CN103038622A - 组织阵列的制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种能够将各种直径的卷状的组织片可靠地固定于基体块的组织阵列的制作方法。一种制作组织阵列的制作方法，该组织阵列是通过将片状组织片（8）卷绕成卷状而形成的卷状组织片（6）以阵列状排列在基板上而成的，其中，该方法通过如下步骤制作组织阵列：在供熔融的包埋剂注入并使其积存起来的容器（10）内配置用于以多个卷状组织片（6）的轴线方向朝向铅垂方向的方式保持该多个卷状组织片（6）的保持构件（16），并使各卷状组织片（6）保持于保持构件（16），将包埋剂注入到容器（10）内，形成将多个卷状组织片（6）以阵列状排列而成的基体块（40），对基体块（40）进行切片，以使卷状组织片（6）成为圆片状，将该切片设置在基板上。

Description

组织阵列的制作方法

技术领域

本发明涉及用于形成组织片的形成方法及用于形成该组织片的装置，该组织片用于制造组织阵列，该组织阵列通过在基板上以阵列状排列组织片而成。

背景技术

在对生物体组织进行检查、分析时，使用通过在基板上排列多个组织片而构成的组织阵列。组织阵列（tissue array）用于通过对被检物质涂布用于特异性地染色的染色液的方法等，检查是否存在病变组织，对基因、蛋白质进行分析、筛选等。

形成用于构成组织阵列的组织片通常这样地进行：对由石蜡等包埋剂包埋起来的组织块进行穿孔，将组织块挖成圆形，并将芯提取出来。

但是，采用这样的组织片的形成方法，存在这样的问题：在提取芯之后进行切片时，组织块中的病变组织中应特别留意的关心部位可能会缺损。

而且，在对生物体组织进行研究的研究者中，也存在这样考虑的人，他们认为，由于在组织块上开孔时，该芯部分完全从组织块中消失，因此，这种做法对后续的研究来说并不是优选的。

因此，对采用其他方法而不采用从组织块中挖出圆形的芯的方法来形成用于构成组织阵列的组织片进行了研究。

专利文献1及专利文献2公开了为了解决像上述那样的问题而提出来的方法。

在专利文献1及专利文献2所公开的组织片的形成方法中，首先，利用切片机等对组织块进行切片，获得片状的组织片。然后，将该片状的组织片卷绕成卷（ロ一ル）状。

将卷绕起来的卷状的组织片插入到石蜡等包埋剂形成为块状而成的基体块的空孔内。当在基体块中排列了规定数量的卷状的组织片时，对该基体块进行切片，以使该卷状的组织片成为圆片状，并将切片设置于载玻片等基板，从而，形成组织阵列。

另外，优选在将卷状的组织片插入到石蜡等包埋剂形成为块状而成的基体块的空孔内时，使卷状的组织片的直径与空孔的直径一致。其原因在于，通过使卷状的组织片的直径与空孔的直径一致，能够可靠地进行定位。

这样，在专利文献1及专利文献2所述的形成方法中，通过将片状的组织片卷绕成卷状，能够将宽范围的组织的各个部位放入到一个组织片中，因此，能够解决病变组织中应特别留意的关心部位缺损这样的问题。

而且，无需在组织块开孔，仅通过将表面切得较薄就能够留存，也能够有助于于后续的研究。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2010／027012号公报

专利文献2：国际公开第2008／108410号公报

发明要解决的问题

如上所述，在专利文献1及专利文献2所述的方法中，将形成的卷状的组织片插入到由石蜡等包埋剂形成为块状而成的基体块的空孔内。

但是，在卷状的组织片中，根据组织片的大小、厚度的不同，其直径也有所不同。因而，存在这样的问题：即使在基体块形成了预先决定的直径的空孔，在卷状的组织片的直径比该空孔的直径大的情况下，也无法将卷状的组织片插入到空孔内，而且，在卷状的组织片的直径比该空孔的直径小的情况下，卷状的组织片在空孔内移动，而无法可靠地使其位置固定。

发明内容

因此，本发明是为了解决上述课题而做成的，其目的在于，提供一种能够使各种直径的卷状的组织片可靠地固定于基体块的组织阵列的制作方法。

用于解决问题的方案

根据本发明的组织阵列的制作方法，该制作方法用于制作组织阵列，该组织阵列是通过将片状的组织片卷绕成卷状而形成的卷状组织片以阵列状排列在基板上而成的，其特征在于，该方法通过如下步骤制作组织阵列：在用于供熔融的包埋剂注入并使其积存起来的容器内配置用于以多个卷状组织片的轴线方向朝向铅垂方向的方式保持该多个卷状组织片的保持构件，并使各卷状组织片保持于保持构件，将包埋剂注入到容器内，从而形成将多个卷状组织片以阵列状排列而成的基体块，对基体块进行切片，以使卷状组织片成为圆片状，将该切片设置在基板上。

