KR100953994B1

KR100953994B1 - 꼬막 종묘의 생산방법

Info

Publication number: KR100953994B1
Application number: KR1020090095410A
Authority: KR
Inventors: 김재민; 임현섭; 강태근; 박종섭; 김상철
Original assignee: 김재민; 임현섭; 강태근; 박종섭; 김상철
Priority date: 2009-10-08
Filing date: 2009-10-08
Publication date: 2010-04-21

Abstract

본 발명은 꼬막 종묘의 생산방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 점차 자원이 고갈되어 가는 자연산 종패의 대안으로 인공적으로 꼬막 종묘를 대량으로 생산할 수 있는 꼬막 종묘의 생산방법에 관한 것이다.

본 발명의 꼬막 종묘의 생산방법은 실내 수조에 수용된 모패로부터 수정란을 얻는 수정란준비단계와, 수정란을 부화조에 수용하여 부화시키는 부화단계와, 부화조에서 부화된 부화유생을 유생 사육조에서 사육하는 유생사육단계와, 유생 사육조에서 사육된 유생을 채묘기에 부착하여 사육하는 채묘단계를 구비한다.

꼬막, 종묘, 양식, 유생, 사육, 해양미세조류, 배지

Description

꼬막 종묘의 생산방법{Method of producing Tegillarca granosa seedling}

천해 유용조개류인 꼬막(Tegillarca granosa)은 일명 참꼬막 이라고 하며, 이매패강, 익형아강, 돌조개목, 돌조개과에 속하는 조개류로서, 돌조개과에는 돌조개를 포함하여 242종이 알려져 있고, 한국에는 16종이 알려져 있다.

이 가운데 중요한 산업종은 꼬막, 피조개(Scapharca broughtonii), 큰이라 피조개(Scapharca satowi), 새꼬막(Scapharca subcrenata)으로 꼬막, 피조개, 새꼬막은 산업종으로 개발되어 현재 양식하고 있으나, 큰이랑피조개는 1970년대에 자원이 개발되었고 그 양도 상당히 많으며, 근년에 국립수산과학원에서 서해안 양식품종으로 양식기술이 개발되었다.

꼬막은 한국 서해안과 남해안 연안에 많이 분포하고 꼬막류 중 가장 천해성으로 간조시에 간출되는 조간대에 서식한다. 서식수온은 약 5 내지 36도, 비중은 1.016 내지 1.022정도가 적합하다. 저질은 다소 연한 개흙질인 곳이 알맞다.

최근 우리나라 연안은 꼬막 모패의 자원량이 현저히 줄어들어 자연채묘가 어려워지고 있는 실정이다. 중국이나 동남아시아는 한국에 비해 월등히 좋은 수온조건을 갖추고 있어 연중 생산이 가능하지만 우리나라는 제약된 환경으로 인하여 양식조건이 열악한 상황이다.

특히, 장기연작, 밀식으로 인한 어장 노화, 연안환경의 오염 등 여러가지 환경오염으로 인한 자연 채묘 부진, 양식생물의 대량폐사로 인한 감소와 자연산 종묘에 의한 양식방법으로 인하여 연도별 생산량의 변동 폭이 심하다.

따라서, 꼬막의 안정정 공급과 꼬막 양식산업의 발전을 위해 인공종묘생산의 필요성이 고조되고 있는데, 현재까지 인공적인 꼬막 종묘 생산에 대한 기술은 거의 전무한 실정이다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 개선하기 위하여 창출된 것으로서, 인공적으로 꼬막 종묘를 대량으로 생산할 수 있는 꼬막 종묘의 생산방법을 제공하는 데 그 목적이 있다.

본 발명의 다른 목적은 부화된 꼬막 유생의 먹이가 되는 먹이생물을 안정적으로 공급하기 위해 양적, 질적으로 우수한 식물 플랑크톤의 대량 배양기술을 제공하는 데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 꼬막 종묘의 생산방법은 수조에 수용된 모패로부터 수정란을 얻는 수정란준비단계와; 상기 수정란을 세척하는 세란단계;를 더 구비하며, 상기 수정란을 부화조에 수용하여 부화시키는 부화단계와; 상기 부화조에서 부화된 부화유생을 유생 사육조에서 사육하는 유생사육단계와; 상기 유생 사육조에서 사육된 유생을 채묘기에서 사육하는 채묘단계;를 구비하는 것을 특징으로 한다.

