KR20140003393A - 베바시주맙 병용 치료법을 위한 바이오마커인 뉴로필린 - Google Patents

베바시주맙 병용 치료법을 위한 바이오마커인 뉴로필린 Download PDF

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폴 델마
도로시 포에른즐러
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준과 비교하여 뉴로필린의 발현 수준을 측정함으로써, 화학치료 요법과 함께 베바시주맙(아바스틴(등록상표))으로 치료하여, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEC")의 선암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하기 위한 방법에 관한 것이다. 개선된 치료 효과는 개선된 전체 생존율 또는 개선된 무진행 생존율일 수 있다. 본 발명은 또한 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준과 비교하여 뉴로필린의 발현 수준을 측정함으로써, 화학치료 요법과 병용되는 베바시주맙(아바스틴(등록상표))에 대한 환자의 민감성 또는 반응성을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다.

Description

베바시주맙 병용 치료법을 위한 바이오마커인 뉴로필린{NEUROPILIN AS A BIOMARKER FOR BEVACIZUMAB COMBINATION THERAPIES}
본 발명은 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준과 비교하여 뉴로필린의 발현 수준을 측정함으로써, 화학치료 요법과 함께 베바시주맙(아바스틴(Avastin, 등록상표))으로 치료하여, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEC")의 선암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하기 위한 방법에 관한 것이다. 개선된 치료 효과는 개선된 전체 생존율 또는 개선된 무진행 생존율일 수 있다. 본 발명은 또한 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준과 비교하여 뉴로필린의 발현 수준을 측정함으로써, 화학치료 요법과 병용되는 베바시주맙(아바스틴(등록상표))에 대한 환자의 민감성 또는 반응성을 평가하기 위한 방법에 관한 것이다.
혈관신생(angiogenesis)은 암 발생에 필수적으로, 1차 종양 크기 및 성장을 조절할 뿐만 아니라 침윤 및 전이 가능성에 영향을 미친다. 따라서, 혈관신생 과정을 매개하는 기전이 유도 항암 치료법에 잠재적인 표적으로 연구되어 왔다. 혈관신생 조절인자에 대한 연구 초기에, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 신호전달 경로가 여러 암 유형에서 혈관신생 활성을 우선적으로 조절하는 것으로 밝혀졌으며, 상기 경로를 다양한 시점에서 조절하기 위한 여러 치료제들이 개발되었다. 이들 치료법은, 특히 베바시주맙, 수니티닙, 소라페닙 및 바탈라닙을 포함한다. 임상에서 혈관신생 억제제의 사용은 성공적으로 나타났지만, 모든 환자가 혈관신생 억제제 치료법에 반응하거나, 충분히 반응하는 것은 아니다. 상기 불완전한 반응의 근본적인 기전은 알려지지 않았다. 그러므로, 항-혈관신생 암 치료법에 민감하거나 반응성인 환자 아군의 확인에 대한 요구가 증가하고 있다.
많은 혈관신생 억제제가 알려져 있지만, 가장 두드러진 혈관신생 억제제는 베바시주맙(아바스틴(등록상표))이다. 베바시주맙은 VEGF(혈관 내피 성장 인자)에 특이적으로 결합하고 그의 생물학적 효과를 차단하는 재조합 인간화 단클론성 IgG1 항체이다. VEGF는 종양 성장 및 전이, 즉, 종양의 신체 다른 부위로의 확산에 필요한 필수 과정인 종양 혈관신생의 핵심 동인이다. 아바스틴(등록상표)은 유럽에서, 총괄하여 매년 250만명 이상의 사망을 야기하는 4가지 일반적 유형의 암: 대장암, 유방암, 비-소세포 폐암(NSCLC) 및 신장암의 후기 단계의 치료에 승인되었다. 지금까지 50만명 이상의 환자들이 아바스틴(등록상표)으로 치료받았으며, 450회 이상의 임상 시험하에 종합적인 임상 프로그램이 다양한 환경(예를 들면, 후기 또는 초기 단계 질환)에서 여러 암 유형(대장암, 유방암, 비-소세포 폐암, 뇌암, 위암, 난소암 및 전립선암 포함)의 치료에 아바스틴의 추가의 사용을 연구중이다. 중요하게, 아바스틴(등록상표)은 광범위한 화학치료법 및 다른 항암 치료와 병용될 때 효능을 나타내어, 병행치료제(co-therapeutic)로서 가능성을 나타내었다. 제3상(Phase-III) 연구는 베바시주맙을 표준 화학치료 요법과 병용하여 유리한 효과를 나타내었음을 발표하였다(예를 들면, 문헌[Kang et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28:18s (suppl. abstr. LBA4007); Saltz et al., 2008, J. Clin. Oncol., 26:2013-2019; Yang et al., 2008, Clin. Cancer Res., 14:5893-5899; Hurwitz et al., 2004, N. Engl. J. Med., 350:2335-2342]). 그러나, 혈관신생 억제제의 선행 연구들에서와 같이, 이들 제3상 연구의 일부는 일부의 환자들이 화학치료 요법으로의 베바시주맙(아바스틴(등록상표))의 추가에 대해 불완전한 반응을 경험함을 밝혔다.
따라서, 혈관신생 억제제, 특히 베바시주맙(아바스틴(등록상표))을 포함하는 병용 요법에 반응하거나 반응하기 쉬운 환자들을 결정하는 방법에 대한 요구가 존재한다. 따라서, 본 발명의 기초가 되는 기술적 문제는, 화학치료 요법, 예를 들면, 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료로의 혈관신생 억제제, 특히 베바시주맙(아바스틴(등록상표))의 추가로부터 이익을 얻을 수 있는, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓거나 이에 걸리기 쉬운 환자의 확인을 위한 방법 및 수단의 제공이다.
상기 기술적 문제는 특허청구범위에 특징지어진 양태를 제공함으로써 해결된다.
따라서, 본 발명은 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료법과 같은 화학치료 요법과 병용되는 혈관신생 억제제, 예를 들면, 베바시주맙(아바스틴(등록상표))에 대한 민감성 또는 반응성과 관련있는, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암의 하나 이상의 바이오마커의 확인 및 선별에 관한 것이다. 특정 양상에서, 본 발명은 표준 화학치료법으로의 혈관신생 억제제, 예를 들면, 베바시주맙(아바스틴(등록상표))의 추가에 대해 민감하거나 반응성인 환자들을 확인하기 위해, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 설정된 대조군과 비교되는 뉴로필린의 종양 특이적 발현 프로필의 사용에 관한 것이다. 본 발명은 또한 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 대조군에 대한 뉴로필린의 종양 특이적 발현 수준을 측정함으로써, 표준 화학치료법, 예를 들면, 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료법으로의 혈관신생 억제제, 예를 들면, 베바시주맙(아바스틴(등록상표))의 추가에 의해, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하는 방법에 관한 것이다. 치료 효과는 임상적인 변수 전체 생존율 및 무진행 생존율을 포함한다. 본 발명은 또한, 본 발명의 방법에 따라 측정되고 정의된, 혈관신생 억제제, 특히 베바시주맙(아바스틴(등록상표))에 민감하거나 반응성인 환자의 확인을 위한 키트 및 조성물을 제공한다.
도 1은 뉴로필린 발현과 전체 생존율(중간 컷오프)의 상관관계를 나타낸다. 긴 파선, 플라시보, 화학치료 및 중간값 초과의 뉴로필린 발현; 짧은 파선, 베바시주맙 치료, 화학치료 및 중간값 초과의 바이오마커 발현; 실선, 베바시주맙 치료, 화학치료 및 중간값 이하의 바이오마커 발현; 중간/짧은 파선, 플라시보, 화학치료 및 중간값 이하의 바이오마커 발현.
도 2는 뉴로필린 발현과 진행 또는 사망까지의 시간(중간 컷오프)과의 상관관계를 나타낸다. 긴 파선, 플라시보, 화학치료 및 중간값 초과의 뉴로필린 발현; 짧은 파선, 베바시주맙 치료, 화학치료 및 중간값 초과의 바이오마커 발현; 실선, 베바시주맙 치료, 화학치료 및 중간값 이하의 바이오마커 발현; 중간/짧은 파선, 플라시보, 화학치료 및 중간값 이하의 바이오마커 발현.
도 3은 뉴로필린-1의 대표적인 아미노산 서열(서열번호 1)이다.
도 4는 뉴로필린 발현과 전체 생존율, 진행 또는 사망까지의 시간, 및 전체 반응 속도(ORR)와의 상관관계를 나타낸다.
따라서, 본 발명은 (a) 환자 샘플에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 수준의 뉴로필린을 갖는 환자에게 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 투여하는 단계를 포함하는, 화학치료 요법에 베바시주맙을 추가함으로써 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하는 방법을 제공한다.
