MX2013001523A - Neuroprolina como biomarcador para terapias combinadas de bevacizumab. - Google Patents

Abstract

La presente invención provee métodos para mejorar el efecto de tratamiento en un paciente que sufre de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ"), mediante tratamiento con bevacizumab (Avastin(r)) en combinación con un régimen de quimioterapia al determinar el nivel de expresión de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ"). El efecto del tratamiento mejorado puede ser supervivencia global mejora o supervivencia global libre de avance mejorado. La presente invención provee además métodos para determinar la sensibilidad o responsividad de un paciente a bevacizumab (Avastin(r)) en combinación con un régimen de quimioterapia a determinar el nivel de expresión de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ").

Description

NEUROPROLINA COMO BIOMARCADOR PARA TERAPIAS COMBINADAS DE BEVACIZÜMAB DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee métodos para mejorar el efecto de tratamiento en un paciente que sufre de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ"), mediante tratamiento con bevacizumab (Avastin®) en combinación con un régimen de quimioterapia al determinar el nivel de expresión de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ"). El efecto del tratamiento mejorado puede ser supervivencia global mejorada o supervivencia libre de avance mejorado. La presente ,invención provee además métodos para determinar la sensibilidad o responsividad de un paciente a bevacizumab (Avastin®) en combinación con un régimen de quimioterapia, al determinar el nivel de expresión de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ") .

Así, la presente invención es concerniente con la identificación y selección de uno o más biomarcadores de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ"), que se correlacionan con la sensibilidad o responsividad a inhibidores de angiogénesis , por ejemplo bevacizumab (Avastin®) , en combinación con regímenes quimioterapéuticos , tales como quimioterapias a base de capecitabina o a base de 5-fluorouracilo. En ciertos aspectos, la invención es concerniente con el uso de la expresión especifica de tumor de neuropilina determinada en relación con controles establecidos en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ, para identificar pacientes sensibles o responsivos a la adición de inhibidores de angiogénesis, por ejemplo bevacizumab (Avastin®) , a quimioterapias estándar. La invención también es concerniente con métodos para mejorar el efecto de tratamiento en un paciente que sufre de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ, mediante adición de inhibidores de angiogénesis, por ejemplo bevacizumab (Avastin®) a quimioterapias estándar, por ejemplo quimioterapias a base de capecitabina o quimioterapias a base de 5-fluorouracilo, al determinar el nivel de expresión especifico de tumor de neuropilina en relación con un control establecido en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ. El efecto de tratamiento incluye los parámetros clínicos de supervivencia global y supervivencia libre de avance. La invención también provee kits y composiciones para la identificación de pacientes sensibles o responsivos a inhibidores de angiogénesis, en particular bevacizumab (Avastin®) , tales pacientes son determinados y definidos de acuerdo con los métodos descritos en la presente.

La angiogénesis es necesaria para el desarrollo de cáncer, regulando no solamente el tamaño del tumor primario y crecimiento, sino también impactando el potencial invasivo y metastático. Así, los mecanismos que moderan los procesos angiogénicos han sido investigados como objetivos potenciales para terapias anti-cáncer dirigidas. Prematuramente en el estudio de moduladores angiogénicos, la ruta de señalización del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) fue descubierto para regular preferiblemente la actividad angiogénica en múltiples tipos de cáncer y múltiples terapéuticos han sido desarrollados para modular esta ruta en varios puntos. Estas terapias incluyen, entre otros, bevacizumab, sunitinib, sorafenib y vatalanib. Aunque el uso de inhibidores angiogénicos en la clínica ha demostrado éxito, no todos los pacientes responden o fallan de responder plenamente a la terapia de inhibidor de angiogénesis. El (los) mecanismo (s) subyacentes a tal respuesta incompleta es (son) desconocido (s) . Por consiguiente, hay una necesidad incrementada por la identificación de subgrupos de pacientes sensibles o responsivos a terapia de cáncer anti-angiogénica.

En tanto que un número de inhibidores de angiogénesis son conocidos, el inhibidor de angiogénesis más prominente es bevacizumab (Avastin®) . Bevacizumab es un anticuerpo de IgGl monoclonal humanizado recombinante que se enlaza específicamente y bloquea los efectos biológicos de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) . VEGF es un accionador clave de angiogénesis de tumor-un proceso esencial-requerido para el crecimiento de tumor y metástasis, esto es, la diseminación del tumor a otras partes del cuerpo. Avastin® está aprobado en Europa para el tratamiento de etapas avanzadas de cuatro tipos de cáncer comunes: cáncer colorectal, cáncer de pecho, cáncer de pulmón de célula no pequeña (NSCLC) y cáncer de riñon, que colectivamente provocan más de 2.5 de millones de muertes cada año. Más de medio millón de pacientes han sido tratados con Avastin® hasta ahora y un programa clínico extenso con más de 450 pruebas clínicas está investigando el uso adicional de Avastin® en el tratamiento de múltiples tipos de cáncer (incluyendo colorectal, pecho, pulmón de célula no pequeña, cerebro, gástrico, de ovario y próstata) , en diferentes ajustes (por ejemplo, enfermedad de etapa avanzada o enfermedad de etapa prematura) . Importantemente, Avastin® ha mostrado ser promisorio como un co-terapéutico, demostrando eficacia cuando es combinado con un amplio intervalo de quimioterapias y otros tratamientos anti-cáncer. Estudios de fase III han sido publicados que demuestran los efectos benéficos de combinar bevacizumab con regímenes quimioterapéuticos estándar (véase, por ejemplo, Kang et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28:18s (suppl. Abstr . LBA4007 ) ; Saltz et al., 2008, J. Clin. Oncol., 26:2013-2019; Yang et al., 2008, Clin, Cáncer Res., 14:5893-5899; Hurwitx et al., 2004, N. Engl. J. Med, 350:2335-2342). Sin embargo, como en estudios previos de inhibidores angiogénicos, algunos de estos estudios fase III han mostrado que una porción de pacientes experimentan respuesta incompleta a la adición de bevacizumab (Avastin®) a otros regímenes quimioterapéuticos.

Así, hay necesidad de métodos para determinar aquellos pacientes que responden o son probables de responder a terapias combinadas que comprenden inhibidores de angiogénesis, en particular bevacizumab (Avastin®) . Así, el problema técnico fundamental de la presente invención es la provisión de métodos y medios para la identificación de pacientes que sufren de o están propensos a sufrir de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ, que se pueden beneficiar de la adición de inhibidores de angiogénesis, en particular bevacizumab (Avastin®), a regímenes quimioterapéuticos, por ejemplo quimioterapias a base de capecitabina o a base de 5-fluorouracilo .

El problema técnico es resuelto por la provisión de modalidades caracterizadas en las reivindicaciones.

La presente invención provee por consiguiente un método para mejorar el efecto de tratamiento en un paciente que I sufre de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ, al agregar bevacizumab a un régimen de quimioterapia, dicho método comprende: (a) determinar el nivel de expresión de neuropilina en una muestra del paciente y (t¡) administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel disminuido de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ.

El efecto del tratamiento mejorado puede ser el parámetro clínico de supervivencia global o puede ser supervivencia libre de avance.

En otras modalidades, la presente invención es concerniente con un método in vitro para la identificación de un paciente responsivo a o sensible a la adición de bevacizumab a un régimen de quimioterapia, dicho método comprende determinar el nivel de expresión de neuropilina en una muestra de un paciente sospechoso de sufrir o estar propenso de sufrir de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ, mediante lo cual el nivel disminuido de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ, es indicador de la sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen.