采用该方法，能够在保持有多个卷状组织片，并利用熔融的包埋剂将多个卷状组织片周围包埋起来的状态下制作基体块，因此，能够制作可靠地排列有多个卷状组织片的组织阵列。

根据本发明的组织阵列的制作方法，其特征还在于，将形成有多个直径至少与卷状组织片的最小直径相同的插入孔的弹性构件用作上述保持构件，来保持卷状组织片的外周面。采用该方法，即使各卷状组织片的直径各不相同，弹性构件的插入孔也能够保持各卷状组织片。

另外，根据本发明的组织阵列的制作方法，其特征还在于，上述插入孔是多边形形状。

即，由于卷状组织片的截面为大致圆形，因此，当插入孔截面为圆形时，有时也难以以弹性构件的保持力来保持卷状组织片，但是，通过将插入孔截面做成多边形形状，能够可靠地保持截面为圆形的卷状组织片。而且，通过将插入孔的截面做成多边形形状，能够减小卷状组织片与弹性构件间的接触面积，从而能够通过减小弹性力，更容易使插入孔的直径扩大，增大对卷状组织片的直径的偏差的容许量。

而且，根据本发明的组织阵列的制作方法，其特征还在于，将形成有多个边长至少与卷状组织片的最小直径相同的格子方框（grid square）的格子状构件用作上述保持构件，来保持卷状组织片的外周面。

采用该方法，即使各卷状组织片的直径各不相同，也能够通过使格子状构件的各个边弹性变形来保持各卷状组织片。

而且，根据本发明的组织阵列的制作方法，其特征在于，将插入于多个卷状组织片的轴心部分的棒状保持构件用作上述保持构件，来保持卷状组织片的轴心部分。

采用该方法，即使各卷状组织片的直径各不相同，也能够保持各卷状组织片。

发明的效果

采用本发明的组织阵列的制作方法，能够使各种直径的卷状的组织片可靠地固定于基体块，从而能够可靠地制作组织阵列。

附图说明

图1是用于说明切出片状的组织片的说明图。

图2是表示将片状的组织片卷绕于芯棒的过程中的状态的说明图。

图3是第1实施方式中的用于排列卷状组织片的结构的组装分解图。

图4是表示第1实施方式中的用于排列卷状组织片的结构的说明图。

图5是表示利用图5的结构制作而成的基体块的说明图。

图6是组织阵列片的立体图。

图7是表示第1实施方式中的保持构件的另一例的说明图。

图8是第2实施方式中的用于排列卷状组织片的结构的组装分解图。

图9是表示第2实施方式中的用于排列卷状组织片的结构的说明图。

具体实施方式

以下，根据附图对本实施方式的组织阵列的制作方法进行说明。首先，根据图1～图2对组织阵列所使用的卷状组织片进行说明。

卷状组织片6是通过将片状的组织片卷绕成卷状而构成的。

简单地对卷状组织片6的制造方法进行说明，利用切片机4将由石蜡等包埋剂包埋起来的组织块5切成100μm左右厚度的片状，形成片状组织片8。然后，将片状的组织片8卷绕于芯棒11形成卷状组织片6。在卷绕时，一边对其加热一边进行卷绕则较佳，以能够可靠地将片状的组织片8卷绕成卷状。

而且，在将组织片卷绕成卷状之后，也可以将图2所示的芯棒11拔出。

第1实施方式

接着，根据图3～图6，对使用上述卷状组织片制作组织阵列的方法的第1实施方式进行说明。

将多个卷状组织片6排列在形成为能够积存熔融的包埋剂（在本实施方式中为石蜡）的形状的容器内。能够将包埋组织片以制作病理样本的包埋皿10和包埋框14用作容器。

以下，对使用了包埋皿10和包埋框14的实施方式进行说明。

包埋皿10形成有中央凹入、能够积存熔融石蜡的积存部20。在积存部20的周围形成有包埋框载置部22，该包埋框载置部22是自积存部20的上端朝向外方而形成的台阶部，且上表面形成为平面状。包埋框载置部22的周围形成有壁部24，该壁部24的外侧与外壁面形成在同一平面中，且该壁部24向上方突出以覆盖载置于包埋框载置部22的包埋框14的侧面。

包埋框14载置于包埋皿10的包埋框载置部22上，与包埋皿10一体地被使用。

包埋框14的中央形成有形成得与包埋皿10的积存部20俯视时的形状相同或者比包埋皿10的积存部20俯视时的形状小的连通孔28。当将包埋框14载置于包埋皿10时，包埋皿10的积存部20与包埋框14的连通孔28相连通，成为较深的积存部。

