CN102988284B - 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法，步骤如下：1）称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，加入半量注射用水，加热到40℃使溶解，得到温度40℃辅料溶液；2）称取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料，加入到上述辅料溶液中，搅拌至全部溶解；3）加入20g活性炭搅拌30分钟，滤出活性炭；4）补加注射用水至19L，用氢氧化钠或盐酸调节pH值至7.4～7.6，补加注射用水到20L；5）灌装后，采用旋转水浴式灭菌，灭菌条件为：121℃灭菌20分钟。

Description

一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，特别涉及一种质量稳定、安全有效的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液及其制备方法。

背景技术

神经节苷脂（gangliosides，GLS）又称N物质，是一组含有唾液酸的鞘糖脂，分子由疏水的神经酰胺和亲水的含唾液酸的寡糖链组成，广泛分布于脊椎动物各组织的细胞膜上，其中以神经系统含量最为丰富；通常根据唾液酸数目不同分为GM(单唾液酸神经节苷脂)、GD(二唾液酸神经节苷脂)和GT(三唾液酸神经节苷脂)等；又根据糖基数目不同将GM分为GM1(含4个糖基)、GM2(含3个糖基)和GM3(含2个糖基)

单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM-1)是最重要的神经节苷脂之一，可促使体外培养的神经细胞生长、分化、再生，对神经生长因子有调节作用，能够促进神经元轴突和树突增生，侧突形成，抑制细胞变性，加强神经营养，减少受损胞体的死亡，促进神经元的再生和机能恢复

GM-1的分子结构式如下：

单唾液酸四己糖神经节苷脂能促进由于各种原因引起的中枢神经系统损伤的功能恢复。作用机理是促进“神经重构neuroplasticity”（包括神经细胞的生存、轴突生长和突触生长）。单唾液酸四己糖神经节苷脂对损伤后继发性神经退化有保护作用。单唾液酸四己糖神经节苷脂对脑血流动力学参数以及因损伤后导致脑水肿有积极的作用。单唾液酸四己糖神经节苷脂通过改善细胞膜酶的活性减轻神经细胞水肿。动物实验显示单唾液酸四己糖神经节苷脂可改善帕金森病所致的行为障碍。

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠（GM1）是主要的神经节苷脂之一，临床上用于治疗血管性或外伤性中枢神经系统损伤；帕金森氏病。

由于单唾液酸四己糖神经节苷脂钠是从猪脑中提取的生物制品，为使其注射液保持安全稳定，避免过敏和其他副作用，生产过程必须多层次的控制，导致生产过程复杂，中间环节多，成本高昂，同时现有制备方法对操作过程以及工艺参数也没有明确的界定，导致产品的质量出现差异。本发明经过工艺改进，通过关键工艺参数的设定和操作步骤的选定，使本发明的工艺方法简单快捷，生产出的产品稳定安全，质量可控，取得了意想不到的技术效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种质量更加稳定、安全、有效的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法。

进一步地，本发明提供了制备单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液时，原料药需要采用特殊溶解条件及特殊灭菌方式的最佳制备工艺及关键工艺参数；

本发明所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液，配方组成如下：

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 200g

氯化钠 160g

磷酸氢二钠23.8g

磷酸二氢钠 4.43g

注射用水 加到20L

溶液pH值为7.4～7.6。

其制备方法包括以下步骤：

1）称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，加入10L注射用水，加热到40℃使溶解，得到温度40℃辅料溶液；

2）称取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料，加入到上述辅料溶液中，搅拌至全部溶解；

3）加入20g活性炭搅拌30分钟，滤出活性炭；

4）补加注射用水至19L，用氢氧化钠或盐酸调节pH 值至7.4～7.6，补加注射用水到20L；

5）灌装后，采用旋转水浴式灭菌，灭菌条件为：121℃灭菌20分钟。

本发明上述制备方法，是经过筛选获得的，筛选过程如下：

本发明产品与进口产品的检测色谱图见附图1、2，从中可见进口产品施捷因中产生了降解杂质GD3,而采用本发明工艺制备的产品没有产生降解杂质GD3。

本发明技术方案制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液与现有市售产品相比，澄明度检测仪检查，外观更澄清，高效液相色谱检测，杂质更少，可以显著增强产品的安全性和稳定性，以下通过试验数据进一步说明本发明的有益效果：