개선된 치료 효과는 임상적인 변수 전체 생존율일 수 있거나, 무진행 생존율일 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 것으로 의심되거나 이에 걸리기 쉬운 환자로부터의 샘플에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 화학치료 요법으로의 베바시주맙의 추가에 대해 반응하거나 민감한 환자를 확인하기 위한 시험관내 방법으로서, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 수준의 뉴로필린이 상기 요법으로의 베바시주맙의 추가에 대한 환자의 민감성을 나타내는 방법에 관한 것이다.
따라서, 본 발명은, 놀랍게도, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암으로 진단된 환자에서 측정된 대조군 수준과 비교되는 해당 환자에서의 뉴로필린의 종양 특이적 발현 수준이 화학치료 요법과 함께 혈관신생 억제제를 투여받은 상기 환자에서의 치료 효과와 관련됨을 밝혔다는 점에서 확인된 기술적 문제를 해결한다. 뉴로필린의 종양 특이적 발현 수준의 변화는 놀랍게도 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료 요법으로의 베바시주맙(아바스틴(등록상표))의 추가에 대한 위암 환자의 개선된 무진행 생존율 및/또는 개선된 전체 생존율의 마커/예측변수(predictor)로서 확인되었다. 특히, 화학치료 요법으로의 베바시주맙(아바스틴(등록상표))의 추가에 대해 반응성 또는 민감성을 나타내는 위암 환자는, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓거나 진단된 환자로부터 수득된 샘플에서 설정된 대조군 수준에 비해 감소된 뉴로필린의 발현을 갖는 것으로 확인되었다. 용어 "마커" 및 "예측변수"는 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 본원에 기술되고 정의된 뉴로필린의 발현 수준을 말한다.
본 발명의 맥락에서, "뉴로필린"은 NRP-1로도 알려져 있으며 도 3에 나타낸 서열번호 1의 아미노산 서열로 예시되는 I형 막 단백질인 뉴로필린-1 단백질을 말한다(NRP-1 전구체 아미노산 서열은 또한 유니프로트(UniProt) 수탁번호 O14786하에 입수가능하다). 본원에서 사용된 바와 같이, "뉴로필린"은 또한 당해 분야에 공지된 바와 같이 NRP-1에 대해 약 44% 상동성을 공유하는 뉴로필린-2(NRP-2로도 공지됨)를 말할 수도 있다. 따라서, 본 발명의 방법은 NRP-1 및 NRP-2를 구별하지 않는다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "뉴로필린"은 또한 이러한 동족체, 변이체 및 이소형이 본원에 기술되고/되거나 당해 분야에 공지된 하나 이상의 항-뉴로필린 항체에 의해 특이적으로 인식되는 한, NRP-1 및/또는 NRP-2의 동족체, 변이체 및 이소형을 포함한다. 용어 "뉴로필린"은 또한 서열번호 1의 아미노산 서열에 대해 또는 NRP-1 및/또는 NRP-2 동족체, 변이체 및 이소형(스플라이스 이소형을 포함함) 중 하나 이상의 서열에 대해 85% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상의 상동성을 갖는 단백질, 및 상기 서열들의 단편을 포함하되, 변이체 단백질(이소형을 포함함), 상동성 단백질 및/또는 단편들은 하나 이상의 NRP-1 및/또는 NRP-2 특이적 항체, 예를 들면, 알엔디 시스템즈 인코포레이티드(R&D Systems, Inc.)(미국 미네소타주 미네아폴리 소재)에서 시판중인 클론 446915, 산타 크루즈 바이오테크놀로지 인코포레이티드(Santa Cruz Biotechnology, Inc.; 미국 캘리포니아주 산타 크루즈 소재)에서 시판중인 카탈로그 번호 sc-5307, 또는 당해 분야에 달리 공지된 것에 의해 인식된다.
따라서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는(이로 한정되지는 않는다) 단백질의 발현 수준의 측정을 포함한다. 특정 양상에서, 본 발명은 뉴로필린의 동족체, 변이체 및 이소형의 검출을 포함하며; 상기 이소형 또는 변이체는 특히 대립형질 변이체 또는 스플라이스 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 그의 단편에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는, 본원에 기술된 바와 같은 뉴로필린에 상동성인 단백질, 또는 그의 단편의 검출도 또한 포함된다. 대안적으로 또는 추가로, 본 발명은, 서열번호 1을 암호화하는 핵산 서열 또는 그의 단편, 변이체 또는 이소형에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 핵산 서열에 의해 암호화된 단백질 또는 그의 단편의 발현 수준의 검출을 포함한다. 이러한 맥락에서, 용어 "변이체"는 뉴로필린 아미노산 서열, 또는 상기 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열이, 돌연변이, 예를 들면, 결실, 부가, 치환, 역위 등에 의해, 서열번호 1에 의해 확인되고/되거나 상기 확인된 유니프로트 수탁번호하에 이용가능한 별개의 서열과 상이함을 의미한다. 또한, 용어 "동족체"는 서열번호 1로 나타낸 바와 같은 하나 이상의 폴리펩티드 또는 그의 단편에 대해 60% 이상, 보다 바람직하게는 80% 이상, 가장 바람직하게는 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 분자를 말한다.
아미노산 또는 핵산 서열이 본원에 기술된 바와 같은 아미노산 또는 핵산 서열에 대해 특정한 정도의 동일성을 갖는지 여부를 측정하기 위해, 당업자는 수동적으로든 또는 당해 분야에 공지되어 있거나 본원에 기술된 컴퓨터 프로그램을 사용하여, 당해 분야에 널리 공지되어 있는 수단 및 방법, 예를 들면, 정렬(alignment)을 이용할 수 있다.
본 발명에 따라서, 2개 이상의 아미노산 또는 핵산 서열의 맥락에서 용어 "동일한" 또는 "동일성 퍼센트"는, 비교창에 걸쳐, 또는 당해 분야에 공지된 바와 같은 서열 비교 알고리즘을 사용하여, 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정된 바와 같은 지정 영역에 걸쳐 최대 대응성에 대해 비교하고 정렬할 때, 동일하거나 특정 비율의 동일한(예를 들면, 서열번호 1의 아미노산 서열과 60% 또는 65% 동일성, 바람직하게는 70 내지 95% 동일성, 보다 바람직하게는 95% 이상의 동일성) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 갖는 2개 이상의 서열 또는 아서열(subsequence)을 말한다. 예를 들면, 60% 내지 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열은 실질적으로 동일한 것으로 간주한다. 상기 정의는 또한 시험 서열의 보체에도 적용된다. 바람직하게는, 기술된 동일성은 적어도 약 15 내지 25개의 아미노산 또는 뉴클레오티드 길이의 영역에 걸쳐, 보다 바람직하게는 약 50 내지 100개 아미노산 또는 뉴클레오티드 길이의 영역에 걸쳐 존재한다. 당업자는, 예를 들어, 당해 분야에 공지된 바와 같은 CLUSTALW 컴퓨터 프로그램(문헌[Thompson, 1994, Nucl. Acids Res. 2, 4673-4680]) 또는 FASTDB(문헌[Brutlag, 1990, Comp. App. Biosci. 6, 237-245)])를 기초로 하는 바와 같은 알고리즘을 이용하여 서열들 사이/중에서 동일성 퍼센트를 결정하는 방법을 인지할 것이다.
FASTDB 알고리즘은 전형적으로 그 계산에서 서열중 내부 비-매칭 결실 또는 부가, 즉, 갭(gap)을 고려하지 않지만, 이것은 동일성 %의 과대평가를 방지하기 위해 수동적으로 보정될 수 있다. 그러나, CLUSTALW는 서열 갭을 그의 동일성 계산에 고려한다. 당업자에게 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool) 및 BALST 2.0 알고리즘(문헌[Altschul, 1997, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402; Altschul, 1993, J. Mol. Evol. 36:290-300; Altschul, 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410])도 또한 이용가능하다. 핵산 서열용 BLASTN 프로그램은 디폴트(default)로서 11의 단어 길이(W), 10의 기대값(E), M=5, N=4, 및 두 가닥의 비교를 이용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 3의 단어 길이(W) 및 10의 기대값(E)을 이용한다. BLOSUM62 스코어링 행렬(scoring matrix)(문헌[Henikoff, 1989, PNAS 89:10915])은 50의 정렬값(B), 10의 기대값(E), M=5, N=4 및 두 가닥의 비교를 이용한다.
전술한 바와 같은 BLAST 알고리즘은 서열 유사성을 결정하기 위한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열 둘 다의 정렬을 제공한다. 정렬의 국소적 특성으로 인해, BLAST는 정확한 매치를 측정하거나 유사한 서열을 확인하는데 특히 유용하다. BLAST 알고리즘 출력데이터의 기본 단위는 하이-스코어링 분절 쌍(High-scoring Segment Pair, HSP)이다. HSP는 그 정렬이 국소적으로 최대이고 그에 대한 정렬 스코어가 사용자에 의해 설정된 임계치 또는 컷오프 스코어를 충족하거나 초과하는, 임의적이지만 동일한 길이를 갖는 2개의 서열 단편으로 이루어진다. BLAST 접근방법은 쿼리(query) 서열과 데이터베이스 서열 사이에 HSP를 찾고, 발견된 임의의 매치의 통계적 유의도를 평가하고, 유의도의 사용자-선택 임계치를 충족시키는 매치만을 기록하는 것이다. 변수 E는 데이터베이스 서열 매치를 기록하기 위한 통계적 유의성 임계치를 설정한다. E는 전체 데이터베이스 검색의 맥락에서 HSP(또는 HSP 세트)의 기회 발생의 예상된 빈도의 상부 경계로서 해석된다. 그 매치가 E를 충족시키는 임의의 데이터베이스 서열을 프로그램 출력데이터에 기록한다.
