CN103041400B - 负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 - Google Patents
负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103041400B CN103041400B CN201210353256.1A CN201210353256A CN103041400B CN 103041400 B CN103041400 B CN 103041400B CN 201210353256 A CN201210353256 A CN 201210353256A CN 103041400 B CN103041400 B CN 103041400B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gamma
- polyglutamic acid
- chitosan
- antibacterial peptide
- composite nanoparticle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 title claims abstract description 112
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 title claims abstract description 91
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 75
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 title abstract description 10
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 title abstract description 10
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 title abstract description 10
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 title abstract 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 12
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 claims description 6
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 108700022109 ropocamptide Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 abstract description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 6
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 239000004567 concrete Substances 0.000 description 3
- 229920000554 ionomer Polymers 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108700022290 poly(gamma-glutamic acid) Proteins 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035806 respiratory chain Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述制备方法具体包括如下步骤：（1）将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.01~10.0mg/mL的抗菌肽水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液；（2）取γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液滴于壳聚糖醋酸水溶液中，所述壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖浓度为0.5~5.0mg/mL，醋酸体积浓度为1~3%，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，离心，取沉淀冷冻干燥，即得负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。本发明制得的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子能减少抗菌肽的初期突释，有效延长药物的释放时间，达到高效使用抗菌肽的目的。
Description
（一）技术领域
本发明涉及一种长效安全的抗菌纳米材料的制备方法，具体涉及一种负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，属于医药工程技术领域。
（二）背景技术
抗菌肽又称抗微生物肽或肽抗生素，在动植物体内分布广泛，是天然免疫防御系统的一部分。抗菌肽不仅有广谱抗菌能力，而且对真菌、病毒及癌细胞也有作用。近年来，由于药物的滥用，药物残留和细菌耐药性等问题日渐严重，从而引发了人们对食品和环境的关注，越来越多的国家开始呼吁禁止滥用抗生素。而抗菌肽因其独特的生物活性，以及不同于传统抗生素的特殊作用机理，已引起了人们极大的研究兴趣，成为分子生物学和生物医学研究领域的热点之一。
天然抗菌肽通常是由30多个氨基酸残基组成的碱性小分子多肽，水溶性好，分子量大约在1.8~4.0kDa之间。大部分抗菌肽具有热稳定性，在100℃下加热10~15min仍能够保持其活性。多数抗菌肽的等电点大于7，表现出较强的阳离子特征。研究表明，抗菌肽分子通过膜内分子间的位移而相互聚集在一起，从而在膜上形成离子通道，使膜蛋白凝集，使细菌不能保持正常的渗透压而死亡。也有科学家认为是通过影响细胞膜上的能量运转和代谢，从而损伤细胞呼吸链的功能而杀死细菌。总之，抗菌肽的作用机理的关键在于通过物理方式和细胞壁发生作用而产生的抗菌活性。抗菌肽只对原核生物细胞和真核生物病变细胞有抗菌作用，对正常的真核细胞不起作用。原因在于原核生物和正常真核生物的细胞膜结构不同，正常真核生物细胞膜中含有大量的胆固醇，而胆固醇的存在使膜结构趋于稳定。此外，高等动物存在高度发达的细胞骨架系统，其存在也抵抗了抗菌肽的作用。因此，抗菌肽天然就存在靶向性，其能够靶向抗菌，而不会破坏正常高等动物细胞。
但是，抗菌肽被广泛应用的障碍是天然资源有限，而化学合成和基因工程等合成技术还不够成熟，合成抗菌肽成本较高，所以目前在实际应用过程中，就需要一种高效的负载方式，来包埋抗菌肽。
高聚物纳米材料作为药物载体已经获得广泛研究。对于亲水性抗菌肽的包埋，可以选择利用壳聚糖和γ-聚谷氨酸(γ-PGA)作为载体材料，通过壳聚糖和γ-聚谷氨酸之间离子交联，制备纳米载体。这种纳米载体的优点是不使用有毒溶剂，制备条件较缓和。这可以避免有机溶剂的存在使抗菌肽不稳定，而发生降解。
目前，壳聚糖与γ-聚谷氨酸通过离子交联法制备纳米粒子的研究并不很多，现有的相关研究并没有获得既能够大大降低突释率，又能够获得缓慢药物释放的高效的药物包埋纳米体系。
（三）发明内容
本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，制得的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子能减少抗菌肽的初期突释，有效延长药物的释放时间，达到高效使用抗菌肽的目的。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，是以质量比为50：10~50：1~50的壳聚糖、γ-聚谷氨酸和抗菌肽为原料，首先是通过γ-聚谷氨酸与抗菌肽之间的离子交联作用制备成γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子，然后再利用壳聚糖与γ-聚谷氨酸之间存在离子交联作用，对制备的γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子进行再包裹，得到负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子；具体包括如下步骤：
