CN103041377A - 负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：（1）将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.5~5.0mg/mL的溶菌酶水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；（2）取γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液滴于0.5~5.0mg/mL的壳聚糖醋酸水溶液中；再滴加浓度为0.5~5.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，得到负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。本发明操作简单，制得的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子可以调节溶菌酶释放速度，具有良好的热稳定性，增加了溶菌酶治疗的安全性、高效性和可靠性，是比较优良的载药纳米体系。
Description
（一）技术领域
本发明涉及一种长效安全的抗菌纳米材料的制备方法，具体涉及一种负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，属于医药工程技术领域。
（二）背景技术
溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中粘多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂，内容物溢出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，溶菌酶具有抗菌、消炎和抗病毒的作用，并且不产生耐药性，所以溶菌酶在一定程度上可以代替抗生素，具有较大的应用潜力。
口服给药要受到两种首过效应的影响，即胃肠道上皮细胞中酶系的降解、代谢及肝中各酶系的生物代谢。许多药物很大一部分因首过效应而代谢失效，如肽类和蛋白类药物等。为获得良好的治疗效果，通常不得不将口服给药改为注射等其它给药途径。由于通过注射途径的非靶向药物均匀分布在全身循环中，到达病灶之前，要经过同蛋白结合、排泄、代谢、分解等步骤，所以最终只有少量药物能达到病灶。靶向给药的目的就是提高靶区的药物浓度，从而提高药物的利用率、疗效以及降低药物的副作用，这一直是医药领域一项重要的研究课题。纳米药物载体的研究能有效地解决这些问题。
高聚物纳米材料作为药物载体已经获得广泛研究。其中合成的可生物降解高分子材料，如聚己内酯和聚乳酸等，由于其良好的生物相容性颇受关注。然而用聚己内酯和聚乳酸制备的纳米材料由于其疏水性，对于亲水性药物的输送效果不显著。因此，对于亲水性药物容菌酶的包埋，可以选择壳聚糖和γ-聚谷氨酸(γ-PGA)作为载体材料，通过壳聚糖和γ-聚谷氨酸之 间发生离子交联，制备纳米载体。这种纳米载体的优点是不使用有毒溶剂，制备条件较缓和。这可以避免有机溶剂的存在导致溶解酶不稳定，因为有机溶剂会使蛋白或肽类物质发生降解。
壳聚糖由于其独特的性质倍受人们关注。其中，壳聚糖来源丰富，并且有很好的抗菌性，是其备受关注的焦点。壳聚糖是甲壳素脱乙酰化的产物，通常脱乙酰度达到50%-95%之间就可以成为很好的壳聚糖。壳聚糖基本结构单元为壳二糖，壳聚糖是D-氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键结合而成的多糖，化学名为聚（2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖），是自然界中唯一存在的带正电的天然多糖，它无毒副作用，具有良好的生物相容性、生物可降解性、吸湿性和保湿性，有明显的抗菌抑菌作用，具有表面多孔结构，是良好的药物缓释剂和保水剂，其形成和结构式可表示为：
γ-PGA是由D-谷氨酸或L-谷氨酸通过α-氨基和γ-羧基形成γ-酰胺键连接而成。γ-PGA分子链上具有大量活性较高的游离侧链羧基，易于修饰和与药物的结合，形成稳定的复合物，可提供药物缓释性和靶向性，降低药物不良反应，从而提高药物疗效。此外γ-PGA具有良好的生物亲和性和生物降解性，不易产生蓄积和毒副作用。
目前，壳聚糖与γ-聚谷氨酸通过离子交联法制备纳米粒子的研究并不很多，到目前为止，并没有获得既能够大大降低药物突释率，又能够获得程序性梯度药物释放的药物包埋纳米体系。
（三）发明内容
本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，制得的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子能减少溶菌酶的初期突释，有效延长药物的释放时间，并达到程序性梯度释放。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，所述制备方法是以质量比为20：5~16：1~5：1~8的壳聚糖、γ-聚谷氨酸、三聚磷酸钠和溶菌酶为原料，首先是通过γ-聚谷氨酸与溶菌酶之间的离子交联作用制备成γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子，再利用壳聚糖与γ-聚谷氨酸之间存在离子交联作用，并借助少量三聚磷酸钠作为辅助离子交联剂对制得的γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子进行再包裹，得到负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子，具体包括如下步骤：
（1）将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.5~5.0mg/mL的溶菌酶水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；
（2）取步骤（1）得到的γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液滴于0.5~5.0mg/mL的壳聚糖醋酸水溶液中，所述壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖浓度为0.5~5.0mg/mL，醋酸体积浓度为1-3%；再滴加浓度为0.5~5.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，离心，取沉淀冷冻干燥，即得负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
进一步，本发明所述的壳聚糖的脱乙酰度为85%～95%，分子量15～150万。在本发明中，壳聚糖的脱乙酰度和分子量对于纳米粒子的性能影响不大。
进一步，本发明所述的γ-聚谷氨酸纯度在92.0%与99%之间，分子量100~145万。
