CN103040881B - 一种白刺高活性成分产品及其在抗氧化作用中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种白刺高活性成分产品，该产品是指首先将白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将所述上清液稀释后经陶瓷膜除杂后，得到过滤液；其次，所述过滤液加入其1~5倍体积、质量浓度为50%~100%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，所述洗脱液采用超滤有机膜截留后，得到白刺高活性成分提取液，该白刺高活性成分提取液经冷冻干燥至恒重，即得淡紫红色粉末产品。本发明快速、绿色安全、简单、成本低廉，具有很强的抗氧化活性。
Description
技术领域
本发明涉及一种高活性成分产品及其应用，尤其涉及一种白刺高活性成分产品及其在抗氧化作用中的应用。
背景技术
白刺是蒺藜科(Zygophyllceae)白刺属(Nitraria)的一种建群性落叶灌木，主要生长在荒漠或半荒漠地区。白刺果实中含花青素、总多酚、多糖、氨基酸、维生素、黄酮、生物碱、矿物质元素等成分，具有显著的降血糖、降血脂、调节免疫、抗疲劳、耐寒冷、抗氧化、延缓衰老、保肝作用、抗肿瘤抗癌等生物活性。
膜分离法是根据生物膜对物质选择性通透的原理进行分离的方法，由于兼有分离、浓缩、纯化和精制的功能，又有高效、节能、环保、分子级过滤及过滤过程简单、易于控制等特征，已广泛应用于食品、医药、生物、环保、化工、水处理等领域，产生了巨大的经济效益和社会效益，已成为当今分离科学中最重要的手段之一。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、绿色安全、简单、成本低廉的白刺高活性成分产品。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供该在白刺高活性成分产品抗氧化作用中的应用。
为解决上述问题，本发明所述的一种白刺高活性成分产品，其特征在于：该产品是指首先将白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将所述上清液稀释4~6倍后经孔径为0.1~10μm的陶瓷膜除杂后，得到过滤液；其次，所述过滤液加入其1~5倍体积、质量浓度为50%~100%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入1~3倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，所述洗脱液采用超滤有机膜截留后，得到白刺高活性成分提取液，该白刺高活性成分提取液经冷冻干燥至恒重，即得淡紫红色粉末产品。
所述洗脱液的截留方法是指将所述洗脱液先经截留分子量为2000~15000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为500~1000的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为5~20kg、温度为10~40℃、流速为5~250mL/min。
所述陶瓷膜除杂的条件是指压力为0.02~3MPa、温度为10~40℃、流速为10~250mL/min。
如上所述的一种白刺高活性成分产品在抗氧化作用中的应用，其特征在于：在制备具有红细胞自发性氧化溶血和肝组织自发性脂质过氧化的各种剂型医药保健品中至少包含有该白刺高活性成分产品。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明采用陶瓷膜技术，可有效地去除果汁中的果胶、细菌、粘液质和鞣质等杂质。
2、本发明采用超滤有机膜分离纯化白刺高活性成分，所获得的产品性质均一、稳定。
3、本发明采用膜分离组合技术，方法简单、快速、易于控制、耗能低，不仅避免了有毒的有机试剂的使用，而且得到的产品稳定、无二次污染、分离效率高、性质均一，有效地降低了设备投资。
4、本发明所用试剂为水和乙醇，过程安全无毒。
5、本发明所得产品经小鼠动物实验证明，具有很强的抗氧化活性，该产品对小鼠红细胞自发性氧化溶血和肝组织自发性脂质过氧化具有明显的抑制作用，且与浓度呈一定的量效关系，可应用于抗氧化作用的医药保健品。
⑴材料：白刺高活性成分产品为本发明实施例1~5所得的淡紫红色粉末。
⑵动物：昆明种小白鼠，普通级，20±0.4g，由青海大学医学院提供。
⑶药品与试剂：三氯乙酸，天津市光复精细化工研究所；硫代巴比妥酸，济南鼎隆化工科技有限公司；维生素E，美国Sigma公司；生理盐水，山东齐都药业有限公司。
⑷实验仪器：Bio-Rad680型酶标仪，美国伯乐公司；MCO-15AC型二氧化碳培养箱，日本三洋电器有限公司；TGL-16G-A型管式离心机,上海安亭科学仪器厂。
⑸对红细胞自氧化溶血的抑制作用：