상기 세란단계는 해수를 여과하여 해수 중의 이물질을 제거한 후 자외선을 조사하여 살균처리한 해수로 상기 수정란을 세척하는 것을 특징으로 한다.

상기 유생사육단계는 해수에 농업용 비료를 혼합한 배지에서 배양된 해양 미세조류를 급이하여 사육하는 것을 특징으로 한다.

상기 농업용 비료는 상기 해수 1ℓ를 기준으로 질소 16.47 내지 24.71mg, 인 1.73 내지 2.60mg을 함유하며, 상기 배지는 상기 해양 미세조류의 세포분열 촉진을 위한 사이토키닌과, 면역강화를 위한 아르기닌 또는 비타민액이 더 첨가된 것을 특징으로 한다.

상기한 바와 같이 본 발명의 꼬막 종묘의 생산방법에 의하면 모패로부터 수정란을 얻어 부화 및 유생을 사육함으로써 꼬막 종묘를 인공적으로 대량 생산할 수 있다.

또한, 꼬막 유생의 사육시 농업용 비료를 이용한 해양 미세조류용 영양 강화 배지에서 배양시킨 해양 미세조류를 급이하므로 양적 질적으로 우수하면서도 안정적이고 경제적인 먹이를 공급할 수 있다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시 예에 따른 꼬막 종묘의 생산방법에 대해서 구체적으로 설명한다.

본 발명의 일 실시 예에 따른 꼬막 종묘의 생산방법은 크게 수정란준비단계와, 부화단계와, 유생사육단계와, 채묘단계를 구비한다.

먼저, 수정란준비단계에서 성숙된 모패로부터 수정란을 얻는다. 모패는 산란기인 6~8월에 서해안 또는 남해 연안에서 채집하는 것이 바람직하다. 성숙기에 암수의 구별은 생식소의 색깔로 구별할 수 있다. 성숙된 암컷은 도홍색, 수컷은 담황색의 생식소를 갖는다. 그러나 성숙된 생식소의 색깔로 암수를 구별하는 경우 꼬막의 패각을 개구하거나 생식소를 적출하여 확인하게 되므로 모패에 손상을 입힐 수 있으므로 암수구별시 주의를 필요로 한다. 바람직하게는 외부 형태적 차이로 구별한다. 꼬막은 각폭과 좌우패각의 각정 간격의 길이가 수컷에 비해 암컷이 두껍고 길어 외관상으로 구별이 가능하다.

채집된 모패는 암컷과 수컷을 선별한 후 즉시 실내 수조에 수용하여 신선한 여과해수를 공급하면서 약 24시간 동안 안정시키는 것이 바람직하다. 수조의 해수 온도는 24 내지 25도 전후로 조절한다. 산란을 유발하기 위해 인위적으로 자극을 줄 수 있다. 가령, 1시간 동안 공기 중에 모패를 노출시키거나, 해수의 수온을 28도까지 서서히 상승시킬 수 있다.

암컷의 산란이 왼료된 수조에 수컷으로부터 방정된 정자를 투입한 후 원활한 수정이 이루어지도록 1 내지 2분 정도 휘저어준다. 그리고 수정된 수정란은 망목 20㎛의 거름망을 사용하여 수집한 후 부화조에 수용하여 부화시키는 부화단계를 수행한다.

바람직하게는 부화조에 수용하기 전에 수정란을 세척하는 세란단계를 수행한다. 세란단계는 여과장치를 이용하여 해수 중의 이물질을 제거한 후 자외선을 조사하여 살균처리한 한 해수를 이용한다. 여과장치로 통상적인 분리막이나 여과사를 이용할 수 있다. 자외선살균을 통해 해수 중에 함유된 유해한 세균을 제거한다.

부화단계에서는 부화율을 높이기 위해 부화조의 해수 온도는 20 내지 30도, 염분은 20 내지 35도로 유지하는 것이 바람직하다. 해수 온도가 20도 미만인 경우 부화율을 약 62%이하로 저하되는 것으로 나타났다. 정상적으로 수정된 수정란은 수정 후 약 30분에 제 1극체가 출현하고, 수정 45분 후 부등분열하여 제 2세포기로 발생한다. 그리고 4세포기, 8세포기를 거쳐 수정 5시간 후에는 상실기 단계에 접어들고, 수정 7시간 후에는 운동을 시작하는 낭배기로 접어들어 서서히 수면 상층부로 이동한다. 그리고 수정 10시간 후에 담륜자로 발달하고, 약 수정 20시간 후에 패각을 형성한 D형 유생으로 발달한다.