进一步，原料壳聚糖、γ-聚谷氨酸、三聚磷酸钠和溶菌酶的质量比优选为20：12~16：3~5：4.8~8。
本发明所使用的壳聚糖和γ-聚谷氨酸是可在体内降解的医用高分子材料，生物相容性好，对人体无害；而将溶菌酶包埋在壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子内，可以得到更好的保护，提高溶菌酶的稳定性和利用率。本发明制得的负载容菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的载 药量为10.3%~22.4%，包封率为23.8%~76.5%，90小时内的释放量为30.2%~90.7%。
与现有技术相比，本发明操作简单，制得的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子可以调节溶菌酶释放速度,减少给药次数,具有良好的热稳定性，增加了溶菌酶治疗的安全性、高效性和可靠性，是比较优良的载药纳米体系。
（四）附图说明
图1中，A是实施例1负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的红外光谱图；B是实施例2负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子红外光谱图；C是实施例3负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子红外光谱图。
图2中，A是实施例1负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的差示扫描量热分析谱图;B是实施例2负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的差示扫描量热分析谱图；C是实施例3负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。
图3中，A是实施例1负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片；B是实施例2负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片；C是实施例3负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。
图4中，A是实施例1负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的扫描电镜照片；B是实施例2负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的扫描电镜照片；C是实施例3负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的扫描电镜照片。
图5中，A是实施例1负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图；B是实施例2负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图；C是实施例3负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图。
（五）具体实施方式
下面以具体实施例对本发明的技术内容做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此：
实施例1：所要制备的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子，具体重量比为：壳聚糖/γ-聚谷氨酸/溶菌酶/三聚磷酸钠=20/5/1/1，制备过程如下：
①壳聚糖溶液的配置：将壳聚糖（脱乙酰度为85%，分子量15万）50.0mg溶于100.0mL的1%的稀醋酸溶液中，室温下搅拌，配成0.5mg/mL的壳聚糖稀醋酸溶液。
②三聚磷酸钠的配制：将三聚磷酸钠5.0mg溶于10.0mL去离子水中，配成0.5mg/mL的三聚磷酸钠水溶液；
③将0.5mg/mL的γ-聚谷氨酸（纯度92%，分子量100万）水溶液与0.5mg/mL的溶菌酶水溶液5：1体积比混合，不断搅拌至有微弱蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；取适量γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液，滴于一定体积的浓度为0.5mg/mL的壳聚糖稀醋酸溶液中，再向其中滴加适量的0.5mg/mL三聚磷酸钠水溶液，使得壳聚糖/γ-聚谷氨酸/溶菌酶/三聚磷酸钠（质量比）=20/5/1/1并不断磁力搅拌，至有蓝色荧光出现，并稳定存在（记为A纳米溶液）；
④将A纳米溶液低温高速（4℃，20000g）离心，去掉上清液，沉淀冷冻干燥，得到干燥的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
图1的A是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的红外光谱图。图2的A是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的差示扫描量热分析谱图，据图2的A所示，本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子有较高的热稳定性，看不到明显的吸热分解峰。图3的A是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。图4的A是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的扫描电镜照片。图5的A是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线。据图5的A所示，本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子虽然药物突释还是较明显，但是出现了梯度药物释放的特征。表1中对应的是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的理化性能，其中载药量和包封率都是三次实验取得的平均值。由表1可以看出实施例1中的样品的载药量和包封率均较低，分别为10.3%和23.8%。虽然 纳米粒子的平均粒径较大，为609.9nm，但是Zeta电位为+45.87mV，因此制得的纳米溶液储存稳定。
实施例2：所要制备的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子，具体重量百分比为：壳聚糖/γ-聚谷氨酸/溶菌酶/三聚磷酸钠=20/12/4.8/3，制备过程如下：
①壳聚糖溶液的配置：将壳聚糖（脱乙酰度为90%，分子量88万）250.0mg溶于100.0mL的2%的稀醋酸溶液中，室温下搅拌，配成2.5mg/mL的壳聚糖醋酸溶液。