Así, la presente invención resuelve el problema técnico identificado en que se mostró sorprendentemente que el nivel de expresión especifico de tumor de neuropilina en un paciente dado en relación con un nivel de control determinado en pacientes diagnosticados con cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estoma o GEJ, se correlación con el efecto del tratamiento de aquellos pacientes administrados con un inhibidor de angiogénesis en combinación con un régimen de quimioterapia. La variación en el nivel de expresión de tumor de neuropilina fue identificado sorprendentemente como un marcador/predictor por la supervivencia libre de avance mejorado y/o supervivencia global mejorada de pacientes con cáncer gástrico en respuesta a la adición de bevacizumab (Avastin®) a regímenes quimioterapéuticos a base de capecitabina o regímenes quimioterapéuticos a base de 5-fluorouracilo.

Específicamente, pacientes con cáncer gástrico que exhiben una respuesta o sensibilidad a la adición de bevacizumab (Avastin®) a regímenes de quimioterapia fueron identificados por tener expresión disminuida de neuropilina en relación con un nivel de control establecido en muestras obtenidas de pacientes que sufren de o diagnosticados con un cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ. Los términos "marcador" y "predictor" pueden ser usados intercambiablemente y se refieren al nivel de expresión de neuropilina como se describe y es definido en la presente.

En el concepto de la presente invención, "neuropilina" a la proteína de neuropilina-1 , una proteína de membrana tipo I también conocida con NRP-1 y ejemplificada por la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1, mostrada en la Figura 3 (la secuencia de aminoácidos del precursor de NRP-1 también está disponible bajo el número de acceso UniProt 014786) . Como se usa en la presente "neuropilina" también se puede referir a neuropilina-2 (también conocida como NRP-2) , que comparte aproximadamente 44% de homologa a NRP-1 como es conocido en el arte. Así, los métodos de la invención no distinguen entre NRP-l y NRP-2. En el contexto de la presente invención, el término "neuropilina" también abarca homólogos, variantes e isoformas de NRP-1 y/o NRP-2, en tanto que dichos homólogos, variantes e isoformas sean reconocidos específicamente por uno o más anticuerpos anti-neuropilina como se describe en la presente y/o como son conocidos en el arte. El término "neuropilina" abarca además proteínas que tienen por lo menos 85%, por lo menos 90% o por lo menos 95% de homología a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o a la secuencia de uno o más de un homologo, variante o isoforma de NRP-1 y/ NRP-2, incluyendo isoformas de empalme, también como fragmentos de la secuencia a condición de que las proteínas variantes (incluyendo isoformas) , proteínas homologas y/o fragmentos sean reconocidos por uno o más anticuerpos NRP-1-y/o NRP-2 específicos, tal como el clon 446915 disponible de R&D Systems, In., (Minneapolis , Minnesota, Estados Unidos de América) , que están disponibles como el número de catálogo se-5307 de Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, California, Estados Unidos de América) o que son de otra manera conocidos en el arte Así, la presente invención abarca la determinación de niveles de expresión de proteínas que incluyen pero no están limitadas a la secuencia de aminoácidos como se describen en la presente. En ciertos aspectos, la invención abarca la detección de homólogos variantes e isoformas de neuropilina; dichas isoformas o variantes, pueden ínter alia, comprender variantes alélicas o variantes de empalme. También contemplada esta la detección de proteínas que son homologas a neuropilina como se describe en la presente o un fragmento de la misma, por ejemplo que tienen por lo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma. Alternativa o adicionalmente , la presente invención abarca la detección de los niveles de expresión de proteínas codificadas por secuencias de ácido nucleico o fragmentos de los mismos que son por los mismos 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idénticas a una secuencia de ácido nucleico que codifican SEQ ID NO: 1 o un fragmento, variante o isoforma de la misma. En este contexto, el término "variante" significa que la secuencia de aminoácidos de neuropilina o la secuencia de ácido nucleico que codifica dicha secuencia de aminoácidos, difiere de la secuencia distinta identificada por SEQ ID NO: 1 y/o disponibles bajo los números de acceso UniProt identificados anteriormente por mutaciones, por ejemplo cancelaciones, adiciones, sustituciones, inversiones, etc. Además, el término "homólogos" se refiere a moléculas que tienen por lo menos 60%, más preferiblemente por lo menos 80% y más preferiblemente por lo menos 90% de identidad de secuencia con uno o más de los polipéptidos como se muestran en SEQ ID NO: l o (a) fragmento (s) de los mismos.

Con el fin de determinar si una secuencia de aminoácidos o secuencia de ácidos nucleicos tiene cierto grado de identidad con una secuencia de aminoácidos o de ácidos nucleicos como se describe en la presente, la persona experimentada en el arte puede usar medios y métodos bien conocidos en el arte, por ejemplo, alienaciones, ya sea manualmente o al utilizar programas de computadora conocidos en el arte o descritos en la presente.

De acuerdo con la presente invención, el término "idéntico" o "por ciento de identidad" en el contexto de dos o más secuencias de aminoácidos o ácidos nucleicos, se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que son las mismas o que tienen un porcentaje especificado de residuos de aminoácidos o nucleótidos que son los mismos (por ejemplo, 60 o 65% de identidad, preferiblemente 70-95% de identidad, mas preferiblemente por lo menos 95% de identidad con las secuencias de aminoácidos de por ejemplo, SEQ ID NO: 1) cuando son comparadas y alineadas para correspondencia máxima sobre una ventana de comparación o sobre una región designada, tal como es medida utilizando un algoritmo de comparación de secuencia como es conocido en el arte o mediante alineación manual e inspección visual. Las secuencias que tienen, por ejemplo 60% a 95% o mayor identidad de secuencia son consideradas ser sustancialmente idénticas. Tal definición también se aplica al complemento de una secuencia de prueba, preferiblemente, la identidad descrita existe sobre una región que es de por lo menos de 15 a 15 aminoácidos o nucleótidos de longitud, mas preferiblemente, sobre una región que es de alrededor de 50 a 100 aminoácidos o nucleótidos de longitud. Aquellos que tienen habilidad en el arte sabrán como determinar el por ciento de identidad entre secuencias utilizando por ejemplo algoritmos tales como aquellos basados en el programa de computadora CLUSTALW (Thompson Nucí. Acids Res. 2 (1994), 4673-4680) o FASTDB (Brutlag Comp. App. Biosci. 6 (1990), 237-245) , como es conocido en el arte.

Aunque el algoritmo FASTDB comúnmente no considera cancelaciones o adiciones no coincidentes internas en secuencias, esto es, separaciones en su cálculo, esto puede ser corregido manualmente para evitar una sobre estimación del por ciento de identidad. CLUSTALW, sin embargo, no toma en cuenta separaciones de secuencia en sus cálculos de identidad. También disponibles para aquellos que tienen habilidad en este arte están los algoritmos BLAST (Herramienta de Búsqueda de Alineación Local Básica) y BLAST 2.0 (Altschul, 1997, Nucí. Acids Res. 25:3389-3402; Altschul, 1993 J. Mol. Evol. 36:290-300); Altschul, 1990, J. Mol. Biol . 215:403-410). El programa BLASTN para secuencias de ácidos nucleicos utiliza como predeterminados longitud de palabra (W) de 11, una esperanza (E) de 10, M=5, N=4 y una comparación de amabas hebras. Para secuencias de aminoácidos, el programa BLASTP usa como predeterminados una longitud de palabra (W) de 3 y una esperanza (E) de 10. La matriz de puntuación BLOSUM62 (Henikoff (1989) PNAS 89:10915) utiliza alineaciones (B) de 50, esperanza (E) de 10, M=5, N=4 y una comparación de ambas hebras.

