CN103007030A - 一种用于预防和治疗男性不育症的中药组合物和制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于预防和治疗男性不育症的中药组合物和制剂的制备方法，按重量份数计，该中药组合物和制剂由以下药材制成：菟丝子50-100份、麦冬90-175份、淫羊藿50-125份、鹿角胶40-100份、熟地黄40-100份、枸杞子50-125份、龟板胶25-75份、黄精25-80份、女贞子40-125份、泽泻20-60份、人参10-60份、山药100-150份；该制备方法包括以下步骤：（1）龟板胶、鹿角胶隔水炖化；（2）人参加乙醇或乙醇水溶液，回流提取；（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮；（4）取煎液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10。该制备方法能够明显提高所述中药组合物和制剂的有效成分含量，进而显著提高疗效。

Description

一种用于预防和治疗男性不育症的中药组合物和制剂的制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种用于预防和/或治疗男性不育症的中药组合物和制剂的制备方法，具体涉及一种用于预防和/或治疗精子数目少、精子活动力下降的男性不育症的中药组合物和制剂的制备方法。

背景技术

中医临床辩证分析表明，精子数减少、精子活力低下所致的男性不育症患者的发病较多始于肾精不足。肾为藏精育子之源泉，而肾精的充盛有赖于后天的不断补充。肾精亏损谓肾之阴阳失调，其进一步影响脾的健运，进而导致肾精的来源更为减少。先后天之本的失调又直接影响各脏器之间的平衡，致使生育功能低下，最终导致不育症。

市售的六味地黄丸的主要作用为滋阴补肾，用于治疗肾阴亏损、头晕耳鸣、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精，消渴。六味地黄丸是将六味药物粉碎成细粉直接入药，加炼蜜制成丸剂，但是药物没有经过提取过程，药物中的有效成分不能被充分提取出来发挥疗效。

中国发明专利申请93100623.6公开了一种治疗男性不育的复方中成药，其特征是由山药8.5-33%、人参2.7-15.6%、龟板胶4-20%、女贞子7-31%、菟丝子5-30%、鹿角胶5-21%、淫羊藿7-31%、枸杞子7-28%、熟地黄5-25%、黄精4-25%、麦冬8-31%、泽泻3-15%共十二味药材组成，加辅料或添加剂制成口服制剂，其剂型为合剂、煎膏剂、冲剂、片剂、小丸剂、酒剂。但最新的临床应用和药理学研究表明，该复方中成药的疗效还有待进一步提高，其中一个重要的原因就在于其处方中各药材的有效成份未能被充分提取出来，导致中药制剂的有效成分含量偏低，直接影响了该复方中成药在临床上的应用和推广。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本申请的发明人在上述复方中成药制备工艺的基础上，根据现代中药制药学理论，通过大量工艺实验和研究，对其工艺步骤和条件进行了优化，从而提出了一种改进的用于制备预防和/或治疗男性不育症的中药组合物和制剂的新方法。该制备方法能够明显提高所述中药组合物和制剂中有效成份的含量，进而显著提高疗效，充分发挥该中药组合物和制剂滋阴补肾、填精益髓的作用，更有效达到衍宗之目的，其以填精益髓之法，使机体恢复正常生殖、生理功能而最终能够生育。

本发明的目的是采用以下技术方案来实现的：

一方面，本发明提供一种用于预防和/或治疗男性不育症的中药组合物的制备方法，按重量份数计，该中药组合物由以下药材制成：

菟丝子50-100份、麦冬90-175份、淫羊藿50-125份、鹿角胶40-100份、熟地黄40-100份、枸杞子50-125份、龟板胶25-75份、黄精25-80份、女贞子40-125份、泽泻20-60份、人参10-60份、山药100-150份；

该制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加乙醇或乙醇水溶液，回流提取；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮；

（4）取煎液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10。

优选地，按重量份数计，上述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子60-75份、麦冬100-152份、淫羊藿60-100份、鹿角胶55-75份、熟地黄50-100份、枸杞子60-100份、龟板胶40-57份、黄精50-80份、女贞子50-100份、泽泻30-38份、人参20-38份、山药100-126份。

更优选地，按重量份数计，上述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子75份、麦冬152份、淫羊藿100份、鹿角胶75份、熟地黄75份、枸杞子100份、龟板胶57份、黄精57份、女贞子100份、泽泻38份、人参38份、山药126份。

优选地，上述制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置；

（4）取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10。

另一方面，本发明提供一种用于预防和/或治疗男性不育症的中药制剂的制备方法，按重量份数计，该中药制剂包含由以下药材制成的中药组合物：

菟丝子50-100份、麦冬90-175份、淫羊藿50-125份、鹿角胶40-100份、熟地黄40-100份、枸杞子50-125份、龟板胶25-75份、黄精25-80份、女贞子40-125份、泽泻20-60份、人参10-60份、山药100-150份；

该制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加乙醇或乙醇水溶液，回流提取；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮；