②三聚磷酸钠的配制：将三聚磷酸钠25.0mg溶于10.0mL去离子水中，配成2.5mg/mL的三聚磷酸钠水溶液；
③将2.5mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液（纯度95%，分子量120万）与2.5mg/mL的溶菌酶水溶液5：2体积比混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；取适量γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液，滴于一定体积的浓度为2.5mg/mL的壳聚糖醋酸溶液，再滴加适量的2.5mg/mL三聚磷酸钠水溶液，使得壳聚糖/γ-聚谷氨酸/溶菌酶/三聚磷酸钠（质量比）=20/12/4.8/3，并不断磁力搅拌，至有蓝色荧光出现，并稳定存在（记为B纳米溶液）；
④将B纳米溶液低温高速离心（4℃，20000g），去掉上清液，沉淀冷冻干燥，得到干燥的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
图1的B是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的红外光谱图。图2的B是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。据图2的B所示，本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子有较高的热稳定性，同时在155℃左右出现台阶，这可能是壳聚糖的玻璃化转变。图3的B是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。图4的B是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的扫描电镜照片。图5的B是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图。据图5的B所示，本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子具有较低的突释和良好的药物缓释效果，同时也显示出了梯度释放 特征。表1中对应的是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的理化性能，其中载药量和包封率有了显著增大，分别为17.4%和72.3%，平均粒径减小至244.9nm，Zeta电位为+40.18，其纳米溶液较稳定。
实施例3：所要制备的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸纳米粒子，具体重量百分比为：壳聚糖/γ-聚谷氨酸/溶菌酶/三聚磷酸钠=20/16/8/5，制备过程如下：
①壳聚糖溶液的配置：将壳聚糖（脱乙酰度为95%，分子量150万）500.0mg溶于100.0mL的3%的稀醋酸溶液中，室温下搅拌，配成5.0mg/mL的壳聚糖醋酸溶液。
②三聚磷酸钠的配制：将三聚磷酸钠50.0mg溶于10.0mL去离子水中，配成5.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液；
③将5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液（纯度99%，分子量145万）与5.0mg/mL的溶菌酶水溶液2：1体积比混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；取适量γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液，滴于一定体积的浓度为5.0mg/mL的壳聚糖醋酸溶液中，再滴加适量的5.0mg/mL三聚磷酸钠水溶液，使得壳聚糖/γ-聚谷氨酸/溶菌酶/三聚磷酸钠（质量比）=20/16/8/5，并不断磁力搅拌，至有蓝色荧光稳定存在（记为C纳米溶液）；
④将C纳米溶液低温高速离心（4℃，20000g），去掉上清液，沉淀冷冻干燥，得到干燥的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
图1的C是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的红外光谱图。图2的C是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的差示扫描量热分析谱图。据图2的C所示，本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子有较高的热稳定性，在190℃左右出现一个热转变台阶，这可能是壳聚糖的玻璃化转变，相比实施例2中的玻璃化转变温度有所提高，这可能是TPP与壳聚糖相互交联更加紧密所致。图3的C是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的透射电镜照片。图4的C是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的扫描电镜照片。图5的C是本发明的负载溶菌酶的 壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的体外释放曲线示意图。据图5的C所示，本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的药物突释明显减弱。表1中对应的是本发明的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的理化性能，由表1可以看出载药量和包封率进一步增大，分别达到22.4%和76.5%，平均粒径为292.2nm，Zeta电位为+33.21mV，其纳米溶液也能稳定存在。
表1
Claims (4)
1.一种负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述制备方法是以质量比为20：5~16：1~5：1~8的壳聚糖、γ-聚谷氨酸、三聚磷酸钠和溶菌酶为原料，具体包括如下步骤：
（1）将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.5~5.0mg/mL的溶菌酶水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；
（2）取步骤（1）得到的γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液滴于0.5~5.0mg/mL的壳聚糖醋酸水溶液中，所述壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖浓度为0.5~5.0mg/mL，醋酸体积浓度为1-3%；再滴加浓度为0.5~5.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，离心，取沉淀冷冻干燥，即得负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的壳聚糖的脱乙酰度为85%～95%，分子量15～150万。