Los algoritmos BLAST, como se discuten anteriormente, producen alienaciones tanto de secuencias de aminoácidos como secuencias de nucleótidos para determinar la similaridad de secuencia. Debido a la naturaleza local de las alineaciones, BLAST es especialmente útil para determinar coincidencias exactas o en identificar secuencias similares. La unidad fundamental de la salida del algoritmo de BLAST es el par de segmentos de alta puntuación (HSP) . Un HSP consiste de dos fragmentos de secuencia de longitudes arbitrarias pero iguales cuya alineación es localmente máxima y para el cual la puntuación de alineación cumple o excede un umbral o puntuación de corte establecida por el usuario. El procedimiento de BLAST es buscar HSP entre una secuencia de interrogación y una secuencia de base de datos para evaluar el significado estadístico de cualesquier coincidencias encontradas y para reportar solamente aquellas coincidencias que satisfacen el umbral de significado seleccionado por el usuario. El parámetro E establece el umbral estadísticamente significativo para reportar coincidencias de secuencia de base de datos. E es interpretado como el límite superior de la frecuencia esperada de presencia de probabilidad de un HSP (o conjunto de HSP) dentro del contexto de la búsqueda de toda la base de datos. Cualquier secuencia de base de datos cuya coincidencia satisface E es reportado en la salida del programa .

Técnicas de computadora análogas que utilizan BLAST pueden ser usados para buscar moléculas idénticas relacionadas en base de datos de proteínas o nucleótidos tales como GenBank o EMBL. Este análisis es mucho más rápido que múltiples hibridizaciones a base de membranas. Además, la sensibilidad de la búsqueda por computadora puede ser modificada para determinar si cualquier coincidencia particular es clasifica como exacta o similar. La base de la búsqueda es la puntuación de producto que es definida como: % de identidad de secuencia por ¾ de puntuación de BLAST máxima 10 y toma en cuenta tanto el grado de similaridad entre dos secuencias y la duración de la coincidencia de secuencia. Por ejemplo, con una puntuación de producto de 40, la coincidencia será exacta dentro de un error de 1-2% y a 70, la coincidencia será exacta. Moléculas similares son usualmente identificadas al seleccionar aquellas que muestran puntuaciones de producto entre 15 y 40, aunque puntuaciones más bajas pueden identificar moléculas relacionadas. Otro ejemplo para un programa apto de generar alineaciones de secuencia es el programa de computadora CLUSTALW (Thompson, 1994, Nucí. Acids Res. 2:4673-4680) o FASTDB (Brutlag, 1990, Comp. App. Biosci. 6:237-245), como es conocido en el arte.

De acuerdo con la presente invención, se descubrió sorprendentemente en la población de AVAGAST (véase, por ejemplo, Kang et al., 2010, J. Clin. Oncol . , 28:18s (suppl. Abstr. LBA4007) ) que un efecto de tratamiento de bevacizumab mayor estaba asociado con la expresión de neuropilina especifica de tumor más baja. Específicamente, la expresión de neuropilina específica de tumor relativamente más baja fue asociada con la supervivencia global mejorada y/o supervivencia libre de avance mejorada en pacientes de bevacizumab además de régimen quimioterapéutico.

En nivel de expresión de neuropilina (por ejemplo, NRP- 1, NRP-2 o una variante homologo, truncación o fragmento del mismo) puede ser determinado mediante cualquier método conocido en el arte apropiado para la. determinación de niveles de proteína específicos de una muestra del paciente y es preferiblemente determinado por un método histoquímico ("IHC") que emplea anticuerpos específicos para neuropilina. Tales métodos bien conocidos e implementados sistemáticamente en el arte y anticuerpos comerciales correspondientes y/o kits están fácilmente disponibles. Por ejemplo, anticuerpos disponibles comercialmente específicos para neuropilina como se describe y define en la presente, pueden ser obtenido de R&D Systems, Inc. (Minneapolis, Minnesota, Estados Unidos de América) como el clon 446915 y de Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, California, Estados Unidos de América) con el número de catálogo sc-5307, Preferiblemente, los niveles de expresión del marcador/proteínas indicadoras de la invención son determinados aplicando los reactivos y/o recomendaciones de protocolo del fabricante del anticuerpo o kit . La persona experimentada también estará consciente de medios adicionales para determinar el nivel de expresión de neuropilina mediante el método de IHC. Por consiguiente, el nivel de expresión de neuropilina y/u otros marcadores/indicadores como es conocido en el arte, puede ser determinado sistemática y reproduciblemente por la persona experimentada en el arte sin carga indebida. Sin embargo, para asegurar resultados exactos y reproducibles la invención también abarca la prueba de muestras del paciente en un laboratorio especializado que puede asegurar la validación de los procedimientos de pruebas .

Preferiblemente, el nivel de expresión de neuropilina es determinado en una muestra biológica- que contiene o se sospecha que contiene células de cáncer y es determinado de manera específica del tumor. La muestra puede comprender tanto células de cáncer, esto es, células de tumor como también células no cancerosas, por ejemplo células endoteliales o células no malignas. En algunos aspectos, la determinación de la expresión especifica del tumor de neuropilina es concerniente con la determinación de los niveles de expresión de exclusivamente células de cáncer en contraposición a otros tipos de células, por ejemplo células endoteliales o células no cancerosas/no malignas que pueden estar presentes en la muestra de tumor. En otros aspectos, la determinación de la expresión específica del tumor del neuropilina es concerniente con la determinación de los niveles de expresión de células de cáncer, también como cualquier otro tipo de célula, por ejemplo células endoteliales que pueden estar presentes en la muestra de tumor. El experimentado en el arte, por ejemplo un patólogo, puede discernir fácilmente células de cáncer de células no cancerosas, por ejemplo células endoteliales. La muestra puede ser una restricción de tejido gástrico o una biopsia de tejido gástrico obtenida de un paciente que sufre de, sospecha de sufrir de o es diagnosticado con cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ. La muestra puede también ser una recepción o biopsia de una lesión metastática obtenida de un paciente que sufre de, se sospecha de sufrir de o es diagnosticado con cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómágo o GEJ. Preferiblemente, la muestra es una muestra de tejido del estómago o tejido de la unión gastro-esofagal o una resección o biopsia de un adenocarcinoma del estómago o unión gastro-esofagal . La muestra puede también ser una muestra de una lesión o sección de cáncer gastrometastático conocido o sospechoso o una muestra de sangre, por ejemplo muestra de sangre periférica conocida o que se sospecha que comprende células de cáncer circulantes, por ejemplo células de cáncer gástrico. El análisis de muestra de acuerdo con los métodos de la invención pueden ser manual, tal como se efectúa por el experimentado en el arte, por ejemplo un patólogo, como es conocido en el arte o puede ser automatizado utilizando elementos de programación disponibles comercialmente diseñados para el procesamiento y análisis de imágenes patológicas, por ejemplo para análisis en biopsia de tejido o resecciones (por ejemplo, IRAX SCAN, Cari Zeiss AG, Jena, Alemania) . Métodos para obtener muestras biológicas incluyendo resecciones de tejido, biopsias y fluidos corporales, por ejemplo muestras de sangre que comprenden células de cáncer/tumor son bien conocidos en el arte.

