CN102985106A - 用于治疗德戈斯病的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

本公开内容尤其涉及含有人补体抑制剂和/或干扰素α抑制剂的组合物，以及所述组合物在用于治疗或预防受试者的德戈斯病的方法中的用途。在一些实施方案中，所述抑制剂为与人补体组分C5蛋白结合或与诸如C5a或C5b等C5生物活性片段结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抑制剂为与干扰素α结合或与干扰素α受体结合的抗体或其抗原结合片段。

Description

用于治疗德戈斯病的方法和组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求保护于2010年3月1日提交的美国临时专利申请序列号61/309,393的优先权和权益，其公开内容以其整体通过引用并入本文。

序列表

本申请含有经由EFS-Web提交的序列表，所述序列表以其整体通过引用并入本文。将在2011年2月25日创建的所述ASCII拷贝命名为ALXN153.txt，其大小为61,625字节。

技术领域

本发明领域为医药、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。

背景

德戈斯病(Degos’ disease，也被称为Kohlmeier病和恶性萎缩性丘疹病(MAP))，是一种特征为在小血管到大血管中的血栓形成的罕见的血管病变(大约200例报告病例)。参见例如Lester和Rapini (2009) Curr Opin Gastroenterol 25:66-73及Englert等，(1984) Br Med J 289:576。尽管通常认为其具有未知病因，但是德戈斯病与病毒感染(例如B19细小病毒和HIV)和诸如红斑狼疮(LE)、皮肌炎和原发性抗磷脂综合征(APS)等自身免疫性疾病相关。参见例如，Crowson等，(2002) J Cutan Pathol 29:596-601；Englert等，(1984)，见上；Heymann (2009) J Am Acad Dermatol 61:505-506；Durie等，(1969) Arch Dermatol 100(5):575-581；Tsao等，(1997) J Am Acad Dermatol 36:317-319和Requena等，(1998) J Am Acad Dermatol 38:852-856。德戈斯病的一些形式可以是家族性的。参见例如， Katz等，(1997) J Am Acad Dermatol 37:480-484和Penault等，(2004) Ann Dermatol Venereol 131:989-993。德戈斯病可以发生在任何年龄的患者中，然而其似乎以大约为3比1的比率相对于女人优先影响男人。参见例如，Katz等，(1997)，见上；Torrelo等，(2002) Br J Dermatol 146:916-918和Wilson等，(2007) Pediatr Dermatol 24(1):18-24。

德戈斯病可以表现为良性的纯粹皮肤型，或作为侵袭性的多器官全身型，后者通常在诊断后一至十二年内致命。Scheinfeld (2007) Clin Exp Derm 32:483-487。皮肤性德戈斯病的表型标志是在皮肤上出现一个或多个红斑状微红颜色的丘疹，所述丘疹结白色疤痕，中心萎缩。

几乎所有全身型的德戈斯病的患者都出现死亡，所述患者在全身累及后的平均寿命预期为大约两到三年。参见例如，Scheinfeld (2007)，见上。患者通常死于有或没有脓毒性并发症的肠穿孔；然而，死亡或者可以源自肠梗塞、心肺衰竭和/或神经梗塞和出血。同样亦参见High等，(2004) J Am Acad Dermatol 50(6):895-899。

尚未确定德戈斯病的标准医学治疗。许多治疗剂在治疗这种疾病中只有边缘的和/或不一致的成功。参见例如Scheinfeld (2007)，见上。例如，一些德戈斯病患者受益于静脉注射免疫球蛋白治疗，但目前似乎没有办法来预测哪些患者会响应所述疗法，参见例如，Dyrsen等，(2008) J Cutan Pathol 35( 增刊 1):20-25；Zhu等，(2007) Br J Dermatol 157(1):206-207和 De Breucker等，(2008) Acta Clin Belg 63(2):99-102 (摘要)。

鉴于前述，很明显需要新的途径和更好的方法来治疗德戈斯病患者。

简述

本公开内容至少部分地基于本发明人的以下发现，所述发现为补体抑制剂(即人源化抗C5抗体依库珠单抗)在治疗罹患全身型德戈斯病的患者方面高度有效。因此，本公开内容特征在于可用于预防和治疗德戈斯病的多种组合物和方法。

在一个方面，本公开内容提供了用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，该方法包括给予罹患德戈斯病的患者足够治疗该疾病的量的补体抑制剂。

在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括以足够维持患者的降低的补体活性水平的量和频率，长期给予罹患德戈斯病的患者补体抑制剂，藉此治疗该疾病。

在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗德戈斯病的方法，所述方法包括：将患者鉴定为患有或可能患有德戈斯病的患者；给予患者足够治疗这种疾病的量的补体抑制剂。

在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗或预防(例如，预防德戈斯病的发生或预防良性皮肤型德戈斯病发展成为更晚期的多器官和/或全身型疾病)的方法。所述方法包括给予有需要的患者足够治疗或预防所述疾病的量的补体抑制剂。在一些实施方案中，可以在治疗期间维持患者血液中的降低的补体激活水平的量和频率长期给予所述抑制剂。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，德戈斯病与B19细小病毒感染或人免疫缺陷病毒感染相关。在一些实施方案中，德戈斯病是特发性的。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，德戈斯病病理性影响胃肠道、中枢神经系统和心血管系统中的一种或多种。在一些实施方案中，德戈斯病是多器官的全身性的德戈斯病。在一些实施方案中，德戈斯病为该疾病的皮肤型。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，德戈斯病对选自以下的至少一种治疗为抗拒的：抗炎剂、抗凝血剂、抗血栓药和静脉注射免疫球蛋白。抗炎药可以是例如选自以下中的一种：皮质类固醇、苯基丁氮酮、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢霉素(cyclosporine)、他克莫司和麦考酚酸酯(mycophenolate mofetil)。抗凝血剂或抗血栓药可以是例如选自氯吡格雷、阿司匹林和双嘧达莫中之一。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂可以是例如选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子中的一种。在一些实施方案中，补体抑制剂可以是例如选自以下之一：可溶的CR1、LEX-CR1、MCP、DAF、CD59、因子H、眼镜蛇毒因子、FUT-175、补体结合抑制素和K76 COOH。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂抑制人补体组分蛋白的表达。在一些实施方案中，补体抑制剂可抑制补体蛋白的活性，所述补体蛋白例如但不限于：补体组分C1s、补体组分C1r、C3转化酶、C5转化酶或C5b-9。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂抑制人补体组分C5、C4、C3或C2的裂解。例如，补体抑制剂可抑制补体组分C5裂解成为C5a和C5b片段。

在一些实施方案中，补体抑制剂是结合人补体组分蛋白(例如C5蛋白)的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与C5蛋白的α链结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与C5的β链结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与人补体组分C5的α链结合，其中所述抗体：(i)抑制人体液中补体的激活；(ii)抑制纯化的人补体组分C5与人补体组分C3b或人补体组分C4b的结合；和(iii)不与人补体激活产物游离C5a结合。在一些实施方案中，抗体与包含SEQ ID NO:1-26中的任一个所描述的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的人补体组分C5蛋白结合。在一些实施方案中，抑制剂是与补体组分C5的C5b片段结合的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段可为选自以下之一：人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab'片段和F(ab')₂片段。

在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂是依库珠单抗或培克珠单抗。

在又一方面，本公开内容特征在于制品，所述制品含有：包含标签的容器；和包含补体抑制剂的组合物，其中所述标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。抑制剂可以是例如与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。抑制剂可以是例如与诸如C5a或C5b等人补体组分C5蛋白片段结合的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，制品包括一种或多种另外的活性剂，例如但不限于一种或多种抗炎剂、抗凝血剂或抗血栓药。