（4）取煎液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10；

（5）加入药学上可接受的辅料制成中药制剂。

优选地，按重量份数计，上述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子60-75份、麦冬100-152份、淫羊藿60-100份、鹿角胶55-75份、熟地黄50-100份、枸杞子60-100份、龟板胶40-57份、黄精50-80份、女贞子50-100份、泽泻30-38份、人参20-38份、山药100-126份。

更优选地，按重量份数计，上述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子75份、麦冬152份、淫羊藿100份、鹿角胶75份、熟地黄75份、枸杞子100份、龟板胶57份、黄精57份、女贞子100份、泽泻38份、人参38份、山药126份。

优选地，上述制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置；

（4）取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10；

（5）加入药学上可接受的辅料制成中药制剂。

在上述中药制剂中，所述药学上可接受的辅料可以选自溶剂、增溶剂、助溶剂、芳香剂、着色剂、抗氧化剂、赋形剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、矫味剂和防腐剂中的一种或多种。

优选地，上述中药制剂为口服制剂，例如口服液、散剂、煎膏剂、片剂、胶囊剂、冲剂、糖浆剂、酒剂、颗粒剂或滴丸剂，更优选为口服液、片剂、胶囊剂或颗粒剂。

最优选地，上述中药制剂为口服液。其中，按重量份数计，所述药学上可接受的辅料包含矫味剂100-400份，例如200-300份；进一步优选地，所述矫味剂选自蔗糖、葡萄糖和果糖中的一种或多种；按重量份数计，所述药学上可接受的辅料包含防腐剂1-10份，例如2-5份；进一步优选地，所述防腐剂选自尼泊金乙酯、苯甲酸钠、苯甲酸钾、山梨酸和脱氢醋酸中的一种或多种。

就本发明中药制剂的制备方法的一个优选实施方案而言，上述中药制剂为口服液，按重量份数计，该中药制剂包含由以下药材制成的中药组合物：

菟丝子75份、麦冬152份、淫羊藿100份、鹿角胶75份、熟地黄75份、枸杞子100份、龟板胶57份、黄精57份、女贞子100份、泽泻38份、人参38份、山药126份；

所述制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置；

（4）取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10；

（5）加蔗糖250重量份、尼泊金乙酯0.5重量份和苯甲酸钠2.5重量份，混匀，加水，混匀，滤过，即得。

再一方面，本发明还提供了上述制备方法制得的中药组合物以及该中药组合物在制备用于预防和/或治疗男性不育症的药物中的用途；优选地，所述男性不育症为精子数减少所致的男性不育症；或者所述男性不育症为精子活力低下所致的男性不育症；或者所述男性不育症为精子数减少和精子活力低下所致的男性不育症。

“肾为先天之本，脾为后天之本”，两者相互依存不可分割。本发明根据以上论点和制药生产实践，为了提高产品的有效成份含量，实现调整人体各脏腑之间关系，重点调整人体先、后天之本，健脾补肾、填精益髓之目的，对现有复方中成药的制备方法进行了进一步的深入研究。

中国发明专利申请93100623.6公开的用于治疗男性不育症的复方中成药是由著名中药方《左归丸》和《龟鹿二仙胶》化载而成。《左归丸》是张仲景的著名方剂，为医界推崇的补肾益精的“祖方”，而《龟鹿二仙胶》是有名的补益精、气、神的名方，为医家所称道。该产品在二方的基础上加上黄精、麦冬以加强补血增液作用；加女贞子养肝，使疏泄通畅，加淫羊藿补肾壮阳，两药助脾之健运，“水谷充盛，肾经足也”；运用泽泻倾泄肾火并防熟地之滋腻。诸药合用就能通补结合、性味平和、达到健脾、补肾、填精益髓之目的。

为了进一步提高该产品的药效，本发明根据该产品的处方特点和药效学试验结果，通过药理学实验研究成果重点优化了制备工艺，筛选得到最佳工艺参数和工艺步骤，由此获得了本发明的中药组合物和制剂的制备方法。该制备方法能够更有效地提取药材中的有效成份，充分发挥中药组合物和制剂调整人体各脏腑之间关系、重点调整人体的先后天之本的功效，以健脾之补肾、填精益髓之法，发挥对人身精、气、神的补益功用，使体内阴阳、气血迅速恢复平衡，患者痊愈。试验结果显示，本发明的制备方法的工艺步骤简便合理，产品中有效成分含量大幅提高，充分发挥出各味药的协同药效，很大程度上提高了临床疗效，使产品具有更显著的滋阴补肾、填精益髓作用，对于肾阴亏损所致的精子数目少、精子活力下降之男性不育症有更优异的治疗效果。

此外，相对于现有的补肾产品，本发明将药物组合物制成口服液体制剂，还具有以下优点：（1）药物以分子或微粒状态分散在介质中，分散度大，吸收快，能较迅速的发挥疗效。（2）易于分剂量，服用方便，患者顺应性好。（3）能减少药物的刺激性。（4）有些药材制成液体制剂后可以提高生物利用度。