부화조에서 부화되어 발달된 D형 부화유생은 유생 사육조에서 10 내지 25일 동안 사육한다. 사육초기 D형 부화유생의 크기는 평균 각장 94.1㎛, 평균 각고 86.7㎛이고, 10일 후 평균 각장 125.2㎛, 평균 각고 113.9㎛이고, 15일후에는 평균 각장 161.0㎛, 평균 각고 143.1㎛이고, 25일째에는 평균 각장 450㎛, 평균 각고 396㎛이상의 크기로 성장한다.

사육조에서 사육시 유생은 5 내지 10개체/mL로 수용한다. 사육수는 필터로 여과한 후 자외선 조사 처리하여 2일마다 전량환수하는 것이 바람직하다. 환수시에는 유생의 유실을 막기 위해 거름망을 이용하여 전체 유생을 수거한 후 환수한다. 유생의 먹이로 배양한 해양미세조류를 사육초기에 1일 0.5 ~10 ×10⁴cells/ml로 공급하고, 오전 오후로 나누어 매일 2회씩 급이한다. 그리고 유생이 성장함에 따라 공급량을 적절하게 조절하여 늘린다.

본 발명에서 유생에게 공급도는 먹이로 실내 배양한 해양 미세조류를 이용한다. 바람직하게는 해수에 농업용 비료를 혼합한 배지에서 배양된 해양 미세조류를 급이하여 사육한다. 특히, 바람직하게 상기 배지는 상기 해양 미세조류의 세포분열 촉진을 위한 사이토키닌과, 면역강화를 위한 아르기닌 또는 비타민액이 더 첨가된 다. 해양미세조류를 배양하기 위한 배지에 대해서는 후술한다.

사육조에서 10 내지 25일 정도 사육된 저서 이행기의 유생은 채묘단계에서 채묘기에 부착하여 사육한다. 채묘기로 통상적인 전복채묘용이나 가리비 채묘용을 이용할 수 있다. 가령, 전복채묘용으로 투명한 염화비닐 파판을 수평식 또는 수직식으로 다수를 배열한 채묘기를 이용하거나, 가리비 채묘용으로 양파망 속에 모지망 500g을 채운 채묘기를 이용할 수 있다. 이외에도 굴패각을 이용한 굴채묘기를 이용할 수 있다.

사육시 수온은 27 내지 29도로 조절한다. 그리고 자외선 조사한 살균해수를 2일마다 유생을 거름망에 걸러주면서 전량 환수한다. 먹이공급은 배양한 해양미세조류를 1일 0.5 ~20×10⁴cells/ml로 공급한다. 채묘단계에서 10일 내지 40일 정도 사육된 꼬막들은 자연해역에 이식된다.

이하, 본 발명의 꼬막 종묘의 사육방법에 적용되는 해양 미세조류용 영양강화 배지에 대해서 상세하게 설명한다. 상기 배지에서 배양된 해양 미세조류를 상기 유생사육단계 뿐만 아니라 수정란준비단계에서 모패의 먹이나 채묘단계에서 유생의 먹이로 이용될 수 있음은 물론이다.

배양에 사용된 해양 미세조류는 아이소크라이시스 갈바나(Isochrysis galbana)를 이용하였다.

아이소크라이시스 갈바나는 분류학적으로 황갈색 편모조류에 속하며, 역사적으로 해산 연체동물 양식에 먹이생물로 이용되는 첫번째 종으로 크기가 작고 소화가 잘되어 꼬막의 먹이 생물로 매우 적합한 종이다.

무엇보다도 아이소크라이시스 갈바나는 우수한 영양적인 특성, 필수 영양소 중 특히 고도 불포화지방산(HUFA)의 함량이 높아 미세조류를 먹이로 섭취하는 초식성 무척추 동물, 예를 들면 패류, 갑각류, 극피동물 등의 유생에 먹이로 널리 사용된다.

아이소크라이시스 갈바나는 부경대 한국해양 미세조류은행으로부터 분양받은 종(KMCC-H-9)을 이용하였다.