本发明人同样发现，本文所述德戈斯病患者的血清中以及活组织检查的皮肤组织内具有升高水平的干扰素α水平。虽然不受任何特定理论或作用机制的约束，但由于干扰素α上调适应性和先天性免疫，增强任何抗原触发剂的作用，且业已报道给予外源干扰素α是皮肤血栓形成和溃疡的原因，本发明人相信，抑制干扰素α是用于治疗德戈斯病的有用策略。

因此，在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，该方法包括给予罹患德戈斯病的患者足够治疗这种疾病的量的干扰素α的抑制剂。

在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，该方法包括以足够维持患者的降低的干扰素α活性水平的量和频率，长期给予罹患德戈斯病的患者干扰素α的抑制剂，藉此治疗所述疾病。

在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗德戈斯病的方法，该方法包括：鉴定患者为患有或可能患有德戈斯病的患者；和给予患者足够治疗这种疾病的量的干扰素α抑制剂。

在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗或预防(例如，预防德戈斯病的发生或预防良性皮肤型德戈斯病发展成为更晚期的多器官和/或全身型疾病)的方法。所述方法包括给予有需要的患者足够治疗或预防所述疾病的量的干扰素α抑制剂。在一些实施方案中，可以在治疗期间维持患者血液中降低的干扰素α表达或活性水平的量和频率，长期给予所述抑制剂。

在一些实施方案中，干扰素α抑制剂可以是例如选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子中的一种。抑制剂可以例如抑制细胞的干扰素α或干扰素α受体的表达。抑制剂可以例如抑制干扰素α或干扰素α受体蛋白的活性。

在一些实施方案中，干扰素α抑制剂与干扰素α结合。在一些实施方案中，干扰素α抑制剂与干扰素α受体结合。例如，在一些实施方案中，干扰素α抑制剂是与干扰素α或干扰素α受体结合的抗体(或其抗原结合片段)。所述抗体可以是单克隆抗体。所述抗体或其抗原结合片段可以是例如选自以下之一：人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab'片段和F(ab')₂片段。

在又一方面，本公开内容特征在于制品，其含有：包含标签的容器；和包含干扰素α抑制剂的组合物，其中标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。干扰素α的抑制剂可以是例如任何本文中所述干扰素α的抑制剂，例如与干扰素α或干扰素受体结合的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，制品包括一种或多种另外的活性剂，例如但不限于抗炎剂、抗凝血剂或抗血栓药。

在一些实施方案中，本文所述方法可以包括给予靶向B细胞的疗法(作为单一作用剂或与补体抑制剂和/或干扰素α抑制剂联合)。例如，本公开内容特征在于用于治疗或预防德戈斯病的方法，所述方法包括给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的患者治疗有效量的靶向B细胞的疗法。靶向B细胞的疗法可以是例如抗-CD20结合剂，例如但不限于抗-CD20抗体。可在本文所述方法中使用的被批准用于临床使用或处于临床开发的例示性治疗抗-CD20抗体包括但不限于：利妥昔单抗(Biogen Idec)、⁹⁰Y -替伊莫单抗(Biogen Idec)、¹³¹I-托西莫单抗(GlaxoSmithKline)、奥法木单抗(Genmab)、TRU-015 (Trubion)、维妥珠单抗(veltuzumab)(IMMU-106，Immunomedics)、奥瑞珠单抗(Roche)和AME-133v(Applied Molecular Evolution)。参见例如：Levene等，(2005)，见上；Burge等，(2008) Clin Ther 30(10):1806-1816；Kausar等，(2009) Expert Opin Biol Ther 9(7):889-895；Morschhauser等，(2009) J Clin Oncol 27(20):3346-3353；和Milani及astillo(2009) Curr Opin Mol Ther 11(2):200-207。

在另一实例中，本文所述的任何方法，例如其中给予德戈斯病患者补体抑制剂和/或干扰素α抑制剂的方法，亦可包括给予诸如抗-CD20抗体等靶向B细胞的疗法。

“多肽”、“肽”和“蛋白质”可交换使用，意即氨基酸的任何肽连接链，不论长度或翻译后修饰怎样。本文所述补体组分蛋白(例如补体组分C2、C3、C4或C5蛋白)可含有或为野生型蛋白，或可以是具有不超过50 (例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、35、40或50)个保守氨基酸取代的变体。保守取代通常包括在以下组别中的取代：甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸、组氨酸和精氨酸；和苯丙氨酸和酪氨酸。

本文所述人补体组分蛋白也包括蛋白的“抗原性肽片段”，其比全长的未成熟蛋白(前蛋白原)短，但是保留全长蛋白在哺乳动物中诱导抗原应答的能力的至少10% (例如，至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少50%、至少55%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99.5%或100%或更多)。例如，C5蛋白的抗原性肽片段可以所述蛋白的任何片段，其比全长未成熟蛋白短并且保留全长蛋白在哺乳动物中诱导抗原应答的能力的至少10%。补体组分蛋白的抗原性肽片段包括所述蛋白的末端以及内部缺失变体。缺失变体可以缺少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸区段(两个或更多个氨基酸的区段)或非连续的单个氨基酸。抗原性肽片段的长度可以是至少6个(例如，至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500或600或更多个)氨基酸残基(例如，SEQ ID NO:1-11中任一个的至少6个连续氨基酸残基)。在一些实施方案中，人补体组分蛋白的抗原性肽片段的长度少于500个(例如，450、400、350、325、300、275、250、225、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8或7个)氨基酸残基(例如，少于SEQ ID NO:1-11中任一个的500个连续氨基酸残基)。在一些实施方案中，全长未成熟人补体组分蛋白(前C5蛋白原)的抗原性肽片段的长度是至少6个但少于500个氨基酸残基。

在一些实施方案中，人补体组分C5蛋白可具有以下氨基酸序列，其与具有SEQ ID NO:1中所描述的氨基酸序列的人C5蛋白具有以下同一性或大于以下的同一性：70 (例如71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100) %同一性。

氨基酸序列同一性百分比(%)定义为在比对序列和引入空位(必要时)以达到最大序列同一性百分比后，与参比序列中的氨基酸相同的候选序列的氨基酸的百分比。为了测定序列同一性百分比目的的比对可以属于本领域技术内的多种方法实现，例如应用可公开获取的计算机软件例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign (DNASTAR)软件。对于测量比对的合适参数(包括在待比较序列的全长范围内实现最大比对所需的任何算法)，可通过已知方法确定。

例示性人C5蛋白以及其抗原性肽片段的氨基酸序列为本领域所知，且在下文中陈述。

在本公开内容中各处所用术语“抗体”，指通过本领域中已知和本文所述的多种方法的任一种产生的完全或完整的抗体(例如IgM、IgG、IgA、IgD或IgE)分子。术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、人源化抗体、去免疫化人抗体和完全人抗体。抗体可以产生于或源自多种物种中的任何一种，例如哺乳动物，例如人、非人灵长类动物(例如猴子、狒狒或黑猩猩)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠和小鼠。抗体可以是纯化的或重组的抗体。

