定神经毡蛋白的表达水平。也可以通过物理方法，例如光度法来测定溶液中的纯化多肽的量。量化混合物中的特定多肽的方法通常取决于例如抗体的特异性结合。利用抗体特异性的特异性检测和定量方法包括例如免疫组织化学(原位)。例如，可以通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)来测定本发明的标志物/指示物蛋白质(例如NRP-1、NRP-2和/或其变体、同源物或截短物)在细胞或组织中的浓度/量。或者，可以实施Western印迹分析或免疫组织化学染色。Western印迹组合通过电泳分离蛋白质的混合物与用抗体的特异性检测。电泳可以是多维诸如2D电泳。通常，多肽在2D电泳中根据其表观分子量沿着一维及根据其等电点沿着另一个方向分离。
如上文所提及的，也可以在神经毡蛋白(如本文中描述并限定的)的相应基因的表达降低中反映依照本发明的标志物/指示物蛋白质的表达降低。因此，可以实施翻译前基因产物(例如，剪接、未剪接或部分剪接mRNA)的定量评估以评估相应基因的表达。本领域技术人员知道要在此上下文中使用的标准方法或者可以自标准的教科书(例如Sambrook,2001,在上述引文中)推导出这些方法。例如，可以通过Northern印迹、实时PCR等获得关于编码神经毡蛋白的mRNA的相应浓度/量的定量数据。
在本发明的又一方面，可以有利地使用本发明的试剂盒来实施本发明的方法，并且可以在多种应用中，例如在诊断领域中或作为研究工具等采用。本发明的试剂盒的各部分可以个别地在管形瓶中或组合地在容器或多容器单元中包装。优选地，试剂盒的制造遵循标准的规程，其对于本领域技术人员已知的。依照采用例如免疫组织化学技术的本文中所描述的发明方法，可以使用试剂盒或诊断组合物来检测神经毡蛋白(如本文中限定并描述的)的表达水平。
虽然以使用贝伐单抗例示，本发明涵盖使用本领域中已知的其它血管发生抑制剂以与标准的化学疗法方案组合使用。如本文中所使用的，术语“血管发生抑制剂”指改变血管发生(例如形成血管的过程)的所有药剂，并且包括阻断血管形成和/或停止或减缓血管生长的药剂。在贝伐单抗外，血管发生抑制剂的非限制性例子包括哌加他尼(pegaptanib)、舒尼替尼、索拉非尼和瓦他拉尼。优选地，依照本发明的方法使用的血管发生抑制剂是贝伐单抗。如本文中所使用的，术语“贝伐单抗”涵盖满足在选自美国、欧洲和日本的国家或地区中获得作为相同或生物相似产品的销售授权必需的要求的所有相应的抗VEGF抗体或抗VEGF抗体片段。
对于在本文中所描述的检测方法中使用，技术人员具有标记本发明涵盖的多肽或寡核苷酸的能力。如本领域中常规实施的，可以依照本领域中已知的标准方法来标记并显现检测mRNA水平中使用的杂交探针和/或IHC方法中使用的抗体或抗体片段。通常使用的系统的非限制性例子包括使用放射性标记物、酶标记物、荧光标签、生物素-亲合素复合物、化学发光等。
本领域技术人员，例如主治内科医生容易地能够对如本文中选定并限定的患者/患者组施用与化学疗法方案组合的贝伐单抗。在某些背景中，主治内科医生会依照他/她的专业经验来变更、改变或修改贝伐单抗和化学疗法方案的施用方案。因此，在本发明的某些方面，提供了用于在患有或怀疑患有胃癌的患者中与化学疗法方案组合用贝伐单抗治疗或改善治疗效果(即无进展或总体存活)的方法，其中所述患者/患者组在生物学样品(特别是胃组织切除、胃组织活组织检查和/或转移性损伤)的评估中表征，所述样品相对于在患有和/或诊断为胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中确立的对照水平展现出降低的神经毡蛋白表达水平。本发明还提供了贝伐单抗在制备用于治疗患有或怀疑患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者的药物组合物中的用途，其中所述患者通过本文中公开的蛋白质标志物/指示物状态(即相对于患有胃癌，特别是胃或GEJ腺癌的患者中确立的对照水平降低的神经毡蛋白表达水平)选择或表征。
