CN102985412A - 可用于治疗阿尔茨海默病及其它形式的痴呆的3-氨基-5,6-二氢-1h-吡嗪-2-酮衍生物 - Google Patents

可用于治疗阿尔茨海默病及其它形式的痴呆的3-氨基-5,6-二氢-1h-吡嗪-2-酮衍生物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及作为β-分泌酶(也称为β-位点淀粉样蛋白裂解酶、BACE、BACE1、Asp2或膜天冬氨酸蛋白酶2)抑制剂的新的3-氨基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮衍生物。本发明还涉及包含此类化合物的药用组合物、制备此类化合物和组合物的方法，和此类化合物和组合物预防和治疗涉及β-分泌酶的病症的用途，所述病症比如阿尔茨海默病(AD)、轻度认知减退、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、中风相关痴呆、帕金森病相关痴呆或者β-淀粉样蛋白相关痴呆。

Description

可用于治疗阿尔茨海默病及其它形式的痴呆的 3- 氨基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮衍生物
发明领域
本发明涉及作为β-分泌酶(也称为β-位点淀粉样蛋白裂解酶、BACE、BACE1、Asp2或膜天冬氨酸蛋白酶(memapsin) 2)抑制剂的新的3-氨基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮衍生物。本发明还涉及包含此类化合物的药用组合物、制备此类化合物和组合物的方法，和此类化合物和组合物预防和治疗涉及β-分泌酶的病症的用途，所述病症比如阿尔茨海默病(AD)、轻度认知减退、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、中风相关痴呆、帕金森病相关痴呆或者β-淀粉样蛋白相关痴呆。
发明背景
阿尔茨海默病(AD)是与老化有关的神经变性疾病。AD患者患有认知缺陷和记忆丧失以及行为问题比如焦虑。虽然超过90% AD受累者具有散发形式的病症，但少于10%病例是家族性或遗传性的。在美国，10名65岁的人中约1名具有AD，而在85岁的人中每2人有1人受AD影响。从初次确诊开始平均寿命预期是7-10年，AD患者需要在非常昂贵的辅助生活机构中或者由家庭成员精心照料。随着人群中老年人数量增加，AD得到越来越多的医学关注。目前可获得用于AD的疗法只治疗疾病的症状，包括用以改善认知性质的乙酰胆碱酯酶抑制剂以及用以控制与这种疾病相关的行为问题的抗焦虑药和抗精神病药。
在AD患者脑中的标志性病理特征是通过tau蛋白高度磷酸化产生的神经原纤维缠结和通过β-淀粉样蛋白1-42 (Aβ 1-42)肽聚集形成的淀粉样蛋白斑。Aβ 1-42形成低聚物，然后是原纤维，最后是淀粉样蛋白斑。低聚物和原纤维据信特别具有神经毒性，可导致与AD相关的大部分神经损伤。预防Aβ 1-42形成的剂具有成为治疗AD的疾病调节剂的可能。Aβ 1-42从淀粉样蛋白前体蛋白(APP)产生，由770个氨基酸组成。Aβ 1-42的N-端由β-分泌酶(BACE)裂解，然后γ-分泌酶裂解C-端末端。除了Aβ 1-42以外，γ-分泌酶还释放Aβ 1-40 (主要裂解产物)以及Aβ 1-38和Aβ 1-43。这些Aβ形式还可聚集以形成低聚物和原纤维。因此，预期BACE的抑制剂将预防Aβ 1-42以及Aβ 1-40、Aβ 1-38和Aβ 1-43的形成，并将为治疗AD的可能的治疗剂。
发明概述
本发明涉及式(I)化合物
Figure 959271DEST_PATH_IMAGE001
或其立体异构体形式，其中
R1选自氢、C1-3烷基、单-和多卤代-C1-3烷基、芳基和杂芳基；
R2选自氢、C1-3烷基、单-和多卤代-C1-3烷基、芳基和杂芳基；
X1、X2、X3、X4独立是C(R3)或N，前提是其中不超过2个代表N；每个R3选自氢、卤代基、C1-3烷基、单-和多卤代-C1-3烷基、氰基、C1-3烷基氧基、单-和多卤代-C1-3烷基氧基；
L是键或-N(R4)CO-，其中R4是氢或C1-3烷基；
Ar是同芳基(homoaryl)或杂芳基；
其中同芳基是苯基或者被1、2或3个选自卤代基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷基氧基、单-和多卤代-C1-3烷基的取代基取代的苯基；
杂芳基选自各自被1、2或3个选自卤代基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷基氧基、单-和多卤代-C1-3烷基的取代基任选取代的吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、噻二唑基、噁唑基和噁二唑基；或者
其加成盐或溶剂合物。
本发明的示例是包含药学上可接受的载体和上述任何化合物的药用组合物。本发明的示例是通过将上述任何化合物和药学上可接受的载体混合制备的药用组合物。本发明的示例是制备药用组合物的方法，包括混合上述任何化合物和药学上可接受的载体。
本发明举例是治疗由β-分泌酶介导的病症的方法，包括给予有需要的受试者治疗有效量的上述任何化合物或药用组合物。
本发明进一步举例是抑制β-分泌酶的方法，包括给予有需要的受试者治疗有效量的上述任何化合物或药用组合物。
本发明的实例是治疗病症的方法，所述病症选自阿尔茨海默病、轻度认知减退、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、中风相关痴呆、帕金森病相关痴呆和β-淀粉样蛋白相关痴呆，优选阿尔茨海默病，所述方法包括给予有需要的受试者治疗有效量的上述任何化合物或药用组合物。
本发明的另一个实例是用于在有需要的受试者中治疗：(a)阿尔茨海默病，(b)轻度认知减退，(c)衰老，(d)痴呆，(e)路易体痴呆，(f)唐氏综合征，(g)中风相关痴呆，(h)帕金森病相关痴呆和(i) β-淀粉样蛋白相关痴呆的上述任何化合物。
发明详述
本发明涉及如前文限定的式(I)化合物，及其药学上可接受的盐。式(I)化合物是β-分泌酶(也称为β-位点裂解酶、BACE、BACE1、Asp2或膜天冬氨酸蛋白酶2)的抑制剂，可用于治疗阿尔茨海默病、轻度认知减退、衰老、痴呆、中风相关痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、帕金森病相关痴呆和β-淀粉样蛋白相关痴呆，优选阿尔茨海默病、轻度认知减退或痴呆，更优选阿尔茨海默病。
在本发明的实施方案中，R1和R2独立选自C1-3烷基；
X1、X2、X3、X4独立是C(R3)，其中每个R3选自氢和卤代基；
L是键或-N(R4)CO-，其中R4是氢；
Ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或者被1或2个选自卤代基、氰基、C1-3烷基和C1-3烷基氧基的取代基取代的苯基；
杂芳基选自各自被1或2个选自卤代基、氰基、C1-3烷基和C1-3烷基氧基的取代基任选取代的吡啶基、嘧啶基和吡嗪基；或者
其加成盐或溶剂合物。
在本发明另一个实施方案中，R1和R2是甲基；
X1、X2、X3、X4是CH；
L是键或-N(R4)CO-，其中R4是氢；
Ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或者被1或2个选自氯代基和氰基的取代基取代的苯基；
杂芳基选自各自被1或2个选自氯代基、氟代基、氰基、甲基和甲氧基的取代基任选取代的吡啶基、嘧啶基和吡嗪基；或者
其加成盐或溶剂合物。
在本发明另一个实施方案中，R1和R2是甲基；
X1是CH或CF；X2、X3和X4是CH；
L是-NHCO-；
Ar是5-氯代-吡啶-2-基；或者
其加成盐或溶剂合物。
在本发明另一个实施方案中，R1和R2是甲基；
X1和X3是CH或CF；X2和X4是CH；
L是键；
Ar是5-甲氧基-吡啶-3-基或嘧啶-5-基；或者
其加成盐或溶剂合物。
定义
“卤代基”应表示氟代基、氯代基和溴代基；“C1-3烷基”应表示具有1、2或3个碳原子的直链或分枝饱和烷基，如甲基、乙基、1-丙基和2-丙基；“C1-3烷基氧基”应表示其中C1-3烷基如前限定的醚基团；“单-和多卤代C1-3烷基”应表示如前限定的C1-3烷基，被1、2、3或者在可能时被更多个如前限定的卤代基原子取代；“单-和多卤代C1-3烷基氧基”应表示其中单-和多卤代C1-3烷基如前限定的醚基团；“C3-6环烷基”应表示环丙基、环丁基、环戊基和环己基；“C3-6环烷二基”应表示二价基团比如环丙二基、环丁二基、环戊二基和环己二基。
术语“受试者”如用于本文指动物，优选哺乳动物，最优选人，其是或已经是治疗、观察或实验的对象。
术语“治疗有效量”如用于本文，指在组织系统、动物或人中引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，所述反应为研究者、兽医、医学博士或其他临床医生所寻求，包括受治疗疾病或病症症状的减轻。
如用于本文，术语“组合物”旨在包括含有指定量的指定成分的产物，以及从指定量的指定成分的组合直接或间接产生的任何产物。
将理解一些式(I)化合物及其加成盐、水合物和溶剂合物可含有一个或多个手性中心，作为立体异构体形式存在。
在上文和下文中，术语“式(I)化合物”意指包括其加成盐、溶剂合物和立体异构体。
术语“立体异构体”或“立体化学的异构体形式”在上文和下文中可互换使用。
本发明包括作为纯的立体异构体或者作为两种或更多种立体异构体的混合物的式(I)化合物的所有立体异构体。
对映体是相互不可重叠的镜像的立体异构体。一对对映体的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)是不是对映体的立体异构体，即它们不是镜像的关系。如果化合物含有双键，则取代基可处于E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则取代基可处于顺式或反式构型。因此，本发明包括对映体、非对映体、外消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物。
根据Cahn-Ingold-Prelog系统指定绝对构型。通过R或S指定在不对称原子的构型。绝对构型未知的拆分化合物可根据它们旋转平面偏光的方向用(+)或(-)表示。
当鉴定具体立体异构体时，意指所述立体异构体基本不含，即伴随少于50%、优选少于20%、更优选少于10%、甚至更优选少于5%、特别是少于2%且最优选少于1%其它异构体。因此，当例如将式(I)化合物指定为(R)时，意指化合物基本不含(S)异构体；当例如将式(I)化合物指定为E时，意指化合物基本不含Z异构体；当例如将式(I)化合物指定为顺式时，意指化合物基本不含反式异构体。
另外，本发明化合物的一些结晶形式可作为多晶型存在，因此旨在包括在本发明中。此外，一些本发明化合物可与水(即水合物)或常见有机溶剂形成溶剂合物，此类溶剂合物也旨在涵盖在本发明范围内。
用于医学时，本发明化合物的盐指非毒性“药学上可接受的盐”。但是，其它盐可用于制备本发明的化合物或其药学上可接受的盐。化合物合适的药学上可接受的盐包括可以例如通过将化合物溶液与药学上可接受的酸溶液混合形成的酸加成盐，所述酸比如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。另外，当本发明化合物携带酸性部分时，其合适的药学上可接受的盐可包括碱金属盐，如钠或钾盐；碱土金属盐，如钙或镁盐；和与合适的有机配体形成的盐，如季铵盐。
可用于制备药学上可接受的盐的代表性酸包括，但不限于，下列：乙酸、2,2-二氯代-乙酸、酰化氨基酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、羊蜡酸、羊油酸、羊脂酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、乙-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙-磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-谷氨酸、β-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖醛酸、马来酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、扑酸、磷酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟甲磺酸和十一烯酸。可用于制备药学上可接受的盐的代表性碱包括，但不限于，下列：氨、L-精氨酸、苯乙苄胺、苄星、氢氧化钙、胆碱、二甲基乙醇胺、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基-葡萄糖胺、海巴明、1H-咪唑、L-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)-吡咯烷、仲胺、氢氧化钠、三乙醇胺、三羟甲基氨基甲烷和氢氧化锌。
本发明化合物的化学名根据由化学文摘社(Chemical Abstracts Service)同意的命名规则产生。
一些式(I)化合物还可作为其互变异构体形式存在。虽然在上式没有明确指出此类形式，但旨在包括在本发明范围内。
化合物的制备
A. 终化合物的制备
实验程序 1
其中L是-N(R4)CO-的式(I-a)终化合物可通过使式(II-a)中间体化合物与式(III)化合物根据反应流程(1)反应制备，反应在合适的反应惰性溶剂比如N,N-二甲基甲酰胺中，在合适的碱比如K3PO4、铜催化剂比如CuI和二胺比如(1R,2R)-(-)-1,2-二氨基环己烷的存在下，在热条件比如将反应混合物在180℃加热，例如在微波照射下135分钟实施。在反应流程(1)中，所有变量如在式(I)限定，W是卤代基，
反应流程 1
实验程序 2
另外，式(I-a)终化合物可通过使式(II-b)中间体化合物与式(IV)化合物根据反应流程(2)反应制备，反应在合适的反应惰性溶剂比如二氯甲烷中，在合适的碱比如三乙胺的存在下，在缩合剂比如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐[HATU, CAS 148893-10-1]的存在下，在热条件比如将反应混合物在25℃加热，例如2小时实施。在反应流程(2)中，所有变量如在式(I)限定，