具体而言，与中国专利申请93100623.6（以下简称原专利）公开的复方中成药的制备工艺相比，本发明的制备方法具有以下明显的优点：

1、原专利的制备工艺是将龟板胶和鹿角胶用水溶解、过滤。本发明改进后的工艺是将龟板胶、鹿角胶隔水炖化。龟板胶和鹿角胶的提取方式采用现代工艺隔水炖化将更有利于胶类物质的溶解。龟板胶、鹿角胶中的主要成分为蛋白质，其水解可形成多肽，多肽可进一步水解成氨基酸。胶类物质中还含有不同含量的微量元素。这些成分的主要功效是温补肝肾、益精养血。温度过低，胶类物质不易溶解，隔水炖化的方法可以使容器内的龟板胶、鹿角胶保持在沸点左右，更有利于其融化，使其中的有效成份充分被提取出来，且不被破坏，进一步提高该药物的疗效。将本发明的制备方法制得的成品与原专利制备工艺制得的成品进行总氮（N）含量的对比，结果显示本发明的制备方法制得的成品总氮（N）含量明显增高，具体数据参见实施例8。

2、在原专利制备工艺中，除人参、龟板胶、鹿角胶，其余九味药材用水煎煮，提取过滤。本发明的制备方法是将人参醇提后的药渣与该九味药材一起加水煎煮。人参中含有的化学成分很多，其中人参皂苷和多糖是其中两类重要的成份。到目前为止，从植物人参中已分离并确定了结构的皂苷成分多达30余种，皂苷为人参生理活性的物质基础。另外，人参中还含有人参多糖、人参烯醇类等物质，人参多糖是人参中提纯的高分子酸性多糖，可降血糖和增强人体免疫功能，是一种免疫增强剂。经过动物实验和人体临床实验观察，证实人参多糖能显著增强人体免疫力，提高机体细胞免疫功能，且其中的水溶性糖类物质占据大比例。本发明经研究发现，人参皂苷和多糖对于本发明的中药组合物和制剂的疗效至关重要。因此，鉴于人参皂苷易溶于乙醇，本发明的制备方法采用的乙醇提取方式可有效提取出人参中的总皂苷。此外，本发明的实验结果显示，提取总皂苷后的人参药渣用沸水提取后还可以提取出人参中的大部分糖类物质。因此，人参醇提后的药渣加水继续提取，能更进一步提取出人参中的人参皂苷和其它有效成分，从而增强了本发明的中药组合物和制剂的疗效。选择测定人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁，将本发明制备方法制得的成品与原专利制备工艺制得的成品进行对比，结果显示本发明的制备方法制得的成品的人参皂苷含量明显提高，具体数据参见实施例8。

3、原专利制备工艺中没有规定最终浸膏的相对密度，本发明的制备方法是将三种滤液混匀，浓缩至相对密度为1.10（50℃～70℃），更精确的规定了浓缩浸膏的相对密度，为下一步的制剂配制提供可依靠保证，使其符合中国药典对制剂的要求，并有效地控制制剂的质量。相对密度的确定无论对于该品种的生产工艺控制还是对于达到药典对剂型的要求都很有必要。由于本品含胶类物质，粘度较大，药液浓缩太粘稠时容易引起焦化，配制时易产生不溶性固体物质，增加滤过难度，因此有必要规定浓缩膏的相对密度。本发明经过多次小试试验发现，相对密度控制在1.10（50℃～70℃）时，粘度不会太大，比较容易配制、灌装，其他指标也符合质量标准要求，制成的制剂服用方便。例如，在口服液的工艺研究过程中，经过三批小试的相对密度检测数据可知，如果浸膏的相对密度不控制的话，制得的成品的相对密度就会有高有低，极不稳定。反之，则会使成品的相对密度基本稳定，使成品的质量标准更容易控制，相对密度的检测更稳定可控，具体数据见表1。

表1

	1批	2批	3批
				规定前浸膏相对密度	1.16	1.47	1.29
规定后浸膏相对密度	1.25	1.24	1.24

此外，还对原专利制备工艺制得的上述三批成品进行了活性成分含量测定，选择测定淫羊藿苷含量，结果显示三批成品含量差异较大，不稳定。对本发明改进后的工艺生产的上述三批成品同样进行了淫羊藿苷含量的测定，结果表明三批成品无明显差异，活性成分含量稳定，详细测定数据参见实施例8。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1：实施例1-4的工艺流程及区域划分图；

