CN103004657A - 一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法 - Google Patents

Abstract

一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，属于水产苗种培育领域，对圆斑星鲽5-6日龄的仔鱼投喂经过强化的轮虫，在圆斑星鲽19-21日龄时同时投喂卤虫无节幼体，并减少轮虫的投喂量，直至34-36日龄结束，然后开始完全投喂卤虫无节幼体；所述的卤虫无节幼体是经过裂壶藻强化的；所述的轮虫是在经过裂壶藻强化后，再用硒酵母对其进行强化。本发明将硒酵母作为轮虫的强化剂，提高饵料中硒的含量，能够促进圆斑星鲽仔鱼生长，促进其变态率，有效地降低了畸形率和体色异常的比率，成活率高，苗种质量好。

Description

一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法

技术领域

本发明属于水产苗种繁育领域，具体地涉及一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法。

背景技术

圆斑星鲽（Verasper variegatus）属鲽形目（Pleuronec tiformes）、鲽科（Pleuronectidae），星鲽属（Verasper），俗称花斑宝、花豹子、花边爪，分布于黄、渤海。圆斑星鲽属大型底栖鱼类，身体呈椭圆形，体型优美、色彩斑斓美丽，是我国北方传统的名贵鱼种，民谚“春花秋鳎”的“花”即“花斑宝”。由于其卵子较大，生殖力较弱，加之过度捕捞和环境变化影响，其自然资源衰退明显，捕捞量逐年减少，特别是最近几年，自然海域已极少捕到，圆斑星鲽自然资源已极度匮乏，急需开展人工繁殖和增养殖技术研究，以促进圆斑星鲽资源的尽快恢复。

目前，在圆斑星鲽的人工繁育方面，国内外已经开展了部分研究工作，并且取得了一定的进展，但是目前技术还不成熟，其中培育苗种的白化率和黑化率比例达到30%~40%，畸形率较高。苗种的畸形和体色异常严重地影响了苗种质量，导致鱼成活率下降，黑化苗放流时易被敌害捕食，其市场售价降低，已经成为限制圆斑星鲽规模化苗种培育的一大难题。

关于比目鱼体色异常的机理研究较多，主要包括视觉、中枢神经、环境与营养几大方面（王吉桥等，比目鱼体色异常的机理与对策，海洋科学，2002，26（2）：27-30），其中营养作为其他功能的物质基础，起着关键作用。研究表明维生素A和E,DHA,EPA,二十碳四烯酸(AA)和磷脂是防止比目鱼体色异常的物质基础。对于矿物质对比目鱼类体色发育的影响未见报道。硒是动物生命活动中所必需的微量元素,参与动物体内蛋白质、氨基酸、核酸、脂肪、碳水化合物和维生素以及微量元素等营养物质的代谢,能调节甲状腺激素的代谢,而甲状腺素又是影响比目鱼类变态和体色发育的重要因素。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，以解决圆斑星鲽苗种畸形率高和体色异常的问题。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，对圆斑星鲽5-6日龄的仔鱼投喂经过强化的轮虫，在圆斑星鲽19-21日龄时同时投喂卤虫无节幼体，并减少轮虫的投喂量，直至34-36日龄结束，然后开始完全投喂卤虫无节幼体；所述的卤虫无节幼体是经过裂壶藻强化的；所述的轮虫是在经过裂壶藻强化后，再用硒酵母对其进行强化。

所述的轮虫在经过裂壶藻强化后，再用硒酵母强化的剂量为每百万轮虫加入0.001～0.003g，强化时间为1.5～4.5小时。

进一步，所述的硒酵母对轮虫进行强化的时间为3ｈ。

进一步，所述的用裂壶藻对轮虫的强化为轮虫的强化密度为200～300个/ml，裂壶藻强化剂量为0.05-0.15g/L，强化时间为8～12小时。

进一步，用经过所述强化后的轮虫投喂圆斑星鲽仔鱼的方法为5～6日龄的圆斑星鲽仔鱼开口后，开始投喂经过裂壶藻和硒酵母强化后的轮虫，轮虫密度控制在5～10个/mL，圆斑星鲽仔鱼19-21日龄时，开始投喂经裂壶藻营养强化后的卤虫无节幼体，卤虫无节幼体密度5～8个m/L，以后逐渐增加卤虫无节幼体投喂量，增至8～12个/mL后保持密度，减少轮虫投喂量，到第34-36日龄停止投喂轮虫。

本发明与现有技术对比的有益效果：

硒酵母提供的是一种有机形式的硒，对动物和人类更有效，更容易消化并保留。强化操作简单易行。将硒酵母作为轮虫的强化剂，提高饵料中硒的含量，能够促进圆斑星鲽仔鱼生长，促进其变态率，有效地降低了畸形率和体色异常的比率，成活率高，苗种质量好。