Figure 718465DEST_PATH_IMAGE003
反应流程 2
实验程序 3
另外，式(I-a)终化合物可通过使式(II-b)中间体化合物与式(V)化合物根据反应流程(3)反应制备，反应在合适的反应惰性溶剂比如二氯甲烷中，在合适的碱比如吡啶的存在下，在热条件比如将反应混合物在25℃加热例如2小时实施。在反应流程(3)中，所有变量如在式(I)限定，Y是卤代基，
Figure 113674DEST_PATH_IMAGE004
反应流程 3
实验程序 4
其中L是键的式(I-b)终化合物可通过使式(II-a)中间体化合物与式(VI)化合物根据反应流程(4)反应制备，反应在合适的反应惰性溶剂比如惰性溶剂混合物例如1,4-二氧六环/乙醇中，在合适的碱比如含水K3CO3、Pd络合物催化剂比如四-(三苯基膦)钯(0) [CAS 14221-01-3]的存在下，在热条件比如将反应混合物在80℃加热例如20小时，或者例如将反应混合物在150℃微波照射下加热10分钟至30分钟实施。在反应流程(4)中，所有变量如在式(I)限定，W是卤代基。R5和R6可以是氢或烷基，或者可一起形成例如式-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-或-C(CH3)2C(CH3)2-的二价基团，
Figure 990364DEST_PATH_IMAGE005
反应流程 4
在上述制备中的许多中间体和原料是可根据本领域已知制备所述或类似化合物的方法制备的已知化合物，一些中间体是新的。许多此类制备方法将在下文更详细地描述。
B. 中间体化合物的制备
实验程序 5
其中R1和R2是氢的式(II-a)、(II-b)和(II-c)的中间体化合物一般可按照下文反应流程(5)和(6)显示的反应步骤制备，
Figure 812826DEST_PATH_IMAGE006
反应流程 5
A: 甲氧基亚胺向脒转化
B: 酰胺向甲氧基亚胺转化
C: 环化
式(II-a)、(II-b)和(II-c)的中间体可从相应的式(VII-a)、(VII-b)和(VII-c)中间体化合物按照本领域已知的甲氧基亚胺向脒转化程序(反应步骤A)制备。所述转化可通过用合适的氨源比如氯化铵处理所述式(VII-a)、(VII-b)和(VII-c)的中间体化合物进行，根据反应流程(5)，反应在合适的反应惰性溶剂比如乙醇中，在热条件比如将反应混合物在75℃加热例如18小时实施。
在以上反应流程(5)中的式(VII-a)、(VII-b)和(VII-c)中间体化合物可从相应的式(VIII-a)、(VIII-b)和(VIII-c)中间体化合物按照本领域已知的酰胺向甲氧基亚胺转化程序(反应步骤B)制备。所述转化可方便地通过将相应的式(VIII-a)、(VIII-b)和(VIII-c)中间体化合物用甲基化剂比如三甲基氧鎓四氟硼酸盐，在合适的反应惰性溶剂比如二氯甲烷中，在适度高温比如25℃处理例如3天进行。
在以上反应流程(5)中的式(VIII-a)、(VIII-b)和(VIII-c)中间体化合物可从相应的式(IX-a)、(IX-b)和(IX-c)中间体化合物按照本领域已知的环化程序(反应步骤C)制备。所述环化可方便地通过将所述式(IX-a)、(IX-b)和(IX-c)中间体化合物在酸性介质比如盐酸在1,4-二氧六环中，在适度高温比如25℃处理例如1小时进行，
Figure 640711DEST_PATH_IMAGE007
反应流程 6
D: N-酰化
E: 还原性胺化
F: 醇向醛氧化
在以上反应流程(6)中的式(IX-a)、(IX-b)和(IX-c)中间体可通过使式(XI-a)、(XI-b)和(XI-c)中间体化合物按照本领域已知的N-酰化程序(反应步骤D)反应制备。所述N-酰化可方便地通过将相应的式(XI-a)、(XI-b)和(XI-c)中间体化合物用式(X)中间体化合物处理进行，反应在合适的反应惰性溶剂比如二氯甲烷中，在合适的碱比如三乙胺的存在下，在低温比如0℃处理例如3小时实施。在反应流程(6)中，所有变量如在式(I)限定，卤代基是氯代基或溴代基。
在以上反应流程(6)中的式(XI-a)、(XI-b)和(XI-c)中间体可通过使式(XIII-a)、(XIII-b)和(XIII-c)中间体化合物按照本领域已知的还原性胺化程序(反应步骤E)反应制备。所述还原性胺化可方便地通过将相应的式(XIII-a)、(XIII-b)和(XIII-c)和(XIII-c)中间体化合物用式(XII)中间体化合物和合适的还原剂比如三乙酰氧基硼氢化钠处理进行，反应在合适的反应惰性溶剂比如二氯甲烷中，在合适的酸性催化剂比如乙酸的存在下，在适度高温比如25℃例如5小时实施。在反应流程(6)中，所有变量如在式(I)限定。
在以上反应流程(6)中式(XIII-a)、(XIII-b)和(XIII-c)中间体可通过使式(XIV-a)、(XIV-b)和(XIV-c)中间体化合物按照本领域已知的醇向醛氧化程序(反应步骤F)反应制备。所述氧化可方便地通过将相应的式(XIV-a)、(XIV-b)和(XIV-c)中间体化合物用氧化剂比如Dess-Martin高碘烷[CAS: 87413-09-0]，在合适的反应惰性溶剂比如二氯甲烷中，在低温比如0℃例如10分钟，然后在适度高温比如25℃例如1小时处理进行。在反应流程(6)中，所有变量如在式(I)限定。
其中Z是合适的N-保护基团比如叔丁氧基羰基的式(XIV-a)、(XIV-b)和(XIV-c)中间体化合物一般可按照本领域已知的Strecker型程序制备。
药理学
本发明的化合物及其药学上可接受的组合物抑制BACE，因此可用于治疗或预防阿尔茨海默病(AD)、轻度认知减退(MCI)、衰老、痴呆、路易体痴呆、脑淀粉样蛋白血管病、多发梗死性痴呆、唐氏综合征、帕金森病相关痴呆和β-淀粉样蛋白相关痴呆。
本发明涉及用作药物的通式(I)化合物、其立体异构体形式或者其药学上可接受的酸或碱加成盐或溶剂合物。
本发明还涉及通式(I)化合物、其立体异构体形式或者其药学上可接受的酸或碱加成盐或溶剂合物，其用于治疗或预防选自AD、MCI、衰老、痴呆、路易体痴呆、脑淀粉样蛋白血管病、多发梗死性痴呆、唐氏综合征、帕金森病相关痴呆和β-淀粉样蛋白相关痴呆的疾病或病况。
本发明还涉及通式(I)化合物、其立体异构体形式或者其药学上可接受的酸或碱加成盐或溶剂合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防前文提到的任一种疾病病况。
鉴于式(I)化合物的效用，提供治疗患有前述任一种疾病的温血动物(包括人在内)的方法或者预防温血动物(包括人在内)患上前述任一种疾病的方法。
所述方法包括将有效量的式(I)化合物、其立体异构体形式、其药学上可接受的加成盐或溶剂合物给予(即全身或局部给予，优选口服给予)温血动物(包括人在内)。
治疗方法还可包括以每天1至4次摄取的方案给予活性成分。在这些治疗方法中优选在给药前配制本发明化合物。如下文描述，用众所周知和容易获得的成分通过已知的程序制备合适的药用制剂。
适合治疗或预防阿尔茨海默病或其症状的本发明化合物可以单独或者与一种或多种附加治疗剂组合给药。组合疗法包括给予含有式(I)化合物和一种或多种附加治疗剂的单一药用剂量制剂，以及给予在其各自单独药用剂量制剂中的式(I)化合物和每种附加治疗剂。例如，可将式(I)化合物和治疗剂在单一口服剂量组合物比如片剂或胶囊剂中一起给予患者，或者可将每种药物在单独的口服剂量制剂中给药。
药用组合物
本发明还提供用于预防或治疗其中抑制β-分泌酶是有益的疾病的组合物，所述疾病比如阿尔茨海默病(AD)、轻度认知减退、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、中风相关痴呆、帕金森病相关痴呆和β-淀粉样蛋白相关痴呆。所述组合物包含治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
虽然可以单独给予活性成分，但优选将其作为药用组合物呈现。因此，本发明进一步提供包含本发明化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂的药用组合物。载体或稀释剂必须“可接受”的意思是与组合物的其它成分可相容并且对其接受者无害。
本发明的药用组合物可通过药学领域众所周知的任何方法制备。作为活性成分的治疗有效量的特定化合物(采用碱形式或加成盐形式)以与药学上可接受的载体紧密混合的方式组合，载体可采用多种形式，取决于期望的给药制剂形式。期望这些药用组合物采用合适的单位剂型，优选用于全身给药比如口服、经皮或胃肠外给药；或者局部给药比如经吸入、喷鼻剂、滴眼剂或经霜剂、凝胶剂、洗发剂等。例如，在制备口服剂型的组合物时，可采用任何常用的药用介质，比如在口服液体制剂比如混悬剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂的情况下用水、甘油、油、醇等；或者在散剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况下用固体载体比如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为它们容易给药，所以片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下显然采用固体药用载体。关于胃肠外组合物，载体将通常包含无菌水(至少大部分)，但可包括其它成分(例如为了帮助溶解)。例如，可制备注射用溶液剂，其中载体包括盐水溶液、葡萄糖溶液或者盐水和葡萄糖溶液的混合物。还可制备注射用混悬剂，在这种情况下可采用合适的液体载体、助悬剂等。在适合经皮给药的组合物中，载体任选包含渗透增强剂和/或合适的湿润剂，任选与任何性质的合适添加剂以较小比例组合，所述添加剂对皮肤不引起任何显著的有害效应。所述添加剂可促进给药至皮肤和/或可有助于制备期望的组合物。这些组合物可通过各种方式，如作为透皮贴剂、作为点贴剂(spot-on)或作为软膏剂给药。
特别有利的是配制剂量单位形式的上述药用组合物以便于给药和剂量一致。用于本文说明书和权利要求书的剂量单位形式指适合作为单位剂量的物理上分离的单位，每个单位含有经计算可产生期望的治疗效应的预定量活性成分以及所需药用载体。此类剂量单位形式的实例是片剂(包括划痕片或包衣片)、胶囊剂、丸剂、粉包、糯米纸囊剂、注射用溶液剂或混悬剂、茶匙剂(teaspoonful)、汤匙剂(tablespoonful)等，及其分隔的多个剂量。
给药的确切剂量和频率取决于所用特定式(I)化合物、正在治疗的特定病况、正在治疗的病况严重度、特定患者的年龄、体重、性别、病症程度和一般健康状况以及患者正使用的其它药物，如本领域技术人员熟知。另外，显然所述有效的每日量可根据受治疗受试者的反应和/或根据开出本发明化合物的医生的评价而降低或增加。
根据给药方式，药用组合物将包含0.05-99 %重量、优选0.1-70 %重量、更优选0.1-50 %重量活性成分，和1-99.95 %重量、优选30-99.9 %重量、更优选50-99.9 %重量药学上可接受的载体，所有百分数均基于组合物总重量计。
本发明化合物可用于全身给药比如口服、经皮或胃肠外给药；或者局部给药比如经吸入、喷鼻剂、滴眼剂或经霜剂、凝胶剂、洗发剂等。化合物优选口服给药。给药的确切剂量和频率取决于所用特定式(I)化合物、正在治疗的特定病况、正在治疗的病况严重度、特定患者的年龄、体重、性别、病症程度和一般健康状况以及患者正使用的其它药物，如本领域技术人员熟知。另外，显然所述有效的每日量可根据受治疗受试者的反应和/或根据开出本发明化合物的医生的评价而降低或增加。
可与载体材料组合以产生单一剂型的式(I)化合物的量将根据受治疗疾病、哺乳动物物种和特定给药方式而变化。但是，作为一般性指导，本发明化合物的合适单位剂量可以例如优选含有0.1 mg-约1000 mg活性化合物。优选单位剂量为1 mg-约500 mg。更优选单位剂量为1 mg-约300mg。甚至更优选单位剂量为1 mg-约100 mg。此类单位剂量可以每天不止一次，例如每天2、3、4、5或6次，但优选每天1或2次给药，以便70 kg成人的总剂量为每次给药每受试者kg体重0.001-约15 mg。优选剂量为每次给药每受试者kg体重0.01-约1.5 mg，此类疗法可持续几周或几个月，有时为几年。但是，应理解对于任何特定患者具体的剂量水平将取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性；正在治疗的个体的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；给药时间和途径；排泄率；先前已给予的其它药物；和正在治疗的特定疾病的严重度，如本领域技术人员熟知。
典型剂量可为一片1 mg-约100 mg片剂或者1 mg-约300 mg每天一次给药，或者每天多次给药，或者一片时控释放胶囊剂或者片剂每天一次给药，含有成比例更高含量的活性成分。时控释放效应可通过在不同pH值溶解的胶囊材料、通过由渗透压缓慢释放的胶囊剂、或者通过任何其它已知的受控释放方式获得。
如本领域技术人员清楚的是，有时可能需要使用这些范围以外的剂量。此外，注意临床医务人员或治疗的医生将结合个体患者的反应知道怎样和何时开始、间断、调节或终止疗法。
下列实施例旨在说明但不限制本发明的范围。
实验部分
在下文中，术语“m.p.”指熔点。“HF”指四氢呋喃，“DMF”指二甲基甲酰胺，“DCM”指二氯甲烷，“AcOEt”指乙酸乙酯，“AcOH”指乙酸，“MeOH”指甲醇， DIPEA指“N,N-二异丙基乙胺”，“rac”指外消旋的。
A. 中间体的制备
实施例 A1: rac-2- 氨基 -2-(3- 溴代 - 苯基 )- 丙腈
将三甲基氰化甲硅烷(20 g, 200 mmol)加至3-溴代-苯乙酮(20 g, 100 mmol)和NH4Cl (11 g, 200 mmol)在NH3/MeOH (400 mL)中的经搅拌的溶液内。将混合物在室温搅拌4天。然后真空蒸发溶剂，将残留物吸收在AcOEt (100 mL)中。滤除固体，真空蒸发滤液以得到rac-2-氨基-2-(3-溴代-苯基)-丙腈(20 g, 86%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A2: rac-2- 氨基 -2-(3- 溴代 - 苯基 )- 丙酸甲酯的制备
Figure 570807DEST_PATH_IMAGE009