附图简述
图显示了：
图1：神经毡蛋白表达与总体存活(中值截留)的关联。长虚线，安慰剂、化学疗法和高于中值的神经毡蛋白表达；短虚线，贝伐单抗疗法、化学疗法和高于中值的生物标志物表达；实线，贝伐单抗疗法、化学疗法和低于或等于中值的生物标志物表达；中/小虚线，安慰剂、化学疗法和低于或等于中值的生物标志物表达。
图2：神经毡蛋白表达与进展或死亡前时间(中值截留)的关联。长虚线，安慰剂、化学疗法和高于中值的神经毡蛋白表达；短虚线，贝伐单抗疗法、化学疗法和高于中值的生物标志物表达；实线，贝伐单抗疗法、化学疗法和低于或等于中值的生物标志物表达；中/小虚线，安慰剂、化学疗法和低于或等于中值的生物标志物表达。
图3：SEQ ID NO:1，神经毡蛋白-1的代表性氨基酸序列。
图4：神经毡蛋白表达与总体存活、进展或死亡前时间、和总体响应率(ORR)之间的关联。
实施例
从参与一项随机化III期研究的患者收集组织样品，所述随机化III期研究比较向一线卡培他滨(若卡培他滨是禁忌的，则允许5-氟尿嘧啶)/顺铂联合化学疗法方案添加贝伐单抗以治疗转移性或不能手术的、局部晚期胃或GEJ腺癌的结果(AVAGAST研究，参见Kang等,2010,J.Clin.Oncol.,28:18s(增刊摘要LBA4007)(“Kang”))。一项关于与血管发生和肿瘤发生相关的生物标志物状态的调查揭示了，相对于整个患者群中测定的对照水平降低的神经毡蛋白表达水平指示改善的总体存活和/或无进展存活。
患者和免疫组织化学方法
总共774位患者参与AVAGAST研究，并且根据特定的生物标志物，来自629-727位参与者的肿瘤样品可用于生物标志物分析。平衡处理臂。约95%的患者是转移性的。约2/3的患者为男性，49%来自亚太地区，32%来自欧洲，而19%来自美洲(参见Kang)。
组织样品以组织块或以先前制备的载玻片可获得。对经福尔马林固定的经石蜡包埋的组织样品的5μm切片(对于块)或对先前制备的载玻片实施免疫组织化学分析。在脱石蜡化和再水合后，通过在PT模块中的柠檬酸盐pH6.0缓冲液于95°C持续30分钟或在Benchmark-XT(Ventana,Tucson,AZ,USA)中的CC1缓冲液来实施抗原修复。
基于已知的肿瘤发生和血管发生活性，选择初始生物标志物，包括神经毡蛋白以进行免疫组织化学分析。具体地，使用以产品目录编号sc-5307可购自Santa Cruz Biotechnology,Inc.(Santa Cruz,California,U.S.A)的抗人神经毡蛋白鼠单克隆抗体来分析神经毡蛋白。
在Autostainer或Benchmark-XT(对于VEGFR-1)上染色切片，并且将一抗温育1小时。特别就Sana Cruz抗体而言，以1/50稀释度使用此抗神经毡蛋白抗体。使用Envision系统(DAKO,Glostrup,Denmark)或Ultraview(Ventana,Tucson,AZ USA)显现一抗的结合。用迈尔(Mayer)氏苏木精复染色所有切片。
对每个IHC测定法产生显示正确性、特异性、线性、和精确性(可再现性和可重复性)的确认报告。外部对照载玻片和内在对照元件的染色归档。
统计学分析
对肿瘤标志物使用H得分来描述生物标志物的总体分布。所检查的标志物的数目是有限的，并且每种标志物得到生物学基本原理支持；对于多重检验没有正式的校正。对蛋白质表达水平使用先验截留：中值(之下，之上)和四分位数(≤25,25<x≤50,50<x≤75,>75)。
在以生物标志物水平限定的患者亚组中评估治疗效果。选择总体存活(“OS”)和/或无进展存活(“PFS”)作为主要终点；使用亚组分析来实施主要描述性分析。治疗对生物标志物相互作用(中值截留)的检验还提供次要分析。
结果
肿瘤标志物
表1中提供了对肿瘤样品分析神经毡蛋白的结果。
表1：通过对AVAGAST样品的IHC分析测定的神经毡蛋白H得分
Figure BDA00002816075700161