本文所用术语“抗体片段”、“抗原结合片段”或相似术语，指保留与抗原(例如补体组分C5蛋白)结合能力的抗体的片段，例如单链抗体、单链Fv片段(scFv)、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)₂片段。scFv片段是包括衍生出scFv的抗体的重链和轻链的可变区两者的单一多肽链。此外，可将与补体组分蛋白(例如补体组分C5)结合的双抗体(Poljak (1994) Structure 2(12):1121-1123；Hudson等，(1999) J Immunol Methods 23(1-2):177-189，这两者的公开内容通过引用以其整体并入本文)和胞内抗体(Huston等，(2001) Hum. Antibodies 10(3-4):127-142；Wheeler等，(2003) Mol Ther 8(3):355-366；Stocks (2004) Drug Discov Today 9(22): 960-966；每一个的公开内容通过引用以其整体并入本文)纳入到本文所述组合物，和在本文所述方法中使用。

除非另有定义，否则本文所用所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在发生冲突的情况下，以包括定义在内的本文件为准。以下阐述了优选的方法和材料，但与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料亦可用于实践或检测本发明公开的方法和组合物。本文提及的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献通过引用以其整体结合。

根据以下的阐述、实施例和权利要求，本公开内容的其它特征和优点，例如用于治疗或预防德戈斯病的方法，将是显而易见的。

详述

本公开内容提供含有人补体抑制剂(例如与人补体组分C5蛋白结合的抗体)的组合物和使用所述组合物来治疗或预防德戈斯病的方法。尽管决无意限制，但下面详述了例示性的组合物(例如药物组合物和制剂)及使用所述组合物的方法，并将其在工作实施例中举例说明。

补体途径

补体系统与机体的其它免疫系统一起作用以抵抗细胞和病毒病原体的侵入。有至少25种补体蛋白，其作为血浆蛋白和膜辅因子的复杂集合而被发现。在脊椎动物血清里，血浆蛋白组成球蛋白的约10%。补体组分通过在一系列复杂而精确的酶裂解和膜结合事件中相互作用达到其免疫防御功能。所得的补体级联导致产生具有调理素的、免疫调节的和溶胞功能的产物。例如，在The Merck Manual第16版中提供与补体激活相关的生物活性的简明概述。

补体级联经由经典途径、备选途径或凝集素途径进行。这些途径共享许多组分，并且尽管它们在其起始步骤上不同，但它们汇合并且共享相同的负责激活和破坏靶细胞的“末端补体”组分(C5至C9)。

经典补体途径通常由抗体识别靶细胞上的抗原位点并与之结合来启动。备选途径可以是抗体不依赖性的，可以由病原体表面上的某些分子来启动。此外，凝集素途径通常用结合甘露糖的凝集素(MBL)与高甘露糖底物结合来启动。这些途径在某一点汇合，在该点由活性蛋白酶(其在每个途径中不同)裂解补体组分C3产生C3a和C3b。激活补体攻击的其它途径可随后在事件顺序中起作用，导致不同方面的补体功能。

C3a是一种过敏毒素。C3b与细菌和其它细胞结合，也结合某些病毒和免疫复合物，并标记它们用于从循环中移除。(在该作用中称C3b为调理素)。通常认为C3b的调理素功能是补体系统的最重要抗感染作用。具阻断C3b功能的遗传损伤的患者易于受广泛的各种病原生物的感染，而具在补体级联较后顺序中的损伤的患者，即具阻断C5功能的损伤的患者，被发现只更易于感染奈瑟氏球菌属(Neisseria)，而且只是稍微更容易。

C3b亦与对每一途径独特的其它组分形成复合物，以形成经典的或备选的C5转化酶，所述转化酶裂解C5成为C5a和 C5b。由于C3对于备选和经典途径二者都是必不可少的，因此被视为补体反应顺序中的关键蛋白。通过血清蛋白酶因子I调节C3b的该性质，所述血清蛋白酶因子I作用于C3b以产生iC3b。尽管iC3b仍然作为调理素起作用，但不能形成活性C5转化酶。

C5是在正常血清中发现的190 kDa的β-球蛋白，其浓度大约75 μg/mL (0.4 μM)。C5是糖基化的，且其质量的约1.5-3%归因于碳水化合物。成熟的C5为通过二硫键与655个氨基酸的75 kDa的β链连接的999个氨基酸的115 kDa的α链的异型二聚体。C5作为单拷贝基因的单链前体蛋白产物合成(Haviland等，(1991) J Immunol 146:362-368)。该基因转录物的cDNA序列预知具有1658个氨基酸以及18个氨基酸的前导序列的分泌性前-C5前体(参见例如美国专利号6,355,245)。

前-C5前体在氨基酸655和659后裂解，产生作为氨基末端片段的β链(上述序列的+1到655位氨基酸残基)和作为羧基末端片段的α链(上述序列的660-1658位氨基酸残基)，且在两者间删除4个氨基酸(上述序列的656-659位氨基酸残基)。

C5a作为包含α链的前74个氨基酸(即上述序列的660-733位氨基酸残基)的氨基末端片段，由备选的或经典的C5转化酶裂解C5的α链而得。C5a的11 kDa质量的约20%归因于碳水化合物。转化酶作用的裂解位点是在或紧邻上述序列的733位氨基酸残基。可在或邻近该裂解位点结合的化合物，具有阻断C5转化酶接近该裂解位点的潜能，藉此作为补体抑制剂起作用。

C5也可借助C5转化酶活性之外的途径活化。限制性的胰蛋白酶消化(参见例如，Minta和Man (1997) J Immunol 119:1597-1602及Wetsel和Kolb (1982) J Immunol 128:2209-2216)和酸处理(Yamamoto和Gewurz (1978) J Immunol 120:2008和Damerau等，(1989) Molec Immunol 26:1133-1142)亦可裂解C5，并产生活性C5b。

C5裂解释放C5a (其为有效的过敏毒素和趋化因子)，并导致溶胞的终末补体复合物C5b-9的形成。C5a和C5b-9亦通过放大下游的炎性因子的释放而具有多效性细胞活化特性，所述炎性因子例如水解酶、活性氧物质、花生四烯酸代谢物和各种细胞因子。

C5b在靶细胞表面与C6、C7和C8结合形成C5b-8复合物。当结合一些C9分子时，形成膜攻击复合物(MAC, C5b-9, 终末补体复合物--TCC)。当足够数量的MAC插入靶细胞膜时，其形成的开口(MAC孔)介导靶细胞的快速渗透性溶胞。较低的非溶胞浓度的MAC可以产生其它效应。特别是，小量的C5b-9复合物膜插入到内皮细胞和血小板可以引起有害的细胞活化。在一些情况下，活化可以在细胞溶胞之前。

如上所述，C3a和C5a是过敏毒素。这些激活的补体组分可以触发肥大细胞脱粒，这使得从嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺和其它炎症介体，导致平滑肌收缩、血管通透性增加、白细胞激活以及包括导致细胞过多的细胞增殖在内的其它炎症现象。C5a亦起趋化肽的作用，所述趋化肽用于吸引促炎性粒细胞到补体激活位点。

在支气管和肺泡上皮细胞及支气管平滑肌细胞的表面发现C5a受体。亦在嗜酸性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和活化的淋巴细胞上发现C5a受体。

组合物

本文所述组合物可含有人补体抑制剂。按照本公开内容，可利用与任何人补体组分结合或以其它方式阻断任何人补体组分的产生和/或活性的任何化合物。例如，补体抑制剂可以是例如小分子、核酸或核酸类似物、肽模拟物或并非核酸或蛋白的大分子。这些抑制剂包括但不限于：有机小分子、RNA适体、L-RNA适体、Spiegelmer、反义化合物、双链RNA、小干扰RNA、锁定核酸抑制剂和肽核酸抑制剂。在一些实施方案中，补体抑制剂可以是蛋白或蛋白片段。