具体实施方式

下面通过实施例详细叙述本发明的技术内容。

1、强化时间的选择

将收获的轮虫放到加有过滤海水的轮虫强化桶内，轮虫的强化密度为200～300个/ml，将制备好的裂壶藻（美国进口的BIO-MARINE藻粉）强化剂加入到强化桶内，强化剂量为0.1g/L强化9小时。之后在强化水体中加入含硒酵母（硒含量为1000mg/kg），剂量为每百万轮虫加入0.003g，分别强化1.5、3和4.5小时，每个时间点取三份样品。强化期间要充分充气,保持溶氧量不低于5毫克/升。强化结束后收集轮虫用洁净海水冲洗，通过300目的筛绢滤掉多余水分后，装入5ml离心管，立即放入-20℃冷冻保存，待测定轮虫中硒的含量。

表1不同强化时间对轮虫体内硒含量影响（mg/kg干重）

	1.5小时	3小时	4.5小时
				对照组	0.96±0.33	0.88±0.40	1.12±0.12
强化组	1.5±0.40	3.36±0.67	5.69±0.40

从表1可以看出，通过含硒酵母的强化，轮虫体内硒含量明显高于对照组。随着强化时间的增加，强化组轮虫体内硒的含量随之升高。根据报道天然桡足类中硒的含量为3～5mg/kg干重，因此确定用含硒酵母0.003g/百万轮虫进行3小时强化可以达到最佳效果。

2、育苗效果

待仔鱼孵出前，将圆斑星鲽受精卵布池，布池密度控制在0.3～0.5万粒/m³。圆斑星鲽仔鱼孵出至4日龄采用静水培育，5日龄后开始换水、流水培育每天换水20%～30%，以后逐渐增加。培育用水经砂滤、杀菌消毒、调温后使用，维持水体温度13～15℃，盐度在28～32，pH 7.5～8.5，溶解氧6～8mg/L，氨氮NH4⁺≤0.01mg/L，光照1000lx以内，不间断充气。

试验在圆斑星鲽仔鱼孵化后第4天开始。挑选健康、活泼的仔鱼转入6个容积为100L的大桶,每个桶中放入6000尾。为稳定水质和防止投喂后轮虫营养下降，需向养殖水体添加浓缩小球藻，在圆斑星鲽仔鱼4~20日龄，小球藻应达到150～200万细胞/mL，以后增加小球藻的浓度至50～100万细胞/mL，并维持其密度_。圆斑星鲽5～6日龄仔鱼开口，开始投喂轮虫，密度控制在5～10个/mL。

给圆斑星鲽仔鱼开口之后投喂经过不同的强化程序的轮虫，一组是用裂壶藻进行强化，强化剂量为0.1g/L，强化时间为12小时，强化密度为200～300个/ml；另一组是在裂壶藻强化的基础上，再加上硒酵母的强化。具体步骤如下：

将收获的轮虫放到加有过滤海水的轮虫强化桶内，轮虫的强化密度为200～300个/ml，将制备好的裂壶藻强化剂加入到强化桶内，强化剂量为0.1g/L，强化9小时。之后加入含硒酵母（硒含量为1000mg/kg），剂量为每百万轮虫加入0.003g，继续强化3小时。强化期间要充分充气，保持溶氧量不低于5毫克/升。强化结束后收集轮虫用洁净海水冲洗后投喂给圆斑星鲽仔鱼。6个实验池分成两组，每三个池子作为一个组，投喂不同处理的轮虫，投喂经过裂壶藻和硒酵母两步强化的轮虫组简称为富硒组，投喂只经过裂壶藻强化的轮虫作为对照组，其他养殖条件完全一致。

圆斑星鲽孵化后第20日龄，开始投喂经裂壶藻营养强化后的卤虫无节幼体，卤虫无节幼体密度5～8个m/L，以后逐渐增加卤虫无节幼体投喂量，增至8～12个/mL后保持密度，同时减少轮虫投喂量，到第35日龄停止投喂轮虫。每天吸底清污一次，每日换水50%～100%。实验到圆斑星鲽孵出后60日龄结束。

分别在圆斑星鲽孵化后30日龄和60日龄取样，测定体重、成活率，统计变态情况、体色发育情况以及骨骼发育状况。每个实验池分别取250mg和100mg稚鱼样品，放入液氮保存，待测三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性。T3测定采用鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)检测试剂盒(E08488f，Cusabio,Wuhan,China)，T4使用鱼甲状腺素(T4)检测试剂盒(CSB-E08489f，Cusabio,Wuhan,China)，谷胱甘肽过氧化物酶测定采用南京建成试剂盒。

表2仔稚鱼生长和成活率

	处理组	特定生长率（%/天）	存活率（%）
				浮游阶段（孵化后6~30日龄）	对照组	8.8±0.6a	28±1.5a
	富硒组	8.6±0.9a	36±1.9a
				变态、俯底阶段（孵化后30~60日龄）	对照组	5.1±1.2b	45±3.6b
	富硒组	10.9±0.3a	56±8.5a