En el contexto de la presente invención, bevacizumab va a ser administrado además de o como una co-terapia o co-tratamiento con uno o más agentes quimioterapéuticos administrados como parte de un régimen de quimioterapia estándar como es conocido en el arte. Ejemplos de tales agentes quimioterapéuticos incluyen 5-fluorouracilo, leucovorina, irinotecana, gemcitabina-erlotinib, agentes quimioterapéuticos a base de capecitabina y platino, tales como paclitaxel, carboplatino, cisplatino y oxaliplatino . Como se demuestra en los ejemplos adjuntos, la adición de bevacizumab a regímenes quimioterapéuticos a base de capecitabina o regímenes quimioterapéuticos a base de 5-fluorouracilo efectuaron un incremento en l supervivencia libre de avance y se correlacionaron con la supervivencia global en pacientes con cáncer gástrico y/o población de pacientes definida y seleccionada de acuerdo con el nivel de expresión de neuropilina, en particular, que tienen una expresión más baja de neuropilina en muestra de tumor en relación con niveles de control establecidos en pacientes situados similarmente .

Bevacizumab puede ser combinado con un régimen de quimioterapia a base de capecitabina o a base de 5-fluorouracilo . La selección entre capecitabina y 5-fluorouiracilo es determinada mejor por el medico de tratamiento en base a estándares bien establecidos en el arte.. Ejemplos de regímenes de quimioterapia a base de capecitabina incluyen la combinación de capecitabina (o 5-fluorouracilo) administrada en combinación con cisplatino un ciclo típico de terapia de capecitabina/cisplatino puede ser capecitabina administrada a una dosis de 1000 mg/m2 oralmente dos veces al día (bid) durante los días 1 a 14, seguido por reposo de una semana y cisplatino a una dosis de 80 mg/m2 administrado como una infusión de 2 horas en el día 1 del ciclo con hiper-hidratación y pre-medicación (esteroides y anti-eméticos ; 3 veces/semana); el ciclo de cisplatino y capecitabina es proseguido hasta que el avance de la enfermedad o toxicidad no manejable, con la administración de cisplatino se limitó a un máximo de 6 ciclos. Así, en ciertos aspectos de la invención, el paciente identificado de acuerdo con los métodos en la presente es tratado con bevacizumab en combinación con capecitabina/cisplatino. Los modos de administración comunes de bevacizumab incluyen administración parenteral como una dosis de bolo o como una infusión en un periodo de tiempo establecido, por ejemplo administración de la dosis diaria total durante 10 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 40 minutos, 50 minutos, 60 minutos, 75 minutos, 90 minutos, 105 minutos, 120 minutos, 3 horas, 4 horas, 5 horas o 6 horas. Por ejemplo 7.5 mg/kg de bevacizumab (Avastin®) pueden ser administrados a pacientes con cáncer gástrico como una infusión intravenosa durante 15 a 30 minutos en el día 1 de cada ciclo de capecitabina como se describe anteriormente. La persona experimentada reconocerá que modos de administración adicionales de bevacizumab son abarcados por la invención, tal como se determina por el paciente y régimen de quimioterapia específico y que el modo de administración específico y dosificación terapéutica son determinados mejor por el medico de tratamiento de acuerdo con los métodos conocidos en el arte .

Los pacientes seleccionados de acuerdo con los métodos de la presente invención son tratados con bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia y pueden ser tratados adicionalmente con una o más terapias anti-cáncer adicionales. En ciertos aspectos, la una o más terapias anti-cáncer adicionales consiste de radiación.

En modalidades preferidas, la muestra obtenida del paciente es recolectada antes de comenzar cualquier otro régimen quimioterapéutico o terapia, por ejemplo terapia para tratamiento de cáncer o el manejo o mejora de un síntoma del mismo. Por consiguiente, en modalidades preferidas, la muestra es recolectada antes de la administración de quimioterapéuticos o el inicio de un régimen de quimioterapia.

La presente invención también es concerniente con una composición de diagnóstico o kit que comprende oligonucleótidos o polipéptidos apropiados para la determinación del nivel de expresión especifico del tumor neuropilina. Como se detalla en la presente, oligonucleótidos tales como ADN, ARN o mezclas de sondas de ADN y ARN pueden ser de uso para detectar los niveles de mARN de las proteínas marcadoras/indicadoras, en particular neuropilina, mientras que los polipéptidos pueden ser de uso en detectar directamente los niveles de proteína de las proteínas marcadoras/indicadoras vía interacción de proteína-proteína especifica. En aspectos preferidos de la invención, los polipéptidos abarcados como sondas para los niveles de expresión de neuropilina e incluidos en los kits o composiciones de diagnóstico descritas en la presente son antibióticos específicos para neuropilina o específicas para homólogos, variantes y/o truncaciones del mismo.

Así, una modalidad adicional de la presente invención provee un kit útil para llevar a cabo los métodos descritos en la presente, que comprenden oligonucleótidos o polipéptidos aptos de determinar el nivel de expresión de neuropilina. Preferiblemente, los oligonucleótidos comprenden cebadores y/o sondas específicos para el mARN que codifica neuropilina como se define y describe en la presente y los polipéptidos comprenden proteínas aptas de interacción específica con neuropilina, por ejemplo, anticuerpos específicos de marcador/indicador o fragmentos de anticuerpo.

En una modalidad adicional, la presente invención provee el uso de bevacizumab para mejorar el efecto de tratamiento en un paciente que sufre de cáncer gástrico, en particular adenocarcinoma del estómago o GEJ, que comprende las siguientes etapas: (a) Determinar el nivel de expresión de neuropilina en una muestra el paciente y (b) Administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene un nivel disminuido de neuropilina en relación con niveles de control determinados en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ.

El efecto de tratamiento mejorado puede ser supervivencia global mejorada o supervivencia libre de avance mejorado.

Como se documenta en los ejemplos adjuntos, la presente invención resuelve el problema técnico identificado en que se podría demostrar sorprendentemente que el nivel de expresión de neuropilina en un paciente dado, en relación con un nivel de control determinado en pacientes diagnosticados con cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ, se correlacionan con el efecto del tratamiento en pacientes administrados con bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia a base de capecitabina o a base de 5-fluorouracilo .

La frase "sensible a" en el contexto de la presente invención, indica que un sujeto/paciente que sufre de, se sospecha de sufrir o es propenso a sufrir de o diagnosticado con cáncer gástrico en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ, muestra una respuesta a un régimen de quimioterapia que comprende la adición de bevacizumab. La persona experimentada estará fácilmente en una posición para determinar si una persona tratada con bevacizumab de acuerdo con los métodos de la invención muestra una respuesta. Por ejemplo, una respuesta puede ser reflejada por sufrimiento disminuido de cáncer gástrico, tal como crecimiento del tumor disminuido y/o detenido, reducción del tamaño del tumor y/o mejora de uno o más síntomas de cáncer gástrico, por ejemplo, sangrado gastrointestinal, dolor, anemia. Preferiblemente, la respuesta puede ser reflejada por índices disminuidos o reducidos de la conversión metastática de cáncer gástrico, por ejemplo la prevención o impedimento de la formación de metástasis o una reducción de número o tamaño de metástasis.

La frase "sensible a" en el contexto de la presente invención, indica que un sujeto/paciente que sufre de, se sospecha de sufrir o esta propenso a sufrir de o diagnosticado con cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ, muestra de alguna manera alguna reacción positiva al tratamiento con bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia. La reacción del paciente puede ser menos pronunciada cuando se compara con un paciente "responsivo a" cómo se describe anteriormente en la presente. El paciente puede experimentar menos sufrimiento asociado con la enfermedad aunque no reducción en el crecimiento de tumor o indicador metastatico puede ser medido y/o la reacción del paciente a bevacizumab en combinación con el régimen de quimioterapia puede ser solamente de naturaleza transitoria, esto es el crecimiento de un tumor y/o metástasis pueden solamente ser reducidos y/o detenidos temporalmente .