使rac-2-氨基-2-(3-溴代-苯基)-丙腈(20 g, 88.9 mmol)溶于HCl/MeOH (500 mL)中，使混合物回流4天。冷却至室温后，加入AcOEt (100 mL)和水(100 mL)，分离有机层后，用AcOEt (2 x 100 mL)洗涤水层。然后将水层用氨水溶液碱化至pH 8，用AcOEt (5 x 100 mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，真空蒸发溶剂以得到呈油状物的rac-2-氨基-2-(3-溴代-苯基)-丙酸甲酯(10.6 g, 46%收率)。
实施例 A3: rac-2- 氨基 -2-(3- 溴代 - 苯基 )- 丙 -1- 醇的制备
Figure 564171DEST_PATH_IMAGE010
在-15℃将氢化铝锂(1 M在THF中; 22 mL, 22 mmol)滴加至rac-2-氨基-2-(3-溴代-苯基)-丙酸甲酯(7.5 g, 29.1 mmol)在THF (200 ml)中的经搅拌的溶液内。用1小时让混合物缓慢加温至0℃。然后加入更多THF (150 ml)，滴加饱和Na2SO4直至不再形成氢。然后加入无水Na2SO4，在室温让其搅拌过夜。将混合物用硅藻土(celite)过滤，用THF漂洗，真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/DCM 0/100至3/97中的溶液)纯化。将期望的级分收集，真空浓缩以得到呈油状物的rac-2-氨基-2-(3-溴代-苯基)-丙-1-醇(5.70 g, 85%收率)。
实施例 A4: rac-[1-(3- 溴代 - 苯基 )-2- 羟基 -1- 甲基 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 380817DEST_PATH_IMAGE011
在0℃将二碳酸二叔丁酯(4.84 g, 22.16 mmol)分批加至rac-2-氨基-2-(3-溴代-苯基)-丙-1-醇(1.7 g, 7.39 mmol)在饱和NaHCO3 (15 mL)和THF (15 mL)混合物中的经搅拌的溶液内。将混合物在0℃搅拌10分钟，在室温搅拌15小时。将混合物在冰水浴中冷却，边搅拌边用KHSO4酸化至pH 1-2。分离有机层，用AcOEt进一步萃取水层。将合并的有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤，真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(二氧化硅; AcOEt/DCM 0/100至20/80)纯化。将期望的级分收集，真空浓缩以得到呈无色油状物的rac-[1-(3-溴代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2.36 g, 93%收率)。
实施例 A5: rac-[1-(3- 溴代 - 苯基 )-1- 甲基 -2- 氧代 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 117829DEST_PATH_IMAGE012
在0℃用5分钟将Dess-Martin高碘烷(Dess-Martin periodinane) (3.55 g, 8.36 mmol)分批加至rac-[1-(3-溴代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2.3 g, 6.97 mmol)在无水DCM中的溶液。将混合物在0℃搅拌10分钟，在室温搅拌1小时。将反应混合物先后用NaHCO3 (饱和水溶液)和NaHSO3 (饱和水溶液)猝灭。然后加入Et2O，将混合物在室温搅拌30分钟。分离有机层，用Et2O进一步提取水层。将合并的有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; DCM)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈无色油状物的rac-[1-(3-溴代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2 g, 88%收率)。
实施例 A6: rac-[1-(3- 溴代 - 苯基 )-1- 甲基 -2- 甲基氨基 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 703531DEST_PATH_IMAGE013
将2 M在THF (6.09 mL, 12.19 mmol)中的甲胺加至rac-[1-(3-溴代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2 g, 6.09 mmol)在DCM (110 mL)和AcOH (2.01 mL)混合物中的溶液内。将混合物在室温搅拌1小时。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.62 g, 17.06 mmol)，将混合物在室温搅拌5小时。将混合物用DCM稀释，倒入NaHCO3 (饱和水溶液)内。分离有机层，用DCM进一步萃取水层。将合并的有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-[1-(3-溴代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2 g, 97%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A7: rac-N-[2-(3- 溴代 - 苯基 )-2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙基 ]-N- 甲基 - 草氨酸 (oxalamic acid) 乙酯的制备
Figure 133376DEST_PATH_IMAGE014
将DIPEA (1.27 mL, 7.31 mmol)加至rac-[1-(3-溴代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2.01 g, 6.09 mmol)在DCM (20 mL)中的溶液，在冰浴中冷却混合物。然后加入乙基草酰氯(0.82 mL, 7.31 mmol)，将混合物在0℃搅拌3小时。将混合物用NH4Cl (饱和水溶液)稀释，并用DCM萃取。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; AcOEt/DCM 0/100至20/80)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈无色油状物的rac-N-[2-(3-溴代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(2.2 g, 81%收率)。
实施例 A8: rac-5-(3- 溴代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 - 哌嗪 -2,3- 二酮的制备
在室温将4 M在二氧六环(6.20 mL, 24.81 mmol)中的盐酸加至rac-N-[2-(3-溴代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(2.2 g, 4.96 mmol)。将混合物在室温搅拌1小时。真空蒸发溶剂。使残留物悬浮于DCM中，用NaHCO3 (饱和水溶液)洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮(1.45 g, 98%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A9: rac-5-(3- 溴代 - 苯基 )-3- 甲氧基 -1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
将三甲基氧鎓四氟硼酸盐(2.24 g, 15.14 mmol)加至rac-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮(1.5 g, 5.05 mmol)在DCM (20 mL)中的溶液，将混合物在室温搅拌3天。然后将混合物用DCM稀释，用冷NaHCO3 (饱和水溶液)洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-5-(3-溴代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(1.5 g, 95%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A10: rac-3- 氨基 -5-(3- 溴代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
将氯化铵(0.405 g, 7.57 mmol)加至rac-5-(3-溴代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(1.57 g, 5.05 mmol)在EtOH (30 mL)中的溶液，将混合物在75℃搅拌18小时。真空除去溶剂，使残留物溶于DCM中，用水洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/AcOEt 0/100至20/80中的溶液)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈白色固体的rac-3-氨基-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.75 g, 50%收率)。
实施例 A11: 5- 甲氧基吡啶 -3- 硼酸的制备
该化合物按照描述于WO 2005/037832的程序制备。
实施例 A12: rac-2- 氨基 -2-(3- 硝基 - 苯基 )- 丙腈的制备
Figure 46099DEST_PATH_IMAGE019
将NH4Cl (51.4 g, 969.7 mmol)加至3-硝基苯乙酮(80 g, 484.8 mmol)和三甲基氰化甲硅烷(96 g, 969.7 mmol)在NH3/MeOH (800 mL)中的经搅拌的溶液。将混合物在室温搅拌2天。然后真空蒸发溶剂，使残留物吸收在DCM中。滤除固体，真空蒸发滤液以得到rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙腈(89 g, 96%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A13: rac-2- 氨基 -2-(3- 硝基 - 苯基 )- 丙酸甲酯的制备
使rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙腈(89 g, 465.5 mmol)溶于HCl/MeOH (1000 mL)中，使混合物回流24小时。真空蒸发溶剂，将残留物用NaHCO3 (饱和水溶液)碱化直至pH 9，用AcOEt (3 x 100 mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙酸甲酯(46 g, 44%收率)。
实施例 A14: rac-2- 氨基 -2-(3- 硝基 - 苯基 )- 丙 -1- 醇的制备
Figure 685208DEST_PATH_IMAGE021
将硼氢化钠(10.2 g, 267.4 mmol)加至rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙酸甲酯(30 g, 133.7 mmol)在EtOH (200 ml)中的经搅拌的溶液。将混合物在室温搅拌3小时。真空蒸发溶剂。然后加入水(200 mL)，用AcOEt (3 x 100 mL)萃取混合物。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤和真空蒸发溶剂。使残留物溶于HCl/DCM (500 mL)中，将混合物在室温搅拌1小时。将混合物滤除，用2-甲氧基-2-甲基-丙烷洗涤以得到rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙-1-醇(27 g, 87%收率)。
实施例 A15: rac-[2- 羟基 -1- 甲基 -1-(3- 硝基 - 苯基 )- 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 17707DEST_PATH_IMAGE022
在0℃将二碳酸二叔丁酯(10.01 g, 45.87 mmol)分批加至rac-2-氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙-1-醇(3 g, 15.29 mmol)在NaHCO3 (饱和水溶液) (30 mL)和THF (30 mL)混合物中的经搅拌的溶液。将混合物在0℃搅拌10分钟，在室温搅拌15小时。将混合物在冰水浴中冷却，边搅拌边用KHSO4酸化直至pH 1-2。分离有机层，用AcOEt进一步萃取水层。将合并的有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; AcOEt/DCM 0/100至100/0)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到rac-[2-羟基-1-甲基-1-(3-硝基-苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(3.3 g, 73%收率)，为静置后固化的浅黄色油状物。
实施例 A16: rac-[1- 甲基 -1-(3- 硝基 - 苯基 )-2- 氧代 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