在本实施方式中，多个卷状组织片6由由弹性体形成的保持构件16保持。能够将海绵、橡胶等材料用作弹性体。

保持构件16的大小为能够正好嵌入到包埋框14的连通孔28的大小，保持构件16的厚度形成为与包埋框14的连通孔28的上下方向上的长度大致相同。

而且，保持构件16的俯视形状与包埋框14的连通孔28的俯视形状大致相同，且在保持构件16的局部形成有切口部29。能够将熔融石蜡从该切口部29注入。

在保持构件16上形成有多个插入孔30，该插入孔30沿着保持构件16的厚度方向（上下方向）贯穿并用于保持卷状组织片6。

将插入孔30的直径做成得比卷状组织片6的预想的最小直径稍小。这样，即使是对最细的卷状组织片6而言，插入到插入孔30的卷状组织片6也会扩宽插入孔30，从而使保持构件16弹性变形。利用该弹性变形的回复力，卷状组织片6的外周面能够被插入孔30的内壁面可靠地保持，从而够固定于包埋皿10的积存部20。

而且，也可以不将保持构件16的插入孔30的截面形成为圆形，而形成为截面是多边形形状。即，与插入孔30的截面为圆形的情况相比，在插入孔30的内壁面具有角时，该角能够可靠地推压卷状组织片6的外周面从而提高固定功能。而且，通过将插入孔30的截面做成多边形形状，能够减小卷状组织片6与弹性构件间相接触的接触面积，从而能够通过减小弹性力而容易使插入孔30的直径扩大，增大对卷状组织片6的直径的偏差的容许量。

若事先在包埋皿10的积存部20的内底面配置双面胶带12则较佳。使双面胶带12的一侧的面（下表面）贴附并固定于积存部20的内底面，使其另一侧的面（上表面）贴附于保持于保持构件16的多个卷状组织片6的下端面。

通过这样地使多个卷状组织片6的下端面贴附并固定于双面胶带12，能够将多个卷状组织片6的下端面对齐而形成在同一平面中。因此，能够使卷状组织片6稳定地排列。

另外，即使不使用双面胶带12，也能够通过推压保持于保持构件16的卷状组织片6的上端面，使卷状组织片6的下端面抵接于包埋皿10的积存部20的内底面，从而使卷状组织片6稳定地排列。

接着，对使用上述器具制作组织阵列的步骤进行说明。

首先，将双面胶带12配置在包埋皿10的积存部20的内底面。

将卷状组织片6插入保持构件16的各插入孔30。并且，预先将各卷状组织片6切齐，以使插入的卷状组织片6的长度为从包埋皿10的积存部20的内底面至安装于包埋框14的连通孔28的保持构件16的上表面的长度。此外，也可以在形成基体块40之后，将各卷状组织片6的长度切齐。

然后，将保持有多个卷状组织片6的保持构件16安装于包埋框14的连通孔28。此时，优选使用粘接剂等将包埋框14与保持构件16间固定。

将安装有保持构件16的包埋框14载置于包埋皿10的包埋框载置部22。

图4表示此时的状态。

在由保持构件16保持有多个卷状组织片6的状态下，将熔融石蜡注入包埋皿10的积存部20内。作为注入口，从保持构件16的切口部29进行注入较佳。

之后，进行冷却，直至熔融石蜡固化。

当熔融石蜡固化时，完成在石蜡内排列有多个卷状组织片6并将该多个卷状组织片6包埋起来而成的基体块40。图5表示将基体块40连同包埋框14一起从包埋皿10中拔出的过程。

优选将基体块40与包埋框14一体地进行处理。即，将包埋框14从包埋皿10中拆除，将包埋框14也一同作为基体块40进行处理。

由于在包埋框14也存在用于写入记录等的区域，因此，事先写入基体块40的信息的话，将有助于后续的研究等，而且，也能防止拿错等。而且，在利用切片机等将基体块40切得较薄（切片）时，为了固定组织块，只要利用任意固定部件将包埋框14固定即可，因此，容易自基体块40制作切片。

如图6所示，通过对基体块40进行切片而获得的片状物体是组织阵列片19。然后，通过将组织阵列片19配置在基板（未图示）上，来做成组织阵列。另外，能够将载玻片、尼龙膜基板、或者硅基板等各种基板用作基板。

另外，根据图7对本实施方式中的保持构件的另一例进行说明。

该保持构件33采用形成有多个格子方框34的格子状构件，其中，该格子方框34边长比卷状组织片6的预想的最小直径稍小。

保持构件33的大小为能够正好嵌入于包埋框14的连通孔28的大小，保持构件33的厚度形成为与包埋框14的连通孔28的上下方向上的长度大致相同。

能够通过将多个能够弹性变形的板状构件组合成格子状来形成格子状构件。

采用该保持构件33，能够将卷状组织片6保持于各格子方框34。而且，也将该保持构件33安装于包埋框14的连通孔28来使用。此时，优选利用粘接剂等将包埋框14与保持构件33间固定。