在一些实施方案中，组合物含有对人补体组分特异的抗体。一些化合物包括针对补体组分C1、C2、C3、C4、C5 (或其片段；见下述)、C6、C7、C8、C9、因子D、因子B、因子P、MBL、MASP-1或MASP-2的抗体，因此，其预防与C5a相关的过敏毒素活性的产生和/或预防与C5b相关的膜攻击复合物(MAC)的组装。在一些实施方案中，补体抑制剂抑制C5b-9复合物的活性和/或组装。例如，在一些实施方案中，抑制剂是与C6、C7、C8、C9或C5b之一结合的抗体或其抗原结合片段，由此预防MAC的组装和/或活性。

组合物亦可含有天然存在的或可溶形式的补体抑制性化合物，例如CR1、LEX-CR1、MCP、DAF、CD59、因子H、眼镜蛇毒因子、FUT-175、补体结合抑制素和K76 COOH。可以用于结合任何人补体组分或以其它方式阻断任何人补体组分的产生和/或活性的其它化合物包括但不限于：蛋白质、蛋白质片段、肽、小分子、包括ARC187 (可自Archemix Corporation, Cambridge, MA市购)在内的RNA适体、L-RNA适体、Spiegelmer、反义化合物、丝氨酸蛋白酶抑制剂、可以用于RNA干扰(RNAi)的分子例如包括小干扰RNA (siRNA)在内的双链RNA、锁定核酸(LNA)抑制剂、肽核酸(PNA)抑制剂等。

在一些实施方案中，补体抑制剂抑制补体激活。例如，补体抑制剂可以结合并抑制C1 (例如C1q、C1r或C1s)的补体激活活性，或补体抑制剂可以结合并抑制C2、C3或C4 (例如抑制其裂解)。在一些实施方案中，抑制剂抑制补体备选途径和/或经典途径的C3转化酶和/或C5转化酶的形成或组装。在一些实施方案中，补体抑制剂抑制终末补体的形成，例如C5b-9膜攻击复合物的形成。例如，抗体补体抑制剂可包括抗C5抗体。所述抗C5抗体可以直接与C5和/或C5b相互作用，由此抑制C5b的形成和/或生理功能。

在一些实施方案中，本文所述组合物可以含有人补体组分C5的抑制剂(例如与人补体组分C5蛋白或其生物学活性片段例如C5a或C5b结合的抗体或其抗原结合片段)。本文所用“补体组分C5的抑制剂”是以下任何作用剂，其抑制：(i)补体组分C5蛋白通过细胞的表达或适当的胞内运输或分泌；(ii) C5裂解片段C5a或C5b的活性(例如C5a与其同源细胞受体的结合或C5b与C6和/或末端补体复合物的其它组分的结合；见上述)；(iii)形成C5a或C5b的人C5蛋白的裂解；或(iv)补体组分C5蛋白通过细胞的适当胞内运输或分泌。抑制补体组分C5蛋白表达包括：抑制编码人C5蛋白的基因的转录；增强编码人C5蛋白的mRNA的降解；抑制编码人C5蛋白的mRNA的翻译；增强人C5蛋白的降解；抑制前人C5蛋白原的适当的修饰加工；或抑制人C5蛋白通过细胞的适当运输或分泌。用于确定候选作用剂是否是人补体组分C5抑制剂的方法为本领域所知，并在本文中阐述。

人补体组分C5的抑制剂可以是例如小分子、多肽、多肽类似物、核酸或核酸类似物。

本文所用“小分子”，意指具有小于约6 kDa、最优选小于约2.5 kDa分子量的物质。许多制药公司具有大量包含小分子阵列的化学和/或生物混合物文库，所述小分子通常是真菌、细菌或藻类提取物，可用本申请的任何测定来筛选。本申请预期尤其使用小化学物文库、肽文库或天然产物集合。Tan等描述了与微型化的基于细胞的测定相容的具有200万种以上合成化合物的文库(J Am Chem Soc (1998) 120:8565-8566)。在本申请范围内的是，可将这类文库用于筛选人补体组分C5的抑制剂。有很多可市购的化合物文库，例如Chembridge DIVERSet。亦可自学术研究者获得文库，例如NCI发育治疗学项目的Diversity集合。亦可以采用合理的药物设计。例如，合理药物设计可以利用关于人补体组分组分C5蛋白的晶体或溶液结构信息。参见例如以下文献中所述的结构：Hagemann等，(2008) J Biol Chem 283(12):7763-75和Zuiderweg等，(1989) Biochemistry 28(1):172–85。亦可以基于已知化合物达到合理药物设计，所述化合物例如已知C5抑制剂(例如与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段)。

肽模拟物可以是这样的化合物，其中修饰主题多肽的至少一部分，且肽模拟物的三维结构基本上保持与主题多肽一样。肽模拟物可以是本公开内容的主题多肽的类似物，其本身可以是在主题多肽序列内含有一个或多个取代或其它修饰的多肽。或者，主题多肽序列的至少一部分可以被非肽结构替换，使得主题多肽的三维结构基本上得以保留。换句话说，主题多肽序列中的1、2或3个氨基酸残基可以被非肽结构替换。此外，主题多肽的其它肽部分可以(但不是必需)被非肽结构替换。肽模拟物(肽和非肽基类似物两者)可以具有改良的特性(例如降低的蛋白水解、增加的保留或提高的生物利用度)。肽模拟物通常具有改进的口服可用性，这使其尤其适合于治疗人或动物病症。应该注意的是，肽模拟物可具有或可不具有相似的二维化学结构，但是有着共同的三维结构特征和几何形状。每种肽模拟物可进一步具有一个或多个独特的另外的结合元件。

可将核酸抑制剂用于降低内源基因例如编码人补体组分C5的基因的表达。核酸拮抗剂可以是例如siRNA、dsRNA、核酶、三股螺旋形成者(triple-helix former)、适体或反义核酸。siRNA是任选包括突出端的小双链RNA (dsRNA)。例如，siRNA的双链区域长度约为18-25个核苷酸，例如长度约19、20、21、22、23或24个核苷酸。在一些实施方案中，siRNA序列可以与靶mRNA精确地互补。dsRNA和siRNA尤其可以用于使哺乳动物细胞(例如人细胞)中的基因表达沉默。参见例如Clemens等，(2000) Proc Natl Acad Sci USA 97:6499-6503；Billy等，(2001) Proc Natl Acad Sci USA 98:14428-14433；Elbashir等，(2001) Nature 411:494-8；Yang等，(2002) Proc Natl Acad Sci USA 99:9942-9947和美国专利申请公开号20030166282、20030143204、 20040038278和20030224432。反义试剂可以包括例如约8-约80个核碱基(即约8-约80个核苷酸)，例如约8-约50个核碱基或约12-约30个核碱基。反义化合物包括核酶、外部指导序列(EGS)寡核苷酸(寡核苷酸酶(oligozyme))和与靶核酸杂交并调节其表达的其它短的催化性RNA或催化性寡核苷酸。反义化合物可包括一段与靶基因序列互补的至少8个连续核碱基。寡核苷酸不需要与其靶核酸序列100%互补以特异性杂交。寡核苷酸在以下情况时为可特异性杂交的：所述寡核苷酸与靶标的结合干扰靶分子酸的正常功能而引起效用损失，并且在需要特异性结合的条件下存在足够程度的互补性以避免所述寡核苷酸与非靶序列的非特异性结合，这类条件即，在体内测定或治疗性处理情况中的生理条件，或者在体外测定情况中进行测定的条件。反义寡核苷酸与mRNA (例如编码人C5蛋白的mRNA)的杂交可以干扰mRNA的一种或多种正常功能。待干扰的mRNA的功能包括所有关键功能，例如RNA到蛋白翻译位点的易位、自RNA的蛋白翻译、产生一个或多个mRNA种类的RNA剪接及RNA可参与的催化活性。特定蛋白与RNA的结合也可通过反义寡核苷酸与所述RNA的杂交来干扰。例示性反义化合物包括与靶核酸特异性杂交的DNA或RNA序列，所述靶核酸例如编码人补体组分C5蛋白的mRNA。互补区域可自约8个核碱基延伸至约80个核碱基。所述化合物可以包括一个或多个修饰的核碱基。