BLAST를 이용하는 유사한 컴퓨터 기술을 사용하여 진뱅크(GenBank) 또는 EMBL과 같은 단백질 또는 뉴클레오티드 데이터베이스내의 동일하거나 관련된 분자를 검색할 수 있다. 상기 분석은 다중 막-기본 하이브리드화보다 훨씬 빠르다. 또한, 컴퓨터 검색의 감도는 임의의 특정한 매치가 정확한 매치 또는 유사한 매치로 분류되는지 여부를 결정하기 위해 변형될 수 있다. 검색의 기본은 하기와 같이 정의되는 곱 스코어(product score)이며, 두 서열 사이의 유사성 정도 및 서열 매치의 길이 둘 다가 고려된다: [서열 동일성 % x 최대 BLAST 스코어 %]/100. 예를 들면, 40의 곱 스코어의 경우, 매치는 1 내지 2% 오차내에서 정확할 것이며, 70의 곱 스코어의 경우, 매치는 정확할 것이다. 유사한 분자들은 통상적으로 15 내지 40의 곱 스코어를 나타내는 것들을 선택함으로써 확인되지만, 더 낮은 스코어도 관련 분자를 확인할 수 있다. 서열 정렬을 제공할 수 있는 프로그램에 대한 또 다른 예는 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같이, CLUSTALW 컴퓨터 프로그램(문헌[Thompson, 1994, Nucl. Acids Res. 2:4673-4680]) 또는 FASTDB(문헌[Brutlag, 1990, Comp. App. Biosci. 6:237-245])이다.
본 발명에 따르면, 놀랍게도 아바가스트(AVAGAST) 집단에서 보다 우수한 베바시주맙 치료 효과가 보다 낮은 종양 특이적 뉴로필린 발현과 관련된 것으로 밝혀졌다(문헌[Kang et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28:18s (suppl. abstr. LBA4007)]). 특히, 비교적 낮은 종양 특이적 뉴로필린 발현은 화학치료 요법 이외에 베바시주맙을 수용한 환자에서의 개선된 전체 생존율 및/또는 개선된 무진행 생존율과 관련된다.
뉴로필린(예컨대, NRP-1, NRP-2, 또는 이의 변이체, 동족체, 절두체(truncation) 또는 단편)의 발현 수준은 환자 샘플중 특정 단백질 수준의 측정에 적합한, 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 평가될 수 있으며, 바람직하게는 뉴로필린에 특이적인 항체를 사용하는 면역조직화학("IHC") 방법에 의해 측정된다. 상기 방법은 널리 공지되어 있고 통상적으로 당해 분야에서 시행되며, 상응하는 상업적 항체 및/또는 키트가 용이하게 이용가능하다. 예를 들면, 본원에 기술되고 정의된 뉴로필린에 특이적인 시판중인 항체는 알엔디 시스템즈 인코포레이티드(미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)에서 클론 446915로, 산타 크루즈 바이오테크놀로지 인코포레이티드(미국 캘리포니아주 산타 크루즈 소재)에서 카탈로그 번호 sc-5307로서 수득할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 마커/지표 단백질의 발현 수준은 항체 또는 키트 제조사의 시약 및/또는 프로토콜 권고사항을 이용하여 평가된다. 당업자는 또한 뉴로필린의 발현 수준을 IHC 방법에 의해 측정하기 위한 또 다른 수단을 인지할 것이다. 그러므로, 당해 분야에 공지된 뉴로필린 및/또는 다른 마커/지표의 발현 수준은 과도한 부담없이 당업자에 의해 통상적으로 재현가능하게 측정될 수 있다. 그러나, 정확하고 재현가능한 결과를 보장하기 위해, 본 발명은 또한 시험 절차의 확인을 보장할 수 있는 전문화된 실험실에서의 환자 샘플의 시험을 포함한다.
바람직하게는, 뉴로필린의 발현 수준은 암 세포를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 생물학적 샘플에서 평가되고, 종양-특이적 방식으로 측정된다. 상기 샘플은 암 세포, 즉, 종양 세포, 및 비-암성 세포, 예컨대 내피 세포 또는 비-악성 세포를 둘 다 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 뉴로필린의 종양-특이적 발현의 측정은 종양 샘플에 존재할 수 있는 다른 세포 유형, 예컨대 내피 또는 비-암성/비-악성 세포와 반대되는 배타적인 암 세포의 발현 수준의 측정에 관한 것이다. 다른 양상에서, 뉴로필린의 종양-특이적 발현의 측정은 암 세포, 및 종양 샘플에 존재할 수 있는 임의의 다른 세포-유형, 예컨대 내피 세포의 발현 수준의 측정에 관한 것이다. 당업자, 예를 들어, 병리학자는 비-암성 세포, 예를 들어, 내피 세포로부터 암 세포를 용이하게 인지할 수 있다. 샘플은 위암, 특히 위 또는 GEJ의 선암을 앓거나, 앓는 것으로 의심되거나, 진단된 환자로부터 수득한 위 조직 절제물 또는 위 조직 생검물일 수 있다. 샘플은 또한 위암, 특히 위 또는 GEJ의 선암을 앓거나, 앓는 것으로 의심되거나, 진단된 환자로부터 수득한 전이성 병볍의 절제물 또는 생검물일 수 있다. 바람직하게는, 샘플은 위 조직 또는 위식도 접합부 조직의 샘플, 또는 위 또는 위식도 접합부의 선암의 절제물 또는 생검물이다. 샘플은 또한 공지되거나 의심되는 전이성 위암 병변 또는 박편의 샘플, 또는 순환성 암 세포, 예컨대 위암 세포를 포함하는 것으로 공지되거나 의심되는 혈액 샘플, 예컨대 말초 혈액 샘플일 수 있다. 본 발명의 방법에 따른 샘플의 분석은, 당해 분야에 공지된 바와 같이, 당업자, 예컨대 병리학자에 의해서 수동으로 수행될 수 있거나, 병리학적 이미지의 처리 및 분석을 위해, 예컨대 조직 생검물 또는 절제물의 분석을 위해 고안된 시판중인 소프트웨어(예컨대 미락스 스캔(MIRAX SCAN), 칼 자이쓰 아게(Carl Zeiss AG), 독일 예나 소재)를 사용하여 자동으로 수행될 수 있다. 조직 절제물, 생검물 및 신체 유체, 예컨대 암/종양 세포를 포함하는 혈액 샘플을 비롯한 생물학적 샘플을 수득하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
본 발명의 맥락에서, 베바시주맙이 당해 분야에 공지된 바와 같은 표준 화학치료 요법의 일부로 투여되는 하나 이상의 화학치료제 이외에 또는 그와의 병행치료법 또는 병행치료제로서 투여된다. 상기 화학치료제의 예로는 5-플루오로우라실, 류코보린, 이리노테칸, 겜시타빈-엘로티닙, 카페시타빈 및 백금-계 화학치료제, 예를 들면, 파클리탁셀, 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴이 포함된다. 첨부된 실시예에 나타낸 바와 같이, 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료 요법으로의 베바시주맙의 추가는 뉴로필린의 발현 수준에 따라 정의되고 선택된, 특히 유사한 상황의 환자에서 설정된 대조군 수준과 비교하여 종양 샘플중에서 보다 낮은 뉴로필린의 발현을 갖는 위암 환자 및/또는 환자 집단에서 무진행 생존율의 증가를 달성하였고, 전체 생존율과 관련되었다.