（1）将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.01~10.0mg/mL的抗菌肽水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液；
（2）取步骤（1）得到的γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液滴于壳聚糖醋酸水溶液中，所述壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖浓度为0.5~5.0mg/ml，醋酸体积浓度为1~3%，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，不会出现沉淀和絮凝现象，然后离心，取沉淀冷冻干燥，即得负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
本发明中，所述的壳聚糖的脱乙酰度为85%～95%，分子量15～150万。在本发明中，壳聚糖的脱乙酰度和分子量对于纳米粒子的性能影响不大。
本发明中，所述的γ-聚谷氨酸纯度在92.0%与99%之间，分子量100~145万。
本发明中，所述的抗菌肽等电点大于7，可以是各类哺乳动物抗菌肽、两栖动物抗菌肽、昆虫动物抗菌肽、植物抗菌肽、细菌抗菌肽和病毒抗菌肽，本发明中主要以人源抗菌肽LL-37为例进行说明。
进一步，原料壳聚糖的浓度范围优选为2.5~5.0mg/mL、γ-聚谷氨酸浓度优选为2.5~5.0mg/mL、抗菌肽的浓度优选为0.4~10.0mg/mL；壳聚糖、γ-聚谷氨酸和抗菌肽的质量比优选为50：25~50：5~50。
本发明所使用的壳聚糖和γ-聚谷氨酸是可在体内降解的高分子医用材料，生物相容性好，对人体无害；而抗菌肽被包埋在壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子内，可以得到更好的保护，提高药物稳定性和利用率。本发明所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的载药量为18.6%~41.7%，包封率为30.2%~79.3%，60小时内的释放量为60.7%~97.1%。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明操作简单，制得的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子，可以调节抗菌肽的释放速度，减少给药次数，增加了抗菌肽治疗的安全性、高效性和可靠性，是比较优良的载药纳米体系。
（四）附图说明
图1中，A是实施例1负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的差示扫描量热分析谱图;B是实施例2负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的差示扫描量热分析谱图；C是实施例3负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。
图2中，A是实施例1负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片；B是实施例2负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片；C是实施例3负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。
图3中，A是实施例1负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图；B是实施例2负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图；C是实施例3负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图。
（五）具体实施方式
下面以具体实施例对本发明的技术内容做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此：
实施例1：所要制备的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子，具体重量百分比为：壳聚糖/γ-聚谷氨酸/抗菌肽=50/10/1，制备过程如下：
①壳聚糖溶液的配置：将壳聚糖（脱乙酰度为85%，分子量15万）50.0mg溶于100.0mL的1%的稀醋酸溶液中，室温下搅拌，配成0.5mg/mL的壳聚糖醋酸溶液。
②将0.5mg/mL的γ-聚谷氨酸（纯度92%，分子量100万）水溶液与0.01mg/mL的抗菌肽水溶液10：1体积比混合，不断搅拌至有微弱蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液；取适量γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液，滴于一定体积的浓度为0.5mg/mL的壳聚糖稀醋酸溶液中，使得壳聚糖/γ-聚谷氨酸/抗菌肽（质量比）=50/10/1并不断磁力搅拌，至有蓝色荧光出现，并稳定存在（记为A纳米溶液）；
③将A纳米溶液低温高速（4℃，20000g）离心，去掉上清液，沉淀冷冻干燥，得到干燥的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
图1的A是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。据图1的A是本发明的负载抗菌肽的γ-聚谷氨酸纳米粒子有较高的热稳定性，在220℃才出现分解，并且在150℃表示壳聚糖的玻璃化转变的台阶消失了，这正说明了壳聚糖与抗菌肽和γ-聚谷氨酸之间的作用较充分。图2的A是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。图3的A是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线。据图3的A所示，本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子药物突释较小，同时出现了明显的缓释特征。表1中对应的是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的理化性能，其中载药量和包封率都是三次实验取得的平均值，由表1可以看出实施例1中的样品的载药量和包封率均较低，分别为18.6%和30.2%。这种复合纳米粒子的粒径较大，为351.3nm，但是Zeta电位为+42.54mV，其纳米溶液非常稳定。
实施例2：所要制备的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子，具体重量百分比为：壳聚糖/γ-聚谷氨酸/抗菌肽=50/25/5，制备过程如下：
①壳聚糖溶液的配置：将壳聚糖（脱乙酰度为90%，分子量88万）250.0mg溶于100.0mL的2%的稀醋酸溶液中，室温下搅拌，配成2.5mg/mL的壳聚糖醋酸溶液。
②将2.5mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液（纯度95%，分子量120万）与0.4mg/mL的抗菌肽水溶液4：5体积比混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液；取适量γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液，滴于一定体积的浓度为2.5mg/mL的壳聚糖醋酸溶液，使得壳聚糖/γ-聚谷氨酸/抗菌肽（质量比）=50/25/5，并不断磁力搅拌，至有蓝色荧光出现，并稳定存在（记为B纳米溶液）；
③将B纳米溶液低温高速（4℃，20000g）离心，去掉上清液，沉淀冷冻干燥，即得到干燥的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