图2：人参皂苷对照品的HPLC图；

图3：测定原专利制备的成品中人参皂苷的HPLC图；

图4：测定本发明制备的成品中人参皂苷的HPLC图；

图5：淫羊藿苷对照品的HPLC图；

图6：测定本发明制备的成品中淫羊藿苷的HPLC图。

具体实施方式

下面通过具体实施例来详细说明本发明，应当理解，下述实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

实施例1  中药制剂的制备（口服液）

【处方】菟丝子75g   麦冬152g    淫羊藿100g  鹿角胶75g

熟地黄75g   枸杞子100g  龟板胶57g 黄精57g

女贞子100g  泽泻38g     人参38g  山药126g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），加蔗糖250g、尼泊金乙酯0.5g和苯甲酸钠2.5g，混匀，加水至1000ml，混匀，滤过，即得。本品为棕黑色液体；气香，味甘甜、微苦。

本实施例的工艺流程及区域划分见图1。其中虚框内为10万级洁净区。洁净区内温度：18-26℃；相对湿度：45-65%；洁净区与室外静压差≥10Pa；区内不同等级区与非洁净区之间的静压差≥5Pa；区内各工位照度≥300Lux。

实施例2  中药制剂的制备（口服液）

【处方】菟丝子60g    麦冬100g    淫羊藿70g    鹿角胶55g

熟地黄100g   枸杞子70g   龟板胶47g 黄精80g

女贞子80g    泽泻30g     人参30g 山药100g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），加蔗糖200g、尼泊金乙酯1.0g和苯甲酸钠1.5g，混匀，加水至1000ml，混匀，滤过，即得。本品为棕黑色液体；气香，味甘甜、微苦。

本实施例的工艺流程及区域划分见图1。其中虚框内为10万级洁净区。洁净区内温度：18-26℃；相对湿度：45-65%；洁净区与室外静压差≥10Pa；区内不同等级区与非洁净区之间的静压差≥5Pa；区内各工位照度≥300Lux。

实施例3  中药制剂的制备（口服液）

【处方】菟丝子70g    麦冬150g    淫羊藿80g    鹿角胶70g

熟地黄70g    枸杞子90g   龟板胶50g  黄精50g

女贞子90g    泽泻30g     人参30g 山药120g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），加蔗糖300g、尼泊金乙酯1.5g和苯甲酸钠3.5g，混匀，加水至1000ml，混匀，滤过，即得。本品为棕黑色液体；气香，味甘甜、微苦。

本实施例的工艺流程及区域划分见图1。其中虚框内为10万级洁净区。洁净区内温度：18-26℃；相对湿度：45-65%；洁净区与室外静压差≥10Pa；区内不同等级区与非洁净区之间的静压差≥5Pa；区内各工位照度≥300Lux。

实施例4  中药制剂的制备（口服液）

【处方】菟丝子50g    麦冬100g    淫羊藿60g    鹿角胶50g

熟地黄50g    枸杞子60g   龟板胶40g 黄精50g

女贞子50g    泽泻30g     人参20g 山药100g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），加蔗糖200g、尼泊金乙酯0.3g和苯甲酸钠1.7g，混匀，加水至1000ml，混匀，滤过，即得。本品为棕黑色液体；气香，味甘甜、微苦。

本实施例的工艺流程及区域划分见图1。其中虚框内为10万级洁净区。洁净区内温度：18-26℃；相对湿度：45-65%；洁净区与室外静压差≥10Pa；区内不同等级区与非洁净区之间的静压差≥5Pa；区内各工位照度≥300Lux。

实施例5  中药制剂的制备（片剂）

【处方】菟丝子75g   麦冬152g    淫羊藿100g  鹿角胶75g

熟地黄75g   枸杞子100g  龟板胶57g 黄精57g

女贞子100g  泽泻38g     人参38g  山药126g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），干燥、粉碎，加淀粉20g制粒，加硬脂酸镁0.5g混合，压片，制成500片，即得。

实施例6  中药制剂的制备（胶囊剂）

【处方】菟丝子75g   麦冬152g    淫羊藿100g  鹿角胶75g

熟地黄75g   枸杞子100g  龟板胶57g 黄精57g

女贞子100g  泽泻38g     人参38g  山药126g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），干燥、粉碎，加95%（体积）乙醇水溶液制粒，填充胶囊，制成500粒，即得。

实施例7  中药制剂的制备（颗粒剂）

【处方】菟丝子75g   麦冬152g    淫羊藿100g  鹿角胶75g

熟地黄75g   枸杞子100g  龟板胶57g 黄精57g

女贞子100g  泽泻38g     人参38g  山药126g

【制法】以上十二味，龟板胶、鹿角胶，隔水炖化。人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量。人参药渣再与其余九味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至相对密度约为1.10（韦氏比重瓶法），干燥、粉碎，加糊精130g、蔗糖180g，制成颗粒，制成500g，分装，即得。