3.根据权利要求1所述的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的γ-聚谷氨酸纯度在92.0%与99%之间，分子量100~145万。
4.根据权利要求1~3之一所述的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于原料壳聚糖、γ-聚谷氨酸、三聚磷酸钠和溶菌酶的质量比为20：12~16：3~5：4.8~8。
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104546725A (zh) * | 2014-12-16 | 2015-04-29 | 华东理工大学 | 一种载酶壳聚糖纳米颗粒的制备方法及其应用 |
| CN107929316A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-04-20 | 曲阜师范大学 | 一种铱纳米智能复合药物及其制备方法 |
| CN109172812A (zh) * | 2018-07-28 | 2019-01-11 | 浙江理工大学 | 一种口服溶菌酶微粒制剂的制备方法 |
| CN109432412A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-08 | 重庆医药高等专科学校 | 一种溶菌酶搽剂 |
| CN110878145A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-03-13 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | 秋葵提取物γ-聚谷氨酸凝胶纳米粒的制备方法 |
| CN110903501A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-03-24 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | γ-聚谷氨酸凝胶纳米粒的制备方法及其应用 |
| CN113768893A (zh) * | 2021-09-17 | 2021-12-10 | 曲阜师范大学 | 一种包埋预防和改善心血管疾病成分的微囊饮片及其制备方法 |
| CN115197030A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-10-18 | 上海农乐生物制品股份有限公司 | 蛋白桑在制备生物有机肥中的用途和方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1908019A (zh) * | 2006-08-17 | 2007-02-07 | 孝感学院 | 壳寡糖硫酸盐及其制备方法 |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1908019A (zh) * | 2006-08-17 | 2007-02-07 | 孝感学院 | 壳寡糖硫酸盐及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 《广州化工》 20120831 王亨缇等 gamma－聚谷氨酸 /壳聚糖负载紫杉醇复合纳米粒子的制备与研究 摘要，第59页右侧第3-12行，第61页右侧第4-8行 1-4 第40卷, 第16期 * |
| 侯国军等: "溶菌酶的特性及应用", 《浙江畜牧兽医》 * |
| 王亨缇等: "γ－聚谷氨酸 /壳聚糖负载紫杉醇复合纳米粒子的制备与研究", 《广州化工》 * |
| 邓倩莹: "缓释溶菌酶纳米微球/壳聚糖复合支架材料的制备及性能", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库，医药卫生科技辑》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104546725A (zh) * | 2014-12-16 | 2015-04-29 | 华东理工大学 | 一种载酶壳聚糖纳米颗粒的制备方法及其应用 |
| CN107929316A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-04-20 | 曲阜师范大学 | 一种铱纳米智能复合药物及其制备方法 |
| CN107929316B (zh) * | 2017-11-27 | 2020-10-09 | 曲阜师范大学 | 一种铱纳米复合药物及其制备方法 |
| CN109172812A (zh) * | 2018-07-28 | 2019-01-11 | 浙江理工大学 | 一种口服溶菌酶微粒制剂的制备方法 |
| CN109172812B (zh) * | 2018-07-28 | 2022-06-28 | 浙江理工大学 | 一种口服溶菌酶微粒制剂的制备方法 |
| CN109432412A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-03-08 | 重庆医药高等专科学校 | 一种溶菌酶搽剂 |
| CN110878145A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-03-13 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | 秋葵提取物γ-聚谷氨酸凝胶纳米粒的制备方法 |
| CN110903501A (zh) * | 2019-11-29 | 2020-03-24 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | γ-聚谷氨酸凝胶纳米粒的制备方法及其应用 |
| CN110903501B (zh) * | 2019-11-29 | 2022-04-15 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | γ-聚谷氨酸凝胶纳米粒的制备方法及其应用 |
| CN113768893A (zh) * | 2021-09-17 | 2021-12-10 | 曲阜师范大学 | 一种包埋预防和改善心血管疾病成分的微囊饮片及其制备方法 |
| CN115197030A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-10-18 | 上海农乐生物制品股份有限公司 | 蛋白桑在制备生物有机肥中的用途和方法 |
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