베바시주맙은 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료 요법과 병용될 수 있다. 카페시타빈과 5-플루오로우라실 사이의 선택은 당해 분야에서 널리 확립된 표준에 기초하여 치료하는 의사에 의해 최선으로 결정된다. 카페시타빈-계 화학치료 요법의 예는 시스플라틴과 함께 투여되는 카페시타빈(또는 5-플루오로우라실)의 병용을 포함한다. 카페시타빈/시스플라틴 치료의 전형적인 사이클은 1 내지 14일에 걸친 매일 2회(bid)의 1000mg/m2의 경구 투여량, 이어서 1주 휴식, 및 과수화 및 전투약(스테로이드 및 항이뇨제; 3x/주)에 의한 사이클의 1일에 2시간 주입으로서 정맥내 투여되는 80mg/m2의 투여량의 시스플라틴일 수 있고; 시스플라틴 및 카페시타빈 사이클은 질병이 진행되고 관리불가능한 독성이 있는 한 계속되지만, 시스플라틴 투여는 최대 6회의 사이클로 제한된다. 따라서, 본 발명의 특정 양상에서, 본 발명의 방법에 따라 확인된 환자를 카페시타빈/시스플라틴과 함께 베바시주맙으로 치료한다. 베바시주맙의 통상적인 투여 방식은 일정 시간에 걸쳐 볼루스(bolus) 투여량으로 또는 주입으로서의 비경구 투여, 예를 들면, 10분, 20분, 30분, 40분, 50분, 60분, 75분, 90분, 105분, 120분, 3시간, 4시간, 5시간 또는 6시간에 걸친 총 일일 투여량의 투여를 포함한다. 예를 들면, 7.5 mg/kg의 베바시주맙(아바스틴(등록상표))을 위암을 갖는 환자에게 상기 매 카페시타빈 사이클의 1일에 15 내지 30분에 걸친 정맥내 주입으로서 투여할 수 있다. 당업자는 특정 환자 및 화학치료 요법에 의해 결정된 바와 같이 베바시주맙의 또 다른 투여 방식이 본 발명에 포함되며, 특정한 투여 방식 및 치료 투여량이 당해 분야에 공지된 방법에 따라 치료 의사에 의해 최선으로 결정됨을 인지할 것이다.
본 발명의 방법에 따라 선택된 환자는 화학치료 요법과 함께 베바시주맙으로 치료되며, 하나 이상의 추가의 항암 치료법으로 더 치료될 수 있다. 특정 양상에서, 하나 이상의 추가의 항암 치료법은 방사선이다.
바람직한 양태에서, 임의의 다른 화학치료 요법 또는 치료법, 예를 들면, 암 치료 또는 그 증상의 관리 또는 개선을 위한 치료법을 시작하기 전에 환자로부터 수득된 샘플을 수거한다. 그러므로, 바람직한 양태에서, 샘플은 화학치료제의 투여 또는 화학치료 요법의 시작 전에 수거된다.
본 발명은 또한 뉴로필린의 종양 특이적 발현 수준의 측정에 적합한 올리고뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 포함하는 진단 조성물 또는 키트에 관한 것이다. 본원에서 상술한 바와 같이, DNA, RNA, 또는 DNA 및 RNA 프로브의 혼합물과 같은 올리고뉴클레오티드가 마커/지표 단백질, 특히 뉴로필린의 mRNA 수준을 검출하는데 사용될 수 있는 반면, 폴리펩티드는 특정 단백질-단백질 상호작용에 의해 마커/지표 단백질의 단백질 수준을 직접 검출하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 바람직한 양상에서, 뉴로필린의 발현 수준용 프로브로서 포함되고 본원에 기술된 키트 또는 진단 조성물에 포함되는 폴리펩티드는 상기 뉴로필린에 특이적이거나, 그의 동족체, 변이체 및/또는 절두체에 특이적인 항체이다.
따라서, 본 발명의 또 다른 양태는 뉴로필린의 발현 수준을 측정할 수 있는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 기술된 방법을 수행하기에 유용한 키트를 제공한다. 바람직하게는, 상기 올리고뉴클레오티드는 본원에 정의되고 기술된 하나 이상의 뉴로필린을 암호화하는 mRNA에 특이적인 프라이머 및/또는 프로브를 포함하며, 폴리펩티드는 뉴로필린과 특이적 상호작용을 할 수 있는 단백질, 예를 들면, 마커/지표 특이적 항체 또는 항체 단편을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 (a) 환자 샘플에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 수준의 뉴로필린을 갖는 환자에게 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 투여하는 단계를 포함하는, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하기 위한 베바시주맙의 용도를 제공한다.
개선된 치료 효과는 개선된 전체 생존율 또는 개선된 무진행 생존율일 수 있다.
첨부된 실시예에 나타낸 바와 같이, 본 발명은 놀랍게도 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암으로 진단된 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해, 해당 환자에서 뉴로필린의 발현 수준이 카페시타빈-계 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 투여받은 상기 환자에서의 치료 효과와 관련됨을 밝힐 수 있었다는 점에서 확인된 기술적 문제를 해결한다.
본 발명의 맥락에서 "에 대해 반응성인"이란 어구는 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓고 있거나, 앓는 것으로 의심되거나, 상기 암에 걸리기 쉽거나, 진단된 대상/환자가 베바시주맙의 추가를 포함하는 화학치료 요법에 대해 반응을 나타내는 것을 의미한다. 당업자는 본 발명의 방법에 따라 베바시주맙으로 치료된 사람이 반응을 나타내는지 여부를 용이하게 결정할 수 있을 것이다. 예를 들면, 반응은 감소된 위암 고통, 예를 들면, 감소되고/되거나 중단된 종양 성장, 종양 크기의 감소, 및/또는 위암의 하나 이상의 증상, 예를 들면, 위장관 출혈, 통증, 빈혈의 개선에 의해 반영될 수 있다. 바람직하게는, 상기 반응은 위암의 전이성 전환의 감소되거나 경감된 징후, 예를 들면, 전이물 형성 방지 또는 전이물의 수 또는 크기의 감소에 의해 반영될 수 있다.
본 발명의 맥락에서 "에 대해 민감한"이란 어구는 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓고 있거나, 앓는 것으로 의심되거나, 상기 암에 걸리기 쉽거나, 진단된 대상/환자가 화학치료 요법과 병용되는 베바시주맙에 의한 치료에 대해 어떻게 해서든 양성 반응을 나타내는 것을 의미한다. 환자의 상기 반응은 전술한 바와 같은 "반응성인" 환자에 비해 덜 현저할 수 있다. 예를 들면, 상기 환자는 종양 성장 또는 전이 지표에서의 감소는 측정할 수 없지만, 질환과 관련된 고통을 덜 경험할 수 있고/있거나, 화학치료 요법과 병용되는 베바시주맙에 대한 환자의 반응은 단지 일시적인 것일 수 있고, 즉, 종양 및/또는 전이물의 성장이 단지 일시적으로 감소되거나 중단될 수 있다.
본 발명에 따른 "앓는 환자"란 어구는 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암의 임상 징후를 나타내는 환자를 말한다. 위암은 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 전이성, 수술불가능 및/또는 국소 진행된 선암일 수 있다. 위암의 맥락에서 "의심되는" 또는 "걸리기 쉬운"이란 어구는, 예를 들면, 가능한 유전학적 소인, 위험하고/하거나 발암성 화합물에 사전노출 또는 돌발적 노출, 또는 발암성 신체적 위험, 예를 들면, 방사선에 노출됨을 근거로 한, 환자에서의 징후 질환을 말한다.
본 발명의 맥락에서 "치료 효과"란 어구는 "무진행 생존율" 및 "전체 생존율"이란 어구를 포함한다.
본 발명의 맥락에서 "무진행 생존율"이란 어구는 그 동안 치료 의사 또는 연구자의 평가에 따라 환자의 질환이 더 악화되지 않는, 즉, 진행되지 않는 치료 동안 및 후의 시간 길이를 말한다. 당업자가 인지하듯이, 환자의 무진행 생존율은, 환자가 유사한 상황에 있는 환자의 대조군의 평균 무진행 생존 시간과 비교할 때 질환이 진행하지 않는 보다 긴 시간을 경험하는 경우 개선되거나 향상된다.
본 발명의 맥락에서 "전체 생존율"이란 어구는 환자군내의 환자의 평균 생존율을 지칭한다. 당업자가 인지하듯이, 환자의 전체 생존율은, 환자가 환자의 다른 아군과 비교할 때 통계학적으로 유의한 보다 긴 평균 생존 시간을 갖는 아군에 속하는 경우, 개선되거나 향상된다. 개선된 전체 생존율은 환자의 하나 이상의 아군에서 명백할 수 있지만, 환자 집단이 전체로서 분석되는 경우에는 명백하지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "투여" 또는 "투여하는"은 치료용 항체의 투여에 대해 당해 분야에 공지되어 있는 임의의 적합한 수단에 의해, 상기 치료 또는 의료 개입이 필요한 환자에게 혈관신생 억제제, 예를 들면, 베바시주맙(아바스틴(등록상표)), 및/또는 혈관신생 억제제, 예를 들어, 베바시주맙(아바스틴(등록상표))을 포함하는 약학 조성물/치료 요법의 투여를 의미한다. 비제한적 투여 경로로는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 국소, 피내, 비강내 또는 기관지내 투여(예를 들면, 흡입에 의해 수행되는 바와 같은)가 포함된다. 본 발명의 맥락에서 비경구 투여, 예를 들면, 정맥내 투여가 특히 바람직하다. 대장암의 치료를 위한 베바시주맙(아바스틴(등록상표))과 관련하여, EMEA에 따른 바람직한 투여량은 2주에 한번씩 주어지는 5 또는 10mg/kg 체중, 또는 3주에 한 번씩 주어지는 7.5 또는 15mg/kg 체중이다(세부사항에 대해서는 http://www.emea.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/avastin/emea-combined-h582en.pdf를 참조한다).