1. 제 1실험예: 적정 배지의 탐색

아이소크라이시스 갈바나를 이용하여 가장 경제적이면서도 대량생산이 가능한 배지를 탐색하기 위해 하기의 실시 예들과 비교예의 배지를 이용하여 배양실험을 하였다.

(실시 예 1)

해수에 농업용 비료를 혼합한 농업용 비료 1.25배 배지를 만들었다. 이때 농업용 비료로는 질소 함량이 46%인 요소비료와 질소, 인, 카리의 함량이 각각 21%, 17%, 17%인 복합비료를 이용하였고, 해수 1ℓ를 기준으로 요소비료 38.96mg과, 복합비료 12.71mg을 혼합하였다.

따라서 질소 및 인의 함량은 해수 1ℓ를 기준으로 각각 20.59mg, 2.16mg이다. 이는 후술할 비교예 3의 schreiver 배지에 함유된 질산과 인산농도를 기준으로 1.25배의 질소 및 인이 함유된 것이다.

(실시 예2)

상기 실시 예1과 동일한 방법으로 배지를 만들되, 해수 1ℓ를 기준으로 요소비료 31.15mg과, 복합비료 10.17mg을 혼합하여 농업용 비료 1.0배 배지를 만들었다. 따라서 질소 및 인의 함량은 해수 1ℓ를 기준으로 각각 16.47mg, 1.73mg이다.

(실시 예3)

상기 실시 예1과 동일한 방법으로 배지를 만들되, 해수 1ℓ를 기준으로 요소비료 46.74mg과, 복합비료 15.29mg을 혼합하여 농업용 비료 1.5배 배지를 만들었다. 따라서 질소 및 인의 함량은 해수 1ℓ를 기준으로 각각 24.71mg, 2.60mg이다.

(비교예1)

아래 표1의 성분함량을 가지는 conwy배지를 이용하였다.

NaNO₃	100.0g
Na₂EDTA	45.0g
H₃BO₃	33.6g
NaH₂PO₄ㆍ2H₂O	20.0g
FeCl₃ㆍ6H₂O	1.30g
MnCl₂ㆍ4H₂O	0.36g
Trace Metal Solution*	1㎖
Vitamin Mix**	100㎖
Distilled water (to make)	1000㎖

*Trace Metal Solution
ZnCl₂	2.1g
CoCl₂ㆍ6H₂O	2.1g
(NH₄)₆ Mo₇O₂₄ㆍ4H₂O	2.1g
CuSO₄ㆍ5H₂O	2.0g
Distilled water 100㎖ (acidify with 1N HCl until solution is clear)

**Vitamin Mix
Vitamin B₁	20mg
Vitamin B₁₂	10mg
Distilled water	200㎖
-Utilization : 1 ㎖ Conwy medium/liter of seawater

(비교예 2)

질소와 인의 함량이 각각 10%, 4%인 액상비료 compsal(중앙프라자) 1ℓ를 이용하여 compsal배지를 만들었다.

(비교예 3)

해수 1ℓ에 질산염(NaNO₃) 100mg과, 인산염(Na₂HPO₄ㆍ12H₂O) 20mg, soil extract 50mg이 혼합된 schreiver배지를 이용하였다.

(비교예 4)

compsal배지 50vol% + 농업용비료 1.0 배 배지 50vol% 비율로 혼합한 배지를 만들었다.

(비교예 5)

conwy배지 75vol% + 농업용비료 1.0 배 배지 25vol% 비율로 혼합한 배지를 만들었다.

(비교예 6)

conwy배지 50vol% + 농업용비료 1.0 배 배지 50vol% 비율로 혼합한 배지를 만들었다.

(비교예 7)

conwy배지 25vol% + 농업용비료 1.0 배 배지 75vol% 비율로 혼합한 배지를 만들었다.

(비교예 8)

상기 실시 예1과 동일한 방법으로 배지를 만들되, 해수 1ℓ를 기준으로 요소비료 62.33mg과, 복합비료 20.35mg을 혼합하여 농업용 비료 2.0배 배지를 만들었다. 따라서 질소 및 인의 함량은 해수 1ℓ를 기준으로 각각 32.94mg, 3.46mg이다.