第2实施方式

接着，根据图8～图9对使用卷状组织片制作组织阵列的方法的第2实施方式进行说明。

另外，有时对与在上述实施方式中说明的结构相同的结构部件标注相同的附图标记，省略其说明。

本实施方式中的保持构件41设有多个棒状构件42而构成，该棒状构件42用于插入于卷状组织片6的轴心部分并保持卷状组织片6的轴心部分。若在形成卷状组织片6时将芯棒11拔出，则能够在卷状组织片6的轴心部分形成空洞，将棒状构件42插入其中。而且，即使在不拔出芯棒11的情况下，若芯棒11形成为筒状，也能够使棒状构件42插入该筒状的内部。

这些多个棒状构件42以向上方突出的方式配置在基座44的上表面，基座44形成为能够配置在包埋皿10的积存部20的内底面的大小。

另外，也可以将保持构件41的棒状构件42的顶端部分形成得较尖锐。

接着，对第2实施方式中的制作组织阵列的步骤进行说明。

首先，将保持构件41配置在包埋皿10的积存部20的内底面。

使保持构件41的棒状构件42插入到卷状组织片6的轴心部分，将多个卷状组织片6排列在包埋皿10内并固定。而且，事先将各卷状组织片6切齐，以使插入的卷状组织片6的长度为从包埋皿10的积存部20的内底面至包埋框14的上表面的长度，。此外，也可以在形成基体块40之后将各卷状组织片6的长度切齐。

然后，将包埋框14载置于包埋皿10的包埋框载置部22。

图8表示此时的状态。

在由保持构件41保持有多个卷状组织片6的状态下，将熔融石蜡注入包埋皿10的积存部20内。将熔融石蜡从包埋框14的连通孔28中的各卷状组织片6彼此的间隙注入。

之后，进行冷却，直至熔融石蜡固化。

另外，当熔融石蜡固化时，完成在石蜡内排列有多个卷状组织片6并将该多个卷状组织片6包埋起来而成的基体块40，由于对基体块40进行切片来制作组织阵列的过程与第1实施方式同样，因此，在此省略说明。

另外，作为在本实施方式中使用的包埋剂，列举了石蜡为例，但是，除此之外，能够列举出火棉、聚酯树脂、聚酰胺树脂、（甲基）丙烯酸树脂等非亲水性包埋剂、聚乙二醇、明胶等亲水性包埋剂、及将上述各材料的多种混合起来而成的包埋剂。

作为优选的包埋剂，能够列举出石蜡及含有聚乙烯等合成聚合物的添加剂的石蜡等石蜡类。

采用本发明，无论是像上述第1实施方式那样的、保持卷状组织片6的外周面的方法，还是像第2实施方式那样的、保持卷状组织片6的轴心部分的方法，均能够使用卷状组织片将其可靠地固定于基体块，能够可靠地制作组织阵列。

Claims (6)

1.一种组织阵列的制作方法，其用于制作组织阵列，该组织阵列是通过将片状的组织片卷绕成卷状而形成的卷状组织片以阵列状排列在基板上而成的，其特征在于，

该方法通过如下步骤制作组织阵列：

在用于供熔融的包埋剂注入并使其积存起来的容器内配置用于以多个卷状组织片的轴线方向朝向铅垂方向的方式保持该多个卷状组织片的保持构件，并使各卷状组织片保持于保持构件；

将包埋剂注入到容器内，从而形成将多个卷状组织片以阵列状排列而成的基体块；

对基体块进行切片，以使卷状组织片成为圆片状，将该切片设置在基板上。

2.根据权利要求1所述的组织阵列的制作方法，其特征在于，

包埋剂为石蜡类。

3.根据权利要求1或2所述的组织阵列的制作方法，其特征在于，

将形成有多个直径至少与卷状组织片的最小直径相同的插入孔的弹性构件用作上述保持构件，来保持卷状组织片的外周面。

4.根据权利要求3所述的组织阵列的制作方法，其特征在于，

上述插入孔为多边形形状。

5.根据权利要求1或2所述的组织阵列的制作方法，其特征在于，

将形成有多个边长至少与卷状组织片的最小直径相同的格子方框的格子状构件用作上述保持构件，来保持卷状组织片的外周面。

6.根据权利要求1或2所述的组织阵列的制作方法，其特征在于，

将插入到多个卷状组织片的轴心部分的棒状保持构件用作上述保持构件，来保持卷状组织片的轴心部分。

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