修饰核碱基可包括例如：5-取代嘧啶类，例如5-碘尿嘧啶、5-碘胞嘧啶；和C₅-丙炔基嘧啶类，例如C₅-丙炔基胞嘧啶和C₅-丙炔基尿嘧啶。其它适合的修饰核碱基包括例如：7-取代-8-氮杂-7-脱氮杂嘌呤和7-取代-7-脱氮杂嘌呤，例如7-碘-7-脱氮杂嘌呤、7-氰基-7-脱氮杂嘌呤、7-氨基羰基-7-脱氮杂嘌呤。这些的实例包括：6-氨基-7-碘-7-脱氮杂嘌呤、6-氨基-7-氰基-7-脱氮杂嘌呤、6-氨基-7-氨基羰基-7-脱氮杂嘌呤、2-氨基-6-羟基-7-碘-7-脱氮杂嘌呤、2-氨基-6-羟基-7-氰基-7-脱氮杂嘌呤和2-氨基-6-羟基-7-氨基羰基-7-脱氮杂嘌呤。参见例如：美国专利号4,987,071、5,116,742和5,093,246；“Antisense RNA and DNA,” D.A. Melton, 编辑, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988)；Haselhoff和Gerlach (1988) Nature 334:585-59；Helene, C. (1991) Anticancer Drug D 6:569-84；Helene(1992) Ann NY Acad Sci 660:27-36和Maher (1992) Bioassays 14:807-15。

适体是可用于识别和特异性结合包括细胞表面蛋白在内的几乎所有分子的短寡核苷酸序列。配体通过指数富集的系统进化(SELEX)程序很有用，可以用于容易地鉴别所述适体。可制备在治疗和诊断学上重要的多种多样的蛋白的适体，所述蛋白例如生长因子和细胞表面抗原。这些寡核苷酸以与抗体相似的亲和力和特异性与其靶标结合。参见例如Ulrich (2006) Handb Exp Pharmacol 173:305-326。

在一些实施方案中，人C5抑制剂是与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。(在下文中所述抗体有时可以被称为“抗C5抗体”)。

在一些实施方案中，抗C5抗体与人前-C5前体蛋白的表位结合。例如，抗C5抗体可与包含SEQ ID NO:1 (NCBI检索号：AAA51925和Haviland等，见上)中所描述的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的人补体组分C5蛋白中的表位结合。

“表位”指蛋白(例如人补体组分C5蛋白)上抗体结合的位点。“重叠表位”包括至少一个(例如，2、3、4、5、或6个)共有氨基酸残基。

在一些实施方案中，抗C5抗体与缺少前导序列的人前-C5前体蛋白中的表位结合。例如，抗C5抗体可以与包含SEQ ID NO:2中所描述的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的人补体组分C5蛋白中的表位结合，SEQ ID NO:2为缺少氨基末端前导序列的人C5蛋白。

在一些实施方案中，抗C5蛋白可以与人补体组分C5蛋白的α链上的表位结合。例如，抗C5抗体可以与在具有SEQ ID NO:3中描述的氨基酸序列的蛋白内或与其重叠的表位结合，SEQ ID NO:3为人补体组分C5 α链蛋白。与C5的α链结合的抗体在例如Ames等，(1994) J Immunol 152:4572-4581中阐述。

在一些实施方案中，抗C5抗体可以与人补体组分C5蛋白的β链的表位结合。例如，抗C5抗体可以与在具有SEQ ID NO:4中所描述的氨基酸序列的蛋白内或与其重叠的表位结合，SEQ ID NO:4为人补体组分C5 β链蛋白。与C5的β链结合的抗体在例如以下文献中阐述：Moongkarndi等，(1982) Immunobiol 162:397；Moongkarndi等，(1983) Immunobiol 165:323和Mollnes等，(1988) Scand J Immunol 28:307-312。

在一些实施方案中，抗C5抗体可以与在人补体组分C5蛋白抗原性肽片段内或与其重叠的表位结合。例如，抗C5抗体可以与在人补体组分C5蛋白的抗原性肽片段内或与其重叠的表位结合，所述片段包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5)或 KSSKC (SEQ ID NO:6)。

在一些实施方案中，抗C5抗体可以与在人补体组分C5蛋白的片段内或与其重叠的表位结合，所述片段包含任一个以下氨基酸序列(其是SEQ ID NO:1的例示性抗原性片段)或由其组成：

人补体组分C5的另外的例示性抗原性片段在例如美国专利号6,355,245中公开，其公开内容通过引用并入本文。

在一些实施方案中，抗C5抗体特异地与人补体组分C5蛋白(例如具有在SEQ ID NO:1中描述的氨基酸序列的人C5蛋白)结合。术语“特异结合”或“特异地结合”，指两种分子形成在生理条件下相对稳定的复合物(例如抗体和补体组分C5蛋白之间的复合物)。通常当缔合常数(K_a)大于10⁶ M^-1时结合被视为特异性的。因此，抗体可以以至少(或大于)10⁶ (例如至少或大于10⁷、10⁸、10⁹、10¹⁰、10¹¹、10¹²、10¹³、10¹⁴或10¹⁵或更高) M^-1的K_a与C5蛋白特异地结合。与人补体组分C5蛋白特异结合的抗体的实例在例如美国专利号6,355,245中描述，其公开内容通过引用以其整体并入本文。

用于测定抗体是否与蛋白抗原结合和/或抗体对蛋白抗原的亲和力的方法为本领域中所知。例如，可以用多种技术来检测和/或量化抗体与蛋白抗原的结合，所述技术例如但不限于：蛋白质印迹、斑点印迹、表面等离子体共振法(例如BIAcore系统；Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden和Piscataway, N.J.)或酶联免疫吸附测定(ELISA)。参见例如：Harlow和Lane (1988) “Antibodies: A Laboratory Manual” Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.；Benny K. C. Lo (2004) “Antibody Engineering: Methods and Protocols,” Humana Press (ISBN: 1588290921)；Borrebaek (1992) “Antibody Engineering, A Practical Guide,” W.H. Freeman和Co., NY; Borrebaek (1995) “Antibody Engineering,” 第2版, Oxford University Press, NY, Oxford；Johne等，(1993) J Immunol Meth 160:191-198；Jonsson等，(1993) Ann Biol Clin 51:19-26和Jonsson等，(1991) Biotechniques 11:620-627。亦参见美国专利号6,355,245。

在一些实施方案中，抗C5抗体可以交叉封闭(crossblock)与在人补体组分C5蛋白内或与其重叠的表位结合的另一抗体的结合。在一些实施方案中，抗C5抗体可以交叉封闭与在人补体组分C5蛋白肽片段内或与其重叠的表位结合的抗体的结合。所述肽片段可以是具有SEQ ID NO:1-11中任一个所描述的氨基酸序列的人补体组分C5蛋白的片段。例如，肽片段可以含有以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5)。