La frase "un paciente que sufre de" de acuerdo con la invención, se refiere a un paciente que muestra signos clínicos de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ. El cáncer gástrico puede ser metastático, inoperable y/o adenoma carcinoma avanzado localmente del estómago o unión gastro-esofagal ("GEJ") . La frase "es susceptible a" o "ser propenso a" en el contexto de cáncer gástrico, se refiere a una indicación de enfermedad en un paciente en base a, por ejemplo una predisposición genética posible, una exposición previa o eventual a compuestos peligrosos y/o carcinógenos o exposición a peligros físicos carcinógenos, tales como radiación.

La frase "efecto de tratamiento" en el contexto de la presente invención abarca las frases "supervivencia libre de avance" y "supervivencia global" .

La frase "supervivencia libre de avance" en el contexto de la presente invención se refiere a la duración de tiempo durante y después del tratamiento durante el cual, de acuerdo1 con la determinación del médico que trata o investigador, la enfermedad del paciente no empeora, esto es, no avanza. Como el experimentado en el arte, apreciara, la supervivencia libre de avance del paciente es mejorada o realzada si el paciente experimentad una duración de tiempo más larga durante el cual la enfermedad no avanza en comparación con el tiempo de supervivencia libre de avance por medio o medio de un grupo de control de pacientes situados similarmente.

La frase "supervivencia global" en el contexto de la presente invención se refiere a la supervivencia promedio dentro del grupo de pacientes. Como la persona experimentada apreciara la supervivencia global del paciente es mejorada o realzada si el paciente que pertenece a un subgrupo de pacientes que tiene un tiempo de supervivencia medio estadísticamente significativo más largo en comparación con otro subgrupo de pacientes. La supervivencia global mejorada puede ser evidente en uno o más subgrupos de pacientes pero no evidente cuando la población de pacientes es analizada como un todo .

Los términos ""administración" o "administrar" como se usa en la presente, significan la administración de un inhibidor de angiogénesis , por ejemplo bevacizumab (Avastin®) y/o una composición farmacéutica/régimen de tratamiento que comprende un inhibidor de angiogénesis, por ejemplo bevacizumab (Avastin®) , a un paciente en necesidad de tal tratamiento o intervención médica mediante cualquier medio apropiado conocido en el arte para la administración de un anticuerpo terapéutico. Rutas no limitantes de administración incluyen mediante administración oral, intravenosa, intraperitoneal , subcutánea, intramuscular, tópica, intradérmica, intranasal o intrabronquial (como es efectuada por inhalación) . Particularmente preferida en el contexto de esta invención es la administración parenteral, por ejemplo administración intravenosa. Con respecto a bevacizumab (Avastin®) para el tratamiento de cáncer coló rectal las dosificaciones preferidas de acuerdo con la EMEA son 5 mg/kg o 10 mg/kg de peso corporal dada una vez cada dos semanas o 7.5 mg/kg o 15 mg/kg de peso corporal dada una vez cada trece semanas (para detalles véase http : //www. emea . europa . eu/humandocs/PDFs/EPAR/avastin/emea-combined-h582en. df ) .

El término "anticuerpo" es usado en la presente en el sentido más amplio e incluye pero no está limitado a anticuerpos monoclonales y policlonales , anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos bis específicos) , anticuerpos quiméricos, anticuerpos insertados de CDR, anticuerpos humanizados, anticuerpos camelizados, anticuerpos de una sola cadena y fragmentos de anticuerpo y construcciones de fragmento, por ejemplo fragmentos F (ab' >2/ fragmentos de Fab, fragmentos de Fv, fragmentos de Fv de una sola cadena (scFvs) , scfVs bis específicos, diacuerpos, anticuerpos de un solo dominio (dAb) y mini cuerpos, que exhiben la actividad biológica deseada, en particular enlace especifico a uno o más de VEGFA, HER2, neuropilina y CD31 o a homólogos, variantes, fragmentos y/o isoformas de los mismos.

Como se usa en la presente, "agente quimioterapéutico" incluye cualquier agente activo que puede proveer un efecto terapéutico anti cáncer y puede ser un agente químico o un agente biológico, en particular que son aptos de interferir con células de cáncer o células de tumor. Agentes activos preferidos son aquellos que actúan como agentes anti-neoplásicos (quimo tóxicos o quimiostáticos) que inhiben o impiden el desarrollo, maduración o proliferación de células malignas. Ejemplos no limitantes de agentes quimioterapéuticos , incluyen agentes alquilantes tales como mostaza de nitrógeno (por ejemplo, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan y cloram ucilo) , nitrosoureas (por ejemplo, carmustina (BCNU) , lomus ina (CCNU) y semustina (metil-CCNU) ) , etileniminas/metilmelaminas (por ejemplo, trietilenmelamina (TEM) , trietileno, triofosforamida (tiotepa) , hexametilmelamina (HMM, altretamina) ) , alquil sulfonatos (por ejemplo, busulfan) y triazinas (por ejemplo, dacarbazina (DTIC) ) ; antimetabolitos tales como análogos de ácido fólico (por ejemplo, metrotexato, trimetrexato) , análogos de pirimidina (por ejemplo, 5-fluorouracilo, fluorodesoxiuridina, gemcitabina, citosina arabinoside (AraC, citarabina) , 5-aracitidina, 2, 2 ' -difluorodesoxicitidina y pro fármaco de análogo de pirimidina, por ejemplo capecitabina) , análogos de purina (por ejemplo, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, azatioprina, 2 ' -desoxicoformicina (pentostatina) , eritrohidro-xinoniladenina (EHNA) , fosfato de fluradabina y 2-clorodesoxiadenosina (cladribina, 2-CdA) ) ; fármacos antimitóticos desarrollados de productos naturales (por ejemplo, paclitaxel, vinca alcaloides : (por ejemplo, vinblastina (VLB) , vincristina y vinorelbina) , taxotere, estramustina y fosfato de estramustina) , epipodofilotoxinas (por ejemplo, etoposide, teniposide) , antibióticos (por ejemplo, actimomicina D, daunomicina (rubidomicina) , doxorubicina, mitoxantrona, idarubicina, gleomicinas, plicamicina (mitramicina) , mitoraicina C, actinomicina) , enzimas (por ejemplo, L-asparaginasa) y modificadores de respuesta biológica (por ejemplo, interferón-alf , IL-2, G-CSF, FM-CSF) ; agentes misceláneos incluyendo complejos de coordinación de platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino) , antracendionas (por ejemplo, mitoxantrona) , urea sustituida (esto es, hidroxiurea) , derivados de metilhidrazina (por ejemplo, N-metilhidrazina ( IH) , procarbazina) , supresores adrenocorticales (por ejemplo, mitotano (o, p' -DDD) , aminoglutetimida) ; hormonas y antagonistas incluyendo antagonistas de adrenocor-ticosteroides (por ejemplo, prednisona y equivalentes, dexametasona, aminoglutetimida) , progestinas (por ejemplo, caproato de hidroxiprogesteronna, acetato de medroxiprogesterona, acetato de megestrol) , estrógenos (por ejemplo, dietilestibestrol, etinil estradiol y equivalentes de los mismos) ; antiestrogenos (por ejemplo, tamoxifen) , andrógenos (por ejemplo, propionato de testosterona, fluximesterona y equivalentes de los mismos) , anti andrógenos (por ejemplo, flutamida, análogos de hormona de liberación de gonadotropina, leuprolato) y anti andrógenos no esteroidales (por ejemplo, flutamida) .

En el contexto de la presente invención, "homología" con referencia a una secuencia de aminoácidos, se entiende que se refiere a una identidad de secuencia de por lo menos 80%, particularmente una identidad de por lo menos 85%, preferiblemente por lo menos 90% y todavía más preferiblemente 95% sobre toda la longitud de la secuencia como es definida por la SEQ ID NO provistas en la presente. En el contexto de esta invención, la persona experimentada entendería que homología cubre además variación (es) alélica (s) de las proteínas marcadores/indicadoras en diferentes poblaciones y grupos étnicos.

