CN102993145A - 一种提取纯化洛伐他汀的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提取纯化洛伐他汀的方法，将生产洛伐他汀的发酵液用酸调至pH1-6，过滤，滤渣用有机溶剂萃取，有机相浓缩，冷却结晶，离心，干燥得粗品，然后对粗品进行微波处理，再溶解在有机溶剂中利用活性炭脱色，重结晶，离心，洗涤，干燥，得到洛伐他汀产品。微波处理使粗品中的杂质变性、固化，达到易于分离的目的，从而提高了产品纯度和质量。

Description

一种提取纯化洛伐他汀的方法

技术领域

本发明涉及洛伐他汀的提取方法，具体涉及从培养土曲霉产生的富含洛伐他汀的发酵液中，提取并纯化洛伐他汀的方法。

背景技术

洛伐他汀(LOVASTATIN)，化学名称为：(S)-2-甲基丁酸-(1S，3S，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-8-{2-[(2R，4R)-4-羟基-6氧代-2-四氢吡喃基]-乙基}-1-萘酯；分子式为C₂₄H₃₆O₅，分子量404.55，结构如下所示：

1987年，默克公司的降血脂药物洛伐他订(lovastatin，Mevacor)获FDA批准上市后，立即引起了医学界的关注，该药的成功开创了降血脂药物的崭新阶段。该药通过抑制胆固醇合成过程中的限速酶羟甲戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)的活性，减少肝胆固醇的合成，刺激低密度脂蛋白(LDL)受体产生，并加强血浆中低密度脂蛋白的清除，极低密度脂蛋白水平也降低，是全球第一个批准上市的HMG-CoA还原酶抑制剂。

PCT申请公开说明书WO9720834(A1)阐述了一种提取洛伐他汀的方法：将发酵液用NaOH调至碱性，然后用甲苯和乙醇的混合溶剂在搅拌的情况下萃取。萃取液洗后加入甲苯和珍珠岩，并用硝酸酸化，搅拌后加入氯仿，压缩过滤后，再加入氯仿加热使环化完全。浓缩结晶后所得粗品再进行重结晶。

PCT申请公开说明书WO0063411(A1)又阐述了一种新的方法：发酵液用NaOH调至碱性，在低温下搅拌，用离心机将菌渣和碱化的萃取液分离，收集滤液；菌渣进一步萃取，将菌渣加入一定量的水并调至碱性，搅拌，再次用离心机分离，收集滤液，菌渣丢弃。收集的滤液用硫酸调至酸性，并加入丁酯和正辛烷的混合有机溶剂萃取，离心分离。有机相真空浓缩，并加入乙酸促进环化，浓缩液冷却到低温下结晶24小时。

挪威专利申请公开说明书NO20015932(A)阐述了的方法是将发酵液用硫酸调至酸性并加热，在高温下搅拌24小时，环化率达到90％。然后对发酵液进行过滤，菌渣用甲苯萃取，萃取液用碳酸氢钠溶液和无盐水洗涤，洗后的萃取液真空浓缩，冷却至低温并搅拌一小时后离心，并用冷甲苯洗涤，浓缩结晶。

在美国专利申请公开说明书US 5712130(A)中提出：发酵液用盐酸调至酸性，冷却后加入丁酯，萃取一定时间，水相和菌渣丢弃不用，有机相做进一步处理。有机相在真空浓缩，再冷却至低温结晶。离心干燥后得到粗品，得到的产品纯度低。

上述方法得到的洛伐他汀粗品，经过乙醇重结晶后，在乙腈或丙酮中溶解会产生乳光，甚至有不容物颗粒。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种提取纯化洛伐他汀的方法，在已有的提取工艺基础上，将微波定型技术应用于物质纯化，通过电磁波的能量辐射，使产品中的杂质变性、固化，达到易于分离的目的，从而提高产品纯度和质量。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种提取纯化洛伐他汀的方法，包括如下步骤：

1)将生产洛伐他汀的发酵液用酸调至pH1-6，过滤弃滤液，滤渣用有机溶剂萃取，取有机相；

2)将步骤1)所得有机相浓缩，冷却后结晶，离心，干燥晶体得粗品；

3)对粗品进行微波处理；

4)将微波处理后的粗品溶解在有机溶剂中利用活性炭脱色，然后重结晶，离心，洗涤，干燥，得到洛伐他汀产品。

上述方法中，步骤1)调节发酵液pH所用的酸可以是盐酸、硫酸、磷酸等无机酸，也可以是醋酸、草酸等有机酸，或是它们的混合物，优选盐酸；对滤渣进行萃取的有机溶剂可以是乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯等低级酯，也可以是甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等低级醇，或是它们的混合物，优选乙酸丁酯。

