CN103040752B - 一种舒血宁脂质体注射液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种舒血宁脂质体注射液，主要由银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺、焦亚硫酸钠和氯化钠制成。与现有技术相比，本发明的脂质体注射液大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，提高了产品质量，减少了毒副作用，适合于工业化大生产。

Description

一种舒血宁脂质体注射液

技术领域

本发明涉及一种银杏叶提取物的新型注射制剂，尤其是银杏叶提取物的脂质体注射液及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

舒血宁注射液的成分为银杏叶提取物，其有效成分主要为黄酮苷类和萜类内酯活性物质，包括：槲皮素、山茶素、银杏三酯、银杏内酯、苦内脂等。银杏是地球上最古老的植物之一，为银杏科银杏属植物，该树种生命力极强，上千年的树龄并不罕见，堪称植物界的“老寿星”。《本草纲目》中记载，银杏叶可补心养气，益肾润肺，健脑醒神，延年益寿。现代医学认为银杏叶是天然的专一性血小板活化因子拮抗剂，其有效成分主要为黄酮苷类和萜类内酯活性物质，包括：槲皮素、山茶素、银杏三酯、银杏内酯、苦内脂等。具有超氧化物歧化酶的活性、清除自由基效应及促进神经生长等作用。银杏叶药用始载于明代，沿用至今，对急性脑梗死、急性心肌梗死、冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的治疗有着确切的疗效。

舒血宁注射液在临床用于心血管病及周围循环障碍性疾病的治疗，是通过多靶点多环节起作用的。它可以降低高同型半胱氨酸（Hcy）带来的心血管风险；降低与动脉粥样硬化发生、演变和发展有关的促炎因子血浆C反应蛋白（CRP）；降低具有强烈的收缩血管和促进血小板聚集的血栓素B₂（TXB₂）；降低对细胞及细胞膜的结构和功能可造成种种损伤的血清过氧化脂质（LOP）；降低广泛存在于各种组织和细胞中内源性缩血管活性物质内皮素（ET）；降低作为血小板和内皮细胞活化程度的血液测定指标P选择素（P-s）；降低参与动脉粥样硬化的初始、发展、斑块糜烂、破裂及血栓并发症全过程的可溶性血管外周血粒细胞表面粘附分子（CDlla）；降低应激状态下增高的神经内分泌激素（ACTH、ET、CORT、TXB₂、PGI₂），避免血管损伤加重；降低增高的血液流变学指标；降低病理损伤时升高的血浆脑钠肽（BNP）；降低促使神经细胞、血管平滑肌细胞发生凋亡，在细胞凋亡与细胞生存调节中发挥极其重要作用的糖原合成酶激酶3β；阻止白细胞的活化，抑制白细胞变形性的下降及黏附性的增加而减轻脑缺血后脑损伤；降低影响细胞顺利吸收营养、氧气、削弱细胞正常功能的蕴粤；降低引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性的丙二醛（MDA）。同时，能提高患者体内消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质，源于生命体的活性物质—SOD；升高能舒张血管，抑制血小板黏附聚集、清除自由基、维持正常的心排血量，具有细胞保护作用的一氧化氮。随着对银杏叶制剂作用的研究，银杏叶的各种制剂不仅在心脑血管疾病治疗上得到了大家认可和应用，而且临床也在慢性阻塞性肺疾病等其他疾病中进行应用。随着研究的深入，银杏叶制剂将会在临床上得到更广泛的应用。

舒血宁注射液的标准规定是“以银杏叶经提取制成的灭菌水溶液”。《中国药典》一部银杏叶提取物的制法为取银杏叶，粉碎，用稀乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，一次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥，粉碎，即得。

银杏叶提取物在水中的溶解度较低，溶解性不足，随温度、存贮时间的变化易于产生沉淀物。因此造成目前上市的舒血宁注射液存在水溶性不好，存贮过程中有沉淀物产生、在低温情况下出现澄清度不好、颜色变深、药物的稳定性差、生物利用度低等问题。

脂质体是用于各种目的密封脂质微囊。确切地说，通过脂质体的全身给药，脂质体可以用来运送治疗剂到达靶部位或细胞。已经证实脂质体特别可用于缓冲药物毒性和改变某些治疗化合物的药动学参数。药物脂质体制剂的稳定性和有效贮存是脂质体产品的重要方面。具体来说，重要的是脂质体制剂在适当条件下长期贮存而不发生包封的药物的不当损失或脂质体大小的改变。不过，有种担心是当脂质体被脱水时或者冷冻随后融化时，可能发生微囊融合和/或包容物的渗漏。

保护微囊在脱水和冷冻期间完整的通常方法是在脂质体制剂中包括一种低温防护剂，例如糖(Harrigan等《脂质的化学与物理学》52：139-149(1990))。低温防护剂保持脂质的完整，防止微囊融合和微囊内容物的损失。例如，美国专利No.4,927,571涉及从冻干形式再生的、含有阿霉素的脂质体组合物，它包括1％至10％的一种低温防护剂，例如海藻糖或乳糖，用于防护冷冻损害。