本文所用术语“交叉封闭抗体”指这样的抗体，其相对于不存在所述抗体时抗C5抗体与补体组分C5蛋白上的表位的结合量，降低所述抗C5抗体与所述表位的结合量。用于测定第一抗体是否交叉封闭第二抗体与表位的结合的合适的方法在本领域中已知。例如，可通过比较在测试抗体存在和不存在的情况下5G1.1抗C5单克隆抗体(由ATCC命名为HB-11625的杂交瘤细胞系产生；参见美国专利号6,355,245)的结合，来鉴定交叉封闭抗体。与不存在测试抗体时5G1.1抗体的结合比较，存在测试抗体时5G1.1抗体结合降低，表明所述测试抗体是交叉封闭抗体。

用于鉴定特定抗体(例如抗C5抗体)结合的表位的方法亦为本领域中所知。例如，可以通过测量抗C5抗体与补体组分C5蛋白的一些(例如3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或30或更多个)重叠肽片段(例如，具有SEQ ID NO:1-11中任一项所述的氨基酸序列的一些重叠片段)的结合，来鉴别所述抗体的结合表位。然后每个不同的重叠肽与固相支持体(例如多孔测定板的单个孔)上的唯一地址结合。接下来，通过在测定板中让抗C5抗体在允许所述抗体与其表位结合的时间量内和条件下与每一种肽接触，来探询(interrogate)所述抗C5抗体。通过洗涤每一个孔来移除未结合的抗C5抗体。然后，让与抗C5抗体结合的可检测标记的第二抗体(如果存在于板上的孔中的话)与每个孔接触，通过洗涤步骤去掉未结合的第二抗体。孔中由可检测标记的第二抗体产生的可检测信号的存在情况或量，表明抗C5抗体与缔合孔的特定肽片段的结合情况。参见例如Harlow和Lane (见上), Benny K. C. Lo (见上)及美国专利申请公开号20060153836，该公开内容通过引用以其整体并入本文。也可以用BIAcore色谱技术鉴定与抗体结合的特定表位(参见例如，Pharmacia BIAtechnology Handbook, “Epitope Mapping,” 第6.3.2节,(1994年5月)；和Johne等，(1993) J Immunol Methods 160:20191-8)。

本文所述抗C5抗体可以具有阻断补体组分C5蛋白(例如人C5蛋白)的C5a和/或C5b活性片段的产生或活性。通过这种阻断作用，抗C5抗体抑制例如C5a的促炎症效应和细胞表面上C5b-9膜攻击复合物(MAC)的产生。具有阻断C5a的产生的能力的抗C5a抗体在例如Moongkarndi等，(1982) Immunobiol 162:397 和Moongkarndi等，(1983) Immunobiol 165:323中描述。

在一些实施方案中，抗C5抗体或其抗原结合片段可以降低C5蛋白与人补体组分C3b (例如，在Ap或CP C5转化酶复合物中存在的C3b)结合的能力达50%以上(例如55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%以上或更高)。在一些实施方案中，当与C5蛋白结合时，抗C5抗体或其抗原结合片段可以降低C5蛋白与补体组分C4b (例如在CP C5转化酶中存在的C4b)结合能力达50%以上(例如55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%以上或更多)。用于测定抗体是否可以阻断补体组分C5蛋白的C5a和/或C5b活性片段的产生或活性，或与补体组分C4b或C3b结合的方法，在本领域中已知，其阐述于例如美国专利号6,355,245和Wurzner等，(1991) Complement Inflamm 8:328-340中。

在一些实施方案中，抗C5抗体与补体组分C5蛋白α链的氨基末端区域结合，但是不与游离C5a结合。α链氨基末端区域内的抗C5抗体的表位，包括例如在人序列VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5)内的表位。

在一些实施方案中，组合物包含和/或抗体为依库珠单抗(Soliris®; Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT)。(参见例如，Kaplan (2002) Curr Opin Investig Drugs 3(7):1017-23；Hill (2005) Clin Adv Hematol Oncol 3(11):849-50和Rother等，(2007) Nature Biotechnology 25(11):1256-1488)。

在一些实施方案中，组合物包含和/或抗体为培克珠单抗(Alexion Pharmaceuticals, Inc., Cheshire, CT)。参见例如Whiss (2002) Curr Opin Investig Drugs 3(6):870-7；Patel等，(2005) Drugs Today (Barc) 41(3):165-70和Thomas等，(1996) Mol Immunol 33(17-18):1389-401。

在一些实施方案中，C5抑制剂是与C5a结合的抗体(有时在本文中称为“抗C5a抗体”)。在一些实施方案中，所述抗体与C5a结合，但不与全长C5结合。如上所讨论，通过一系列蛋白水解裂解事件来对C5原形式(proform)即1676个氨基酸残基的前体蛋白进行加工。前18肽(编号-18到-1)组成信号肽，其从前体蛋白裂解。剩余的1658个氨基酸蛋白在两处裂解，形成α和β链。首个裂解事件发生在655和656位氨基酸残基间。第二个裂解发生在659和660位氨基酸残基间。两个裂解事件导致形成3个不同的多肽片段：(i)包含氨基酸1-655的片段，其被称为β链；(ii)包含氨基酸660-1658的片段，其被称为α链；和(iii)由氨基酸656-659组成的四肽片段。α链和β链多肽片段经由二硫键彼此连接，并构成成熟C5蛋白。CP或Ap C5转化酶通过在残基733-734间裂解α链激活成熟的C5，这导致C5a片段(氨基酸660-733)的释放。成熟C5的剩余部分是片段C5b，其含有由二硫键与β链键合的α链的残基734-1658。

C5a在体内由血清酶羧肽酶B迅速代谢为被称为“C5a des-Arg”的73个氨基酸的形式，其已经失去了羧基末端的精氨酸残基。因此，在一些实施方案中，与C5a结合的抗体亦结合脱精氨酸C5a。在一些实施方案中，与C5a结合的抗体不与脱精氨酸C5a结合。

在一些实施方案中，C5抑制剂是与存在于C5a的新表位(neoepitope)结合的抗体，所述新表位即C5a自成熟C5的α链片段释放时暴露的表位。与C5a (例如存在于C5a的新表位)结合的抗体为本领域所知，用于生产所述抗体的方法亦是如此。例如，与C5a结合的抗体可具有C5a新表位特异性抗体的结合特异性，所述C5a新表位特异性抗体在例如以下任一文献中阐述：PCT公开号WO 01/15731；Ames等，(1994) J Immunol 152(9):4572-4581；Inoue (1989) Complement Inflamm 6(3):219-222；和美国专利号6,866,845。在另一实例中，与C5a结合的抗体可以具有市售C5a新表位特异性抗体的结合特异性，所述C5a新表位抗体例如但不限于：sc-52633 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, California)、I52-1486 (BD Pharmingen/BD Biosciences)、ab11877 (Abcam, Cambridge, Massachusetts)和HM2079 (clone 2952; HyCult Biotechnology, the Netherlands)。在一些实施方案中，与C5a结合的抗体可以交叉封闭任何前述C5a新表位特异性抗体的结合。

