CN103040937B - 一种冠心宁脂质体注射液 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种冠心宁脂质体注射液，主要由丹参、川芎、磷脂酰甘油、胆固醇、吐温80、依地酸二钠和亚硫酸氢钠制成。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，疗效更显著。

Description

一种冠心宁脂质体注射液

技术领域

本发明涉及一种新型的冠心宁注射制剂，具体涉及一种冠心宁的脂质体注射液及制法，属于医药技术领域。

背景技术

冠心宁是近几年来常用的活血化瘀的中药制剂。冠心宁注射液由丹参、川芎两味中药组成，具有活血化瘀，通脉养心作用。川芎中的化学成分主要有生物碱如川芎嗪，酚性物质如阿魏酸、大黄酚和川芎酚等。川芎的药理作用主要通过钙的拮抗作用和清除自由基作用，对缺血性组织器官的损伤有明显的保护作用和改善作用，川芎通过抗血小板聚集、扩张血管、降低血糖粘稠度、调整TXA₂/PGI₂等作用而具有抗血栓作用。

丹参总酚酸对脑缺血和心肌缺血再灌注的损伤有保护作用，能减轻心肌梗死时的心肌缺血的程度和范围，减小梗死范围，可保护缺血心肌，对心肌缺血有治疗作用；它还具有缩小脑梗塞面积、减轻脑水肿的功效，离体研究发现其抗氧化作用极为明显；总酚酸类成分具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基等作用，其中含量最高的两个成分为丹酚酸A和B活性最强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用；进一步的研究表明丹酚酸类在抗肝损伤、抗动脉粥样硬化及细胞凋亡等方面也有显著活性。

现代医学研究表明：冠心宁能扩张血管，降低血压，增加冠脉血流量，缩短实验性心肌缺血持续时间；降低血粘度，改变红细胞膜的电荷，增加红细胞的变形能力；抑制凝血，抑制血小板合成前列腺素。抑制血小板粘附，聚集，延长血清凝血酶原时间，促进红细胞解聚，促进纤溶功能。临床上主要用于治疗支气管肺炎、冠心病、冠心病心绞痛、颈性眩晕、急性脑梗塞、血管性痴呆、早期脑梗死、慢性肺心病心衰、病毒性心肌炎、2型糖尿病、糖尿病并发缺血性脑卒中、糖尿病周围神经病变、2型糖尿病肾病、慢性支气管炎急性发作等。

标准WS3-B-3267-98公开了冠心宁注射液的制备方法，该方法采用水提取、两次乙醇沉淀的方法制备。

专利文献CN1631426A公开了一种冠心宁冻干粉针剂及其制备方法，从中药丹参、川芎中提取纯化的有效部位，与药用辅料混合，制备成冻干粉针剂；专利CN1634208A公开了一种注射用冠心宁及其制备方法，该方法是用丹参和川芎的有效部位加赋形剂经搅拌，溶解，滤过，并加注射用水及调节pH制备冻干粉针剂。

上述剂型虽然对辅料和方法进行了筛选，具有一定得优点；但是依然存在各种不足，例如药物的稳定性差，疗效不确切，不利于长期存放，生物利用度低，影响了临床应用。

脂质体（liposomes）最早是1965年被英国Banghan等作为研究生物膜的模型提出的。Banghan等发现，当磷脂分散在水中时形成多层囊泡，而且每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开。后来将这种由脂质双分子组成，内部为水相的闭合囊泡称为脂质体。

人们通过研究发现，脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放，提高药物靶向性，减少药物毒性和副作用，提高药物疗效。

如果能将冠心宁制成脂质体注射液，则有望克服现有的冠心宁注射液存在的一系列问题，提高药物的稳定性，延长药物在体内的保留时间，长久发挥药效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反应的发生率，改进治疗速度和治疗效果。

不过，制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的冠心宁脂质体是亟待解决的课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的冠心宁脂质体注射液，主要由丹参、川芎、磷脂酰甘油、胆固醇、吐温80、依地酸二钠和亚硫酸氢钠制成。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，疗效更显著。