Como se usa en la presente, el término "polipéptido" se refiere a un péptido, una proteína, un oligopéptido o un polipéptido que abarca cadenas de aminoácidos de una longitud dada, en donde los residuos de aminoácido son enlazados por enlace de péptidos covalentes. Sin embargo, péptido miméticos de tales proteínas/polipéptidos son también abarcados por la invención, en donde aminoácidos y/o enlaces de péptidos han sido reemplazados por análogos funcionales, por ejemplo un residuo de aminoácido diferente de uno de los 20 aminoácidos gen-codificados, por ejemplo selenocisteina . Péptidos, oligopéptidos y proteínas pueden ser denominados polipéptidos . Los términos polipéptidos y proteínas son usados intercambiablemente en la presente . El término "polipéptido" también ser refiere a y no excluye modificaciones del polipéptido, por ejemplo glicosilación, acetilación, fosforilación y los semejantes. Tales modificaciones son bien descritas en textos básicos y en monografías más detalladas, también como en una literatura de búsqueda voluminosa.

Los términos "que trata" y "tratamiento" , como se usan en la presente, se refieren a remediación de, mejora de, disminución de la severidad de o reducción en el curso de tiempo de enfermedad o cualquier parámetro o síntoma del mismo. Preferiblemente, dicho paciente es un paciente humano y la enfermedad a ser tratada es un cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ. Los términos "determinar" o "determinación" de tal paciente, es concerniente con métodos para determinar los niveles de expresión de neuropilina y/o para seleccionar tales pacientes en base a los niveles de expresión de tales proteínas marcadoras/indicadoras en relación con los niveles de control establecidos en pacientes diagnosticados con cáncer coló rectal metastático.

Además de los métodos descritos anteriormente, la invención también abarca métodos inmunohistoquímicos adicionales para determinar el nivel de expresión de neuropilina, tal como mediante Western blotting y detección a base de ELISA. Como se entiende en el arte, el nivel de expresión de las proteínas marcadoras/indicadoras de la invención puede también ser determinado al nivel de mAR mediante cualquier método apropiado conocido en el arte, tal como Northern blotting, PCR en tiempo real y RT PCR. Métodos y sistemas de detección inmunohistoquímicos y a base de mARN son bien conocidos en el arte y pueden ser deducidos de libros de texto estándar, tales como Lottspeich (Bionalytik, Spektrum Akademisher Verlag, 1998) o Sambrook y Russell (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, N.Y., Estados Unidos de América, 2001). Los métodos descritos son de uso particular para determinar el nivel de expresión, por ejemplo nivel de expresión especifico del tumor de neuropilina en un paciente o grupo de pacientes en relación con los niveles de control establecidos en una población similarmente situada, por ejemplo que sufre de o diagnosticada con cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ.

El nivel de expresión de neuropilina puede también ser determinado al nivel de proteína al tomar ventaja de técnicas de inmunoaglutinación, inmunoprecipitación (por ejemplo, inmunodifusión, inmunoelectroforesis, fijación inmune) , técnicas de western blotting (por ejemplo, inmuno-histoquímica (in situ) , inmunocitoquímica (in situ) , cromatografía de afinidad, inmunoanálisis de enzima) y los semejantes. Las cantidades del polipéptido purificado en solución pueden ser determinadas mediante métodos físicos, por ejemplo fotometría. Métodos„ para cuantificar un polipéptido particular en una mezcla dependen usualmente del enlace específico, por ejemplo de anticuerpos; Los métodos de detección y cuantificación específicos aprovechan la especificidad de anticuerpos que comprende por ejemplo, inmunohistoquímica (in situ) . Por ejemplo, la concentración/calidad de las proteínas marcadoras/indicadoras de la presente invención (por ejemplo, NRP-1, NRP-2 y/o una variante, homologo o truncación de la misma) en una célula o tejido puede ser determinada mediante análisis inmunoabsorbente enzima-enlazado (ELISA) . Alternativamente, análisis de Western Blot o teñido inmunohistoquímico pueden ser efectuados. El Western blotting combina la separación de una mezcla de proteínas mediante electroforesis y detección especifica con anticuerpos. La electroforesis puede ser multidimensional tal como electroforesis 2D. Usualmente, los polipéptidos son separados en la electroforesis 2D mediante su peso molecular aparente a lo largo de una dimensión y por su punto isoeléctrico a lo largo de la otra dirección.

Como se menciona anteriormente, la expresión disminuida de las proteínas marcadoras/indicadoras de acuerdo con la presente invención puede también ser reflejada en la expresión disminuida del (los) gen (es) correspondiente (s) para neuropilina como se describe y define en la presente. Por consiguiente, una determinación cuantitativa del producto genético antes de la traducción (por ejemplo, mAR empalmado, sin empalmar o parcialmente empalmado) puede ser efectuada con el fin de evaluar la expresión del (los) gen (es) correspondiente (s) . La persona experimentada en el arte está consciente de métodos estándar a ser usados en este contexto y pueden deducir estos métodos a partir de libros de texto estándares, (por ejemplo, Sambrook, 2001, loe. Cit . ) . Por ejemplo, datos cuantitativos en cuanto a las respectivas concentraciones/cantidades de mARN que codifican neuropilina pueden ser obtenidas mediante Northern Blot, PCR en tiempo real y los semejantes.

En un aspecto adicional de la invención, el kit de la invención puede ventajosamente ser usado para llevar a cabo un método de la invención y podría ser empleado inter. alia, en una variedad de aplicaciones, por ejemplo en el campo de diagnóstico o como una herramienta de investigación. Las partes del kit de la invención pueden ser empacadas individualmente en frascos o en recipientes o unidades de multirecipientes . La manufactura del kit sigue procedimientos preferiblemente estándar que son conocidos por la persona experimentada en el arte. El kit o composiciones de diagnóstico pueden ser usados para la detección del nivel de expresión de neuropilina (como se define y describe en la presente) de acuerdo con los métodos de la invención descritos en la presente, empleando por ejemplo técnicas inmunohistoquímicas .

Aunque es ejemplificada por el uso de bevacizumab, la invención abarca el uso de otros inhibidores de angiogénesis conocidos en el arte, para uso en combinación en regímenes de quimioterapia estándares. Los términos "inhibidor de angiogénesis" como se usa en la presente se refiere a todos los agentes que alteran la angiogénesis (por ejemplo, el proceso para formar vasos sanguíneos) e incluye agentes que bloquean la formación de y/o detienen o frenan el crecimiento de vasos sanguíneos. Ejemplos no limitantes de inhibidores de angiogénesis incluyen, además de bevacizumab, pegaptanib, sunitinib, sorafenib y vatalanib. Preferiblemente, el inhibidor de angiogénesis para uso de acuerdo con los métodos de la presente invención es bevacizumab. Como se usa en la presente, el término "bevacizumab", abarca todos los anticuerpos anti-VEGF correspondientes o fragmentos de anticuerpo anti-VEGF que satisfacen los requerimientos necesarios para obtener una autorización de comercialización como un producto idéntico o biosimilar en un país o territorio seleccionado del grupo de países que consisten de los Estados Unidos de América, Europa y Japón.