在0℃用5分钟将Dess-Martin高碘烷(3.78 g, 8.91 mmol)分批加至rac-[2-羟基-1-甲基-1-(3-硝基-苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(2.2 g, 7.42 mmol)在无水DCM (35 mL)中的溶液。将混合物在0℃搅拌10分钟，在室温搅拌1小时。将反应混合物先后用NaHCO3 (饱和水溶液)和NaHSO3 (饱和水溶液)猝灭。然后加入Et2O，将混合物在室温搅拌30分钟。分离有机层，用Et2O进一步萃取水层。将合并的有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; DCM)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到rac-[1-甲基-1-(3-硝基-苯基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.74 g, 80%收率)，为静置后固化的无色油状物。
实施例 A17: rac-[1- 甲基 -2- 甲基氨基 -1-(3- 硝基 - 苯基 )- 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 913167DEST_PATH_IMAGE024
将2 M在THF (5.78 mL, 11.55 mmol)中的甲胺加至rac-[1-甲基-1-(3-硝基-苯基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.7 g, 5.78 mmol)在DCM (100 mL)和AcOH (1.98 mL)混合物中的溶液。将混合物在室温搅拌1小时。然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.43 g, 16.17 mmol)，将混合物在室温搅拌2小时。将混合物用DCM稀释，倒入NaHCO3 (饱和水溶液)中。分离有机层，用DCM进一步萃取水层。将合并的有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到呈无色油状物的rac-[1-甲基-2-甲基氨基-1-(3-硝基-苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.7 g, 95%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A18: rac-N-[2- 叔丁氧基羰基氨基 -2-(3- 硝基 - 苯基 )- 丙基 ]-N- 甲基 - 草氨酸乙酯的制备
Figure 265651DEST_PATH_IMAGE025
将DIPEA (1.15 mL, 6.59 mmol)加至rac-[1-甲基-2-甲基-氨基-1-(3-硝基-苯基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.7 g, 5.50 mmol)在DCM (20 mL)中的溶液，将混合物在冰浴中冷却。然后加入乙基草酰氯(0.74 mL, 6.59 mmol)，将混合物在0℃搅拌3小时。将混合物用NH4Cl (饱和水溶液)稀释，用DCM萃取。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; AcOEt/DCM 0/100至20/80)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈无色油状物的rac-N-[2-叔丁氧基羰基氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(2.2 g, 98%收率)。
实施例 A19: rac-1,5- 二甲基 -5-(3- 硝基 - 苯基 )- 哌嗪 -2,3- 二酮的制备
Figure 270517DEST_PATH_IMAGE026
在室温将4 M在二氧六环(6.88 mL, 27.5 mmol)中的盐酸加至rac-N-[2-叔丁氧基羰基氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(2.25 g, 5.5 mmol)。将混合物在室温搅拌1小时。真空蒸发溶剂。使残留物悬浮于DCM中，用NaHCO3 (饱和水溶液)洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-哌嗪-2,3-二酮(1.2 g, 83%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A20: rac-3- 甲氧基 -1,5- 二甲基 -5-(3- 硝基 - 苯基 )-5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
Figure 708451DEST_PATH_IMAGE027
将三甲基氧鎓四氟硼酸盐(2.02 g, 13.68 mmol)加至rac-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-哌嗪-2,3-二酮(1.2 g, 4.56 mmol)在DCM (10 mL)中的溶液，将混合物在室温搅拌3天。然后将混合物用DCM稀释，用冷NaHCO3 (饱和水溶液)洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到呈白色固体的rac-3-甲氧基-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(1 g, 79%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A21: rac-3- 氨基 -1,5- 二甲基 -5-(3- 硝基 - 苯基 )-5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
将氯化铵(0.19 g, 3.59 mmol)加至rac-3-甲氧基-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.66 g, 2.39 mmol)在EtOH (30 mL)中的溶液，将混合物在75℃搅拌18小时。真空除去溶剂，使残留物溶于DCM中，用水洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/AcOEt 0/100至20/80中的溶液)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈白色固体的rac-3-氨基-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.31 g, 49%收率)。
实施例 A22: rac-3- 氨基 -5-(3- 氨基 - 苯基 )-1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
将rac-3-氨基-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.31 g, 1.18 mmol)在EtOH (28 mL)和AcOEt (15 mL)混合物中的溶液在H-Cube反应器(1 ml/min, 30 mm Pd/C 5%柱体, 全H2模式, 室温, 2个周期)中氢化。真空除去溶剂以得到呈白色固体的rac-3-氨基-5-(3-氨基-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.27 g, 98%收率)，将其不再纯化即用于下一步。
实施例 A23: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )- 丙腈的制备
Figure 777404DEST_PATH_IMAGE030
按照描述于实施例A1的类似方法合成rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙腈。由此从市售获得的5-溴代-2,4-二氟代苯乙酮(CAS Nr: 864773-64-8, 60 g, 255 mmol)开始，获得rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙腈(31 g, 47%收率)。
实施例 A24: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )- 丙酸的制备
Figure 266417DEST_PATH_IMAGE031
使rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙腈(28 g, 107.6 mmol)溶于6 N HCl (300 mL)和乙酸(300 mL)中，使混合物回流72小时。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。加入AcOEt (400 mL)和水(300 mL)，分离有机层，用AcOEt (200 mL)洗涤水层。将水层中和至pH 7，用AcOEt (250 mL)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙酸(22 g, 72%收率)。
实施例 A25: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )- 丙酸甲酯的制备
Figure 490725DEST_PATH_IMAGE032
使rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙酸(22 g, 78.5 mmol)溶于4 N HCl/MeOH (400 mL)中，使混合物回流72小时。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。加入AcOEt (400 mL)和水(300 mL)，用AcOEt (200 mL)洗涤水层。将水层中和直至pH 7，用AcOEt (250 mL)萃取。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙酸甲酯(20 g, 87%收率)。
实施例 A26: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )- 丙 -1- 醇的制备
Figure 614538DEST_PATH_IMAGE033
将硼氢化钠(4 g, 105 mmol)加至rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙酸甲酯(20 g, 68 mmol)在乙醇(200 ml)中的经搅拌的溶液，将混合物在14℃搅拌72小时。然后真空浓缩反应混合物。加入AcOEt (500 mL)，将有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙-1-醇(16 g, 88%收率)。
实施例 A27: rac-[1-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-2- 羟基 -1- 甲基 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 961206DEST_PATH_IMAGE034
按照描述于实施例A4的类似方法合成rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。由此从rac-2-氨基-2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-丙-1-醇(4.2 g, 15.78 mmol)开始，获得rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(5.3 g, 92%收率)。
实施例 A28: rac-[1-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-1- 甲基 -2- 氧代 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
按照描述于实施例A5的类似方法合成rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。由此从rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 (3.2 g, 8.74 mmol)开始，获得rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(3 g, 94%收率)。
实施例 A29: rac-[1-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-1- 甲基 -2- 甲基氨基 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 464049DEST_PATH_IMAGE036
按照描述于实施例A6的类似方法合成rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。由此从rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(3 g, 8.24 mmol)开始，获得rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.8 g, 58%收率)。
实施例 A30: rac-N-[2-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙基 ]-N- 甲基 - 草氨酸乙酯的制备
Figure 645631DEST_PATH_IMAGE037
按照描述于实施例A7的类似方法合成rac-N-[2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯。由此从rac-[1-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 (1.8 g, 4.75 mmol)开始，获得rac-N-[2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(1.9 g, 84%收率)。
实施例 A31: rac-5-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 - 哌嗪 -2,3- 二酮的制备
Figure 396156DEST_PATH_IMAGE038