(비교예 9)

상기 실시 예1과 동일한 방법으로 배지를 만들되, 해수 1ℓ를 기준으로 요소비료 49.07mg과, 복합비료 10.17mg을 혼합하여 농업용 비료(질소 1.5배, 인 1.0배) 배지를 만들었다. 따라서 질소 및 인의 함량은 해수 1ℓ를 기준으로 각각 24.71mg, 1.73mg이다.

아이소크라이시스 갈바나의 대량 배양시 적정 배지를 선정하기 위해 상기의 실시예들 및 비교 예들의 배지를 이용하여 접종 후 경과일수에 따른 세포수를 측정하였다. 그 결과는 하기의 표2에 나타내었다.

배양조건은 250㎖ 삼각플라스크에서 배양수온 25℃, 조도는 연속조명 6000 lux였으며, 초기접종밀도는 50×10⁴cells/ml였으며, 7일간 배양하였다. 성장은 1일 1회 Thomas 혈구측정기(hemocytometer)로 광학 현미경(CH2,Olympus)하에서 세포수를 측정하였고, 일간 성장률은 아래와 같은 SGR(specific growth rate)측정방법을 이용하여 계산하였다.

일간성장률= (2.3026/0.6931)×(log(N₂/N₁)/(t₂-t₁))

(t₁,t₂ = 접종 후 각 경과 일수, N₁ _,N₂ = 접종 후 t₁,t₂ 일 때의 밀도)

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
구분	0day	1day	2day	3day	4day	5day	6day	7day
실시예2	50	53	68	76	84	96	126	142
비교예1	50	68	81	83	100	128	148	170
비교예2	50	51	54	64	71	86	92	104
비교예3	50	51	68	70	80	82	101	132
비교예4	50	51	59	63	81	90	98	138

상기 표 2의 결과로부터 아이소크라이시스 갈바나 (Isochrysis galbana)의 대량배양시 적정 영양배지를 탐색한 결과 비교예 1에서 성장률이 0.3245로 가장 높았고 비교예 3보다는 실시예 2가 0.2814로 더 높았다. 비교예 2는 0.2206으로 성장이 가장 낮았으며 비교예4는 0.2813으로 농업용 비료만을 사용한 실시예2 에 비해 큰 차이가 없었다.

따라서 conwy 배지와 비교해 볼 때 가장 경제적이면서도 대량배양에 적합한 배지는 농업용 비료를 사용한 실시예2 로 나타났다.

상기와 같은 결과를 바탕으로 농업용 비료를 이용하는 배지의 경우 가장 적합한 농업용 비료의 함량을 파악하기 위하여 실시 예 2 와 실시 예 3, 비교 예 1, 비교 예 5 내지 비교 예 8의 배지에 아이소크라이시스 갈바나를 배양하여 접종 후 경과일수에 따른 세포수를 측정하여 그 결과를 하기의 표3에 나타내었다.

배양조건은 250㎖ 삼각플라스크에서 배양수온 25℃, 조도는 연속조명 6000 lux였으며, 초기접종밀도는 50×10⁴cells/ml였으며, 5일간 배양하였다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
구분	0day	1day	2day	3day	4day	5day
비교예 1	50	66	75	83	116	133
비교예 5	50	61	76	88	109	116
비교예 6	50	60	72	77	94	99
비교예 7	50	59	66	75	90	94
실시예 2	50	53	61	79	83	84
실시예 3	50	52	55	67	83	83
비교예 8	50	54	59	60	62	64

상기 5일간 실험결과는 표3에서와 같이 대조구인 비교 예1의 conwy에서 specific growth가 0.3837로 가장 높았고, 비교예 5 내지 비교 예 7에서는 conwy가 많이 들어간 순으로 성장이 좋았다. 또 비료만을 넣은 것은 conwy보다 성장이 낮았고 비료를 많이 넣을수록 성장이 좋지 못했다.

따라서 농업용 비료의 경우 해수 1ℓ당 질소 16.47 내지 24.71mg, 인 1.73 내지 2.60mg이 함유된 배지에서 갈바나의 성장이 가장 양호함을 알 수 있다.