Figure BDA00002816075700171
用于后续分析的神经毡蛋白表达的中值H得分是90，第25和第75百分位数得分分别是40和120。
生物标志物与总体存活的关联
在以中值或四分位数神经毡蛋白H得分分开的患者中对总体存活测定危害比。
表2：以中值神经毡蛋白H得分分开的AVAGAST患者中总体存活的危害比
神经毡蛋白H得分 N 置信度下限 危害比估值 置信度上限
<=中值 350 0.59 0.75 0.97
>中值 329 0.81 1.07 1.40
表3：以四分位数神经毡蛋白H得分分开的AVAGAST患者中总体存活的危害比
神经毡蛋白H得分 N 置信度下限 危害比估值 置信度上限
<=P25 186 0.48 0.68 0.96
P25至<=P50 164 0.57 0.83 1.19
P50至<=P75 184 0.67 0.97 1.42
>P75 145 0.79 1.19 1.78
计算危害比指示，总体存活在施用与标准化学疗法组合的贝伐单抗时在那些展现出相对降低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达的患者中改善。具体而言，在表2中，在具有较低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达(小于等于中值)的患者亚组中治疗危害比的95%置信区间的上限低于1。这支持在此患者亚组中观察到的治疗效果(总体存活)的统计学相关性。
在图1中提供了就总体存活而言将贝伐单抗治疗和神经毡蛋白表达联系起来的卡普兰-迈耶曲线(Kaplan-Meier curve)(中值截留)。在图1中也可见，当向化学疗法添加贝伐单抗时那些具有相对较低的神经毡蛋白表达的患者的总体存活改善(以危害比指示)。与对于具有高于中值的肿瘤特异性神经毡蛋白表达的患者仅为0.8个月相比，中值总体存活在具有相对较低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达(小于等于中值)的患者中改善1.8个月。结果证明，治疗效果(总体存活)在具有相对较低的神经毡蛋白水平的患者子集中改善。
生 物标志物与无进展存活的关联
在以中值或四分位数神经毡蛋白H得分分开的患者中对疾病进展或死亡前时间测定危害比。
表4：以中值神经毡蛋白H得分分开的AVAGAST患者中疾病进展或死亡前时间的危害比
神经毡蛋白H得分 N 置信度下限 危害比估值 置信度上限
<=中值 350 0.53 0.68 0.87
>中值 329 0.62 0.80 1.05
表5：以四分位数神经毡蛋白H得分分开的AVAGAST患者中疾病进展或死亡前时间的危害比
神经毡蛋白H得分 N 置信度下限 危害比估值 置信度上限
<=P25 178 0.51 0.71 0.98
P25至<=P50 160 0.47 0.68 0.98
P50至<=P75 179 0.50 0.72 1.03
>P75 139 0.61 0.92 1.37
计算危害比指示，无进展存活在那些施用与标准化学疗法组合的贝伐单抗的患者中随着肿瘤特异性神经毡蛋白表达降低而改善。在表4中，在具有较低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达(小于等于中值)的患者子集中治疗危害比的95%置信区间的上限低于1。这支持在此患者亚组中观察到的治疗效果(无进展存活)的统计学相关性。
表6：以四分位数神经毡蛋白H得分分开的AVAGAST患者中疾病进展或死亡前时间的危害比(进一步分析)
神经毡蛋白H得分 N 置信度下限 危害比估值 置信度上限
<=P25 186 0.51 0.71 0.98
P25至<=P50 164 0.47 0.68 0.98
P50至<=P75 184 0.51 0.73 1.05
＞P75 145 0.60 0.89 1.33