Para uso en los métodos de detección descritos en la presente, la persona experimentada tiene la habilidad de marcar los polipéptidos u oligonucleótidos abarcados por la presente invención. Como se practica sistemáticamente en el arte, las sondas de hibridización para uso en la detección de niveles de mARN y/o anticuerpos4 o fragmentos de anticuerpo para uso en los métodos de IHC pueden ser marcados y visualizados de acuerdo con métodos estándar conocidos en el arte. Ejemplos no limitantes de sistemas usados comúnmente incluyen el uso de radiomarcadores , marcadores de enzimas, etiquetas fluorescentes, complejos de biotina-avidina, quimioluminiscencia y los semejantes.

La persona experimentada en el arte, por ejemplo, el médico que atiende, esta fácilmente en posición para administrar el bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente/grupo de pacientes como se selecciona y define en la presente. En ciertos contextos, el médico que atiende puede modificar, cambiar o enmendar los esquemas de administración para el bevacizumab y el régimen de quimioterapia de acuerdo con su experiencia profesional. Por consiguiente, en ciertos aspectos de la presente invención, se provee un método para el tratamiento o mejorar el efecto de tratamiento (esto es, supervivencia libre de avance o supervivencia global) en un paciente que sufre o se sospecha de sufrir cáncer gástrico con bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia, mediante lo cual dicho paciente/grupo de pacientes es caracterizado en la determinación de una muestra biológica (en particular una resección de tejido gástrico, biopsia de tejido gástrico y/o lesión metastática) , dicha muestra exhibe un nivel de expresión disminuido de neuropilina, en relación con niveles de control establecidos en pacientes que sufren de y/o diagnosticados con cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ. La presente invención también provee el uso de bevacizumab en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un paciente que sufre de o se sospecha de sufrir de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ, en donde los pacientes son seleccionados o caracterizados por el estatus de marcador/indicador de proteína revelado en la presente (esto es, un nivel de expresión disminuido de neuropilina en relación con niveles de control establecidos en pacientes que sufren de cáncer gástrico, en particular adenoma carcinoma del estómago o GEJ) .

Las Figuras muestran: Figura 1: correlación de expresión de neuropilina con la supervivencia global (corte de mediana) . Líneas continuas largas, placebo, quimioterapia y expresión de neuropilina por encima de la mediana; líneas discontinuas cortas, terapia con bevacizumab, quimioterapia y expresión del biomarcador por encima de la mediana; líneas continuas, terapia de bevacizumab, quimioterapia y expresión de biomarcador por debajo o igual a la mediana; línea discontinua media/pequeña, placebo, quimioterapia y expresión de biomarcador por debajo o igual a la mediana.

Figura 2 : correlación de expresión de neuropilina con el tiempo al avance o muerte (corte de mediana) . Línea discontinua, placebo, quimioterapia y expresión de neuropilina por encima de la mediana, línea discontinua corta, terapia con bevacizumab, quimioterapia y expresión de biomarcador por encima de la mediana; línea continua, terapia con bevacizumab, quimioterapia y expresión de biomarcador por debajo o igual a la mediana; línea discontinua media/pequeña, placebo, quimioterapia y expresión de biomarcador por debajo o igual la mediana.

Figura 3: SEQ ID NO: 1, secuencia de aminoácidos representativa de neuropilin-1.

Figura 4 : correlación entre expresión de neuropilina con la supervivencia global, tiempo al avance o muerte y proporción de respuesta global (ORR) .

EJEMPLOS Muestras de tejido fueron recolectadas de pacientes que participan en un estudio fase III aleatorizado que compara los resultados de agregar bevacizumab a regímenes de quimioterapia de combinación de capecitabina (5-fluorourocilo fue permitido si capecitabina fuera contraindicada) /cisplatino de primera línea para el tratamiento de carcinoma metastico o adenoma carcinoma avanzado localmente del estómago o GEJ (el estudio . de AVAGAST, véase, Kang et al., 2010, J. Clin, Oncol . , 28;18s (suppl. Abstr. LBA4007) ("Kang")). Una investigación del estatus de biomarcadores relacionados con angiogénesis y tumorigenesis revelo que un nivel de expresión disminuido de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en toda la población de pacientes indico supervivencia global mejorada y/o supervivencia libre de avance.

Pacientes y métodos inmunohistoquimicos Un total de 774 pacientes participaron en el estudio de AVAGAST y muestras de tumor de entre 629 y 727 de los participantes estuvieron disponibles para análisis de biomarcador, dependiente del biomarcador especifico. Los brazos de tratamiento fueron equilibrados. Aproximadamente 95% de los pacientes fueron metastáticos . Aproximadamente 2 /3 de los pacientes fueron varones, 49% fueron de Asia/Pacifico, 32% fueron de Europa y 19% fueron de las Américas (véase, Kang) .

Las muestras de tejido estuvieron disponibles como bloques de tejidos o como portaobjetos previamente preparados. El análisis inmunohistoquímico fue efectuado sobre secciones de 5 µp\ de muestras de tejido embebidas con parafina formalina-fijadas (para bloques) o sobre los portaobjetos previamente preparados. Después de la desparafinación y rehidratación, la recuperación de antígeno fue efectuada mediante la solución reguladora del pH de citrato de H 6.0 a 95°C por 30 minutos en un módulo de PT o en solución reguladora del pH de CC1 en la marca de referencia-XT (Ventana, Tucson, AZ, Estados Unidos de América) .

Biomarcadores iniciales, incluyendo neuropilina fueron seleccionados para análisis inmunohistoquimico en base a la actividad tumorigénica y angiogénica conocida. En particular, neuropilina fue analizada utilizando el anticuerpo monoclonal murino de neuropilina anti-humano disponible de Santa Cruz, Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, California, Estados Unidos de América) con numero de catálogo sc-5307.

Las secciones fueron teñidas sobre el dispositivo Autostainer o Benchmark-XT (para VEGFR-1) y los anticuerpos primarios fueron incubados por 1 hora. Con respecto especifico al anticuerpo Santa Cruz, este anticuerpo anti-neuropilina fue usado a una dilución 1/50. El enlace de los anticuerpos primarios fue visualizado utilizando el sistema Envision (DAKO, Glostrup, Dinamarca) o Ultraview (Ventana, Tucson, AZ, Estados Unidos de América) . Todas las secciones fueron contra teñidas con hemotoxilina de Mayer.

Reportes de validación que muestran exactitud, linealidad y precisión (reproducibilidad y repetibilidad) fueron producidos para cada análisis de IHC. El teñido de portaobjetos de control externo y elementos de control intrínsecos fue documentado.

Análisis estadístico La distribución global de biomarcadores fue descrita utilizando la puntuación H . para marcadores de tumor. El número dé marcadores examinado fue limitado y cada uno fue apoyado por un racionamiento biológico; no hubo ninguna corrección formal para pruebas múltiples. El corte a priori fue usado para el nivel de expresión de proteína: mediana (por debajo, encima) y cuartil (=25, 25< x 50=, 50> x =75, >75) .

Los efectos del tratamiento fueron estimados en subgrupos de pacientes definidos por el nivel de biomarcador. La supervivencia global ("OS") y/o supervivencia libre de avance ("PFS") fue escogida como el punto final primario; el análisis descriptivo primario fue efectuado utilizando el análisis de subgrupo. La prueba de tratamiento de interacciones de biomarcador (corte de mediana) también proporciono un análisis secundario.

Resultados Marcadores de tumor Resultados del análisis de las muestras de tumor para neuropilina son provistos en la Tabla 1.

Tabla 1: Puntuaciones H de neuropilina. determinados mediante análisis de IHC de muestras de AVAGAST La puntuación H mediana de la expresión de neuropilina usada para análisis subsecuente fue de 90, con puntuaciones del 25th y 75th percentil de 40 y 120, respectivamente.

Correlación de biomarcador con la supervivencia global Las proporciones de peligro fueron determinadas para la supervivencia global en pacientes separados por mediana o puntuación de H de neuropilina de cuartil.