对比例1  中药制剂的制备（口服液）

【处方】菟丝子75g   麦冬152g    淫羊藿100g  鹿角胶75g

熟地黄75g   枸杞子100g  龟板胶57g 黄精57g

女贞子100g  泽泻38g     人参38g  山药126g

【制法】制法同原专利实施例一的“益尔精”合剂的制备工艺，即将人参切碎加入5倍量，60%药用乙醇回流三次合并滤液，滤过，回收乙醇后备用；取龟板胶、鹿角胶打碎后加四倍量水炖溶后乘热过滤；余下九味药材，经整理后加人参提取后剩余的参渣，用水煮沸提取二次，合并滤液，滤过；将以上三种滤液混匀，浓缩至约700ml，加蔗糖200g，加水至1000ml，滤过，加入防腐剂，分装为每支100ml，灭菌即得。分装成每支10ml或20ml装量的即为口服液。

实施例8  有效成分含量测定

1、鹿角胶含量测定

根据药典规定，照氮测定法（中国药典2010年版附录IX L第一法）测定鹿角胶含量。

具体操作步骤：取样品3ml，精密称定，置干燥的500ml凯氏烧瓶中；然后依次加入硫酸钾（或无水硫酸钠）10g和硫酸铜粉末0.5g，再沿瓶壁缓缓加硫酸20ml；在凯氏烧瓶口放一小漏斗并使烧瓶成45°斜置，用直火缓缓加热，使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，强热至沸腾，待溶液成澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷。沿瓶壁缓缓加水250ml，振摇使混合，放冷后，加40%氢氧化钠溶液75ml，注意使之沿瓶壁流至瓶底，自成一液层，加锌粒数粒，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接；另取2%硼酸溶液50ml，置500ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴；将冷凝管的下端插入硼酸溶液的液面下，轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸馏，至接收液的总体积约为250ml时，将冷凝管尖端提出液面，使用蒸气冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏；馏出液用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于1.401mg的N。

结果显示，实施例1制得的成品消耗滴定液26.12ml，其总氮（N）含量为11.255mg/ml；对比例1制得的成品消耗滴定液19.04ml，其总氮（N）含量为7.948 mg/ml。

2、人参皂苷含量测定：

采用高相液相色谱法测定人参皂苷含量，色谱条件与系统适用性试验如下：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈-水为流动相梯度洗脱，流动相洗脱梯度见表2，紫外检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温为20℃，理论板数按人参皂苷Re峰计算，应不低于3000。

表2

时间（分钟）	水（体积%）	乙腈（体积%）
			0～50	81 →  80	19  →  20
50～75	80 →  60	20  →  40

对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg₁对照品11.55mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得人参皂苷Rg₁对照品储备液；精密称取人参皂苷Re对照品10.42mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得人参皂苷Re对照品储备液；精密称取人参皂苷Rb₁对照品20.52mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得人参皂苷Rb₁对照品储备液。

精密量取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re和人参皂苷Rb₁对照品储备液各2ml，置10ml量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，即得人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re和人参皂苷Rb₁对照品混合溶液（人参皂苷Rg₁ 46.20μg/ml、人参皂苷Re 83.36μg/ml和人参皂苷Rb₁ 164.16μg/ml）。

供试品溶液的制备：精密量取样品50ml，置蒸发皿中，水浴蒸至无醇味，放冷，用水10ml分次洗入分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，水液加水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，加氨试液20ml洗涤一次，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

测定法：精密量取对照品混合溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，按面积外标法计算，即得。

计算公式：含量（mg/支）= 样品峰面积×对照品浓度（μg/ml）×5×10÷（对照品峰面积×50×1000）

人参皂苷含量测定结果见表3，将实施例1制得的成品与对比例1制得的成品进行对比，结果显示实施例1制得的成品人参皂苷含量明显提高。

表3

3、淫羊藿苷含量测定

淫羊藿的主要成分为淫羊藿苷，其具有雄性激素样的作用，其补肾阳、强筋骨、祛风湿，对于肾虚阳痿、遗精早泄、腰膝痿软、肢冷畏寒具有良好的作用，因此测定淫羊藿苷的含量对于体现本发明的药物组合物和制剂的疗效具有重要意义。

通过HPLC测定淫羊藿苷的含量，将实施例1制得的口服液成品（以下简称实施例1口服液）与对比例1制得的口服液成品（以下简称对比例1口服液）进行对比，结果显示实施例1制得的口服液成品的淫羊藿苷含量明显更高。详细数据如表4。

采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷含量，其中色谱条件与系统适用性试验结果如下：

色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲醇-0.15mol/L磷酸二氢钠溶液（体积比=6∶5）为流动相；紫外检测波长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解后，制成每1ml中含70μg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取样品10ml，精密称定，加水20ml移入分液漏斗中，摇匀。用乙醚萃取2次，每次20ml，弃去醚层。再用水饱和正丁醇萃取5次，每次20 ml，合并正丁醇萃取液，用正丁醇饱和的5%NaHCO₃水溶液洗涤2次，每次20 ml。再用正丁醇饱和水洗涤3次，每次20ml，正丁醇萃取液置蒸发皿中在水浴上蒸干，残渣用流动相溶解，移入10 ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过。弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