在按方案群体中产生表5，所述按方案群体排除具有主要方案违背的患者。在意图治疗群中产生表6，所述意图治疗群包括所有随机化患者。因此，表6提供了更精确的分析。
在图2中提供了就无进展存活而言将贝伐单抗治疗和神经毡蛋白表达联系起来的卡普兰-迈耶曲线(中值截留)。在图2中也可见，当向化学疗法添加贝伐单抗时那些具有相对较低的神经毡蛋白表达的患者的无进展存活改善(以危害比指示)。与对于具有高于中值的肿瘤特异性神经毡蛋白表达的患者仅为1.3个月相比，中值无进展存活在具有相对较低的肿瘤特异性神经毡蛋白表达(小于等于中值)的患者中改善2.1个月。结果证明，治疗效果(无进展存活)在具有相对较低的神经毡蛋白水平的患者子集中改善。
Figure IDA00002816076100011
Figure IDA00002816076100021

Claims (20)

1.一种通过向化学疗法方案添加贝伐单抗来改善患有胃癌的患者中的治疗效果的方法，所述方法包括：
(a)测定患者样品中神经毡蛋白的表达水平；并
(b)对相对于患有胃癌的患者中测定的对照水平具有降低的神经毡蛋白水平的患者施用与化学疗法方案组合的贝伐单抗。
2.一种用于鉴定对向化学疗法方案添加贝伐单抗治疗响应或敏感的患者的体外方法，所述方法包括测定来自怀疑患有或易于患上胃癌的患者的样品中神经毡蛋白的表达水平，其中相对于患有胃癌的患者中测定的对照水平，降低的神经毡蛋白水平指示所述患者对向所述方案添加贝伐单抗的敏感性。
3.权利要求1的方法，其中所述治疗效果是总体存活。
4.权利要求1的方法，其中所述治疗效果是无进展存活。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述胃癌是胃腺癌或胃食管接合腺癌。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中通过免疫组织化学方法(IHC)检测所述神经毡蛋白表达水平。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述样品选自下组：胃组织切除或胃组织活组织检查。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述化学疗法方案是基于卡培他滨的化学疗法方案或基于5-氟尿嘧啶的化学疗法方案。
9.权利要求8的方法，其中所述基于卡培他滨的化学疗法方案是与顺铂组合的卡培他滨的方案。
10.权利要求8的方法，其中所述基于5-氟尿嘧啶的化学疗法方案是与顺铂组合的5-氟尿嘧啶的方案。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中用一种或多种抗癌疗法共治疗所述患者。
12.权利要求11的方法，其中所述抗癌疗法是辐射。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中在新辅助疗法或辅助疗法前测定神经毡蛋白的表达水平。
14.一种可用于实施权利要求1-13中任一项的方法的试剂盒，其包含能够测定神经毡蛋白表达水平的寡核苷酸或多肽。
15.寡核苷酸或多肽用于测定权利要求1-13中任一项的神经毡蛋白表达水平的用途。
16.权利要求14的试剂盒或权利要求15的用途，其包含能够测定神经毡蛋白表达水平的多肽，其中所述多肽适合于在免疫组织化学方法中使用和/或是对神经毡蛋白特异性的抗体。
17.贝伐单抗用于改善患有胃癌的患者的治疗效果的用途，包括下列步骤：
(a)测定患者样品中神经毡蛋白的表达水平；并
(b)对相对于患有胃癌的患者中测定的对照水平具有降低的神经毡蛋白水平的患者施用与化学疗法方案组合的贝伐单抗。
18.权利要求17的用途，其中所述治疗效果是总体存活。
19.权利要求17的用途，其中所述治疗效果是无进展存活。
20.权利要求17-19中任一项的用途，其中所述胃癌是胃腺癌和/或胃食管接合腺癌。
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