取健康昆明种小鼠40只，按体重随机分为4组，雌雄各半，分为VE组和低，中，高剂量组。禁食过夜后摘眼球取血，加入肝素钠，制成抗凝血，4000r/min离心6min，弃去上清液，得到红细胞，用冰冷的生理盐水洗涤3次后制成5%的红细胞悬液，取0.3mL红细胞悬液与0.3mL不同浓度(终浓度为30、10和5μg/mL，生理盐水配制)的白刺高活性成分样品混合，同时以终浓度为100μmol/L的VE作为阳性对照，以等体积的水替代白刺高活性成分样品作为空白对照。混合均匀后于37℃温育24h，4000r/min离心10min，取上清液，用生理盐水稀释10倍，于540nm波长处测定OD值。
红细胞自氧化溶血的抑制率(%)=(1-Ai/Aj)×100；式中Ai为空白对照的平均吸光度值，Aj为试样的平均吸光度值。空白对照组以等体积生理盐水代替（参见表1）。
表1白刺高活性成分产品对红细胞自氧化溶血的抑制作用
注：与VE组相比*p<0.05；**p<0.01。
由表1可知，本发明白刺高活性成分产品各剂量组对小鼠红细胞的自氧化溶血具有较好的抑制作用，且呈剂量效应关系，中、高剂量组与VE组有显著性差异。
⑹对小鼠肝组织自发性脂质过氧化的影响：
组织在发生脂质过氧化的时候，产生了大量的醛类、醇类和烃类物质，醛类以丙二醛(MDA)最具代表性，所以体系中丙二醛的含量高低可间接反映体系中脂质过氧化作用的强弱。MDA可以用硫代巴比妥酸(TBA)法来测定，即一分子丙二醛可与两分子TBA缩合反应，在酸性条件下形成的红色化合物在532nm处有最大吸收，测定OD值的高低可间接反应抗脂质过氧化能力的高低，OD值越小，物质的抗脂质过氧化能力越强。
取健康昆明种小鼠40只，按体重随机分为4组，雌雄各半，分为VE组和低，中，高剂量组。禁食过夜后颈椎脱臼致死，迅速取出肝脏，加入冰冷的生理盐水后用组织粉碎器粉碎，制成5%的组织匀浆，在eppendorf管中加入肝匀浆液0.3mL及不同浓度(终浓度为30、10和5μg/mL，生理盐水配制)的白刺高活性成分产品样品0.3mL，以终浓度为100μmol/L的VE作为阳性对照，以等体积的水替代白刺高活性成分产品作为空白对照，37℃温浴12h，加入25%三氯乙酸(TCA)0.5mL终止反应，4000r/min离心8min。取0.3mL上清液，加入0.67%的硫代巴比妥酸(TBA)0.3mL，沸水浴加热15min，于波长532nm处测OD值。
肝组织自发性脂质过氧化的抑制率(%)=(1-Ai/Aj)×100；式中Ai为空白对照的平均吸光度值，Aj为试样的平均吸光度值。空白对照组以等体积双蒸馏水代替（参见表2）。
表2白刺高活性成分产品对小鼠肝组织自发性脂质过氧化的抑制作用
注：与VE组相比*p<0.05；**p<0.01。
由表2数据可知，本发明白刺果粉各剂量组对小鼠肝组织自发性脂质过氧化具有较好的抑制作用，且呈剂量效应关系，中、高剂量组与VE组有显著性差异。
具体实施方式
实施例1一种白刺高活性成分产品，该产品是指首先将500kg白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将上清液稀释4倍后经孔径为0.1μm的陶瓷膜在压力为0.02MPa、温度为10℃、流速为10mL/min的条件下除去果汁中的果胶、细菌、粘液质和鞣质等杂质后，得到过滤液；其次，过滤液加入其1倍体积、质量浓度为50%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入1倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，洗脱液先经截留分子量为2000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为500的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为5kg、温度为10℃、流速为5mL/min。该白刺高活性成分提取液经冷肼温度为-45℃，真空度为15Pa的冷冻干燥至恒重，即得2.1kg的淡紫红色粉末产品。
该白刺高活性成分产品的抗过氧化自由基（ORAC）值为6122μmolTE/g。
实施例2一种白刺高活性成分产品，该产品是指首先将500kg白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将上清液稀释6倍后经孔径为10μm的陶瓷膜在压力为3MPa、温度为40℃、流速为250mL/min的条件下除去果汁中的果胶、细菌、粘液质和鞣质等杂质后，得到过滤液；其次，过滤液加入其5倍体积、质量浓度为100%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入3倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，洗脱液先经截留分子量为15000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为500的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为20kg、温度为40℃、流速为250mL/min。该白刺高活性成分提取液经冷肼温度为-40℃，真空度为18Pa的冷冻干燥至恒重，即得4.2kg的淡紫红色粉末产品。
该白刺高活性成分产品的抗过氧化自由基（ORAC）值为6057μmolTE/g。