在一些实施方案中，C5抑制剂可以是与哺乳动物(例如人) C5a蛋白结合的抗体。例如，所述抗体可以结合具有以下氨基酸序列的人C5a蛋白：TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHKDMQLGR (SEQ ID NO:12)。所述抗体可以在于以下氨基酸序列内或与其重叠的表位处与人C5a结合：CCYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:13)；KCCYDGACVNNDETCEQR (SEQ ID NO:14)；VNNDETCEQR (SEQ ID NO:15)；VNNDET (SEQ ID NO:16)；AARISLGPR (SEQ ID NO:17)；CCYDGACVNNDETCEQRAA (SEQ ID NO:18)；CCYDGACVNNDETCEQRA (SEQ ID NO:19)；CCYDGACVNNDETCEQR (SEQ ID NO:20)；CCYDGACVNNDETCEQ (SEQ ID NO:21)；CCYDGACVNNDETCE (SEQ ID NO:22)；CYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:23)；YDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:24)或CYDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO:25)。在一些实施方案中，抗体可以与人C5a蛋白或其片段结合，所述片段含有包含SEQ ID NO:12-25中任一个所述的至少4 (例如至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17或更多)个连续氨基酸或由所述连续氨基酸组成的氨基酸序列。本文所述抗体可结合的另外的C5a蛋白片段和用于产生合适的C5a特异性抗原结合位点的方法，在例如美国专利号4,686,100中陈述，该公开内容通过引用以其整体并入本文。

在一些实施方案中，抗体与C5a的结合可抑制C5a 的生物学活性。用于测量C5a活性的方法包括例如趋化性测定、RIA或ELISA (参见例如Ward和Zvaifler (1971) J Clin Invest 50(3):606-16 和 Wurzner等，(1991) Complement Inflamm 8:328-340)。在一些实施方案中，抗体与C5a的结合可抑制C5a和C5aR1之间的相互作用。用于检测和/或测量C5a和C5aR1之间的相互作用(在抗体存在和不存在时)的适合方法为本领域已知，在例如以下文献中阐述：Mary和Boulay (1993) Eur J Haematol 51(5):282-287；Kaneko等，(1995) Immunology 86(1):149-154；Giannini等，(1995) J Biol Chem 270(32):19166-19172和美国专利申请公开号20060160726。例如，可以在存在和不存在抗体时评估可检测标记(例如放射性标记)的C5a与表达C5aR1的外周血单核细胞的结合。在所述抗体存在时与C5aR1结合的可检测标记的C5a量与在所述抗体不存在时的结合量相比降低，表明所述抗体抑制C5a和C5aR1之间的相互作用。在一些实施方案中，抗体与C5a的结合可抑制C5a和C5L2之间的相互作用(见下文)。用于检测和/或测量C5a和C5L2之间的相互作用的方法在本领域已知，在例如Ward (2009) J Mol Med 87(4):375-378和Chen等，(2007) Nature 446(7132):203-207中阐述(见下文)。

在一些实施方案中，C5抑制剂是与C5b结合的抗体(有时在本文中称为“抗C5b抗体”)。在一些实施方案中，所述抗体与C5b结合，但不与全长C5结合。C5b的结构在上文中进行了阐述，并亦在例如以下文献中详述：Müller-Eberhard (1985) Biochem Soc Symp 50:235-246；Yamamoto和Gewurz (1978) J Immunol 120(6):2008-2015和Haviland等(1991)，见上。如上所述，C5b与C6、C7和C8结合，在靶细胞表面上形成C5b-8复合物。在系列结合期间形成的蛋白复合物中间体包括C5b-6 (包括C5b和C6)、C5b-7 (包括C5b、C6和C7)和C5b-8 (包括C5b、C6、C7和C8)。当与一些C9分子结合时，形成膜攻击复合物(MAC，C5b-9终末补体复合物(TCC))。当将足够数量的MAC插入靶细胞膜时，它们制造的开口(MAC孔)介导靶细胞的快速渗透性溶胞。

在一些实施方案中，抗体与C5b的结合可以抑制C5b和C6之间的相互作用。在一些实施方案中，抗体与C5b的结合可以抑制C5b-9 MAC-TCC的组装或活性。在一些实施方案中，抗体与C5b的结合可以抑制补体依赖性细胞溶胞(例如在体外和/或在体内)。用于评估抗体是否抑制补体依赖性溶胞的适合的方法，包括例如溶血测定或用于检测可溶解的C5b-9活性的其它功能测定。例如，在抗体存在时补体溶细胞能力的降低可通过以下方法来测量：Kabat和Mayer (编辑), “Experimental Immunochemistry, 第2版,” 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), 第135-139页描述的溶血测定，或该测定的常规变化，例如在例如Hillmen等，(2004) N Engl J Med 350(6):552中所述的鸡红细胞溶血法。

与C5b结合的抗体以及用于制备所述抗体的方法在本领域是已知的。参见例如美国专利号6,355,245。市售抗C5b抗体可以从许多供应商包括例如Hycult Biotechnology (目录号: HM2080; 克隆568)和Abcam™(ab46151或ab46168)获得。

在一些实施方案中，C5抑制剂是与C5b的哺乳动物(例如人)形式结合的抗体。例如，所述抗体可以与具有以下氨基酸序列的人C5b蛋白的一部分结合：

。

在一些实施方案中，所述抗体可以与具有以下氨基酸序列的人C5b蛋白的一部分结合：

(SEQ ID NO:26)。在一些实施方案中，所述抗体可以与人C5b蛋白或其含有以下氨基酸序列的片段结合，所述氨基酸序列含有SEQ ID NO:4 或 SEQ ID NO:26中所描述的至少4 (例如，至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20或更多)个连续氨基酸或由所述连续氨基酸组成。

在例如美国专利号6,335,245中公开了C5抑制剂抗体可以结合的人C5b或C5a的另外例示性亚片段，所述专利的公开内容通过引用并入本文。

在一些实施方案中，抑制剂是与C5a多肽(例如，具有SEQ ID NO:12中所描述的氨基酸序列的人C5a多肽)特异地结合的抗体。在一些实施方案中，抑制剂是与C5b多肽特异地结合的抗体。

用于测定特定作用剂是否是人补体组分C5抑制剂的方法已在本文阐述，并为本领域所知。例如，体液中C5a和C5b的浓度和/或生理活性可以用本领域众所周知的方法来测量。用于测量C5a浓度或活性的方法包括例如趋化性测定、RIA或ELISA (参见例如，Ward和Zvaifler (1971) J Clin Invest 50(3):606-16和Wurzner等，(1991) Complement Inflamm 8:328-340)。对于C5b，可使用本文所述的溶血测定或用于可溶性C5b-9的测定。也可以使用本领域已知的其它测定。可使用这些或其它适合类型的测定来筛选能抑制人补体组分C5例如抗C5抗体的候选作用剂，以便例如鉴别在本文所述方法中有用的化合物并测定所述化合物的适当的剂量水平。

用于检测对mRNA或蛋白的表达的抑制(例如对人C5蛋白的表达或编码人C5蛋白的mRNA的表达的抑制)的方法在分子生物学领域众所周知，包括例如：用于mRNA的RNA印迹法和RT-PCR (或定量RT-PCR)技术；用于蛋白检测的蛋白质印迹、斑点印迹或ELISA技术。参见例如，Sambrook等，(1989) “Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版,” Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.。

用于测定候选化合物是否抑制人C5裂解为C5a和C5b形式的方法在本领域已知，并在例如以下文献中阐述：Moongkarndi等，(1982) Immunobiol 162:397；Moongkarndi等，(1983) Immunobiol 165:323；Isenman等，(1980) J Immunol 124(1):326-31；Thomas等，(1996) Mol Immunol 33(17-18):1389-401和Evans等，(1995) Mol Immunol 32(16):1183-95。