测定法：精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测定，按面积外标法计算，即得。

计算公式：含量（mg/支）= 样品峰面积×对照品浓度（mg/ml）×10÷对照品峰面积。

表4

实施例9  药效学研究

本发明的中药组合物和制剂是主治精子数不足和/或精子活动率低下的男性不育症的复方中药。该中药组合物和制剂除能显著增加雄性小鼠单位重量附睾的精子数目，明显提高具有活动能力的精子的百分率（也能显著增加老年小鼠具有活动能力的精子百分率）外，还具有增强受试动物的耐力、耐寒、耐缺氧能力的强壮功效。

对实施例1制得的口服液成品与对比例1制得的口服液成品进行了两项药效学试验，药效学指标分别为单位重量附睾的精子数目、精子活力和耐力试验。具体试验数据和统计学结果如下。其中，统计学方法均采用方差分析。

1、单位重量附睾的精子数目、精子活力

（1）剂量与药效关系试验

选取健康雄性小鼠，按体重分为四个给药组（即实施例1口服液组、对比例1口服液组，其中对比例1口服液组分别进行三次试验，分别记为对比例1-1口服液组、对比例1-2口服液组、对比例1-3口服液组）和对照组，给药组剂量分别为10ml/kg与20ml/kg，每日灌服一次，连续10天。对照组给予等体积生理盐水。第11天，同时处死动物，立即切取附睾丸一小块，称重，每10mg重附睾组织加任氏液2ml，于研钵内轻磨成匀浆，并滴入血球计数板置于显微镜下观察及计算每100mg附睾的精子数和精子活动能力，结果见表5。

表5

注：以上各组中进行试验的小鼠数量均为10只。实施例1口服液组与对照组对比*P<0.05、**P<0.01，实施例1口服液组与对比例1口服液组对比△P<0.05、△△P<0.01，对比例1口服液组与对照组对比▲P<0.05、▲▲P<0.01。

数据显示，实施例1口服液组与对照组比较有极显著差异（P<0.01）；实施例1口服液组与对比例1口服液组相比有显著性差异（P<0.05）；部分对比例1口服液组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。

综上所述，本发明制备的中药制剂对增加雄性成年小鼠单位重量附睾的精子数及精子活力的作用效果较原专利的复方中成药的作用效果明显增强，且作用随着剂量增加而加强。

（2）给药时间与药效关系试验

选取健康雄性小鼠，按体重分为两个配对组，每个配对组随机为分四个给药组（即实施例1口服液组、对比例1口服液组，其中对比例1口服液组分别进行三次试验，分别记为对比例1-1口服液组、对比例1-2口服液组、对比例1-3口服液组）和生理盐水对照组，第一配对组给药方法与上述相同，连续给药10天。第二配对组处理同上，但连续给药30天。给药后处死动物，立即称取附睾组织，按照前述步骤，观察并计算每100mg附睾的精子数及活动率，结果见表6。

表6

注：以上各组中进行试验的小鼠数量均为10只。实施例1口服液组与对照组对比*P<0.05、**P<0.01，实施例1口服液组与对比例1口服液组对比△P<0.05、△△P<0.01，对比例1口服液组与对照组对比▲P<0.05、▲▲P<0.01。

上述数据显示，给药10天及给药30天时，实施例1口服液组与对照组比较均有极显著差异（P<0.01）；实施例1口服液组与对比例1口服液组相比有显著性差异（P<0.05）；部分对比例1口服液组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。

综上可知，本发明制备中药制剂与原专利的复方中成药的作用效果相比，能更显著增加成年雄性小鼠单位重量附睾所含精子数及活力精子百分率，且作用随着给药时间增加而加强。

2、耐力试验

选取健康小鼠，按体重随机分为四个给药组（即实施例1口服液组、对比例1口服液组，其中对比例1口服液组分别进行三次试验，分别记为对比例1-1口服液组、对比例1-2口服液组、对比例1-3口服液组）及生理盐水对照组。给药组灌服给药，对照组给予等体积生理盐水，连续10天。末次给药后1小时，五组同时分别投入水深为30cm的三个泳箱，水温为26℃，以小鼠最后下沉死亡为指标（未给予负重让其自然游泳，以去除影响游泳的其他因素），记录每只小鼠游泳时间，并作统计学处理，强迫游泳试验结果见表7。

表7

注：以上各组中进行试验的小鼠数量均为10只。实施例1口服液组与对照组对比*P<0.05、**P<0.01，实施例1口服液组与对比例1口服液组对比△P<0.05、△△P<0.01，对比例1口服液组与对照组对比▲P<0.05、▲▲P<0.01。

上述数据显示，就平均游泳时间而言，实施例1口服液组与对照组比较均有极显著差异（P<0.01）；实施例1口服液组与对比例1口服液组相比有显著性差异（P<0.05）；部分对比例1口服液组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。