实施例3一种白刺高活性成分产品，该产品是指首先将500kg白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将上清液稀释5倍后经孔径为2μm的陶瓷膜在压力为0.05MPa、温度为25℃、流速为30mL/min的条件下除去果汁中的果胶、细菌、粘液质和鞣质等杂质后，得到过滤液；其次，过滤液加入其2倍体积、质量浓度为60%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入2倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，洗脱液先经截留分子量为10000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为500的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为10kg、温度为25℃、流速为50mL/min。该白刺高活性成分提取液经冷肼温度为-42℃，真空度为14Pa的冷冻干燥至恒重，即得3.9kg的淡紫红色粉末产品。
该白刺高活性成分产品的抗过氧化自由基（ORAC）值为6023μmolTE/g。
实施例4一种白刺高活性成分产品，该产品是指首先将500kg白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将上清液稀释4.5倍后经孔径为5μm的陶瓷膜在压力为0.08MPa、温度为30℃、流速为130mL/min的条件下除去果汁中的果胶、细菌、粘液质和鞣质等杂质后，得到过滤液；其次，过滤液加入其3倍体积、质量浓度为70%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入1.5倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，洗脱液先经截留分子量为5000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为800的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为15kg、温度为30℃、流速为150mL/min。该白刺高活性成分提取液经冷肼温度为-38℃，真空度为17Pa的冷冻干燥至恒重，即得2.4kg的淡紫红色粉末产品。
该白刺高活性成分产品的抗过氧化自由基（ORAC）值为6019μmolTE/g。
实施例5一种白刺高活性成分产品，该产品是指首先将500kg白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将上清液稀释5.5倍后经孔径为1μm的陶瓷膜在压力为1.4MPa、温度为26℃、流速为80mL/min的条件下除去果汁中的果胶、细菌、粘液质和鞣质等杂质后，得到过滤液；其次，过滤液加入其4倍体积、质量浓度为80%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入2.5倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，洗脱液先经截留分子量为8000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为800的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为10kg、温度为27℃、流速为180mL/min。该白刺高活性成分提取液经冷肼温度为-35℃，真空度为16Pa的冷冻干燥至恒重，即得2.9kg的淡紫红色粉末产品。
该白刺高活性成分产品的抗过氧化自由基（ORAC）值为6043μmolTE/g。
上述实施例1~5所得的白刺高活性成分产品在抗氧化作用中的应用是指：在制备具有红细胞自发性氧化溶血和肝组织自发性脂质过氧化的各种剂型医药保健品中至少包含有该白刺高活性成分产品。
Claims (1)
1.一种白刺高活性成分产品，其特征在于：该产品是指首先将白刺鲜果挑选去杂，经榨汁过滤并离心后，得到上清液；然后将所述上清液稀释4~6倍后经孔径为0.1~10μm的陶瓷膜除杂后，得到过滤液；其次，所述过滤液加入其1~5倍体积、质量浓度为50%~100%的乙醇溶液经醇沉除多糖，过滤后将滤液于旋转蒸发仪上旋蒸除去乙醇后，加入1~3倍滤液体积的去离子水洗脱，得到洗脱液；最后，所述洗脱液采用超滤有机膜截留后，得到白刺高活性成分提取液，该白刺高活性成分提取液经冷冻干燥至恒重，即得淡紫红色粉末产品；所述洗脱液的截留方法是指将所述洗脱液先经截留分子量为2000~15000的超滤有机膜截留，得到透过液A，弃去截留液A；将所述透过液A经截留分子量为500~1000的超滤有机膜截留，弃去透过液B，得到截留液B，该截留液B即为白刺高活性成分提取液；其中截留条件是指压力为5~20kg、温度为10~40℃、流速为5~250mL/min；所述陶瓷膜除杂的条件是指压力为0.02~3MPa、温度为10~40℃、流速为10~250mL/min。
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