步骤3)用微波处理的目的在于使粗品中的杂质变性、固化，处理时间依所处理的样品量和使用的微波功率而定，本领域技术人员可以根据本发明实施例给出的检测方法，针对所需处理的样品，通过有限次的实验得到合适的处理条件。例如，对于5-10g的粗品样品，600W微波处理60-150秒或者1200W微波处理30-80秒即可。

步骤4)中所用有机溶剂可以是甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等低级醇，也可以是乙酸乙酯、乙酸丁酯等低级酯，还可以是丙酮、丁酮等低级酮，或是它们的混合物，优选乙醇。

将本发明方法制备的洛伐他汀产品分别在乙腈、丙酮中配成2％质量体积比浓度(单位g/mL，即100mL溶液中含有2g产品)的溶液，未发现乳光，未发现颗粒物。

附图说明

图1为实施例1制备的产品A1的HPLC色谱图；

图2为实施例1制备的产品A2的HPLC色谱图；

图3为实施例2制备的产品B1的HPLC色谱图；

图4为实施例2制备的产品B2的HPLC色谱图；

图5为实施例3制备的产品C1的HPLC色谱图；

图6为实施例3制备的产品C2的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步的详细描述，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1

8L发酵液用3N盐酸调至pH2.8，过滤弃滤液，滤渣用醋酸丁酯800ml、300ml萃取两次，有机相合并后在80℃下真空浓缩至160ml，再冷却至10℃结晶，离心，干燥后得到粗品15.1g。将粗品平均分成两份，一份在600W微波处理90秒，然后用120ml乙醇热溶解，加入0.8g活性炭进行脱色处理，热过滤，滤液定容125ml，降温进行重结晶，抽滤，真空干燥晶体得产品A2。另一份直接用120ml乙醇热溶解，加入0.8g活性炭脱色，热过滤，滤液定容125ml，降温重结晶，抽滤，真空干燥晶体得产品A1。

实施例2

8L发酵液用3N盐酸调至pH2.9，过滤弃滤液，滤渣用醋酸丁酯800ml、300ml萃取两次，有机相合并后在80℃下真空浓缩至156ml，再冷却至10℃结晶，离心，干燥后得到粗品15.06g。将粗品平均分成两份，一份在600W微波处理150秒，然后用100ml乙醇热溶解，加入0.7g活性炭进行脱色处理，热过滤，滤液定容105ml，降温进行重结晶，抽滤，真空干燥晶体得产品B2。另一份直接用100ml乙醇热溶解，加入0.7g活性炭脱色，热过滤，滤液定容105ml，降温重结晶，抽滤，真空干燥晶体得产品B1。

实施例3

8L发酵液用3N盐酸调至pH3.0，过滤弃滤液，滤渣用醋酸丁酯800ml、300ml萃取两次，有机相合并后在85℃下真空浓缩至160ml，再冷却至10℃结晶，离心，干燥后得到粗品15.3g。将粗品平均分成两份，一份在1200W微波处理30秒，然后用120ml乙醇热溶解，加入0.8g活性炭进行脱色处理，热过滤，滤液定容125ml，降温进行重结晶，抽滤，真空干燥晶体得产品C2。另一份直接用120ml乙醇热溶解，加入0.8g活性炭脱色，热过滤，滤液定容125ml，降温重结晶，抽滤，真空干燥晶体得产品C1。

产品检测：

将实施例1-3所得产品分别溶解于乙腈、丙酮中配成质量体积比浓度为2％g/mL的溶液，进行浊度测定，结果比较如下表：

经过微波处理后，洛伐他汀的溶解性明显改善，不溶性杂质被除去。利用HPLC检测产品A1、A2、B1、B2、C1和C2的纯度，色谱图如图1～图6所示，它们的纯度分别是99.197％、99.217％、99.097％、99.220％、99.258％和99.257％，可见，微波处理没有改变洛伐他汀的结构，产品纯度符合要求。

Claims (5)

1.一种提取纯化洛伐他汀的方法，包括以下步骤：

1)将生产洛伐他汀的发酵液用酸调至pH1-6，过滤弃滤液，滤渣用有机溶剂萃取，取有机相；

2)将步骤1)所得有机相浓缩，冷却后结晶，离心，干燥晶体得粗品；

3)对粗品进行微波处理；

4)将微波处理后的粗品溶解在有机溶剂中利用活性炭脱色，然后重结晶，离心，洗涤，干燥，得到洛伐他汀产品。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)调节发酵液pH所用的酸选自盐酸、硫酸、磷酸、醋酸和草酸中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)萃取用有机溶剂选自乙酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、甲酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、甲酸丁酯、丁酸甲酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯、甲醇、乙醇、异丙醇和丁醇中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)微波处理的条件是：对于5-10g的粗品样品，600W微波处理60-150秒或者1200W微波处理30-80秒。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)溶解粗品所用有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酮和丁酮中一种或多种。

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