가장 적합한 비료의 농도를 재확인하기 위하여 실시 예 1 내지 실시 예 3, 비교예 1의 배지를 이용하여 갈바나의 성장을 실험하여 그 결과를 하기의 표 4에 나타내었다. 배양조건은 250㎖ 삼각플라스크에서 배양수온 25℃, 조도는 연속조명 6000 lux였으며, 초기접종밀도는 50×10⁴cells/ml였으며, 5일간 배양하였다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
구분	0day	1day	2day	3day	4day	5day
실시예1	50	66	76	88	102	124
실시예2	50	68	78	89	96	109
실시예3	50	64	71	83	96	102
비교예1	50	77	87	93	116	142
비교예9	50	66	75	84	99	106

상기 표 4의 결과로부터 비교 예 1과 비교시 농업용 비료 1.25 배, 즉 질소 20.59mg, 인 2.16mg이 함유된 농업용 비료 배지에서 갈바나의 성장이 가장 양호한 것으로 나타났다.

상기 실험 결과들을 종합해 볼 때 농업용 비료는 1.0 내지 1.5배, 특히 1.25배의 농업용 비료 배지를 사용하는 것이 가장 효율적이고 경제적인 배지로 판단된다.

2. 제 2실험예: 세포분열촉진제 탐색

세포분열을 촉진시키기 위해 실시 예1의 농업용 비료 1.25배 배지 1ℓ에 옥신, 지베렐린, 사이토키닌을 각각 첨가하여 아이소크라이시스 갈바나 (Isochrysis galbana)의 세포분열을 매일 측정하였다. 대조구로는 비교예 1의 conwy배지를 이용하였다. 배양조건은 250㎖ 삼각플라스크에서 배양수온 25℃, 조도는 연속조명 6000 lux였으며, 초기접종밀도는 50×10⁴cells/ml였으며, 5일간 배양하였다.

그 결과는 하기의 표 5 내지 표7에 각각 나타내었다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
구분	0day	1day	2day	3day	4day	5day
옥신1ml/L	50	77	87	93	116	142
옥신2ml/L	50	74	86	93	112	140
옥신3ml/L	50	74	88	90	114	140
옥신4ml/L	50	77	87	99	121	147
옥신5ml/L	50	66	88	96	116	138
conwy 배지	50	67	88	103	121	144

상기 표 5를 살펴보면, 실험개시시 5×10⁴ cells/ml 이던 것이 배지 1 L당 옥신 1 내지 5ml의 첨가구에서 138 내지 147×10⁴ cells/ml의 밀도를 보여 대조구인 conwy 배지구의 144×10⁴ cells/ml와 유의한 차이를 보이지 않았다. 옥신4 ml/L 첨가구에서 147×10⁴ cells/ml로 가장 높은 성장을 보였으나 peak가 1000×10⁴ cells/ml 이상인 아이소크라이시스 갈바나 밀도를 두고 보았을 때 옥신의 영향이라고 볼 수 없다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
구분	0day	1day	2day	3day	4day	5day
지베렐린1ml/L	50	79	84	92	120	144
지베렐린2ml/L	50	79	82	93	114	138
지베렐린3ml/L	50	72	86	94	119	150
지베렐린4ml/L	50	77	81	98	122	149
지베렐린5ml/L	50	73	92	99	120	144
conwy 배지	50	67	88	103	121	144

상기 표 6의 지베렐린 첨가실험의 경우 옥신의 실험구와 마찬가지로 각 첨가구에서 138-150×10⁴ cells/ml의 밀도를 보여 대조구인 conwy 배지의 144×10⁴ cells/ml과 비교해 보았을 때 유의한 차이를 보이지 않았다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
구분	0day	1day	2day	3day	4day	5day
사이토키닌1ml/L	50	77	87	93	116	142
사이토키닌2ml/L	50	83	92	115	135	179
사이토키닌3ml/L	50	86	95	121	142	185
사이토키닌4ml/L	50	94	109	124	154	201
사이토키닌5ml/L	50	89	107	125	153	200
conwy 배지	50	67	88	103	121	144

상기 표 7의 사이토키닌의 경우 접종 5일 후 1 ml/L 첨가구에서는 대조구인 conwy 배지와 유의한 차이가 없었으나 2 ml/L 첨가구에서는 179×104 cells/ml, 3 ml/L 첨가구에서는 185×104 cells/ml의 세포분열을 보였고, 4 ml/L 첨가구에서는 201×104 cells/ml로 가장 높은 세포분열 속도를 나타내었다. 5 ml/L 첨가구에서 200×104 cells/ml로 4 ml/L 첨가구와 비슷한 경향을 보였다.