试验例1 灭菌稳定性试验

对实施例1、实施例2灭菌后单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液和同样的制备方法但采用湿热灭菌法灭菌的样品进行比较，考察其灭菌后制剂性状、pH值及降解杂质。结果见表1。

表1 不同灭菌方法得到的产品的观察结果

由表1可见，本发明灭菌法制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液（旋转水浴灭菌）较湿热灭菌法得到的产品效果更好，杂质更小，可以显著增强产品的安全性和稳定性。

试验例2   贮藏稳定性试验

将实施例1、实施例2制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液和市场上的市售样品进行比较，在常温下贮藏12个月，以降解杂质为考察指标，进行长期稳定性考察试验。结果见表2。

表2 不同处方单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液长期稳定性考察结果

测定时间	实施例1	实施例2	市售样品
				0月	0.02%	0.03%	0.14%
3月	0.03%	0.04%	0.16%
				6月	0.05%	0.06%	0.19%
9月	0.07%	0.08%	0.21%
				12月	0.08%	0.10%	0.23%

由表2可见，本发明制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液，在常温下考察12个月，降解杂质明显低于市售样品。

综上所述，本发明提供了一种新的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液制备方法，生产工艺过程简单，具有鲜明的创造性和实用性，在临床使用上必将有良好的应用前景。

附图说明

图1：由本申请实施例1制得的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液有关物质检测高效液相色谱图。

图2：进口上市产品“施捷因”的有关物质检测高效液相色谱图。

为了更好地理解本发明，下面通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。

具体实施方式

本发明所用原辅材料，如无特别说明，均为药用级别。

实施例1

取精密称重的磷酸氢二钠23.8g、磷酸二氢钠4.43g、氯化钠160g，加入配剂量50%(10L)、温度为40℃的注射用水中搅拌溶解，再将精密称重的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料200g加入到温度为40℃的上述溶液中，转速900rpm，搅拌10分钟以上至全部溶解。加入0.1％活性炭（W/V），转速900rpm搅拌吸附30分钟。用0.45μm金属滤芯脱炭。加注射用水至配剂量95%(19L)，用浓度约为1.0mol/L氢氧化钠溶液或盐酸调节pH值至7.4～7.6，加注射用水定容至20L；过滤、灌装、加塞压盖、121℃，20分钟旋转水浴灭菌、灯检、包装即得。

实施例2

取精密称重的磷酸氢二钠23.8g、磷酸二氢钠4.43g、氯化钠160g，加入配剂量50%(10L)、温度为60℃的注射用水搅拌溶解，再将精密称重的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠200g加入到温度为60℃的磷酸盐溶液中，转速1000rpm，搅拌30分钟至全部溶解。加入0.1％活性炭（W/V），转速1000rpm搅拌吸附15分钟。用0.45μm金属滤芯脱炭。加注射用水至配剂量95%，用浓度约为0.5mol/L氢氧化钠溶液或盐酸调节pH值至7.4～7.6，加注射用水定容至20L。过滤、灌装、加塞压盖、121℃，30分钟旋转水浴灭菌、灯检、包装即得。

实施例3

对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液有关物质进行检测，方法如下：

HPLC法,色谱条件：用氨基键合硅胶为填充剂，以乙腈一四氢呋喃-0.1mol/L磷酸溶液（66：8：34）为流动相，流速为1.0ml/min,进样量20μl，检测波长应为205nm。