综上可知，将本发明制备的中药制剂与原专利的复方中成药的作用效果相比，其具有更显著的增强机体耐力的作用。

实施例9  临床研究

经批准将实施例1制备的口服液（即仙鹿口服液）在上海中医药大学附属龙华医院、岳阳医院、曙光医院、广州中医学院附属医院、广东省中医院等单位进行临床观察，对精液质量低下（包括精子数减少和精子活力低下）的男性不育症共416例进行Ⅱ期临床研究，其中200例进行随机分组、双盲对照临床验证。另216例为非随机开放自身对照试验（即不需要对照、不设盲开放性地治疗，在医生和患者都知情的情况下，用被评价的药物进行治疗，和平时正常用药一样）。其中，按卫生部“中药新药治疗男性不育的临床研究指导原则”为疗效评定标准。

（一）治愈：配偶受孕；

（二）显效：虽未受孕，但治疗后三个月精子数量、活动力等常规检查正常，精子功能检测已正常；

（三）有效：精子功能检测虽不正常，但精液常规检查有群级间改善，如C级进入B级；

（四）无效：治疗前后无变化。

治疗结果：

1、仙鹿口服液治疗组100例，临床痊愈15例，占15%；显效40例，占40%；有效28例，占28%；无效17例，占17%。总有效率83%。

2、男宝胶囊对照组100例，临床痊愈4例，占4%；显效18例，占18%；有效26例，占26%；无效52例，占52%。总有效率48%。

3、仙鹿口服液开放组216例，临床痊愈26例，占12.04%；显效78例，占36.11%；有效75例，占34.72%；无效37例，占17.13%。总有效率为82.87%。

4、仙鹿口服液治疗组、开放组316例患者的总有效率为82.91%。

5、对407例患者在治疗前后进行血常规、肝、肾功能、心电图等方面安全性观察，没异常改变。

结果表明，仙鹿口服液总有效率为82.91%，对照组男宝胶囊总有效率为48%，可见仙鹿口服液对以肾阴虚为主的男性不育症有更显著疗效。

不良反应：在仙鹿口服液治疗组及开放组中有胃纳不香、饮食减少、胸闷等症6例，叮嘱其饭后服用，上述症状逐渐消除，不需停药。在对照组中有4例服药后有头晕头胀、身热不舒适、口干的感觉，叮嘱其饭后服用，症状逐渐消除，亦没有停药，服完全疗程。

以下为部分仙鹿口服液治疗组病例的情况说明：

病例一

赵××，男，29岁，结婚二年，同居未采取避孕措施，不育，性生活正常。就诊时精子浓度40×10⁹/L，活力Ⅱ级，活率50%，服用仙鹿口服液（每日三次，每次10ml）90天后，精子浓度50×10⁹/L，活力III级，活率60%，其爱人怀孕，后生下一健康男孩。

病例二

王××，男，31岁，结婚三年，同居未采取避孕措施未育，性生活正常，有射精，曾服用补肾药品中医治疗一年半，肌注HCG治疗半年，未见疗效。就诊时精子浓度34×10⁹/L，活力Ⅰ级，活率50%，服用仙鹿口服液（每日三次，每次10ml），90天为一疗程，精子浓度60×10⁹/mL，活力III级，活率90%，其爱人怀孕，后生下一健康男孩。

病例三

唐××，男，24岁，结婚一年，同居，未采取避孕措施未育，性生活正常，有射精，未经治疗，对方妇检正常。就诊时精子浓度7.0×10⁹/L，活力0级，活率0%，服用仙鹿口服液（每日三次，每次10ml支），90天为一疗程，精子浓度100×10⁹/L，活力III级，活率80%，后对方怀孕。

病例四

黄××，男，26岁，结婚1年余，女方妇科检查正常，性生活正常（未采取任何避孕措施），就诊时精子数3200万/ml，活力Ⅱ-III级，活率46%，服用仙鹿口服液（每日三次，每次10ml），连续服用90天，复查精液常规，精子数9800万/ml，活力III-Ⅳ级，活率70%，治疗结果显效。

病例五

徐××，男，31岁，结婚5年不育，女方妇科检查正常，性生活正常（未采取任何避孕措施），就诊时精子总数2000万/毫升，活力差，活率20%，服用仙鹿口服液（每日三次，每次10ml），连续服用82天，诸症消失，女方妊娠试验阳性，复查男方精液，精子数9000万/毫升，活力III～Ⅳ级，活率60%，配偶已生一男孩。

病例六

杨××，男，29岁，结婚3年不育，女方妇科检查无异常，性生活正常（未采取任何避孕措施），就诊时检查精液常规：精子数3000万/毫升，活力一般，活率50%，曾用强精煎、男宝、维生素E治疗无效。服用仙鹿口服液（每日三次，每次10ml），连续服用82天，复查精液，精子数5500万/毫升，活力III级，活率50%，女方已经妊娠，男方痊愈。