美国专利No.4,880,635涉及通过在糖的存在下干燥脂质体而制备的脱水脂质体组合物，其中的糖存在于脂质体双分子层膜的内部和外部表面。类似地，美国专利No.5,077,056涉及脱水脂质体组合物，它优选地在脂质体表面的内部和外部包括防护性糖。

人们通过研究发现，脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放，提高药物靶向性，减少药物毒性和副作用，提高药物疗效。如果能将银杏叶提取物制成脂质体注射液，则有望克服现有的舒血宁注射液存在的一系列问题，提高药物的溶解性和稳定性，延长药物在体内的保留时间，长久发挥药效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反应的发生率，改进治疗速度和治疗效果。

不过，制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的舒血宁脂质体是亟待解决的课题。

发明内容

本发明的目的是研制一种稳定的银杏叶提取物的新制剂。本发明人经过长期研究发现，通过选用特定重量配比的银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺、焦亚硫酸钠和氯化钠，可以形成品质优异的银杏叶提取物脂质体注射液，即本发明的舒血宁脂质体注射液。

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱（DOPC）、二硬脂酰磷脂酰胆碱（DSPC）、二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、二豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC）、二月桂酰磷脂酰胆碱（DLPC）、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。

在本发明中，针对银杏叶提取物的特点，本发明人在大量的筛选实验时，发现当使用磷脂和胆固醇简单组合难以形成其品质优良的脂质体，所得脂质体在高温40℃、相对湿度75%±5%的加速试验下，包封率、稳定性、和渗漏率等性质较差，必须对其膜材料进行修饰。

在本发明的舒血宁脂质体注射液中，使用二油酰磷脂酰胆碱和十八胺作为脂质体膜的基本成分，使用聚氧乙烯烷基胺对其膜材料进行修饰，以进一步改进脂质体膜的稳定性和药物的包封率。聚氧乙烯烷基胺是一种非离子表面活性剂，当用于舒血宁脂质体膜中时，能改善膜材料的性质和舒血宁的溶解性，从而提高包封率，而且能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高舒血宁脂质体注射液的稳定性。

在本发明的舒血宁脂质体注射液中，相对于7重量份的银杏叶提取物而言，二油酰磷脂酰胆碱的用量为24-80份，十八胺的用量为24-60份，聚氧乙烯烷基胺的用量为10-36份。如果聚氧乙烯烷基胺的用量低于10重量份，则由于其用量过低导致对舒血宁脂质体注射液的稳定性改进不够，反之，如果聚氧乙烯烷基胺的用量高于36重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于药物活性成分泄露。

在本发明的舒血宁脂质体注射液中，焦亚硫酸钠不仅仅具有抗氧化的作用，还可以用于进一步调节脂质体的膜稳定性。不受理论限制，本发明人令人惊奇地发现，加入焦亚硫酸钠可以改变膜稳定性，改善舒血宁脂质体的药学性质。经研究，发明人发现焦亚硫酸钠优于亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素C和没食子酸丙酯，相对于7重量份的银杏叶提取物而言，最优选的用量为1-5份。

研究发现，当使用上述特定量的银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺和焦亚硫酸钠时，可以得到品质优良的舒血宁脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

本发明的目的在于提供一种稳定的舒血宁脂质体注射液，主要由银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺、焦亚硫酸钠和氯化钠制成。本发明的脂质体注射液具有良好的制剂稳定性，存贮过程中没有有沉淀物产生、药物的稳定性好、生物利用度高，长期放置过程中脂质体同样保持良好的包封率和稳定性，减少了毒副作用，提高了制剂产品质量。

本发明解决的技术方案如下：

本发明提供一种舒血宁脂质体注射液，其主要由银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺、焦亚硫酸钠和氯化钠制成。

本发明提供的舒血宁脂质体注射液，其规格为2ml(折合银杏叶提取物7.0mg)和5ml（折合银杏叶提取物17.5mg）。

本发明提供的舒血宁脂质体注射液，主要由以下重量份数比的成分制成：

本发明提供的舒血宁脂质体注射液，优选的重量组分为：

本发明还提供了一种舒血宁脂质体注射液的制备方法，包括如下步骤：

（1）按重量组分称取银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺和焦亚硫酸钠置于梨形瓶中，加入有机溶剂，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明磷脂膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入pH6.0～6.6的缓冲溶液，轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到介质中溶胀水合，然后在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得舒血宁脂质体；

（3）将氯化钠加入到上述脂质体中，超滤膜除去细菌及热源，无菌条件下灌封，灭菌，制得舒血宁脂质体注射液。

上述的制备方法，其中所述的有机溶剂选自苯甲醇、甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选为体积比为1:1的乙醇和丙酮的混合溶液。