系统适用性试验：取对照品溶液（1）、对照品溶液（2）、对照品溶液（3）和供试品溶液等量混合。摇匀，作为系统适用性试验溶液。精密量取40μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按单唾液酸四己糖神经节苷脂钠峰计，理论板数不得低于1000，主峰与前后相邻的杂质峰的分离度应大于1.5。

有关物质对照品溶液的制备：  精密称取唾液酸对照品适量，加水溶解并稀释制成1ml含10μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液（1）；精密称取GD1a对照品适量，加水溶解并稀释制成1ml含40μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液（2）；精密称取GD3对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液（3）。

有关物质供试品溶液的制备  取供试品适量，加水稀释制成每1ml中含GM1 2mg的溶液，摇匀即得。

有关物质对照溶液的制备  精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。

测定法  取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的20%～30%。再精密量取供试品溶液、对照品溶液（1）（2）（3）、对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的5倍。在供试品溶液记录的色谱图中，如有保留时间与对照品溶液（1）、（2）、（3）主峰保留时间一致的峰，其峰面积分别不能大于对照品溶液（1）、（2）、（3）主峰峰面积（游离唾液酸不得过0.40%、GD1a不得过2.00%、GD3 不得过1.00%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2（0.40%），各杂质峰（溶剂峰不计）面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的5倍（5.00%）。

Claims (3)

1.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的制备方法，所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液，配方组成如下：

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠 200g

氯化钠 160g

磷酸氢二钠 23.8g

磷酸二氢钠 4.43g

注射用水 加到20L

溶液pH值为7.4～7.6，

其制备方法包括以下步骤：

1）称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠，加入10L注射用水，加热到40℃使溶解，得到温度40℃辅料溶液；

2）称取单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料，加入到上述辅料溶液中，搅拌至全部溶解；

3）加入20g活性炭搅拌30分钟，滤出活性炭；

4）补加注射用水至19L，用氢氧化钠或盐酸调节pH 值至7.4～7.6，补加注射用水到20L；

5）灌装后，采用旋转水浴式灭菌，灭菌条件为：121℃灭菌20分钟。

2.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤如下：

取精密称重的磷酸氢二钠23.8g、磷酸二氢钠4.43g、氯化钠160g，加入50%注射用水，温度为40℃的注射用水搅拌溶解，再将精密称重的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠原料200g加入到温度为40℃的上述溶液中，转速900rpm，搅拌30分钟至全部溶解，加入0.1％活性炭，转速900rpm搅拌吸附30分钟，用0.45μm金属滤芯脱炭，加注射用水至19L，用浓度为1.0mol/L的氢氧化钠溶液或盐酸调节pH值至7.4～7.6，加注射用水定容至20L；过滤、灌装、加塞压盖、121℃，20分钟旋转水浴灭菌、灯检、包装即得。

3.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液的检测方法，包括以下步骤：

采用HPLC法检测,色谱条件：

用氨基键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-0.1mol/L磷酸溶液=66：8：34为流动相，流速为1.0ml/min,进样量20μl，检测波长应为205nm；

系统适用性试验：取对照品溶液（1）、对照品溶液（2）、对照品溶液（3）和供试品溶液等量混合，摇匀，作为系统适用性试验溶液，精密量取40μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按单唾液酸四己糖神经节苷脂钠峰计，理论板数不得低于1000，主峰与前后相邻的杂质峰的分离度应大于1.5；

有关物质对照品溶液的制备：精密称取唾液酸对照品适量，加水溶解并稀释制成1ml含10μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液（1）；

精密称取GD1a对照品适量，加水溶解并稀释制成1ml含40μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液（2）；

精密称取GD3对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液（3）；

有关物质供试品溶液的制备取供试品适量，加水稀释制成每1ml中含GM12mg的溶液，摇匀即得；

有关物质对照溶液的制备精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得；

测定法取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的20%～30%，再精密量取供试品溶液、对照品溶液（1）（2）（3）、对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，进行测定。

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