图1的B是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。图2的B是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。图2的B显示，所制得的纳米粒子以纳米束的形式出现，并且每个纳米束的尺寸都不大，约为100nm左右。图3的B是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图，据图3的B所示，本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的突释显著降低，同时抗菌肽的体外缓释效果更加显著。表1中对应的是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的理化性能，其中载药量和包封率有了显著增大，分别为41.7%和61.0%，平均粒径减小至92.6nm，Zeta电位为+38.69，其纳米溶液较稳定。
实施例3：所要制备的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子，具体重量百分比为：壳聚糖/γ-聚谷氨酸/抗菌肽=50/50/50，制备过程如下：
①壳聚糖溶液的配置：将壳聚糖（脱乙酰度为95%，分子量150万）500.0mg溶于100.0mL的3%的稀醋酸溶液中，室温下搅拌，配成5.0mg/mL的壳聚糖醋酸溶液。
②将5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液（纯度99%，分子量145万）与10.0mg/mL的抗菌肽水溶液2：1体积比混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液；取适量γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液，滴于一定体积的浓度为5.0mg/mL的壳聚糖醋酸溶液中，使得壳聚糖/γ-聚谷氨酸/抗菌肽（质量比）=50/50/50，并不断磁力搅拌，至有蓝色荧光稳定存在（记为C纳米溶液）；
③将C纳米溶液低温高速（4℃，20000g）离心，去掉上清液，沉淀冷冻干燥，得到干燥的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
图1的C是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。据图1的C所示，本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子有较高的热稳定性，其分解峰值温度与实施例2中的DSC曲线相比，没有显著的区别。图2的C是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。据图2的C所示，所制得的纳米粒子以纳米束的形式出现，并且每个纳米束的尺寸都较大，约为1000nm左右，每个纳米束中都聚集了很多小的纳米粒子，这应该是壳聚糖对γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子进行再包裹导致的。图3的C是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图，据图3的C所示，本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的药物突释比实施例2中的要大。表1中对应的是本发明的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的理化性能，由表1可以看出载药量和包封率分别达到34.8%和79.3%，平均粒径为703.6nm，Zeta电位为+25.44mV，其纳米溶液也能稳定存在。
表1
Claims (7)
1.一种负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述制备方法是以质量比为50：10~50：1~50的壳聚糖、γ-聚谷氨酸和抗菌肽为原料，具体包括如下步骤：
（1）将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.01~10.0mg/mL的抗菌肽水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液；
（2）取步骤（1）得到的γ-聚谷氨酸/抗菌肽复合纳米粒子溶液滴于壳聚糖醋酸水溶液中，所述壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖浓度为0.5~5.0mg/mL，醋酸体积浓度为1~3%，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，离心，取沉淀冷冻干燥，即得负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的壳聚糖的脱乙酰度为85%～95%，分子量15～150万。
3.根据权利要求1所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的γ-聚谷氨酸纯度在92.0%与99.0%之间，分子量100~145万。
4.根据权利要求1所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的抗菌肽是人源抗菌肽LL-37。
5.根据权利要求1~4之一所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，γ-聚谷氨酸水溶液的浓度为2.5~5.0mg/mL，抗菌肽水溶液的浓度为0.4~10.0mg/mL。
6.根据权利要求1~4之一所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖的浓度为2.5~5.0mg/mL。
7.根据权利要求1~4之一所述的负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于：控制原料壳聚糖、γ-聚谷氨酸和抗菌肽的质量比为50：25~50：5~50。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210353256.1A CN103041400B (zh) | 2012-09-20 | 2012-09-20 | 负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210353256.1A CN103041400B (zh) | 2012-09-20 | 2012-09-20 | 负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103041400A CN103041400A (zh) | 2013-04-17 |
| CN103041400B true CN103041400B (zh) | 2014-10-08 |
Family
ID=48054408
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210353256.1A Active CN103041400B (zh) | 2012-09-20 | 2012-09-20 | 负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103041400B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104306981B (zh) * | 2014-09-15 | 2017-05-10 | 安徽科技学院 | 抗幽门螺杆菌活性抗菌肽胃黏膜纳米粒给药系统制备方法 |
| CN104844839B (zh) * | 2015-03-23 | 2017-03-15 | 济南大学 | 一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备方法 |
| CN109172802A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-01-11 | 岭南师范学院 | 一种罗非鱼鱼鳃抗菌肽壳聚糖纳米粒及其制备方法和应用 |
| CN110054713A (zh) * | 2019-04-19 | 2019-07-26 | 同济大学 | 含抗菌肽的两亲性接枝共聚物及其制备方法和应用 |