용어 "항체"는 본원에서 가장 광의로 사용되며, 바람직한 생물 활성을 나타내는, 특히 VEGFA, HER2, 뉴로필린 및 CD31 중 하나 이상에 특이적으로 결합하는, 단클론성 및 다클론성 항체, 다중특이적 항체(예, 이중특이적 항체), 키메라성 항체, CDR 이식 항체, 인간화 항체, 카멜화(camelized) 항체, 단쇄 항체 및 항체 단편 및 단편 구조물, 예를 들면, F(ab')2 단편, Fab-단편, Fv-단편, 단쇄 Fv-단편(scFv), 이중특이적 scFv, 다이아바디(diabody), 단일 도메인 항체(dAb) 및 미니바디(minibody), 또는 그의 동족체, 변이체, 단편 및/또는 이소형을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "화학치료제"는 항암 치료 효과를 제공할 수 있는 임의의 활성 약제를 포함하며, 특히 암 또는 종양 세포와 간섭할 수 있는 화학 약제 또는 생물 약제일 수 있다. 바람직한 활성 약제는 악성 세포의 발생, 성숙 또는 증식을 억제 또는 방지하는 항-종양제(화학독성제 또는 화학조절제(chemostatic))로 작용하는 것들이다. 화학치료제의 비제한적인 예로는 다음이 포함된다: 알킬화제, 예를 들면, 질소 머스타드(예를 들면, 메클로레타민, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란 및 클로람부실), 니트로소우레아(예를 들면, 카무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU) 및 세무스틴(메틸-CCNU)), 에틸렌이민/메틸멜라민(예를 들면, 트라이에틸렌멜라민(TEM), 트라이에틸렌, 티오포스포라미드(티오테파), 헥사메틸멜라민(HMM, 알트레타민)), 알킬 설포네이트(예를 들면, 부설판), 및 트라이아진(예를 들면, 다카바진(DTIC)); 항-대사물질, 예를 들면, 폴산 유사체(예를 들면, 메토트렉세이트, 트라이메트렉세이트), 피리미딘 유사체(예를 들면, 5-플루오로우라실, 플루오로데옥시우리딘, 겜시타빈, 시토신 아라비노사이드(AraC, 시타라빈), 5-아자시티딘, 2,2'-다이플루오로데옥시시티딘, 피리미딘 유사체 전구약물, 예컨대 카페시타빈), 및 퓨린 유사체(예를 들면, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 2'-데옥시코포마이신(펜토스타틴), 에리트로하이드록시노닐아데닌(EHNA), 플루다라빈 포스페이트 및 2-클로로데옥시아데노신(클라드리빈, 2-CdA)); 천연 생성물로부터 개발된 항유사분열 약물(예를 들면, 파클리탁셀, 빈카 알칼로이드(예, 빈블라스틴(VLB), 빈크리스틴 및 비노렐빈), 탁소테어, 에스트라무스틴 및 에스트라무스틴 포스페이트), 에피포도필로톡신(예, 에토포시드, 테니포시드), 항생물질(예를 들면, 액티노마이신 D, 다우노마이신(루비도마이신), 독소루비신, 미토잔트론, 이다루비신, 블레오마이신, 플리카마이신(미트라마이신), 미토마이신C, 액티노마이신), 효소(예를 들면, L-아스파라기나제), 및 생물 반응 조절제(예를 들면, 인터페론-알파, IL-2, G-CSF, GM-CSF); 백금 배위 착체(예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴), 안트라센다이온(예를 들면, 미토잔트론), 치환된 우레아(즉, 하이드록시우레아), 메틸하이드라진 유도체(예를 들면, N-메틸하이드라진(MIH), 프로카바진), 부신피질 억제제(예를 들면, 미토테인(o,p'-DDD), 아미노글루테티미드)를 포함하는 다양한(miscellaneous) 약제; 부신피질스테로이드 길항물질(예를 들면, 프레드니손 및 등가물, 덱사메타손, 아미노글루테티미드), 프로게스틴(예를 들면, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트), 에스트로겐(예를 들면, 다이에틸스틸베스트롤, 에티닐 에스트라다이올 및 그의 등가물)을 포함하는 호르몬 및 길항물질; 항에스트로겐(예를 들면, 타목시펜), 안드로겐(예를 들면, 테스토스테론 프로피오네이트, 플루옥시메스테론 및 그의 등가물), 항안드로겐(예를 들면, 플루타미드, 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체, 류프롤리드) 및 비-스테로이드성 항안드로겐(예를 들면, 플루타미드).
본 발명의 맥락에서, 아미노산 서열과 관련하여 "상동성"은 본원에 제공된 서열번호들에 의해 정의된 서열의 전체 길이에 대해 80% 이상의 서열 동일성, 특히 85% 이상의 동일성, 바람직하게는 90% 이상, 보다 더 바람직하게는 95% 이상의 동일성을 말하는 것으로 이해된다. 본 발명의 맥락에서, 당업자는 상동성은 상이한 집단 및 종족에서 마커/지표 단백질의 또 다른 대립형질 변이체를 포함함을 이해할 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리펩티드"는 아미노산 잔기가 공유 펩티드 결합에 의해 연결된, 일정 길이의 아미노산 쇄를 포함하는 펩티드, 단백질, 올리고펩티드 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 그러나, 아미노산 및/또는 펩티드 결합이 기능성 유사체, 예를 들면, 20개 유전자-암호화된 아미노산 중 하나, 예를 들면, 셀레노시스테인 이외의 다른 아미노산 잔기로 치환된, 상기 단백질/폴리펩티드의 펩티드유사체(peptidomimetic)도 또한 본 발명에 포함된다. 펩티드, 올리고펩티드 및 단백질은 폴리펩티드로 칭할 수 있다. 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 용어 "폴리펩티드"는 또한 폴리펩티드의 변형, 예를 들면, 글리코실화, 아세틸화, 포스포릴화 등을 말하며, 이들을 배제하지 않는다. 상기 변형은 기본 텍스트 및 보다 상술된 모노그래프에 뿐만 아니라 방대한 연구 문헌에 잘 기술되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "치료하는" 및 "치료"는 질환의 중증도의 개선, 호전, 감소, 또는 질환의 시간 과정 또는 그의 임의의 변수 또는 증상에서의 감소를 말한다. 바람직하게는, 상기 환자는 인간 환자이며, 치료될 질환은 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암이다. 상기 환자의 "평가하는" 또는 "평가"라는 용어는 뉴로필린의 발현 수준을 측정하고/하거나, 전이성 대장암으로 진단된 환자에서 설정된 대조군 수준에 대한 상기 마커/지표 단백질의 발현 수준을 기준으로 상기 환자를 선별하는 방법에 관한 것이다.
전술한 방법 이외에, 본 발명은 또한 뉴로필린의 발현 수준을 평가하기 위한 또 다른 면역조직화학 방법, 예를 들면, 웨스턴 블로팅(Western blotting) 및 ELISA-기본 검출을 포함한다. 당해 분야에서 인지되듯이, 본 발명의 마커/지표 단백질의 발현 수준은 또한 노던 블로팅(Nothern blotting), 실시간 PCR 및 RT PCR과 같이, 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 mRNA 수준에서 평가될 수 있다. 면역조직화학- 및 mRNA-기본 검출 방법 및 시스템은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며, 표준 교재, 예를 들면, 문헌[Lottspeich, Bioanalytik, Spektrum Akademisher Verlag, 1998]) 또는 문헌[Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, U.S.A., 2001]으로부터 추론될 수 있다. 기술된 방법은, 예컨대 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓고 있거나 진단된 유사한 상황의 집단에서 설정된 대조군 수준에 대한 환자 또는 환자군으로부터의 뉴로필린의 발현 수준, 예컨대 종양 특이적 발현 수준을 측정하는데 특히 유용하다.
뉴로필린의 발현 수준은 또한 면역응집억제(immunoagglutination), 면역침전(예를 들면, 면역확산, 면역전기영동, 면역 고정), 웨스턴 블로팅 기술(예를 들면, (동일반응계내) 면역조직화학, (동일반응계내) 면역세포화학, 친화크로마토그래피, 효소 면역분석) 등의 이점을 취함으로써 단백질 수준에 대해 측정될 수 있다. 용액중 정제된 폴리펩티드의 양은 또한 물리적 방법, 예를 들면, 광도측정에 의해 측정될 수 있다. 혼합물중 특정 폴리펩티드를 정량화하는 방법은 통상적으로, 예를 들면, 항체의 특이적 결합을 필요로 한다. 항체의 특이성을 이용하는 특이적 검출 및 정량화 방법은, 예를 들면, 면역조직화학(동일반응계내)을 포함한다. 예를 들면, 세포 또는 조직내 본 발명의 마커/지표 단백질(예컨대, NRP-1, NRP-2 및/또는 이의 변이체, 동족체 또는 절두체)의 농도/양은 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)에 의해 측정될 수 있다. 다르게는, 웨스턴 블롯 분석 또는 면역조직화학 염색을 수행할 수 있다. 웨스턴 블로팅은 전기영동에 의한 단백질 혼합물의 분리와 항체를 사용한 특이적 검출을 결합시킨다. 전기영동은 2D 전기영동과 같이 다차원성일 수 있다. 통상적으로, 폴리펩티드는 한 차원으로 그의 겉보기 분자량 및 다른 방향으로 그의 등전점에 의해 2D 전기영동으로 분리된다.