本发明解决的技术方案如下：

本发明提供一种冠心宁脂质体注射液，其主要由丹参、川芎、磷脂酰甘油、胆固醇和吐温80制成。

本发明提供的冠心宁脂质体注射液，其规格为2ml和10ml。

本发明提供的冠心宁脂质体注射液，主要由以下重量份数比的成分制成：

本发明提供的冠心宁脂质体注射液，优选的重量组分为：

本发明还提供了一种冠心宁脂质体注射液的制备方法，包括如下步骤：

（1）称取处方量的丹参和川芎，加水煎煮三次，第一次2小时，第二、第三次各1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，用乙醇沉淀处理二次，第一次使含醇量达75%，第二次为85%，每次加乙醇后均冷藏放置，滤过，合并滤液，浓缩，用注射用水稀释，用稀盐酸调节pH值至3.2，冷藏，滤过，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，浓缩，冷藏，滤过，再调节pH值至6.8，煮沸30分钟，浓缩；

（2）按重量组分称取磷脂酰甘油、胆固醇、吐温80置于梨形瓶中，加入有机溶剂中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

（3）将步骤（1）中的浓缩药液倒入梨形瓶中，按重量组分称取依地酸二钠和烟硫酸氢钠加缓冲盐溶液溶解后倒入梨形瓶中轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，得脂质体混悬液；

（4）将上述混悬液倒入乳匀机，连续乳匀；

（5）将上述乳匀后的混悬液经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下灌装，封口，制得冠心宁脂质体注射液。

上述的制备方法，其中所述的有机溶剂选自苯甲醇、甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选为丙酮。

上述的制备方法，其中所述的缓冲溶液选自枸橼酸盐缓冲溶液、磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液。

本发明制得的冠心宁脂质体注射液，不仅提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，图1是冠心宁注射液的血药浓度-时间曲线。表示实施例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液、对比例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液和市售冠心宁注射液的血药浓度与时间的关系曲线。

其中：

上市例实施例1实施例2实施例3

对比例1对比例2对比例3

具体实施方式

以下通过实施例进一步解释和说明本发明，但本发明不限于以下实施例，并且在不偏离本文上述和下文所述意图的情况下，可以进行各种修改，并且这些修改也包括在本发明的技术范围内。

实施例1冠心宁脂质体注射液

处方

制备过程

（1）称取20000g丹参和20000g川芎，加400L水煎煮三次，第一次2小时，第二、第三次各1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至2L，用乙醇沉淀处理二次，第一次使含醇量达75%，第二次为85%，每次加乙醇后均冷藏放置，滤过，合并滤液，浓缩至约1L，用注射用水稀释至4L，用稀盐酸调节pH值至3.2，冷藏，滤过，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，浓缩至1L，冷藏，滤过，再调节pH值至6.8，煮沸30分钟，制得浓缩药液；

（2）称取300g磷脂酰甘油、200g胆固醇、100g吐温80置于梨形瓶中，加入有3L丙酮中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去丙酮，制得磷脂膜；

（3）将步骤（1）中的浓缩药液倒入梨形瓶中，称取1g依地酸二钠和10g亚硫酸氢钠加5L pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液溶解后倒入梨形瓶中轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，得脂质体混悬液；

（4）将上述混悬液倒入乳匀机，连续乳匀；

（5）将上述乳匀后的混悬液用pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液定容至10L，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下灌装，封口，制得冠心宁脂质体注射液。

实施例2冠心宁脂质体注射液

处方

制备过程

（1）称取4000g丹参和4000g川芎，加80L水煎煮三次，第一次2小时，第二、第三次各1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至0.5L，用乙醇沉淀处理二次，第一次使含醇量达75%，第二次为85%，每次加乙醇后均冷藏放置，滤过，合并滤液，浓缩至约0.2L，用注射用水稀释至0.4L，用稀盐酸调节pH值至3.2，冷藏，滤过，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，浓缩至0.2L，冷藏，滤过，再调节pH值至6.8，煮沸30分钟，制得浓缩药液；

（2）称取200g磷脂酰甘油、100g胆固醇、100g吐温80置于梨形瓶中，加入有0.6L丙酮中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去丙酮，制得磷脂膜；