按照描述于实施例A8的类似方法合成rac-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮。由此从rac-N-[2-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(1.9 g, 3.96 mmol)开始，获得rac-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮(1.1 g, 83%收率)，就这样用于下一反应。
实施例 A32: rac-5-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-3- 甲氧基 -1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
按照描述于实施例A9的类似方法合成rac-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮。由此从rac-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮(1 g, 3 mmol)开始，获得rac-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(1 g, 99%收率)，就这样用于下一反应。
实施例 A33: rac-3- 氨基 -5-(5- 溴代 -2,4- 二氟代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
Figure 924407DEST_PATH_IMAGE040
按照描述于实施例A9的类似方法合成rac-3-氨基-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮。由此从rac-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(1 g, 2.8 mmol)开始，获得rac-3-氨基-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.6 g, 63%收率)。
实施例 A34: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )- 丙腈的制备
Figure 288392DEST_PATH_IMAGE041
按照描述于实施例A1的类似方法合成rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙腈。由此从市售获得的5-溴代-2-氟代苯乙酮(CAS Nr: 198477-89-3, 25 g, 115 mmol)开始，获得rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙腈(28 g, 定量收率)。
实施例 A35: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )- 丙酸的制备
Figure 648966DEST_PATH_IMAGE042
按照描述于实施例A24的类似方法合成rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙酸。由此从rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙腈(27 g, 111 mmol)开始，获得rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙酸(18 g, 62%收率)。
实施例 A36: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )- 丙酸甲酯的制备
Figure 98402DEST_PATH_IMAGE043
使rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙酸(6 g, 22.9 mmol)溶于H2SO4 (20 mL)和甲醇(200 mL)中，使混合物回流48小时。冷却至室温后，真空浓缩反应混合物。加入水，将水层用NaHCO3 (饱和水溶液)碱化直至pH 8，用AcOEt萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂以得到rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙酸甲酯(6 g, 95%收率)。
实施例 A37: rac-2- 氨基 -2-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )- 丙 -1- 醇的制备
Figure 468203DEST_PATH_IMAGE044
按照描述于实施例A26的类似方法合成rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙-1-醇。由此从rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙酸甲酯(6 g, 21.7 mmol)开始，获得rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙-1-醇(5.2 g, 97%收率)。
实施例 A38: rac-[1-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-2- 羟基 -1- 甲基 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 922581DEST_PATH_IMAGE045
按照描述于实施例A4的类似方法合成rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。由此从rac-2-氨基-2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-丙-1-醇(5.2 g, 20.96 mmol)开始，获得rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(7.3 g, 定量收率)。
实施例 A39: rac-[1-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-1- 甲基 -2- 氧代 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 719635DEST_PATH_IMAGE046
按照描述于实施例A5的类似方法合成rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。由此从rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-2-羟基-1-甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(7.3 g, 20.96 mmol)开始，获得rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(6 g, 83%收率)。
实施例 A40: rac-[1-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-1- 甲基 -2- 甲基 - 氨基 - 乙基 ]- 氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure 390788DEST_PATH_IMAGE047
按照描述于实施例A6的类似方法合成rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯。由此从rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1-甲基-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(6 g, 17.3 mmol)开始，获得rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(4 g, 64%收率)。
实施例 A41: rac-N-[2-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-2- 叔丁氧基羰基氨基 - 丙基 ]-N- 甲基 - 草氨酸乙酯的制备
Figure 564281DEST_PATH_IMAGE048
按照描述于实施例A7的类似方法合成rac-N-[2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯。由此从rac-[1-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1-甲基-2-甲基氨基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 (4 g, 11.07 mmol)开始，获得rac-N-[2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(4.8 g, 93%收率)，为无色油状物。
实施例 A42: rac-5-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 - 哌嗪 -2,3- 二酮的制备
按照描述于实施例A8的类似方法合成rac-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮。由此从rac-N-[2-(5-溴代-2-氟代-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-N-甲基-草氨酸乙酯(3.3 g, 7.15 mmol)开始，获得rac-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮(2.25 g, 定量收率)，就这样用于下一反应。
实施例 A43: rac-5-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-3- 甲氧基 -1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
按照描述于实施例A9的类似方法合成rac-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮。由此从rac-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-哌嗪-2,3-二酮(3 g, 9.52 mmol)开始，获得rac-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(2.3 g, 73.4%收率)，就这样用于下一反应。
实施例 A44: rac-3- 氨基 -5-(5- 溴代 -2- 氟代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
按照描述于实施例A9的类似方法合成rac-3-氨基-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮。由此从rac-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-3-甲氧基-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.95 g, 2.89 mmol)开始，获得rac-3-氨基-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.5 g, 55%收率)。
实施例 A45: rac-3- 氨基 -5-(5- 氨基 -2- 氟代 - 苯基 )-1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
Figure 475288DEST_PATH_IMAGE052
将rac-3-氨基-5-(5-溴代-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.5 g, 1.59 mmol)与NaN3 (0.26 g, 3.98 mmol)、CuI (0.379 g, 1.99 mmol)和Na2CO3 (0.337 g, 3.18 mmol)在DMSO (23 mL)中混合，使反应物脱气。在此之后，加入N,N’-二甲基乙二胺(0.3 mL, 2.78 mmol)，将混合物在110℃加热直至反应完成，约1小时。将反应混合物倒在DCM中。加入氢氧化铵(28%在水中)，将有机层分离，用氢氧化铵洗涤3次。将有机层干燥(Mg2SO4)，过滤和真空浓缩以得到rac-3-氨基-5-(5-氨基-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.38 g, 95%收率)。
B. 终化合物的制备
实施例 B1: rac-3 ’ -(6- 氨基 -2,4- 二甲基 -5- 氧代 -2,3,4,5- 四氢 - 吡嗪 -2- 基 )- 联苯基 -3- 甲腈的制备
Figure 88278DEST_PATH_IMAGE053
在室温在氮气下将四(三苯基膦)钯(0) (0.015 g, 0.013 mmol)加至rac-3-氨基-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.13 g, 0.439 mmol)、(3-氰基苯基)硼酸(0.194 g, 1.317 mmol)和K2CO3 (0.182 g, 1.317 mmol)在1,4-二氧六环(4 mL)和EtOH (0.4 mL)中的经搅拌的悬浮液内。将混合物在微波照射下在150℃搅拌20分钟。将混合物用水稀释，用DCM萃取。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/DCM 0/100至3/97中的溶液)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈灰白色固体的rac-3’-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-联苯基-3-甲腈(0.076 g, 54%收率)。