상기 언급한 바와 같이, 본 발명에 따른 마커/지표 단백질의 감소된 발현은 또한 뉴로필린(본원에 기술되고 정의됨)에 상응하는 유전자의 감소된 발현으로 반영될 수 있다. 그러므로, 번역전 유전자 산물(예를 들면, 접합, 비접합 또는 부분 접합 mRNA)의 정량적 평가가 상응하는 유전자의 발현을 평가하기 위해 수행될 수 있다. 당업자는 상기와 관련하여 사용될 표준 방법을 인지하거나 표준 교재(예를 들면, 상기 인용한 샘브룩 등의 문헌(2001))로부터 이들 방법을 추론할 수 있다. 예를 들면, 뉴로필린을 암호화하는 mRNA의 각각의 농도/양에 대한 정량적 데이터는 노던 블롯, 실시간 PCR 등에 의해 수득될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양상에서, 본 발명의 키트는 본 발명의 방법을 수행하기 위해 유리하게 사용될 수 있으며, 특히, 다양한 용도에, 예를 들면, 진단 분야에서 또는 연구 도구로서 사용될 수 있다. 본 발명 키트의 부품들은 개별적으로 바이알에, 또는 용기 또는 다중용기 단위에 함께 포장될 수 있다. 키트의 제조는 바람직하게는 당해 분야에 당업자에게 공지되어 있는 표준 절차를 따른다. 키트 또는 진단 조성물은, 예를 들면, 면역조직화학 기술을 사용하는 본원에 기술된 본 발명의 방법에 따라서, 뉴로필린(본원에 기술되고 정의됨)의 발현 수준을 검출하기 위해 사용될 수 있다.
베바시주맙의 사용으로 예시되었지만, 본 발명은 표준 화학치료 요법과 함께 사용하기 위해 당해 분야에 공지된 바와 같은 다른 혈관신생 억제제의 사용을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "혈관신생 억제제"는 혈관신생(예를 들면, 혈관을 형성하는 과정)을 변형시키는 모든 약제를 말하며, 혈관의 형성을 차단하고/하거나 혈관의 성장을 중단 또는 지연시키는 약제를 포함한다. 혈관신생 억제제의 비제한적인 예로는, 베바시주맙 이외에, 페가프타닙, 서니티닙, 소라페닙 및 바탈라닙이 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에 따라 사용하기 위한 혈관신생 억제제는 베바시주맙이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "베바시주맙"은 미국, 유럽 및 일본으로 이루어진 국가의 군으로부터 선택된 나라 또는 영토에서 동일 또는 유사생물(biosimilar) 의약품으로서 판매 허가를 받기 위해 필요한 필요조건들을 충족시키는, 모든 상응하는 항-VEGF 항체 또는 항-VEGF 항체 단편을 포함한다.
본원에 기술된 검출 방법에 사용하기 위해, 당업자는 본 발명에 포함되는 폴리펩티드 또는 올리고뉴클레오티드를 표지화하는 능력을 갖는다. 당해 분야에서 통상적으로 실시되듯이, IHC 방법에 사용하기 위한 mRNA 수준 및/또는 항체 또는 항체 단편을 검출하는데 사용하기 위한 하이브리드화 프로브는 당해 분야에 공지된 표준 방법에 따라 표지화되고 가시화될 수 있다. 통상적으로 사용되는 시스템의 비제한적인 예로는 방사성표지, 효소 표지, 형광성 태그, 비오틴-아비딘 복합체, 화학발광 등의 사용이 포함된다.
당업자, 예를 들면, 주치의는 본원에서 선택되고 정의된 환자/환자군에게 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 용이하게 투여할 수 있다. 특정 맥락에서, 주치의는 그/그녀의 전문적 경험에 따라 베바시주맙 및 화학치료 요법에 대한 투여 계획을 수정, 변화 또는 변형할 수 있다. 그러므로, 본 발명의 특정 양상에서, 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 사용하여 위암을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 환자의 치료 또는 치료 효과의 개선(즉, 무진행 생존율 또는 전체 생존율)을 위한 방법이 제공되는데, 이때 상기 환자/환자군은 위암, 특히 위 또는 GEJ의 선암을 앓고/거나 진단된 환자에서 설정된 대조군 수준에 비해 감소된 뉴로필린의 발현 수준을 나타내는 생물학적 샘플(특히 위 조직 절제물, 위 조직 생검물 및/또는 전이성 병변)의 평가에서 특징지어진다. 본 발명은 또한 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓거나 앓는 것으로 의심되는 환자의 치료를 위한 약학 조성물의 제조에 있어서 베바시주맙의 용도를 제공하며, 이때 환자는 본원에 개시된 단백질 마커/지표 상태(즉, 위암, 특히 위 또는 위식도 접합부("GEJ")의 선암을 앓는 환자에서 설정된 대조군 수준에 비해 감소된 뉴로필린 발현 수준)에 의해 선택되거나 특징지어진다.
실시예
전이성 또는 수술불가능한, 국소 진행된 위 또는 GEJ의 선암의 치료를 위한 제1선 카페시타빈(5-플루오로우라실은 카페시타빈이 사용금지된 경우에 허용되었다)/시스플라틴 병용 화학치료 요법에 베바시주맙을 추가한 결과를 비교하는 무작위 제3상 연구(아바가스트 연구, 문헌[Kang et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28:18s (suppl. abstr. LBA4007)]("Kang") 참조)에 참여한 환자로부터 조직 샘플을 수거하였다. 혈관신생 및 종양형성과 관련된 바이오마커에 대한 연구로부터 전체 환자 집단에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 뉴로필린의 발현 수준이 개선된 전체 생존율 및/또는 무진행 생존율을 나타냄이 밝혀졌다.
환자 및 면역조직화학 방법
총 774명의 환자가 아바가스트 연구에 참여하였으며, 상기 참가자중 629 내지 727명의 종양 샘플이 특이적인 바이오마커에 따라 변하는 바이오마커 분석에 이용가능하였다. 치료 암스(arms)의 균형을 맞추었다. 약 95%의 환자가 전이성이었다. 약 2/3의 환자는 남성이었고, 49%는 아시아/태평양 출신이었고, 32%는 유럽 출신이었고, 19%는 아메리카 출신이었다(상기 "Kang" 문헌 참조).
조직 샘플은 조직 블록 또는 사전에 준비된 슬라이드로서 이용가능하였다. 면역조직화학 분석은 포르말린-고정 파라핀-함침 조직 샘플의 5㎛ 박편(블록의 경우) 또는 사전에 준비된 슬라이드상에서 수행하였다. 탈파라핀화 및 재수화 후, 벤치마크(Benchmark)-XT(벤타나(Ventana), 미국 애리조나주 투싼 소재)에서 PT 모듈 또는 CC1 완충제중에서 95℃에서 30분 동안 시트레이트(pH 6.0) 완충제를 사용하여 항원 검색을 수행하였다.
뉴로필린을 비롯한 초기 바이오마커는 공지된 종양형성 및 혈관형성 활성에 기초하여 면역조직화학 분석을 위해 선택하였다. 특히, 뉴로필린을 산타 크루즈 바이오테크놀로로지 인코포레이티드(산타 크루즈, 미국 캘리포니아주 소재)에서 시판중인 항-인간 뉴로필린 뮤린 단클론성 항체를 사용하여 분석하였다.
박편을 오토스테이너(Autostainer) 또는 벤치마크-XT상에서 염색하고, 1차 항체를 1시간 동안 항온처리하였다. 특히 산타 크루즈 항체의 경우, 이러한 항-뉴로필린 항체를 1/50 희석액으로 사용하였다. 1차 항체의 결합을 엔비젼(Envision) 시스템(다코(DAKO), 덴마크 글로스트럽 소재) 또는 울트라뷰(Ultraview)(벤타나, 미국 애리조나주 투싼 소재)를 사용하여 가시화하였다. 모든 박편들을 메이어(Mayer) 헤마톡실린으로 대비염색하였다.
정확성, 특이성, 선형성 및 정밀성(재현성 및 반복성)을 나타내는 타당성확인 보고서(validation report)가 각각의 IHC 분석을 위해 생성되었다. 외부 대조군 슬라이드 및 내부 대조군 요소들의 염색이 입증되었다.
통계적 분석
바이오마커의 전체적 분포는 종양 마커에 대한 H-스코어를 이용하여 기술하였다. 시험한 마커의 수는 제한되었으며, 각각은 생물학적 이유에 의해 뒷받침되었으며; 중복 시험에 대해 공식적인 보정은 없었다. 단백질 발현 수준에 대해 선험적 컷오프를 이용하였다: 중간값(미만, 초과) 및 사분위수(≤25, 25<x≤50, 50<x≤75, >75).