注：特定生长率(%/day)=100×(ln结束时体重-ln开始时体重)/实验天数

存活率%=(开始时鱼体个数–死亡鱼个数)/开始时鱼个数×100

从表2中可以看出圆斑星鲽仔鱼在浮游阶段的生长和存活率在两组之间没有差异，但是经过60天的培育，富硒组稚鱼的体重和成活率都明显地高于对照组。

表3体色和体型发育情况

	处理组	体色正常比例（%）	完全变态比例（%）	骨骼畸形比例（%）
					60天	对照组	65.1±1.2b	70.1±3.6b	22.8±1.9a
	富硒组	88.9±0.3a	94.5±8.5a	15.7±0.6b

注：体色正常是指右侧有眼侧躯干部有黑色素细胞分布,无眼侧没有色素细胞分布；完全变态是指左侧的眼球完全移动到右侧，并可见眼窝；骨骼畸形比例是指完全变态个体中出现骨骼发育异常的比例。

60天培育结束时，从鱼体的体色、变态率和骨骼畸形率（表3）来看，富硒组稚鱼体色正常比例高达88.9%，显著地高于对照组65.1%。富硒组的个体基本变态结束，仅有少量个体变态不完全，而对照组还有30%没有完全变态。统计各组鱼体骨骼畸形的比例发现富硒组明显低于对照组。

表4饵料及仔稚鱼中硒的含量

轮虫（mg/kg干重）

仔稚鱼（mg/kg干重）

对照组	0.88±0.40b	1.75±0.33b
			富硒组	3.36±0.67a	2.82±0.14a

表4是实验中各组轮虫和圆斑星鲽体内硒的含量，可以看出经过硒酵母强化的轮虫体内的硒含量明显增加，达到天然桡足类的硒含量。摄食富硒轮虫，仔稚鱼体内硒含量也显著增加。

表5鱼体中GPx活性、T4和T3的含量

注：方差分析采用单因素方差分析，只比较同一时间点不同处理组之间的差异

由表5可看出，GPx活性在圆斑星鲽仔鱼30日龄和60日龄时均是投喂富硒轮虫组的高，但仅在30日龄时富硒组的明显高于对照组。T3含量在不同时间都是富硒组显著高于对照组，富硒组T4含量在30天时显著高于对照组，在60日龄时显著低于对照组。硒作为依赖硒的GPx的核心组成部分，参与了生物体中有机和无机过氧化物的清除过程。GPx活性升高，清除产生的自由基效率增强，从而修复损伤，提高水产动物的生产性能。硒作为5-脱碘酶的组成部分，介导甲状腺激素的形成和降解，催化四碘甲状腺原氨酸(T4)转变为三碘甲状腺原氨酸(T3)，甲状腺激素对于鱼类早期阶段的生长和存活至关重要，是比目鱼类仔鱼变态和色素发育的影响关键因子。圆斑星鲽仔鱼在30日龄时开始变态，此时富硒组T4含量显著高于对照组，T3含量一直是富硒组明显高于对照组，甲状腺激素促进了圆斑星鲽仔稚鱼的生长、变态和色素发育，影响着骨骼发育，减少了畸形率。

综上所述，在圆斑星鲽苗种培育过程中，使用富硒酵母强化的轮虫进行投喂，强化时间为3小时，强化剂量为每百万轮虫0.003g，可以促进仔稚鱼的生长，加速变态过程，降低苗种体色异常的比率和死亡率，显著提高苗种的质量，取得最佳养殖效果。

Claims (5)

1.一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，对圆斑星鲽5-6日龄的仔鱼投喂经过强化的轮虫，在圆斑星鲽19-21日龄时同时投喂卤虫无节幼体，并减少轮虫的投喂量，直至34-36日龄结束，然后开始完全投喂卤虫无节幼体；所述的卤虫无节幼体是经过裂壶藻强化的；所述的轮虫是在经过裂壶藻强化后，再用硒酵母对其进行强化。

2.根据权利要求1所述的一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，其特征在于所述的轮虫在经过裂壶藻强化后，再用硒酵母强化的剂量为每百万轮虫加入0.001～0.003g，强化时间为1.5～4.5小时。

3.根据权利要求2所述的一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，其特征在于所述的硒酵母对轮虫进行强化的时间为3ｈ。

4.根据权利要求1所述的一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，其特征在于所述的用裂壶藻对轮虫的强化为轮虫的强化密度为200～300个/ml，裂壶藻强化剂量为0.05-0.15g/L，强化时间为8～12小时。

5.根据权利要求1所述的一种控制圆斑星鲽苗种畸形率和体色异常的繁育方法，其特征在于用经过所述强化后的轮虫投喂圆斑星鲽仔鱼的方法为5～6日龄的圆斑星鲽仔鱼开口后，开始投喂经过裂壶藻和硒酵母强化后的轮虫，轮虫密度控制在5～10个/mL，圆斑星鲽仔鱼19-21日龄时，开始投喂经裂壶藻营养强化后的卤虫无节幼体，卤虫无节幼体密度5～8个m/L，以后逐渐增加卤虫无节幼体投喂量，增至8～12个/mL后保持密度，减少轮虫投喂量，到第34-36日龄停止投喂轮虫。