实施例 B2: rac-3- 氨基 -5-[3-(5- 甲氧基 - 吡啶 -3- 基 )- 苯基 ]-1,5- 二甲基 -5,6- 二氢 -1H- 吡嗪 -2- 酮的制备
Figure 227136DEST_PATH_IMAGE054
在室温在氮气下将四(三苯基膦)钯(0) (0.012 g, 0.010 mmol)加至rac-3-氨基-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.1 g, 0.338 mmol)、5-甲氧基吡啶-3-硼酸(0.078 g, 0.506 mmol)和K2CO3 (0.140 g, 1.013 mmol)在1,4-二氧六环 (5 mL)和EtOH (0.5 mL)中的经搅拌的悬浮液内。将混合物在微波照射下在150℃搅拌30分钟。将混合物用水稀释，用DCM萃取。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/DCM 0/100至3/97中的溶液)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈灰白色固体的rac-3-氨基-5-[3-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.076 g, 69%收率)。
实施例 B3: rac-5- 氯代 - 吡啶 -2- 羧酸 [3-(6- 氨基 -2,4- 二甲基 -5- 氧代 -2,3,4,5- 四氢 - 吡嗪 -2- 基 )- 苯基 ]- 酰胺的制备
Figure 374345DEST_PATH_IMAGE055
在室温将5-氯代-2-吡啶羧酸(0.071 g, 0.448 mmol)加至rac-3-氨基-1,5-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.080 g, 0.344 mmol)在DCM (5 mL)中的经搅拌的溶液内。然后加入N,N-二甲基苯胺(0.061 mL, 0.482 mmol)，在室温搅拌5分钟后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(0.170 g, 0.448 mmol)。将混合物在室温搅拌3小时。将混合物用Na2CO3 (饱和水溶液)稀释，用DCM萃取。将有机层分离，干燥(Na2SO4)，过滤和真空蒸发溶剂。将粗产物用快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/DCM 0/100至4/96中的溶液)纯化。将期望的级分收集和真空浓缩以得到呈白色固体的rac-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-苯基]-酰胺(0.023 g, 18%收率)。
实施例 B4: (R)-5- 氯代 - 吡啶 -2- 羧酸 [3-(6- 氨基 -2,4- 二甲基 -5- 氧代 -2,3,4,5- 四氢 - 吡嗪 -2- 基 )- 苯基 ]- 酰胺和 (S)-5- 氯代 - 吡啶 -2- 羧酸 [3-(6- 氨基 -2,4- 二甲基 -5- 氧代 -2,3,4,5- 四氢 - 吡嗪 -2- 基 )- 苯基 ]- 酰胺的制备
Figure 624061DEST_PATH_IMAGE055
将rac-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-苯基]-酰胺(0.22 g)样品通过制备SFC (Chiralpak® IC 250 x 20 mm, 流动相60% CO2, 36% EtOH, 4% DCM和0.3% iPrNH2)纯化，以得到(R)-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-苯基]-酰胺(0.064 g, 15%)和(S)-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-苯基]-酰胺(0.065 g, 15%)。
实施例 B5: rac-5- 氨基 -3-(2,4- 二氟代 -5- 苯基 - 苯基 )-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮的制备
Figure 671652DEST_PATH_IMAGE056
按照描述于实施例B2的类似方法合成rac-5-氨基-3-(2,4-二氟代-5-苯基-苯基)-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮。由此从rac-3-氨基-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.1 g, 0.3 mmol)开始，获得呈油状物的rac-5-氨基-3-(2,4-二氟代-5-苯基-苯基)-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮。将该油状物通过加入HCl (2 N在异丙醇中)转化为盐酸盐，并从DIPE和乙腈结晶以得到白色固体(0.048 g, 44%收率)。
实施例 B6: rac-5- 氨基 -3-[2,4- 二氟代 -5-(5- 甲氧基 -3- 吡啶基 )- 苯基 ]-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮、 (R)-5- 氨基 -3-[2,4- 二氟代 -5-(5- 甲氧基 -3- 吡啶基 ) 苯基 ]-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮和 (S)-5- 氨基 -3-[2,4- 二氟代 -5-(5- 甲氧基 -3- 吡啶基 ) 苯基 ]-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮的制备
Figure 981410DEST_PATH_IMAGE057
按照描述于实施例B2的类似方法合成rac-5-氨基-3-[2,4-二氟代-5-(5-甲氧基-3-吡啶基)苯基]-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮。由此从rac-3-氨基-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.55 g, 1.66 mmol)开始，获得呈固体的rac-5-氨基-3-[2,4-二氟代-5-(5-甲氧基-3-吡啶基)苯基]-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.4 g, 67%收率)。
然后将rac-5-氨基-3-[2,4-二氟代-5-(5-甲氧基-3-吡啶基)苯基]-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.32 g)样品通过制备SFC (Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, 流动相CO2, MeOH含0.2% iPrNH2)纯化，以得到(R)-5-氨基-3-[2,4-二氟代-5-(5-甲氧基-3-吡啶基)苯基]-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.09 g, 15%)和(S)-5-氨基-3-[2,4-二氟代-5-(5-甲氧基-3-吡啶基)-苯基]-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.092 g, 15%)。
实施例 B7: rac-5- 氨基 -3-(2,4- 二氟代 -5- 嘧啶 -5- 基 - 苯基 )-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮、 (R)-rac-5- 氨基 -3-(2,4- 二氟代 -5- 嘧啶 -5- 基 - 苯基 )-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮和 (S)-rac-5- 氨基 -3-(2,4- 二氟代 -5- 嘧啶 -5- 基 - 苯基 )-1,3- 二甲基 -2H- 吡嗪 -6- 酮的制备
Figure 114451DEST_PATH_IMAGE058
按照描述于实施例B2的类似方法合成rac-5-氨基-3-(2,4-二氟代-5-嘧啶-5-基-苯基)-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮。由此从rac-3-氨基-5-(5-溴代-2,4-二氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.6 g, 1.81 mmol)开始，获得呈固体的rac-5-氨基-3-(2,4-二氟代-5-嘧啶-5-基-苯基)-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.49 g, 82%收率)。然后将该产物通过制备SFC (Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, 流动相CO2, MeOH含0.2% iPrNH2)纯化，以得到(R)-5-氨基-3-(2,4-二氟代-5-嘧啶-5-基-苯基)-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.098 g, 16%)和(S)-5-氨基-3-(2,4-二氟代-5-嘧啶-5-基-苯基)-1,3-二甲基-2H-吡嗪-6-酮(0.106 g, 18%)。
实施例 B8: (R)-5- 氯代 - 吡啶 -2- 羧酸 [3-(6- 氨基 -2,4- 二甲基 -5- 氧代 -2,3,4,5- 四氢 - 吡嗪 -2- 基 )-4- 氟代 - 苯基 ]- 酰胺和 (S)-5- 氯代 - 吡啶 -2- 羧酸 [3-(6- 氨基 -2,4- 二甲基 -5- 氧代 -2,3,4,5- 四氢 - 吡嗪 -2- 基 )-4- 氟代 - 苯基 ]- 酰胺的制备
Figure 167858DEST_PATH_IMAGE059
使5-氯代-2-吡啶羧酸(0.113 g, 0.72 mmol)溶于MeOH (10 mL)中，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓盐酸盐(0.53 g, 1.92 mmol)。将混合物搅拌5分钟后，在0℃加入rac-3-氨基-5-(5-氨基-2-氟代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.6 g, 1.81 mmol)在MeOH (5 mL)中的溶液，将混合物再搅拌3小时。在此之后，将反应混合物在0℃用NaOH (1M在H2O中)猝灭，用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，然后分离，干燥(MgSO4)和真空蒸发溶剂。将粗材料通过快速柱层析(硅胶; 7 M氨在甲醇/DCM 0/100至5/95中的溶液)纯化，将期望的级分收集，真空蒸发溶剂以得到rac-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-4-氟代-苯基]-酰胺(0.5 g)。然后将该产物通过制备SFC (Chiralpak® Diacel OJ 20 x 250 mm, 流动相CO2, iPrOH含0.2% iPrNH2)纯化，以得到(R)-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-4-氟代-苯基]-酰胺(0.06 g, 9.6%)和(S)-5-氯代-吡啶-2-羧酸[3-(6-氨基-2,4-二甲基-5-氧代-2,3,4,5-四氢-吡嗪-2-基)-4-氟代-苯基]-酰胺(0.065 g, 10%)。
实施例 B9: rac-5- 氨基 -1,3- 二甲基 -3-(3- 苯基 - 苯基 )-2H- 吡嗪 -6- 酮的制备
Figure 69955DEST_PATH_IMAGE060
按照描述于实施例B2的类似方法合成rac-5-氨基-1,3-二甲基-3-(3-苯基-苯基)-2H-吡嗪-6-酮。由此从rac-3-氨基-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.33 g, 1.11 mmol)开始，获得呈油状物的rac-5-氨基-1,3-二甲基-3-(3-苯基-苯基)-2H-吡嗪-6-酮。将该油状物通过加入HCl (2 N在异丙醇中)转化为盐酸盐，并从DIPE和乙腈结晶以得到白色固体(0.072 g, 20%收率)。
实施例 B10: rac-5- 氨基 -1,3- 二甲基 -3-(3- 嘧啶 -5- 基苯基 )-2H- 吡嗪 -6- 酮的制备
按照描述于实施例B2的类似方法合成rac-5-氨基-1,3-二甲基-3-(3-嘧啶-5-基苯基)-2H-吡嗪-6-酮。由此从rac-3-氨基-5-(3-溴代-苯基)-1,5-二甲基-5,6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(0.1 g, 0.34 mmol)开始，获得呈灰白色固体的rac-5-氨基-1,3-二甲基-3-(3-嘧啶-5-基苯基)-2H-吡嗪-6-酮(0.075 g, 75%收率)。
表 1
Figure 843056DEST_PATH_IMAGE062
化合物号 实施例号 X1 X3 ---L-Ar C5-立体化学
1 B1 CH CH
Figure 261005DEST_PATH_IMAGE063
 RS
2 B2 CH CH RS
3 B3 CH CH
Figure 669170DEST_PATH_IMAGE065
 RS
4 B4 CH CH
Figure 714486DEST_PATH_IMAGE065
 S
5 B4 CH CH R
6 B5 CF CF
Figure 720806DEST_PATH_IMAGE066
 RS
7 B6 CF CF
Figure 808847DEST_PATH_IMAGE064
 RS
8 B6 CF CF
Figure 138197DEST_PATH_IMAGE064