上述的制备方法，其中所述的缓冲溶液选自枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为6.2的枸橼酸盐缓冲溶液。

本发明制得的舒血宁脂质体注射液，不仅提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

图1是舒血宁脂质体注射液的血药浓度-时间曲线，表示实施例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液、对比例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液和市售舒血宁注射液的血药浓度与时间的关系曲线。

其中：

具体实施方式

以下通过实施例进一步解释和说明本发明，但本发明不限于以下实施例，并且在不偏离本文上述和下文所述意图的情况下，可以进行各种修改，并且这些修改也包括在本发明的技术范围内。

实施例1舒血宁脂质体注射液

处方

制备工艺：

（1）按重量组分称取7g银杏叶提取物、50g二油酰磷脂酰胆碱、30g十八胺、20g聚氧乙烯烷基胺和1g焦亚硫酸钠置于梨形瓶中，加入1500ml体积比为1:1的乙醇和丙酮的混合溶液，50℃加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明磷脂膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入1500mlpH为6.2的枸橼酸盐缓冲溶液，轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到介质中溶胀水合，然后在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得舒血宁脂质体；

（3）将18g氯化钠加入到上述脂质体中，定容至2000ml，超滤膜除去细菌及热源，无菌条件下灌封，灭菌，制得1000支舒血宁脂质体注射液。实施例2舒血宁脂质体注射液

处方

制备工艺：

（1）按重量组分称取7g银杏叶提取物、80g二油酰磷脂酰胆碱、60g十八胺、10g聚氧乙烯烷基胺和5g焦亚硫酸钠置于梨形瓶中，加入1500ml体积比为1:1的乙醇和丙酮的混合溶液，50℃加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明磷脂膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入1500mlpH为6.2的枸橼酸盐缓冲溶液，轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到介质中溶胀水合，然后在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得舒血宁脂质体；

（3）将18g氯化钠加入到上述脂质体中，定容至2000ml，超滤膜除去细菌及热源，无菌条件下灌封，灭菌，制得1000支舒血宁脂质体注射液。

实施例3舒血宁脂质体注射液

处方

制备工艺：

（1）按重量组分称取17.5g银杏叶提取物、60g二油酰磷脂酰胆碱、60g十八胺、90g聚氧乙烯烷基胺和3g焦亚硫酸钠置于梨形瓶中，加入3000ml体积比为1:1的乙醇和丙酮的混合溶液，50℃加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明磷脂膜；

（2）在氮气保护下，向瓶中加入3000mlpH为6.2的枸橼酸盐缓冲溶液，轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到介质中溶胀水合，然后在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得舒血宁脂质体；

（3）将45g氯化钠加入到上述脂质体中，定容至5000ml，超滤膜除去细菌及热源，无菌条件下灌封，灭菌，制得1000支舒血宁脂质体注射液。

对比例1-3舒血宁脂质体注射液的制备

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的原辅料成分分别制成舒血宁脂质体注射液：

表1对比例1-3中所用原辅料成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的舒血宁脂质体注射液，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得舒血宁脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的舒血宁脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得舒血宁脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液以10000r/min的转速高速离心，离心5分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测槲皮素的含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3和对比例1-3制备的样品以及上市舒血宁注射液（批号：20110601，上海先锋药业有限公司）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察（以槲皮素为考察指标），试验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，对比例和上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率（为槲皮素为考察指标），结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射液渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的舒血宁脂质体注射液具有更高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别静脉注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射液，以及市售的舒血宁注射液（批号：20110601，上海先锋药业有限公司.），注射量为0.2ml注射液。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定槲皮素的血药浓度。绘制实施例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液、对比例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液和市售替舒血宁注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液和市售舒血宁注射液相比，本发明实施例1-3中制备的舒血宁脂质体注射液具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的舒血宁脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (3)

1.一种舒血宁脂质体注射液，其特征在于由以下重量份数比的成分制成：

其中，单位剂量的规格为2ml，含折合银杏叶提取物7.0mg；和单位剂量的规格为5ml，含折合银杏叶提取物17.5mg。

2.根据权利要求1所述的舒血宁脂质体注射液，其特征在于由以下重量份数比的成分制成：

3.一种制备权利要求1或2所述的舒血宁脂质体注射液的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)按重量组分称取银杏叶提取物、二油酰磷脂酰胆碱、十八胺、聚氧乙烯烷基胺和焦亚硫酸钠置于梨形瓶中，加入有机溶剂，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明磷脂膜；所述的有机溶剂选自体积比为1:1的乙醇和丙酮的混合溶液；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入pH6.0～6.6的缓冲溶液，轻摇，使磷脂膜洗脱并分散到介质中溶胀水合，然后在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得舒血宁脂质体；所述缓冲溶液选自pH为6.2的枸橼酸盐缓冲溶液；

(3)将氯化钠加入到上述脂质体中，超滤膜除去细菌及热源，无菌条件下灌封，灭菌，制得舒血宁脂质体注射液。