상기의 결과로부터 농업용 비료에 사이토키닌이 첨가되었을 때 갈바나의 세포분열을 촉진시킴을 알 수 있고, 사이토키닌의 첨가량은 배지 1ℓ를 기준으로 4 내지 5ml/L가 바람직한 것으로 나타났다.

3. 제 3실험예: 수온에 대한 면역물질의 탐색

실시 예1의 농업용 비료 1.25배 배지 1ℓ에 아르기닌과 시스테인 및 비타민액을 각각 첨가하여 아이소크라이시스 갈바나 (Isochrysis galbana)를 대상으로 수온에 대한 저항성 및 세포분열을 관찰하였다. 비타민액은 증류수 1000㎖에 티아민(Thiamine) 60 mg, 시아노코발라민(Cyanocobalamine) 70 mg, 비오틴(Biotin) 100 mg을 혼합한 용액을 이용하였고, 대조구로는 비교예 1의 conwy배지를 이용하였다. 배양조건은 250㎖ 삼각플라스크에서 배양수온을 달리하면서 조도는 연속조명 6000 lux였으며, 초기접종밀도는 50×10⁴cells/ml였으며, 5일간 배양하였다.

그 결과는 하기의 표 8 내지 10에 나타내었다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
	10℃						25℃
	0day	1day	2day	3day	4day	5day	0day	1day	2day	3day	4day	5day
아르기닌1ml/L	50	54	68	67	-	-	50	83	94	92	-	-
아르기닌2ml/L	50	55	67	84	86	-	50	82	82	93	-	-
아르기닌3ml/L	50	72	86	95	105	121	50	80	86	94	-	-
아르기닌4ml/L	50	77	81	94	106	120	50	85	81	90	-	-
아르기닌5ml/L	50	73	82	95	103	120	50	83	92	90	-	-
conwy배지	50	53	67	-	-	-	50	83	88	-	-	-

상기 표 8을 참조하면, 10℃의 저수온에서 3 내지 5 ml/L 첨가한 아르기닌 첨가구의 경우 120×104 cells/ml 내외의 세포분열을 보여 가장 좋은 결과를 보였다. 이에 반해 1 ml/L와 2 ml/L 첨가구에서는 각각 실험 3일과 4일 후 67×10⁴ cells/ml, 86×10⁴ cells/ml의 세포분열을 보이다가 4일과 5일 후에 모두 폐사하였다. conwy배지만을 사용한 대조구에서도 저수온에서는 실험 3일 후 모두 폐사하였다.

그리고 비교적 고수온인 25℃에서는 아르기닌 첨가구 및 대조구 모두 실험 3일 또는 4일 만에 모두 폐사하였다.

상기의 결과로부터 아르기닌의 첨가에 의한 수온에 대한 면역기능은 고수온보다는 저수온에서 효과적임을 알 수 있었다. 특히, 아르기닌의 첨가량이 3 내지 5 ml/L 인 것이 바람직하였다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
	10℃						25℃
	0day	1day	2day	3day	4day	5day	0day	1day	2day	3day	4day	5day
시스테인1ml/L	50	79	74	-	-	-	50	82	92	-	-	-
시스테인1ml/L	50	79	72	-	-	-	50	80	82	-	-	-
시스테인1ml/L	50	72	76	-	-	-	50	80	86	-	-	-
시스테인1ml/L	50	77	71	-	-	-	50	85	81	-	-	-
시스테인1ml/L	50	73	72	-	-	-	50	83	92	-	-	-
conwy배지	50	53	67	-	-	-	50	83	88	-	-	-

상기 표 9의 시스테인의 경우 10℃와 25℃에서 실험 3일 만에 모두 폐사하여 conwy배지만을 사용한 대조구와 비슷한 경향을 보임으로써 수온에 대한 면역기능을 하지 못하는 것으로 나타났다.

구분	cell density( ×10⁴cells/ml)
	10℃						25℃
	0day	1day	2day	3day	4day	5day	0day	1day	2day	3day	4day	5day
비타민1ml/L	50	79	84	84	-	-	50	79	84	92	-	-
비타민2ml/L	50	79	82	84	-	-	50	79	82	93	-	-
비타민3ml/L	50	72	86	82	-	-	50	72	86	92	99	103
비타민4ml/L	50	77	81	80	-	-	50	73	85	94	96	101
비타민5ml/L	50	73	92	88	-	-	50	72	80	95	97	103
conwy배지	50	53	67	-	-	-	50	83	88	-	-	-

상기 표 10의 비타민 액을 첨가한 첨가구에서는 10℃의 저수온의 경우 모든 실험구에서 실험 3일 후 85×10⁴ cells/ml 전후의 세포분열을 보이다가 실험개시 4일만에 모두 폐사하여 실험개시 3일 만에 모두 폐사한 conwy배지만을 사용한 대조구와 비슷한 경향을 보여 저수온에서는 면역 효과가 없는 걸로 나타났다.