 S
9 B6 CF CF R
10 B7 CF CF
Figure 304179DEST_PATH_IMAGE067
 RS
11 B7 CF CF
Figure 563122DEST_PATH_IMAGE067
 S
12 B7 CF CF
Figure 379768DEST_PATH_IMAGE067
 R
13 B8 CF CH
Figure 116780DEST_PATH_IMAGE065
 S
14 B8 CF CH
Figure 702482DEST_PATH_IMAGE065
 R
15 B9 CH CH RS
16 B10 CH CH
Figure 108373DEST_PATH_IMAGE067
 RS
C. 分析部分
LCMS
关于本发明化合物的(LC)MS-表征，使用下列方法。
通用程序 A ：
用HP 1100 (Agilent Technologies)系统进行HPLC测量，该系统包括具有脱气器的泵(四元或二元)、自动采样器、柱加热炉、二极管阵列检测器(DAD)和如在各方法中指定的柱。MS检测器配置有电喷雾电离源或者ESCI双重电离源(电喷雾组合大气压化学电离)。用氮气作为雾化气。源温度维持在140℃或100℃。数据采集用MassLynx-Openlynx软件或Chemsation-Agilent Data Browser软件实施。
通用程序 B ：
UPLC (超效液相层析)测量用Acquity UPLC (Waters)系统进行，该系统包括采样组织器、含脱气器的二元泵、四柱加热炉、二极管阵列检测器(DAD)和如在各方法中指定的柱。MS检测器配置有ESCI双重电离源(电喷雾组合大气压化学电离)。用氮气作为雾化气。源温度维持在140℃。数据采集用MassLynx-Openlynx软件实施。
通用程序 C ：
HPLC测量用Alliance HT 2795 (Waters)系统进行，该系统包括含有脱气器的四元泵、自动采样器、二极管阵列检测器(DAD)和在下文各方法中指定的柱，柱保持在30℃温度。流体从柱分流至MS分光计。MS检测器配置有电喷雾电离源。毛细管针电压是3 kV，源温度维持在100℃在LCT (来自Waters的Time of Flight ZsprayTM质谱仪)上。用氮气作为雾化气。数据采集用Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统实施。
通用程序 D ：
LC测量用Acquity UPLC (Waters)系统实施，该系统包括二元泵、样品组织器、柱加热器(设为55℃)、二极管阵列检测器(DAD)和在下文各方法中指定的柱。流体从柱分流至MS分光计。MS检测器配置有电喷雾电离源。通过用0.02秒停留时间在0.18秒内从100至1000扫描来采集质谱。毛细管针电压是3.5 kV，源温度维持在140℃。用氮气作为雾化气。数据采集用Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统实施。
方法 1：
除了通用程序A以外：反相HPLC在来自Agilent的Eclipse Plus-C18柱(3.5μm, 2.1 x 30 mm)上进行，流速1.0 ml/min，在60℃。所用梯度条件是：5.0分钟内从95 % A (0.5 g/l乙酸铵溶液+ 5 %乙腈)、5 % B (乙腈)至100 % B，保持至5.15分钟，在5.3分钟平衡至初始条件直至7.0分钟。注射体积2 μl。高分辨质谱(Time of Flight, TOF检测器)通过用0.3秒停留时间在0.5秒内从100至750扫描来采集。毛细管针电压在正电离模式是2.5 kV，在负电离模式是2.9 kV。锥孔电压(cone voltage)在正和负电离模式都是20 V。Leucine-Enkephaline是用于锁定质量校正的标准物。
方法 2：
除了通用程序B以外：反相UPLC在来自Waters的BEH-C18柱(1.7 μm, 2.1 x 50 mm)上进行，流速1.0 ml/min，在50℃，不分流至MS检测器。所用梯度条件是：95 % A (0.5 g/l乙酸铵溶液+ 5 %乙腈)、5 % B (乙腈)，3.8分钟至40 % A、60 % B，4.6分钟至5 % A、95 % B，保持至5.0分钟。注射体积2 μl。低分辨质谱(单个四极, SQD检测器)通过用0.08秒的通道间延迟在0.1秒内从100至1000扫描来采集。毛细管针电压是3 kV。锥孔电压在正电离模式是25 V，在负电离模式是30 V。
方法 3：
除了通用程序C以外：反相HPLC在Waters Xterra-RP C18柱(3.5 µm, 4.6 x 100 mm)上进行，流速0.8 ml/min。两种流动相(流动相A: 100 % 7 mM乙酸铵; 流动相B: 100 %乙腈)用于运行梯度条件，4.5分钟内从80 % A和20 % B (保持0.5分钟)至90 % B，90 % B 4分钟，用初始条件再平衡3分钟。所用注射体积是5 μl。锥孔电压在正和负电离模式都是20 V。质谱通过用0.3秒的扫描间延迟在0.4秒内从100至1000扫描来采集。
方法 4：
除了通用程序D以外：反相UPLC (超效液相层析)在桥接乙基硅氧烷/硅石杂合体(BEH) C18柱(1.7 μm, 2.1 x 50 mm; Waters Acquity)上进行，流速0.8 ml/min。两种流动相(流动相A: 0.1 %甲酸在H2O/甲醇95/5中; 流动相B: 甲醇)用于运行梯度条件，1.3分钟内从95 % A和5 % B至5 % A和95 % B，保持0.2分钟。所用注射体积是0.5 μl。锥孔电压在正电离模式是10 V，在负电离模式是20 V。
方法 5：
除了通用程序D以外：反相UPLC (超效液相层析)在桥接乙基硅氧烷/硅石杂合体(BEH) C18柱(1.7 μm, 2.1 x 50 mm; Waters Acquity)上进行，流速0.8 ml/min。两种流动相(25 mM乙酸铵在H2O/乙腈95/5中; 流动相B：乙腈)用于运行梯度条件，1.3分钟内从95 % A和5 % B至5 % A和95 % B，保持0.3分钟。所用注射体积是0.5 μl。锥孔电压在正电离模式是30 V，在负电离模式是30 V。
熔点
数值是峰值或熔化范围，在有这种分析方法通常伴随的实验不确定性的情况下获得。
Mettler FP 81HT/FP90 装置 ( 通过表 3 的 FP90 标明 )
对于许多化合物，在Mettler FP81HT/FP90装置上的开放毛细管中确定熔点。用1、3、5或10℃/分钟的温度梯度测量熔点。最高温度是300℃。从数字显示器读取熔点。
DSC823e ( 通过表 3 的 DSC 标明 )
对于许多化合物，用DSC823e (Mettler-Toledo)确定熔点。用30℃/分钟的温度梯度测量熔点。最高温度是400℃。
表 2: 分析数据-Rt指保留时间(分钟)，[M+H]+指化合物的质子化质量，方法指用于(LC)MS的方法，
化合物号 Rt [M+H]+ 方法 熔点
1 2.84 319 1 218.6 ºC (FP90)
2 1.26 325 2 230.4 ºC (FP90)
3 1.68 372 2 n.d.
4 4.92 372 3 218.8 ºC (FP90)
5 4.91 372 3 220.1 ºC (FP90)
6 0.98 330 4 141.5 ºC (DSC)
7 0.81 361 5 180.5 ºC (DSC)
8 0.80 361 5 173.6 ºC (DSC)
9 0.80 361 5 172.9 ºC (DSC)
10 0.68 332 5 145.2 ºC (DSC)
11 0.67 332 5 166.1 ºC (DSC)
12 0.67 332 5 166.2 ºC (DSC)
13 0.85 390 5 221.5 ºC (DSC)
14 0.85 390 5 n.d.
15 n.d. n.d. n.d* 227.3 ºC (DSC)
16 0.72 296 2 234.6 ºC (FP90)
n.d.指未测定
*LC/MS用于不是盐的另一级分(游离碱)。
SFCMS
通用程序 A ：
SFC测量用Berger Instruments (Newark, DE, USA)的Analytical SFC系统进行，该系统包括用于递送二氧化碳(CO2)和调节剂的FCM-1200二元泵流体控制模块、CTC Analytics自动液体采样器、用于将柱从室温加热至80℃的TCM-20000热控制模块。使用配备有承受至多400 bar的高压流动池的Agilent 1100 UV光电二极管阵列检测器。流体从柱分流至MS分光计。MS检测器配置有大气压电离源。Waters ZQ质谱分光光度计的电离参数如下：高压放电针电流(corona)：9µa，源温度：140℃，锥孔电压(cone)：30 V，探测器温度：450℃，二级锥孔电压(extractor) 3 V，脱溶剂气体400L/hr，锥孔气体70 L/hr。用氮气作为雾化气。数据采集用Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统实施。
通用程序 B：
SFC测量用Berger Instruments (Newark, DE, USA)的Analytical SFC系统实施，该系统包括用于递送二氧化碳(CO2)和调节剂的二元泵控制模块(FCM-1200)、用于将柱加热(TCM2100)使温度控制在1-150℃范围的热控制模块，和用于6个不同柱的柱选择阀(Valco, VICI, Houston, TX, USA)。光电二极管阵列检测器(Agilent 1100, Waldbronn, Germany)配备有高压流动池(至多400 bar)和配置有CTC LC Mini PAL自动采样器(Leap Technologies, Carrboro, NC , USA)。具有正交Z-电喷雾界面的ZQ质谱仪(Waters, Milford, MA, USA)与SFC-系统偶联。仪器控制、数据收集和处理用由SFC ProNTo软件和Masslynx软件组成的集成平台实施。
方法 1：
除了通用程序A以外：SFC中的手性分离在CHIRALPAK IC DAICEL柱(5 µm, 4.6 x 250 mm)上在35℃进行，流速3.0 ml/min。流动相是CO2、60%乙醇(含有0.3% iPrNH2)，保持11分钟。
方法 2：
除了通用程序B以外：SFC中的手性分离在CHIRALPAK AD-H柱(4.6 x 500 mm)上在50ºC进行，流速3.0 ml/min。流动相是CO2、20% MeOH (含有0.2% iPrNH2)，保持17.520分钟，然后以10%速率从20%至50% MeOH/CO2，并在50%保持4.20分钟。
方法 3：
除了通用程序B以外：SFC中的手性分离在CHIRALPAK AD-H柱(4.6 mm x 500 mm)上在50ºC进行，流速3.0 ml/min。流动相是CO2、20% MeOH (含有0.2% iPrNH2)，保持15.00分钟，等度模式。
方法 4：
除了通用程序B以外：SFC中的手性分离在CHIRALCEL OJ-H柱(4.6 x 500 mm)上在50ºC进行，流速3.0 ml/min。流动相是CO2、20% iPrOH (含有0.2 % iPrNH2)，保持19.60分钟，然后以10%速率从20%至50% iPrOH (含有0.2 % iPrNH2)，并在50%保持3.0分钟。
表 3: 分析SFC数据-Rt指保留时间(分钟)，[M+H]+指化合物的质子化质量，方法指用于对映体纯的化合物的(SFC)MS分析的方法。
化合物号 Rt [M+H]+ UV面积% 方法 异构体洗脱顺序
5 6.10 372 100 1 A
4 8.29 372 100 1 B
9 10.77 361 100 2 A
8 13.10 361 100 2 B
12 6.67 332 99.1 3 A
11 8.03 332 100 3 B
14 8.15 390 100 4 A
13 9.73 390 100 4 B
旋光度
旋光度在具有钠灯的Perkin-Elmer 341旋光计上测量，报告如下：[α]λ t º C (c g/100ml, 溶剂)。
表 4: 分析数据-对映体纯的化合物的旋光度值
化合物号 αD (º) 波长(nm) 浓度w/v % 溶剂 温度(℃)
5 -81.1 589 0.54 DMF 20
4 +87.2 589 0.50 DMF 20
9 +47.1 589 0.37 MeOH 20
8 -46.8 589 0.35 MeOH 20
12 +23.4 589 0.36 MeOH 20
11 -25.2 589 0.37 MeOH 20
D. 药理学实施例
本发明提供的化合物是β-位点APP-裂解酶1 (BACE1)的抑制剂。抑制BACE1 (天冬氨酸蛋白酶)据信与治疗阿尔茨海默病(AD)有关。从β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)产生和聚集β-淀粉样蛋白肽(Aβ)据信在AD的发病和进展中发挥关键作用。从淀粉样蛋白前体蛋白(APP)分别由β-分泌酶和γ-分泌酶顺次裂解Aβ域的N-和C-端，产生Aβ。
由于式(I)化合物能够抑制BACE1活性，所以预期它们实质上对该酶有效。表3显示下文所述用基于生物化学荧光共振能量转移(FRET)的测定和在SKNBE2细胞中用细胞αlisa测定测试的此类抑制剂的特性，所述测定适合鉴定此类化合物，更特别是式(I)化合物。
基于生物化学FRET的测定
本测定是基于荧光共振能量转移测定(FRET)的测定。本测定的底物是APP衍生的13个氨基酸的肽，其含有淀粉样蛋白前体蛋白(APP) β-分泌酶裂解位点的‘Swedish’ Lys-Met/Asn-Leu突变。这种底物还含有两种荧光团：(7-甲氧基-香豆素-4-基)乙酸(Mca)是具有320 nm激发波长和405nm发射波长的荧光供体，2,4-二硝基苯基(Dnp)是专利所有的猝灭受体。已选择该两种基团之间的距离以便在光激发后，供体荧光能量通过共振能量转移被受体明显猝灭。在被BACE1裂解后，荧光团Mca与猝灭基团Dnp分离，恢复供体的全部荧光产量。荧光的增加与蛋白水解的速率线性相关(Koike H等, J Biochem. 1999, 126, 235-42)。