综合上述药效学、有效成份含量测定以及临床研究结果可知，本发明的制备方法制备的用于预防和/或治疗男性不育症的中药组合物和制剂的有效成份含量明显提高，药理作用更加突出，疗效更加显著，远远优于中国专利申请93100623.6公开的治疗男性不育的复方中成药的制备工艺。

Claims (15)

1.一种用于预防和/或治疗男性不育症的中药组合物的制备方法，按重量份数计，该中药组合物由以下药材制成：

菟丝子50-100份、麦冬90-175份、淫羊藿50-125份、鹿角胶40-100份、熟地黄40-100份、枸杞子50-125份、龟板胶25-75份、黄精25-80份、女贞子40-125份、泽泻20-60份、人参10-60份、山药100-150份；

该制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加乙醇或乙醇水溶液，回流提取；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮；

（4）取煎液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子60-75份、麦冬100-152份、淫羊藿60-100份、鹿角胶55-75份、熟地黄50-100份、枸杞子60-100份、龟板胶40-57份、黄精50-80份、女贞子50-100份、泽泻30-38份、人参20-38份、山药100-126份；

优选地，所述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子75份、麦冬152份、淫羊藿100份、鹿角胶75份、熟地黄75份、枸杞子100份、龟板胶57份、黄精57份、女贞子100份、泽泻38份、人参38份、山药126份。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置；

（4）取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10。

4.一种用于预防和/或治疗男性不育症的中药制剂的制备方法，按重量份数计，该中药制剂包含由以下药材制成的中药组合物：

菟丝子50-100份、麦冬90-175份、淫羊藿50-125份、鹿角胶40-100份、熟地黄40-100份、枸杞子50-125份、龟板胶25-75份、黄精25-80份、女贞子40-125份、泽泻20-60份、人参10-60份、山药100-150份；

该制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加乙醇或乙醇水溶液，回流提取；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮；

（4）取煎液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10；

（5）加入药学上可接受的辅料制成中药制剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子60-75份、麦冬100-152份、淫羊藿60-100份、鹿角胶55-75份、熟地黄50-100份、枸杞子60-100份、龟板胶40-57份、黄精50-80份、女贞子50-100份、泽泻30-38份、人参20-38份、山药100-126份；

优选地，所述中药组合物由以下药材制成：

菟丝子75份、麦冬152份、淫羊藿100份、鹿角胶75份、熟地黄75份、枸杞子100份、龟板胶57份、黄精57份、女贞子100份、泽泻38份、人参38份、山药126份。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置；

（4）取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10；

（5）加入药学上可接受的辅料制成中药制剂。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述药学上可接受的辅料选自溶剂、增溶剂、助溶剂、芳香剂、着色剂、抗氧化剂、赋形剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、矫味剂和防腐剂中的一种或多种。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述中药制剂为口服制剂，例如口服液、散剂、煎膏剂、片剂、胶囊剂、冲剂、糖浆剂、酒剂、颗粒剂或滴丸剂，更优选为口服液、片剂、胶囊剂或颗粒剂。

9.根据权利要求4至8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述中药制剂为口服液。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，按重量份数计，所述药学上可接受的辅料包含矫味剂100-400份，例如200-300份；优选地，所述矫味剂选自蔗糖、葡萄糖和果糖中的一种或多种。

11.根据权利要求9或10所述的制备方法，其特征在于，按重量份数计，所述药学上可接受的辅料包含防腐剂1-10份，例如2-5份；优选地，所述防腐剂选自尼泊金乙酯、苯甲酸钠、苯甲酸钾、山梨酸和脱氢醋酸中的一种或多种。

12.一种用于预防和/或治疗男性不育症的中药制剂的制备方法，该中药制剂为口服液，按重量份数计，该中药制剂包含由以下药材制成的中药组合物：

菟丝子75份、麦冬152份、淫羊藿100份、鹿角胶75份、熟地黄75份、枸杞子100份、龟板胶57份、黄精57份、女贞子100份、泽泻38份、人参38份、山药126份；

所述制备方法包括以下步骤：

（1）龟板胶、鹿角胶，隔水炖化；

（2）人参加65%（体积）乙醇水溶液，回流提取二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至适量；

（3）人参药渣再与其余九味药材，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液静置；

（4）取上清液与炖化的龟板胶、鹿角胶，及人参提取物混匀，浓缩至韦氏比重瓶法测定相对密度为1.10；

（5）加蔗糖250重量份、尼泊金乙酯0.5重量份和苯甲酸钠2.5重量份，混匀，加水，混匀，滤过，即得。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法制得的中药组合物。

14.根据权利要求13所述的中药组合物在制备用于预防和/或治疗男性不育症的药物中的用途；

优选地，所述男性不育症为精子数减少所致的男性不育症；或者所述男性不育症为精子活力低下所致的男性不育症；或者所述男性不育症为精子数减少和精子活力低下所致的男性不育症。

15.根据权利要求4至12中任一项所述的制备方法制得的中药制剂。

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