25℃의 고수온에서는 비타민 1 ml/L와 2 ml/L를 첨가한 첨가구에서 실험개시 3일 후 각각 92×10⁴ cells/ml, 93×10⁴ cells/ml의 세포 밀도를 보이다가 4일 만에 모두 폐사하였으나 3 내지 5 ml/L 실험구에서는 103×10⁴ cells/ml의 세포분열을 보여 고수온에 대한 효과가 높은 것으로 나타났다.

상기 표 2 내지 표 10결과들로부터 가장 경제적이면서도 미세조류의 대량 배양이 가능한 배지는 해수에 농업용 비료를 혼합한 배지이며, 특히 해수 1ℓ에 질소 16.47 내지 24.71mg, 인 1.73 내지 2.60mg을 함유하는 농업용 비료 배지임을 알 수 있다. 나아가 세포분열촉진제로 사이토키닌을 첨가하거나, 수온에 대한 면역강화물질로 저수온에서는 아르기닌을 첨가하고 고수온에서는 비타민액을 첨가하는 것이 효과적임을 알 수 있다.

상기한 바와 같이 본 발명의 꼬막 종묘의 생산방법에 상기의 배지를 이용하여 대량으로 배양한 해양 미세 조류를 먹이로 이용하므로 먹이의 안정적 공급이 가능하고, 어린 유생에게 양적 및 질적으로 우수하면서도 경제적인 먹이를 급이할 수 있는 장점을 가진다. 우수한 먹이를 공급함으로써 꼬막 유생의 생존율을 높이고 성장을 촉진시킬 수 있다.

또한, 상기 배지를 이용함으로써 기존의 식물먹이 생물 배양보다 배양기간을 단축시키면서 동시에 단위시간당 생산량을 높일 수 있다.

이상에서 본 발명은 일 실시 예를 참고로 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 실시 예가 가능하다는 점을 이해할 것이다.

따라서 본 발명의 진정한 보호 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 정해져야 할 것이다.

Claims

삭제
채집된 모패를 각폭과 좌우 패각의 각정 간격에 의해 암수를 선별한 후 암컷의 산란이 완료된 수조에 수컷으로부터 방정된 정자를 투입하여 수정란을 얻는 수정란준비단계와;

해수를 여과하여 해수 중의 이물질을 제거한 후 자외선을 조사하여 살균처리한 해수로 상기 수정란을 세척하는 세란단계와;

상기 수정란을 부화조에 수용하여 부화시키는 부화단계와;

상기 부화조에서 부화된 부화유생을 유생 사육조에서 5 내지 10개체/1mL로 수용하여 10 내지 25일 동안 사육하며, 사육수는 필터로 여과한 후 자외선 조사 처리하여 2일마다 전량 환수하되 거름망을 이용하여 전체 유생을 수거한 후 환수하는 유생사육단계와;

상기 유생 사육조에서 사육된 유생을 양파망 속에 모지망을 채운 채묘기에 부착시켜 10 내지 40일 동안 사육하는 채묘단계;를 구비하는 것을 특징으로 하는 꼬막 종묘의 생산 방법.
제 2항에 있어서, 상기 유생사육단계는 해수에 농업용 비료를 혼합한 배지에서 배양된 해양 미세조류를 급이하여 사육하는 것을 특징으로 하는 꼬막 종묘의 생산 방법.
제 3항에 있어서, 상기 농업용 비료는 상기 해수 1ℓ를 기준으로 질소 16.47 내지 24.71mg, 인 1.73 내지 2.60mg을 함유하며,

상기 배지는 상기 해양 미세조류의 세포분열 촉진을 위한 사이토키닌과, 면역강화를 위한 아르기닌 또는 비타민액이 더 첨가된 것을 특징으로 하는 꼬막 종묘의 생산 방법.