CN102986736A - 粘质沙雷氏菌在防治白蚁中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了粘质沙雷氏菌在防治白蚁中的应用及关键制备技术，粘质沙雷氏菌保藏编号为CGMCC NO.6325。本发明公开的粘质沙雷氏菌，对白蚁具有较好的杀灭作用，又不污染环境，具有绿色高效的特点。

Description

粘质沙雷氏菌在防治白蚁中的应用

技术领域

本发明属于生物领域，尤其涉及粘质沙雷氏菌在防治白蚁中的应用。

背景技术

白蚁是地球上最古老的社会性昆虫，具有生殖力强，存活力高，破坏性大的特点。其分布于除南极洲以后的六大洲，主要分布在以赤道为中心，南北纬度45度之间。在我国，白蚁的种类已知的有476种，危害房屋建筑的种类有70多种，主要的蚁害种类有19种。白蚁在我国的分布主要在淮河以南，向北逐渐减少，向南边逐渐增多，我国大部分省均有分布的记录。

目前，白蚁的防治以化学防治为主。由于白蚁为社会性昆虫，化学防治难以达到根除白蚁的作用。而且，多种白蚁危害房屋建筑，和人类的生活环境密切相关，化学防治会对人类的身体健康带来不良影响。伴随着科学技术的发展，人类对生态环境平衡的日益关注，生物防治技术的发展受到越来越多的重视。生物防治技术相比于化学防治方法对环境和人体健康的危害以及在持续控制病害方面有长足的进步。害虫综合管理(IPM)概念的提出完善与推广使用生物防治技术的重要性和可行性已经逐渐的被人们接受并应用于生产实践中。

发明内容

基于以上背景技术，本发明涉及一种白蚁的生物防治方法。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

粘质沙雷氏菌在防治白蚁中的应用，优选地，本发明的粘质沙雷氏菌保藏编号为CGMCC NO.6325。

本发明另外一方面还涉及一种防治白蚁的药剂，其特征在于含有粘质沙雷氏菌作为活性成分。

此外，本发明还涉及粘质沙雷氏菌的关键生产技术，其特征在于将粘质沙雷氏菌接种在液体培养基中，然后将其置于摇床10℃-40℃，100-600转/分钟转速，密闭遮光培养5-60小时，优选置于摇床28℃，200转/分钟转速，密闭遮光培养36小时。

按照本发明，通过试验验证，达到了以下有益技术效果：

(1)达到了对白蚁较好的杀灭作用。不仅对接触到的白蚁效果较好，而且由于粘质沙雷氏菌在白蚁之间可以互相感染，对蚁穴中的其他白蚁也能达到较好的防效。

(2)本发明作为生物防治，避免了化学防治的环境污染，避免了对人体健康的影响。

具体实施方式

实施例1粘质沙雷氏菌生产制备技术

供试材料

粘质沙雷氏菌菌种来源：采自感染粘质沙雷氏菌的白蚁(采自南京林业大学校园)，采用下面的培养基培养，每年移菌一次，该菌株被命名为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)，并于2012年8月15日被保藏在中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.6325。

白蚁采自南京林业大学校园，采回室内后25±1℃，黑暗培养。

细菌培养基配方

细菌固体培养基配方

牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3克，蛋白胨5克，氯化钠5克，琼脂18克，水1000毫升，pH至7.2-7.4

细菌液体培养基配方

牛肉膏3克，蛋白胨5克，氯化钠5克，水1000毫升，pH至7.2-7.4。

固体培养基接菌

在无菌操作台中接种。接种完成后，将试管竖直放入28℃的温箱中培养48h，放入冰箱4℃保存；平板培养基倒置放入28℃温箱中培养。

液体培养基接菌

在无菌操作台中用接种环取粘质沙雷氏菌接种在液体培养基中，然后将其置于摇床28℃，200转/分钟转速，密闭遮光培养36h。

实施例2：粘质沙雷氏菌防治白蚁效果测定

液体培养基稀释：

将液体培养基原液分别稀释为2^-1、2^-2、2^-3、2^-4和2^-5稀释度的溶液。

测OD值：

在分光光度计600nm波长下测得各浓度溶液的OD值。

测溶液浓度

将各浓度的溶液分别稀释为10^-7、10^-8和10^-9稀释度的溶液。用无菌吸管按无菌操作分别吸取各稀释液0.1mL加入到培养皿中，用无菌玻璃刮棒将菌液涂抹均匀，平放于桌上20-30分钟，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置于28℃温箱培养24h，重复3次。

计数：每毫升含菌数＝每稀释度平均菌落数×10×稀释倍数

滴定

每培养皿放10头白蚁，用0.04μL微量点滴仪分别将各浓度菌液滴定到白蚁前胸背板上，重复3次，以清水为对照。具体用药方法不限如此，也可以采用喷雾的方式。

观察：

记录白蚁的死亡数量。当对照死亡率为20％时结束观察。

数据处理

利用SPSS13.0统计分析软件进行数据处理，求出菌液对白蚁的LD₅₀和95％置信限。

结果与分析

OD值与粘质沙雷氏菌数量的关系

从表1可以看出，在一定的范围内，随着粘质沙雷氏菌数量的增加，其OD₆₀₀也增加。OD₆₀₀值与粘质沙雷氏菌数量呈线性相关，方程为：

y＝3.8771x-0.3732(R²＝0.993)。因此，可以根据此方程，利用菌液OD₆₀₀值求得菌液的菌数量。

表1：OD600值与粘质沙雷氏菌数量的关系

粘质沙雷氏菌对白蚁的急性毒性

菌液对白蚁效果非常明显，随着菌液浓度的增加，其防治效果也提高。

此外，随着菌液处理时间的延长，其效果就越好。粘质沙雷氏菌对白蚁21h的LD₅₀为10.82×10⁴个，粘质沙雷氏菌对白蚁42h的LD₅₀为1.55×10⁴个，效果相差近7倍(表2)

表2：粘质沙雷氏菌对白蚁的急性毒性

当理解的是，本发明的具体实施例仅仅是出于示例性说明的目的，其不以任何方式限定本发明的保护范围，本领域的技术人员可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (4)

1.粘质沙雷氏菌在防治白蚁中的应用，优选地，粘质沙雷氏菌保藏编号为CGMCC NO.6325。

2.一种防治白蚁的药剂，其特征在于含有粘质沙雷氏菌作为活性成分，优选地，粘质沙雷氏菌保藏编号为CGMCC NO.6325。

3.权利要求1所述的粘质沙雷氏菌的培养方法，其特征在于将粘质沙雷氏菌接种在液体培养基中，然后将其置于摇床10℃-40℃，100-600转/分钟转速，密闭遮光培养5-60小时，优选置于摇床28℃，200转/分钟转速，密闭遮光培养36小时。

4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述的液体培养基包括牛肉膏2-4重量份克，蛋白胨4-6重量份，氯化钠4-6重量份，水1000重量份，液体培养基的pH介于7.2-7.4之间。