简言之，在384孔格式中，在不存在或存在化合物的情况下，将重组BACE1蛋白以1 μg/ml终浓度与10 μm底物在孵育缓冲液(40mM柠檬酸盐缓冲液pH 5.0, 0.04% PEG, 4% DMSO)中在室温孵育120分钟。然后通过在T=0和T=120 (在320nm激发和在405nm发射)的荧光测量直接测量蛋白水解的量。结果用RFU表示为T120与T0之间的差异。
通过最小平方和法将最佳拟合曲线拟合于%Controlmin对化合物浓度的图。从中可获得IC50值(导致50%活性抑制的抑制浓度)。
LC = 低对照值的中位数
　　　　 = 低对照：不含酶的反应
HC = 高对照值的中位数
　 = 高对照：含酶的反应
%效应= 100-[(样品-LC)/(HC-LC) *100]
%对照= (样品/HC)*100
%Controlmin = (样品-LC)/(HC-LC) *100
基本如上所述测试下列举例的化合物，表现下列活性：
表 5:
化合物号 基于生物化学FRET的测定 pIC50
1 4.56
2 4.81
3 6.34
4 <4.52
5 6.53
6 <4.52
7 5.12
8 <4.52
9 5.42
10 <4.52
11 <4.52
12 5.04
13 4.54
14 7.40
15 <4.52
16 <4.52
在SKNBE2细胞中的细胞αlisa测定
在两个αlisa测定中，将产生和分泌到人神经母细胞瘤SKNBE2细胞介质中的完整Aβ和Aβ42水平定量。测定基于表达野生型淀粉样蛋白前体蛋白(hAPP695)的人神经母细胞瘤SKNBE2。将化合物稀释，加至这些细胞，孵育18小时，然后测量Aβ42和完整Aβ。通过夹心αlisa测量完整Aβ和Aβ42。αlisa是夹心测定，使用附着于链霉亲和素包被珠的生物素化抗体AbN/25和分别检测完整Aβ和Aβ42的抗体Ab4G8或cAb42/26缀合的受体珠。在完整Aβ或Aβ42存在的情况下，珠紧密靠近。供体珠的激发引起单态氧分子的释放，这触发受体珠中能量转移的级联，导致光发射。在孵育1小时后测量光发射(在650nm激发和在615nm发射)。
通过最小平方和法将最佳拟合曲线拟合于%Controlmin对化合物浓度的图。从中可获得IC50值(导致50%活性抑制的抑制浓度)。
LC = 低对照值的中位数
　　　　 = 低对照：不存在化合物的情况下预孵育细胞，在αlisa中不存在生物素化Ab
HC = 高对照值的中位数
　 = 高对照：不存在化合物的情况下预孵育细胞
%效应= 100-[(样品-LC)/(HC-LC) *100]
%对照= (样品/HC)*100
%Controlmin = (样品-LC)/(HC-LC) *100
基本如上所述测试下列举例的化合物，表现下列活性：
表 6:
Figure 711392DEST_PATH_IMAGE068
。

Claims (9)

1.式(I)化合物
Figure DEST_PATH_IMAGE001
，或其立体异构体形式，或者其加成盐或溶剂合物，其中
R1选自氢、C1-3烷基、单-和多卤代-C1-3烷基、芳基和杂芳基；
R2选自氢、C1-3烷基、单-和多卤代-C1-3烷基、芳基和杂芳基；
X1、X2、X3、X4独立是C(R3)或N，前提是其中不超过2个代表N；每个R3选自氢、卤代基、C1-3烷基、单-和多卤代-C1-3烷基、氰基、C1-3烷基氧基、单-和多卤代-C1-3烷基氧基；
L是键或-N(R4)CO-，其中R4是氢或C1-3烷基；
Ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或者被1、2或3个选自卤代基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷基氧基、单-和多卤代-C1-3烷基的取代基取代的苯基；
杂芳基选自各自被1、2或3个选自卤代基、氰基、C1-3烷基、C1-3烷基氧基、单-和多卤代-C1-3烷基的取代基任选取代的吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、噻二唑基、噁唑基和噁二唑基。
2.权利要求1的化合物，或其加成盐或溶剂合物，其中
R1和R2独立选自C1-3烷基；
X1、X2、X3、X4独立是C(R3)，其中每个R3选自氢和卤代基；
L是键或-N(R4)CO-，其中R4是氢；
Ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或者被1或2个选自卤代基、氰基、C1-3烷基和C1-3烷基氧基的取代基取代的苯基；
杂芳基选自各自被1或2个选自卤代基、氰基、C1-3烷基和C1-3烷基氧基的取代基任选取代的吡啶基、嘧啶基和吡嗪基。
3.权利要求1的化合物，或其加成盐或溶剂合物，其中
R1和R2是甲基；
X1、X2、X3、X4是CH；
L是键或-N(R4)CO-，其中R4是氢；
Ar是同芳基或杂芳基；
其中同芳基是苯基或者被1或2个选自氯代基和氰基的取代基取代的苯基；
杂芳基选自各自被1或2个选自氯代基、氟代基、氰基、甲基和甲氧基的取代基任选取代的吡啶基、嘧啶基和吡嗪基。
4.权利要求1的化合物，或其加成盐或溶剂合物，其中
R1和R2是甲基；
X1是CH或CF；X2、X3和X4是CH；
L是-NHCO-；
Ar是5-氯代-吡啶-2-基。
5.权利要求1的化合物，或其加成盐或溶剂合物，其中
R1和R2是甲基；
X1和X3是CH或CF；X2和X4是CH；
L是键；
Ar是5-甲氧基-吡啶-3-基或嘧啶-5-基。
6.一种药用组合物，所述药用组合物包含治疗有效量的权利要求1至5中任一项的化合物和药学上可接受的载体。
7.一种用于制备权利要求6的药用组合物的方法，其特征在于使药学上可接受的载体与治疗有效量的权利要求1至5中任一项的化合物紧密混合。
8.权利要求1至5中任一项的化合物，所述化合物用于治疗、防止或预防阿尔茨海默病(AD)、轻度认知减退、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、中风相关痴呆、帕金森病相关痴呆或β-淀粉样蛋白相关痴呆。
9.一种治疗病症的方法，所述病症选自阿尔茨海默病、轻度认知减退、衰老、痴呆、路易体痴呆、唐氏综合征、中风相关痴呆、帕金森病相关痴呆和β-淀粉样蛋白相关痴呆，所述方法包括给予有需要的受试者治疗有效量的权利要求1至5中任一项的化合物或权利要求6的药用组合物。
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2597087B1 (en) 2005-10-25 2016-03-30 Shionogi&Co., Ltd. Dihydrooxazine and tetrahydropyrimidine derivatives as BACE 1 inhibitors
JP5383483B2 (ja) 2007-04-24 2014-01-08 塩野義製薬株式会社 アルツハイマー症治療用医薬組成物
EP2147914B1 (en) 2007-04-24 2014-06-04 Shionogi&Co., Ltd. Aminodihydrothiazine derivatives substituted with cyclic groups
CA2727859C (en) 2008-06-13 2016-11-01 Shionogi & Co., Ltd. SULFUR-CONTAINING HETEROCYCLIC DERIVATIVE HAVING ß-SECRETASE-INHIBITING ACTIVITY
JPWO2010047372A1 (ja) 2008-10-22 2012-03-22 塩野義製薬株式会社 Ｂａｃｅ１阻害活性を有する２−アミノピリミジン−４−オンおよび２−アミノピリジン誘導体
ES2590038T5 (es) 2009-12-11 2021-10-19 Shionogi & Co Derivado de oxazina
BR112012015916A2 (pt) * 2009-12-31 2017-04-25 Novartis Ag derivados de pirazina e seu uso no tratamento de distúrbios neurológicos
US20130109683A1 (en) 2010-06-09 2013-05-02 Janssen Pharmaceutica Nv 5,6-dihydro-2h-[1,4]oxazin-3-yl-amine derivatives useful as inhibitors of beta-secretase (bace)
JP5766198B2 (ja) 2010-10-29 2015-08-19 塩野義製薬株式会社 縮合アミノジヒドロピリミジン誘導体
AU2011321427A1 (en) 2010-10-29 2013-05-02 Shionogi & Co., Ltd. Naphthyridine derivative
JP5834091B2 (ja) 2010-12-22 2015-12-16 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｎａａｍｌｏｚｅ Ｖｅｎｎｏｏｔｓｃｈａｐ ベータ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）の阻害剤として有用な５，６−ジヒドロ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−８−イルアミン誘導体
KR102012675B1 (ko) 2011-03-09 2019-08-21 얀센 파마슈티카 엔.브이. 베타-세크레타제(BACE)의 억제제로서 유용한 3,4-디하이드로-피롤로[1,2-a]피라진-1-일아민 유도체
TW201247635A (en) 2011-04-26 2012-12-01 Shionogi & Co Oxazine derivatives and a pharmaceutical composition for inhibiting BAC1 containing them
US9540359B2 (en) 2012-10-24 2017-01-10 Shionogi & Co., Ltd. Dihydrooxazine or oxazepine derivatives having BACE1 inhibitory activity
BR112015030678A8 (pt) 2013-06-12 2020-01-07 Janssen Pharmaceutica Nv derivados 4-amino-6-fenil-5,6-di-hidroimidazo [1,5-a] pirazina como inibidores de beta-secretase (bace), composição farmacêutica, processo para preparação da mesma, e usos na fabricação de medicamentos
MX368326B (es) 2013-06-12 2019-09-27 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de 4-amino-6-fenil-5,6-dihidroimidazo[1,5-a]pirazin-3(2h )-ona como inhibidores de beta-secretasa (bace).
WO2014198854A1 (en) 2013-06-12 2014-12-18 Janssen Pharmaceutica Nv 4-amino-6-phenyl-6,7-dihydro[1,2,3]triazolo[1,5-a]pyrazine derivatives as inhibitors of beta-secretase (bace)
ES2768823T3 (es) 2014-12-18 2020-06-23 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de 2,3,4,5-tetrahidropiridin-6-amina y 3,4-dihidro-2H-pirrol-5-amina útiles como inhibidores de beta-secretasa

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101460480A (zh) * 2006-04-05 2009-06-17 阿斯利康(瑞典)有限公司 2-氨基嘧啶-4-酮类化合物及其用于治疗或预防Aβ相关病理的用途
WO2009097278A1 (en) * 2008-01-28 2009-08-06 Janssen Pharmaceutica N.V. 6-SUBSTITUTED-THIO-2-AMINO-QUINOLINE DERIVATIVES USEFUL AS INHIBITORS OF β-SECRETASE (BACE)
CN102712621A (zh) * 2009-12-31 2012-10-03 诺瓦提斯公司 吡嗪衍生物及其在治疗神经学障碍中的用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1678172E (pt) 2003-10-15 2010-03-03 Targacept Inc Composições farmacêuticas e métodos para alívio da dor e tratamento de perturbações do sistema nervoso central

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101460480A (zh) * 2006-04-05 2009-06-17 阿斯利康(瑞典)有限公司 2-氨基嘧啶-4-酮类化合物及其用于治疗或预防Aβ相关病理的用途
WO2009097278A1 (en) * 2008-01-28 2009-08-06 Janssen Pharmaceutica N.V. 6-SUBSTITUTED-THIO-2-AMINO-QUINOLINE DERIVATIVES USEFUL AS INHIBITORS OF β-SECRETASE (BACE)
CN102712621A (zh) * 2009-12-31 2012-10-03 诺瓦提斯公司 吡嗪衍生物及其在治疗神经学障碍中的用途

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