| CN112064145B (zh) * | 2020-09-21 | 2022-07-15 | 曲阜师范大学 | 一种聚γ-谷氨酸/壳聚糖/纳米铜抗菌复合纤维的制备方法 |
| CN113337952B (zh) * | 2021-06-11 | 2022-11-04 | 菏泽市源林川服饰有限公司 | 一种超耐洗珊瑚绒面料及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102657843A (zh) * | 2012-06-05 | 2012-09-12 | 云南民族大学 | 抗菌肽组合物及其制备方法 |
-
2012
- 2012-09-20 CN CN201210353256.1A patent/CN103041400B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103041400A (zh) | 2013-04-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103041400B (zh) | 负载抗菌肽的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 | |
| CN103041377B (zh) | 负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 | |
| Zhao et al. | Long-term storage of lipid-like nanoparticles for mRNA delivery | |
| CN110623918B (zh) | 羧甲基壳聚糖/海藻酸钠纳米水凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN103110955B (zh) | 纳米药物载体、还原响应的纳米药物颗粒与纳米药物颗粒制剂及其制备方法 | |
| Chai et al. | Regenerative antibacterial hydrogels from medicinal molecule for diabetic wound repair | |
| Li et al. | Synthesis and characterization of chitosan quaternary ammonium salt and its application as drug carrier for ribavirin | |
| CN102688195B (zh) | 一种具有pH敏感性的包载盐酸阿霉素的壳聚糖羧甲基壳聚糖纳米缓释微粒的制备方法 | |
| Erdoğar et al. | Prolonged retention and in vivo evaluation of cationic nanoparticles loaded with Mitomycin C designed for intravesical chemotherapy of bladder tumours | |
| CN104225614B (zh) | 同载亲疏水生物分子的壳聚糖接枝聚乳酸复合微球及其制备方法 | |
| CN101744771A (zh) | 一种固体恩诺沙星纳米粒的制备方法 | |
| CN101991541B (zh) | 阿昔洛韦-壳聚糖纳米粒的制备方法 | |
| CN108096214B (zh) | 一种趋磁细菌量子点微胶囊及其制备方法 | |
| Cui et al. | A chitosan-based self-healing hydrogel for accelerating infected wound healing | |
| CN104399067A (zh) | 一种装载溶菌酶的壳聚糖微球兽药制剂及其制备方法 | |
| WO2023056717A1 (zh) | 一种功能丝素蛋白药物载体及其制备方法 | |
| Fang et al. | Glucose oxidase loaded thermosensitive hydrogel as an antibacterial wound dressing | |
| CN102836435A (zh) | 基于海藻酸钠的pH敏感型肝靶向复合纳米给药系统及制备方法 | |
| Yu et al. | Therapeutic nanoplatforms with bacteria-specific activation for directional transport of antibiotics | |
| CN109010840B (zh) | 一种两亲性生物可降解载药胶束的制备方法 | |
| CN103006546B (zh) | 包载难溶性药物的含碳纳米管温敏型凝胶的制备和应用 | |
| CN102516536A (zh) | 一种以两亲性壳聚糖为交联剂的聚乙烯亚胺衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN110960512B (zh) | 一种氨基酸-壳聚糖纳米载药系统、其制备方法及应用 | |
| CN108653197B (zh) | 一种羧甲基壳聚糖季铵盐温敏凝胶及其制备方法 | |
| CN105749293A (zh) | 一种含氧吨酮改性高分子药物及其制备方法以及作为制备抗菌药物上的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20161228 Address after: Hangzhou City, Zhejiang province 310036 Xiasha Higher Education Park forest Street No. 16 Patentee after: Hangzhou Normal University Qianjiang College Address before: Hangzhou City, Zhejiang province 310036 Xiasha Higher Education Park forest Street No. 16 Patentee before: Hangzhou Normal University Patentee before: Zhejiang Prov. Academy of Agricultural Sciences |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200709 Address after: Room 1207, building 4, Yuancheng times center, Qiantang New District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee after: Hangzhou Zanhe Agricultural Technology Co., Ltd Address before: Hangzhou City, Zhejiang province 310036 Xiasha Higher Education Park forest Street No. 16 Patentee before: HANGZHOU NORMAL UNIVERSITY QIANJIANG College |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20201224 Address after: 250101 y3-622, Wanda Plaza, high tech Zone, Jinan City, Shandong Province Patentee after: SHANDONG RUNTU ENERGY-SAVING ENVIRONMENTAL PROTECTION ENGINEERING Co.,Ltd. Address before: 310018 room 1207, building 4, Yuancheng times center, Qiantang New District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee before: Hangzhou Zanhe Agricultural Technology Co., Ltd |