Tabla 2: Proporciones de peligro para la supervivencia global en pacientes de AVAGAST separados por puntuación H de neuropilina mediana Tabla 3: Proporciones de peligro para la supervivencia global en pacientes AVAGAST separados por puntuación H de neuropilina de cuartil Las proporciones de peligro calculadas indican que la supervivencia global se mejora en aquellos pacientes que exhiben expresión específica del tumor relativamente disminuida de neuropilina cuando se administra bevacizumab en combinación con la quimioterapia estándar. En particular, en la Tabla 2 , el límite superior del intervalo de confianza de 95% de la proporción de peligro de tratamiento en el subconjunto de pacientes con baja expresión de neuropilina especifica de tumor (= mediana) es menor de 1. Esto soporta la relevancia estadística del efecto de tratamiento (supervivencia global) observada en este subgrupo de pacientes .

Una curva de Kaplan-Meier correlaciona el tratamiento con bevacizumab y la expresión de neuropilina con respecto a la supervivencia global es provista en la Figura 1 (corte de mediana) . La mejora en supervivencia global para aquellos pacientes que tienen expresión de neuropilina relativamente baja cuando bevacizumab es agregado a la quimioterapia, indicada en las proporciones de peligro, es también visible en la Figura 1. La supervivencia global mediana fue mejorada por 1.8 meses en pacientes con expresión de neuropilina especifica de tumor es relativamente baja (= mediana) en comparación con solamente 0.8 meses para pacientes con expresión de neuropilina especifica del tumor por encima de la mediana. Los resultados demuestran que el efecto de tratamiento (supervivencia global) es mejorado en el subconjunto de pacientes con nivel de neuropilina relativamente bajo.

Correlación de biomarcador con supervivencia libre de avance Las proporciones de peligro fueron determinadas para el empo al avance de enfermedad o muerte en pacientes separados por puntuaciones H de neuropilina mediana o cuartil Tabla 4 : Proporciones de peligro para el tiempo al avance de enfermedad o muerte en pacientes de AVAGAS separados por puntuación H de neuropilina H Tabla 5: Proporciones de peligro para el tiempo al avance de enfermedad o muerte en pacientes AVAGASG separados por puntuación H de neuropilina de cuartil Las proporciones de peligro calculada indican que la supervivencia libre de avance mejora en aquellos pacientes administrados con bevacizumab en combinación con la quimioterapia estándar a media que la expresión específica del tumor de neuropilina disminuye. En la Tabla 4 , el límite superior del intervalo de confianza de 95 % de la proporción de peligro de tratamiento en el subconjunto de pacientes con baja expresión de neuropilina especifica del tumor {= mediana) es menor de 1. Esto soporta la relevancia estadística de efecto de tratamiento (supervivencia libre de avance) observado en este subgrupo de pacientes.

Tabla 6: Proporciones de peligro para el tiempo al avance de la enfermedad o muerte en pacientes de AVAGAST separados por puntuación H de neuropilina de cuartil (análisis adicional) La Tabla 5 fue producida en la población de semejante-protocolo que excluyo pacientes con violaciones de protocolo mayores. La Tabla 6 fue producida en la población de intento por tratar que incluyo todos los pacientes aleatorizados . La Tabla 6 , por consiguiente provee un análisis más exacto.

Una curva de Kaplan-Meier que correlaciona el tratamiento de bevacizumab y la expresión de neuropilina con respecto a una supervivencia libre de avance es provista en la Figura 2 (corte de mediana) . La mejora en supervivencia libre de avance páira aquellos pacientes que tienen expresión de neuropilina relativamente baja cuando bevacizumab es agregado a la quimioterapia, indicada en las proporciones de peligro es también visible en la Figura 2. La supervivencia libre de avance mediana fue mejorada por 2.1 meses en pacientes con expresión de neuropilina especifica del tumor relativamente baja (= mediana) en comparación con solamente 1.3 meses para pacientes con expresión de neuropilina especifica de tumor por encima de la mediana. Resultados demuestran que el efecto de tratamiento (supervivencia libre de avance) es mejorado en el subconjunto de pacientes con nivel relativamente bajo de neuropilina.

Claims (20)

REIVINDICACIONES

1. Un método para mejorar el efecto de tratamiento en un paciente que sufre de cáncer gástrico al agregar bevacizumab a un régimen de quimioterapia, el método está caracterizado porque comprende : (a) determinar el nivel de expresión de neuropilina en una muestra del paciente y (b) administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene nivel disminuido de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico.

2. Un método in vitro para la identificación de un paciente responsivo a o sensible a la adición de tratamiento de bevacizumab a un régimen de quimioterapia, dicho método está caracterizado porque comprende determinar el nivel de expresión de neuropilina en una muestra de un paciente que sospecha de sufrir de o de ser propenso a sufrir de cáncer gástrico, mediante lo cual un nivel disminuido de neuropilina en relación con un nivel de control determinado en pacientes que sufren de cáncer gástrico es indicador de sensibilidad del paciente a la adición de bevacizumab a dicho régimen.

3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el efecto de tratamiento es supervivencia global.

4. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el efecto del tratamiento es supervivencia libre de avance .

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicho cáncer gástrico es adenoma carcinoma de estómago o adenoma carcinoma de unión gastroesofagal .

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el nivel de expresión de neuropilina es detectado mediante un método histoquímico (IHC) .

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la muestra es seleccionada del grupo que consiste de resección de tejido gástrico o biopsia de tej ido . gástrico .

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el régimen de quimioterapia es un régimen de quimioterapia a base de capecitabina o un régimen de quimioterapia a base de 5-fluorouracilo.

9. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque el régimen de quimioterapia a base de capecitabina es un régimen de capecitabina en combinación con cisplatino.

10. EL método de la reivindicación 8, ^caracterizado porque el régimen de quimioterapia a base de 5-fluorouracilo es un régimen de 5-fluorouracilo en combinación con cisplatino .

11. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, caracterizado porque el paciente es co-tratado con una o más terapias anti-cáncer.

12. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque la terapia anti-cáncer es radiación.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, caracterizado porque el nivel de expresión de neuropilina es determinado antes de la terapia neo adyuvante o terapia adyuvante .

1 . Un kit útil para llevar a cabo el método de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado porque comprende oligonucleótidos o polipéptidos aptos de determinar el nivel de expresión de neuropilina.

15. El uso de un oligonucleótido o polipéptido para determinar el nivel de expresión de neuropilina en cualquiera de las reivindicaciones 1-13.

16. El kit de la reivindicación 14 o el uso de la reivindicación 15, caracterizado porque comprende un polipéptido apto de determinar el nivel de expresión de neuropilina, en donde dicho polipéptido es apropiado para uso en un método inmuno histoquimico y/o es un anticuerpo específico para neuropilina.

17. El uso de bevacizumab para mejorar el efecto de tratamiento de un paciente que sufre de cáncer gástrico, caracterizado porque comprende las siguientes etapas: (a) determinar el nivel de expresión de neuropilina en una muestra del paciente y (b) administrar bevacizumab en combinación con un régimen de quimioterapia al paciente que tiene nivel disminuido de neuropilina en relación con niveles de control determinados en pacientes que sufren de cáncer gástrico.

18. El uso de la reivindicación 17, caracterizado porque el efecto de tratamiento es supervivencia global.

19. El uso de la reivindicación 17, caracterizado porque el efecto de tratamiento es supervivencia libre de avance.

20. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 17-19, caracterizado porque el cáncer gástrico es adenocarcinoma de estómago y/o adenocarcinoma de unión gastroesofagal .