（3）将步骤（1）中的浓缩药液倒入梨形瓶中，称取1g依地酸二钠和5g亚硫酸氢钠加1L pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液溶解后倒入梨形瓶中轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，得脂质体混悬液；

（4）将上述混悬液倒入乳匀机，连续乳匀；

（5）将上述乳匀后的混悬液用pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液定容至2L，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下灌装，封口，制得1000支冠心宁脂质体注射液。

实施例3冠心宁脂质体注射液

处方

制备过程

（1）称取4000g丹参和4000g川芎，加80L水煎煮三次，第一次2小时，第二、第三次各1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至0.5L，用乙醇沉淀处理二次，第一次使含醇量达75%，第二次为85%，每次加乙醇后均冷藏放置，滤过，合并滤液，浓缩至约0.2L，用注射用水稀释至0.4L，用稀盐酸调节pH值至3.2，冷藏，滤过，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，浓缩至0.2L，冷藏，滤过，再调节pH值至6.8，煮沸30分钟，制得浓缩药液；

（2）称取100g磷脂酰甘油、200g胆固醇、50g吐温80置于梨形瓶中，加入有0.6L丙酮中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去丙酮，制得磷脂膜；

（3）将步骤（1）中的浓缩药液倒入梨形瓶中，称取0.5g依地酸二钠和1g亚硫酸氢钠加1L pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液溶解后倒入梨形瓶中轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，得脂质体混悬液；

（4）将上述混悬液倒入乳匀机，连续乳匀；

（5）将上述乳匀后的混悬液用pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液定容至2L，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下灌装，封口，制得1000支冠心宁脂质体注射液。

对比例1-3冠心宁脂质体注射液的制备

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成冠心宁脂质体注射液：

表1对比例1-3中所用原辅料成分

其中，“/”表示未使用。

*CN101785758A

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的冠心宁脂质体注射液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得冠心宁脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的冠心宁脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得冠心宁脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液以10000r/min的转速高速离心，离心5分钟，取上清液，用甲醇溶解，测定丹参和川芎总酚酸的含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品，对比例1-3制备的样品以及上市的冠心宁注射液（批号：20100919，石药银湖制药有限公司）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，以丹参和川芎总酚酸的含量为考察指标，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，对比例和上市制剂含量降低；而本发明的样品含量变化不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别静脉注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射液，以及市售冠心宁注射液（批号：20100919，石药银湖制药有限公司），注射量为100μl注射液。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液、对比例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液和市售冠心宁注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与上市冠心宁注射液和对比例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液相比，本发明实施例1-3中制备的冠心宁脂质体注射液具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的冠心宁脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (1)

1.一种冠心宁脂质体注射液，其特征在于由以下重量份数比的成分制成：

其制备方法包括以下步骤：

(1)称取20000g丹参和20000g川芎，加400L水煎煮三次，第一次2小时，第二、第三次各1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至2L，用乙醇沉淀处理二次，第一次使含醇量达75％，第二次为85％，每次加乙醇后均冷藏放置，滤过，合并滤液，浓缩至约1L，用注射用水稀释至4L，用稀盐酸调节pH值至3.2，冷藏，滤过，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，浓缩至1L，冷藏，滤过，再调节pH值至6.8，煮沸30分钟，制得浓缩药液；

(2)称取300g磷脂酰甘油、200g胆固醇、100g吐温80置于梨形瓶中，加入有3L丙酮中，加热搅拌分散均匀，于旋转蒸发器上减压除去丙酮，制得磷脂膜；

(3)将步骤(1)中的浓缩药液倒入梨形瓶中，称取1g依地酸二钠和10g亚硫酸氢钠加5L pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液溶解后倒入梨形瓶中轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到水合介质溶解，得脂质体混悬液；

(4)将上述混悬液倒入乳匀机，连续乳匀；

(5)将上述乳匀后的混悬液用pH为6.8的磷酸氢二钠-枸橼酸缓冲溶液定容至10L，经超滤膜除去细菌及热源，然后流通蒸汽消毒，无菌条件下灌装，封口，制得冠心宁脂质体注射液。