치료 효과는 바이오마커 수준에 의해 정의된 환자들의 아군으로부터 평가하였다. 전체 생존율("OS") 및/또는 무진행 생존율("PFS")을 1차 종말점으로 선택하였으며, 1차 묘사 분석은 아군 분석을 이용하여 수행하였다. 바이오마커 상호작용(중간 컷오프)에 의한 치료 시험은 또한 2차 분석을 제공하였다.
결과
종양 마커
뉴로필린에 대한 종양 샘플의 분석의 결과를 하기 표 1에 제공한다.
아바가스트 샘플의 IHC 분석에 의해 측정된 뉴로필린 H 스코어
PI + CapC
N=387		 Bv7.5 + CapC
N=387		 모든 환자
N=774
n 335 344 679
기하 평균 35 38 36
산술 평균 85 86 86
SE 3.1 3.1 2.2
SD 57.0 57.8 57.4
Min - Max 0 - 210 0 - 250 0 - 250
25번째 백분위수 40 40 40
중간값 90 90 90
75번째 백분위수 120 118 120
CV(%) 67 67 67
Min의 수 41 33 74
Max의 수 1 1 1
100% 염색을 갖는 수 118 114 232
후속 분석에 사용된 뉴로필린 발현의 중간값 H 스코어는 90이었고, 25번째 및 75번째 백분위수 스코어는 각각 40 및 120이었다.
전체 생존율과의 바이오마커 상관관계
위험 비를 중간값 또는 사분위수 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 환자의 전체 생존율에 대해 측정하였다.
중간값 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 아바가스트 환자의 전체 생존율에 대한 위험 비
뉴로필린 H 스코어 N 하부 신뢰 한계 위험 비 추정치 상부 신뢰 한계
≤중간값 350 0.59 0.75 0.97
>중간값 329 0.81 1.07 1.40
사분위수 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 아바가스트 환자의 전체 생존율에 대한 위험 비
뉴로필린 H 스코어 N 하부 신뢰 한계 위험 비 추정치 상부 신뢰 한계
≤P25 186 0.48 0.68 0.96
P25< 및 ≤P50 164 0.57 0.83 1.19
P50< 및 ≤P75 184 0.67 0.97 1.42
>P75 145 0.79 1.19 1.78
계산된 위험 비는 전체 생존율이 표준 화학치료와 함께 베바시주맙을 투여하는 경우, 뉴로필린의 비교적 감소된 종양 특이적 발현을 나타내는 환자에서 개선됨을 나타낸다. 특히, 표 2에서, 낮은 종양 특이적 뉴로필린 발현(≤중간값)을 갖는 환자의 부분집합에서의 치료 위험 비의 95% 신뢰 구간의 상부 경계는 1 미만이다. 이는 환자의 아군에서 관찰된 치료 효과(전체 생존율)의 통계학적 관련성을 지지한다.
전체 생존율에 관해 베바시주맙 치료와 뉴로필린 발현을 관련짓는 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선이 도 1(중간 컷오프)에 제공된다. 위험 비에서 표시되는, 베바시주맙이 화학치료에 추가되는 경우 비교적 낮은 뉴로필린 발현을 갖는 환자에 대한 전체 생존율의 개선은 또한 도 1에서 가시적이다. 중간값 전체 생존율은 중간값 초과의 종양 특이적 뉴로필린 발현을 갖는 환자에 대한 단지 0.8개월에 비해, 비교적 낮은 종양 특이적 뉴로필린 발현(≤중간값)을 갖는 환자에서 1.8개월만큼 개선되었다. 이러한 결과는 치료 효과(전체 생존율)가 비교적 낮은 수준의 뉴로필린을 갖는 환자의 부분집합에서 개선됨을 증명한다.
무진행 생존율과의 바이오마커 상관관계
위험 비를 중간값 또는 사분위수 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 환자의 질병 진행 또는 사망까지의 시간에 대해 측정하였다.
중간값 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 아바가스트 환자의 질병 진행 또는 사망까지의 시간에 대한 위험 비
뉴로필린 H 스코어 N 하부 신뢰 한계 위험 비 추정치 상부 신뢰 한계
≤중간값 350 0.53 0.68 0.87
>중간값 329 0.62 0.80 1.05
사분위수 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 아바가스트 환자의 질병 진행 또는 사망까지의 시간에 대한 위험 비
뉴로필린 H 스코어 N 하부 신뢰 한계 위험 비 추정치 상부 신뢰 한계
≤P25 178 0.51 0.71 0.98
P25< 및 ≤P50 160 0.47 0.68 0.98
P50< 및 ≤P75 179 0.50 0.72 1.03
>P75 139 0.61 0.92 1.37
계산된 위험 비는 무진행 생존율이 표준 화학치료와 함께 베바시주맙을 투여하는 환자에서 뉴로필린의 종양 특이적 발현이 감소됨에 따라 개선됨을 나타낸다. 표 4에서, 낮은 종양 특이적 뉴로필린 발현(≤중간값)을 갖는 환자의 부분집합에서의 치료 위험 비의 95% 신뢰 구간의 상부 경계는 1 미만이다. 이는 환자의 아군에서 관찰된 치료 효과(무진행 생존율)의 통계학적 관련성을 지지한다.
사분위수 뉴로필린 H 스코어에 의해 분리된 아바가스트 환자의 질병 진행 또는 사망까지의 시간에 대한 위험 비(추가 분석)
뉴로필린 H 스코어 N 하부 신뢰 한계 위험 비 추정치 상부 신뢰 한계
≤P25 186 0.51 0.71 0.98
P25< 및 ≤P50 164 0.47 0.68 0.98
P50< 및 ≤P75 184 0.51 0.73 1.05
>P75 145 0.60 0.89 1.33
표 5는 주요 프로토폴 위반을 갖는 환자를 제외한 사전-프로토콜 집단에서 생성되었다. 표 6은 모든 무작위 환자를 포함하는 치료의향(intent-to-treat) 집단에서 생성되었다. 따라서, 표 6이 더욱 정확한 분석을 제공한다.
무진행 생존율에 관해 베바시주맙 치료와 뉴로필린 발현을 관련짓는 카플란-마이어 곡선이 도 2(중간 컷오프)에 제공된다. 위험 비에서 표시되는, 베바시주맙이 화학치료에 추가되는 경우 비교적 낮은 뉴로필린 발현을 갖는 환자에 대한 무진행 생존율의 개선은 또한 도 2에서 가시적이다. 중간값 무진행 생존율은 중간값 초과의 종양 특이적 뉴로필린 발현을 갖는 환자에 대한 단지 1.3개월에 비해, 비교적 낮은 종양 특이적 뉴로필린 발현(≤중간값)을 갖는 환자에서 2.1개월만큼 개선되었다. 이러한 결과는 치료 효과(무진행 생존율)가 비교적 낮은 수준의 뉴로필린을 갖는 환자의 부분집합에서 개선됨을 증명한다.
SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Neuropilin as a Biomarker for Bevacizumab Combination Therapies <130> S2557 PCT S3 <140> PCT/EP2011/063932 <141> 2011-08-12 <150> EP10172812.9 <151> 2010-08-13 <160> 1 <170> BiSSAP 1.0 <210> 1 <211> 923 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SOURCE <222> 1..923 <223> /mol_type="protein" /organism="Homo sapiens" <400> 1 Met Glu Arg Gly Leu Pro Leu Leu Cys Ala Val Leu Ala Leu Val Leu 1 5 10 15 Ala Pro Ala Gly Ala Phe Arg Asn Asp Lys Cys Gly Asp Thr Ile Lys 20 25 30 Ile Glu Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ser Pro Gly Tyr Pro His Ser Tyr 35 40 45 His Pro Ser Glu Lys Cys Glu Trp Leu Ile Gln Ala Pro Asp Pro Tyr 50 55 60 Gln Arg Ile Met Ile Asn Phe Asn Pro His Phe Asp Leu Glu Asp Arg 65 70 75 80 Asp Cys Lys Tyr Asp Tyr Val Glu Val Phe Asp Gly Glu Asn Glu Asn 85 90 95 Gly His Phe Arg Gly Lys Phe Cys Gly Lys Ile Ala Pro Pro Pro Val 100 105 110 Val Ser Ser Gly Pro Phe Leu Phe Ile Lys Phe Val Ser Asp Tyr Glu 115 120 125 Thr His Gly Ala Gly Phe Ser Ile Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Arg Gly 130 135 140 Pro Glu Cys Ser Gln Asn Tyr Thr Thr Pro Ser Gly Val Ile Lys Ser 145 150 155 160 Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro Asn Ser Leu Glu Cys Thr Tyr Ile 165 170 175 Val Phe Val Pro Lys Met Ser Glu Ile Ile Leu Glu Phe Glu Ser Phe 180 185 190 Asp Leu Glu Pro Asp Ser Asn Pro Pro Gly Gly Met Phe Cys Arg Tyr 195 200 205 Asp Arg Leu Glu Ile Trp Asp Gly Phe Pro Asp Val Gly Pro His Ile 210 215 220 Gly Arg Tyr Cys Gly Gln Lys Thr Pro Gly Arg Ile Arg Ser Ser Ser 225 230 235 240 Gly Ile Leu Ser Met Val Phe Tyr Thr Asp Ser Ala Ile Ala Lys Glu 245 250 255 Gly Phe Ser Ala Asn Tyr Ser Val Leu Gln Ser Ser Val Ser Glu Asp 260 265 270 Phe Lys Cys Met Glu Ala Leu Gly Met Glu Ser Gly Glu Ile His Ser 275 280 285 Asp Gln Ile Thr Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Thr Asn Trp Ser Ala Glu 290 295 300 Arg Ser Arg Leu Asn Tyr Pro Glu Asn Gly Trp Thr Pro Gly Glu Asp 305 310 315 320 Ser Tyr Arg Glu Trp Ile Gln Val Asp Leu Gly Leu Leu Arg Phe Val 325 330 335 Thr Ala Val Gly Thr Gln Gly Ala Ile Ser Lys Glu Thr Lys Lys Lys 340 345 350 Tyr Tyr Val Lys Thr Tyr Lys Ile Asp Val Ser Ser Asn Gly Glu Asp 355 360 365 Trp Ile Thr Ile Lys Glu Gly Asn Lys Pro Val Leu Phe Gln Gly Asn 370 375 380 Thr Asn Pro Thr Asp Val Val Val Ala Val Phe Pro Lys Pro Leu Ile 385 390 395 400 Thr Arg Phe Val Arg Ile Lys Pro Ala Thr Trp Glu Thr Gly Ile Ser 405 410 415 Met Arg Phe Glu Val Tyr Gly Cys Lys Ile Thr Asp Tyr Pro Cys Ser 420 425 430 Gly Met Leu Gly Met Val Ser Gly Leu Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr 435 440 445 Ser Ser Asn Gln Gly Asp Arg Asn Trp Met Pro Glu Asn Ile Arg Leu 450 455 460 Val Thr Ser Arg Ser Gly Trp Ala Leu Pro Pro Ala Pro His Ser Tyr 465 470 475 480 Ile Asn Glu Trp Leu Gln Ile Asp Leu Gly Glu Glu Lys Ile Val Arg 485 490 495 Gly Ile Ile Ile Gln Gly Gly Lys His Arg Glu Asn Lys Val Phe Met 500 505 510 Arg Lys Phe Lys Ile Gly Tyr Ser Asn Asn Gly Ser Asp Trp Lys Met 515 520 525 Ile Met Asp Asp Ser Lys Arg Lys Ala Lys Ser Phe Glu Gly Asn Asn 530 535 540 Asn Tyr Asp Thr Pro Glu Leu Arg Thr Phe Pro Ala Leu Ser Thr Arg 545 550 555 560 Phe Ile Arg Ile Tyr Pro Glu Arg Ala Thr His Gly Gly Leu Gly Leu 565 570 575 Arg Met Glu Leu Leu Gly Cys Glu Val Glu Ala Pro Thr Ala Gly Pro 580 585 590 Thr Thr Pro Asn Gly Asn Leu Val Asp Glu Cys Asp Asp Asp Gln Ala 595 600 605 Asn Cys His Ser Gly Thr Gly Asp Asp Phe Gln Leu Thr Gly Gly Thr 610 615 620 Thr Val Leu Ala Thr Glu Lys Pro Thr Val Ile Asp Ser Thr Ile Gln 625 630 635 640 Ser Glu Phe Pro Thr Tyr Gly Phe Asn Cys Glu Phe Gly Trp Gly Ser 645 650 655 His Lys Thr Phe Cys His Trp Glu His Asp Asn His Val Gln Leu Lys 660 665 670 Trp Ser Val Leu Thr Ser Lys Thr Gly Pro Ile Gln Asp His Thr Gly 675 680 685 Asp Gly Asn Phe Ile Tyr Ser Gln Ala Asp Glu Asn Gln Lys Gly Lys 690 695 700 Val Ala Arg Leu Val Ser Pro Val Val Tyr Ser Gln Asn Ser Ala His 705 710 715 720 Cys Met Thr Phe Trp Tyr His Met Ser Gly Ser His Val Gly Thr Leu 725 730 735 Arg Val Lys Leu Arg Tyr Gln Lys Pro Glu Glu Tyr Asp Gln Leu Val 740 745 750 Trp Met Ala Ile Gly His Gln Gly Asp His Trp Lys Glu Gly Arg Val 755 760 765 Leu Leu His Lys Ser Leu Lys Leu Tyr Gln Val Ile Phe Glu Gly Glu 770 775 780 Ile Gly Lys Gly Asn Leu Gly Gly Ile Ala Val Asp Asp Ile Ser Ile 785 790 795 800 Asn Asn His Ile Ser Gln Glu Asp Cys Ala Lys Pro Ala Asp Leu Asp 805 810 815 Lys Lys Asn Pro Glu Ile Lys Ile Asp Glu Thr Gly Ser Thr Pro Gly 820 825 830 Tyr Glu Gly Glu Gly Glu Gly Asp Lys Asn Ile Ser Arg Lys Pro Gly 835 840 845 Asn Val Leu Lys Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile Ile Ala Met 850 855 860 Ser Ala Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Val Cys Gly Val Val Leu Tyr 865 870 875 880 Cys Ala Cys Trp His Asn Gly Met Ser Glu Arg Asn Leu Ser Ala Leu 885 890 895 Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Val Asp Gly Val Lys Leu Lys Lys Asp 900 905 910 Lys Leu Asn Thr Gln Ser Thr Tyr Ser Glu Ala 915 920

Claims (20)

  1. (a) 환자 샘플에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) 위암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 수준의 뉴로필린을 갖는 환자에게 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 투여하는 단계
    를 포함하는, 화학치료 요법에 베바시주맙을 추가함으로써 위암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하는 방법.
  2. 위암이 의심되거나 위암에 걸리기 쉬운 환자로부터의 샘플에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 화학치료 요법에 베바시주맙 치료의 추가에 대해 반응하거나 민감한 환자를 확인하기 위한 시험관내 방법으로서, 위암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 수준의 뉴로필린이 상기 화학치료 요법으로의 베바시주맙의 추가에 대한 환자의 민감성을 나타내는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    치료 효과가 전체 생존율인 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    치료 효과가 무진행 생존율인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항중 어느 한 항에 있어서,
    위암이 위 선암 또는 위식도 접합부 선암인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항중 어느 한 항에 있어서,
    뉴로필린 발현 수준이 면역조직화학 방법(IHC)에 의해 검출되는 방법.
  7. 제1항 내지 제6항중 어느 한 항에 있어서,
    샘플이 위 조직 절제물 또는 위 조직 생검물인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항중 어느 한 항에 있어서,
    화학치료 요법이 카페시타빈-계 화학치료 요법 또는 5-플루오로우라실-계 화학치료 요법인 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    카페시타빈-계 화학치료 요법이 시스플라틴과 병용되는 카페시타빈의 요법인 방법.
  10. 제8항에 있어서,
    5-플루오로우라실-계 화학치료 요법이 시스플라틴과 병용되는 5-플루오로우라실의 요법인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항중 어느 한 항에 있어서,
    환자가 하나 이상의 항암 치료법과 병행치료되는 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    항암 치료법이 방사선인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 있어서,
    뉴로필린의 발현 수준이 수술전보조(neoadjuvant) 또는 보조 치료법 이전에 측정되는 방법.
  14. 뉴로필린의 발현 수준을 측정할 수 있는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 포함하는, 제1항 내지 제13항중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하는데 유용한 키트.
  15. 제1항 내지 제13항중 어느 한 항에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하기 위한 올리고뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 용도.
  16. 뉴로필린의 발현 수준을 측정할 수 있는 폴리펩티드를 포함하되, 상기 폴리펩티드가 면역조직화학 방법에 사용하기에 적합하고/하거나 뉴로필린에 특이적인 항체인 제14항에 따른 키트 또는 제15항에 따른 용도.
  17. (a) 환자 샘플에서 뉴로필린의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) 위암을 앓는 환자에서 측정된 대조군 수준에 비해 감소된 수준의 뉴로필린을 갖는 환자에게 화학치료 요법과 함께 베바시주맙을 투여하는 단계
    를 포함하는, 위암을 앓는 환자의 치료 효과를 개선하기 위한 베바시주맙의 용도.
  18. 제17항에 있어서,
    치료 효과가 전체 생존율인 용도.
  19. 제17항에 있어서,
    치료 효과가 무진행 생존율인 용도.
  20. 제17항 내지 제19항중 어느 한 항에 있어서,
    위암이 위 선암 및/또는 위식도 접합부 선암인 용도.
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