抑制人补体组分C5亦可降低受试者体液中补体的溶细胞能力。可通过本领域众所周知的方法来测量存在的补体溶细胞能力的这类降低，例如通过以下方法：常规溶血测定，例如Kabat和Mayer (编辑), “Experimental Immunochemistry, 第2版,” 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), 第135-139页所述的溶血测定，或该测定的常规变化，例如在例如Hillmen等，(2004) N Engl J Med 350(6):552中所述的鸡红细胞溶血法。

在一些实施方案中，本文所述组合物可含有干扰素α抑制剂。可按照本公开内容使用任何结合或以其它方式阻断干扰素α产生和/或活性的化合物。例如，干扰素α抑制剂可以是例如：小分子、核酸或核酸类似物(例如siRNA、dsRNA、核酶、三股螺旋形成者、适体)、肽模拟物或非核酸或蛋白的大分子。这些作用剂包括但不限于：有机小分子、RNA适体、L-RNA适体、Spiegelmer、反义化合物、双链RNA、小干扰RNA、锁定核酸抑制剂和肽核酸抑制剂。在一些实施方案中，干扰素α抑制剂可以是蛋白或蛋白片段。在一些实施方案中，干扰素α抑制剂是与干扰素α结合的受体(干扰素α受体)的抑制剂。人干扰素α受体在例如以下文献中阐述：Novick等，(1994) Cell 77(3):391-400；Chill等，(2003) Structure 11(7):791-802和Uzé等，(2007) Curr Top Microbiol Immunol 316:71-95。在一些实施方案中，干扰素α抑制剂与干扰素α或其受体结合，并抑制干扰素α与其受体间的相互作用。

在一些实施方案中，干扰素α的抑制剂是与干扰素α蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。(在下文中，所述抗体有时可被称为“抗干扰素α抗体”)。例示性抗干扰素α抗体在本领域中已知，并在例如以下文献中阐述：美国专利申请公开号20090324605、20070059309和20080160030；美国专利号7,087,726和4,423,147，每一个的公开内容通过引用以其整体并入本文。

可用于本文所述组合物和方法的另外的例示性抗干扰素α抗体包括例如MEDI-545 (MDX-1103；AstraZeneca/Medimmune)。

用于生产抗体的方法

用于生产本公开内容的抗体(例如抗C5抗体或抗干扰素α抗体)或其抗原结合片段的合适方法在本领域中已知(参见例如美国专利号6,355,245)并在本文中阐述。例如，可如下产生单克隆抗C5抗体：用表达补体组分C5的细胞、C5多肽或C5多肽的抗原性片段作为免疫原，如此在动物中引起免疫应答，可以从所述动物中分离抗体生产细胞，进而分离单克隆抗体。可以测定所述抗体的序列，并通过重组技术来生产所述抗体或其变体。可基于能与人补体组分C5结合的多肽和单克隆抗体的序列，将重组技术用于生产嵌合抗体、CDR移植的抗体、人源化抗体和完全人抗体。相似地，可如下产生单克隆抗干扰素α抗体：使用干扰素α多肽或干扰素α多肽的抗原性片段作为免疫原，如此在动物中引起免疫应答，可以从所述动物中分离抗体生产细胞，进而分离单克隆抗体。

此外，可用诸如补体组分蛋白或干扰素α等抗原性多肽作为诱饵，以基于靶标特异性分离所述抗体或多肽，来选择源自重组文库的抗体(“噬菌体抗体”)。非人抗体和嵌合体抗体的生产和分离完全在本领域技术人员的见识内。

可将重组DNA技术用于修饰在非人细胞中生产的抗体的一种或多种特征。因此，可以构建嵌合抗体，以降低其在诊断或治疗应用中的免疫原性。此外，可通过CDR移植术及任选框架修饰使抗体人源化，来使免疫原性最小化。参见美国专利号5,225,539和7,393,648，其每一个的内容通过引用并入本文。

可自动物血清获得抗体，或在单克隆抗体或其片段情况下在细胞培养物中产生抗体。可按照已建立的程序(包括细菌或优选哺乳动物细胞培养中的程序)，将重组DNA技术用于生产抗体。所选择的细胞培养系统优选分泌抗体产物。

在另一实施方案中，用于生产本文公开的抗体的过程包括培养已被杂合载体转化的宿主，例如大肠杆菌(E.coli)或哺乳动物细胞。载体包括一个或多个表达盒，所述表达盒含有与编码信号肽的第一DNA序列可操作地连接的启动子，所述第一DNA序列在适当阅读框中与编码抗体蛋白的第二DNA序列连接。然后收集和分离所述抗体蛋白。任选表达盒可包括与编码抗体蛋白的多顺反子(例如双顺反子) DNA序列可操作地连接的启动子，每一多顺反子DNA序列各自在适当阅读框中与信号肽可操作地连接。

在适合的培养基中体外增殖杂交瘤细胞或哺乳动物宿主细胞，所述培养基包含常用的的标准培养基(例如Dulbecco氏改良Eagle培养基(DMEM)或RPMI 1640培养基)，任选补充哺乳动物血清(例如胎牛血清)或痕量元素和生长维持补充剂(例如饲养细胞，例如正常小鼠腹腔渗出细胞、脾细胞、骨髓巨噬细胞、2-氨基乙醇、胰岛素、转铁蛋白、低密度脂蛋白、油酸等等)。作为细菌细胞或酵母细胞的宿主细胞的繁殖同样在本领域已知的适合的培养基中实施。例如，对于细菌，适合的培养基包括培养基LE、NZCYM、NZYM、NZM、Terrific肉汤、SOB、SOC、2 xYT或M9基本培养基。对于酵母，适合的培养基包括培养基YPD、YEPD、基本培养基或完全极限省却培养基(Complete Minimal Dropout Medium)。

体外生产提供相对纯的抗体制品，并允许放大生产以产生大量的所需抗体。用于细菌细胞、酵母、植物或哺乳动物细胞培养的技术在本领域已知，包括均质悬浮培养(例如，在气升式反应器或连续搅拌反应器中)和固定化或截留细胞培养(例如在中空纤维、微胶囊中，在琼脂糖微珠或陶瓷管壳(ceramic cartridge)上)。

亦可通过在体内繁殖哺乳动物细胞获得大量的所需抗体。为此目的，将产生所需抗体的杂交瘤细胞注入组织相容性的哺乳动物，以引起产生抗体的肿瘤的生长。任选在注射之前用碳氢化合物尤其是矿物油例如姥鲛烷(四甲基-十五烷)引发动物。一至三周后，从那些哺乳动物的体液中分离抗体。例如，将通过让适合的骨髓瘤细胞与源自Balb/c小鼠的产生抗体的脾细胞融合而获得杂交瘤细胞，或源自生产所需抗体的杂交瘤细胞系Sp2/0的转染细胞，腹膜内注射到任选用姥鲛烷预处理的Balb/c小鼠。一至两周后，自动物采取腹水。

在例如以下文献中讨论前述及其它技术：Kohler和Milstein, (1975) Nature 256:495-497；美国专利号4,376,110；Harlow和Lane, Antibodies: a Laboratory Manual, (1988) Cold Spring Harbor，该公开内容通过引用以其整体并入本文。用于制备重组抗体分子的技术在以上参考文献中阐述，亦在例如以下文献中阐述：WO97/08320；美国专利号5,427,908；美国专利号5,508,717；Smith (1985) Science 225:1315-1317；Parmley和Smith (1988) Gene 73:305-318；De La Cruz等，(1988) Journal of Biological Chemistry 263:4318-4322；美国专利号5,403,484；美国专利号5,223,409；WO88/06630；WO92/15679；美国专利号5,780,279；美国专利号5,571,698；美国专利号6,040,136；Davis等，(1999) Cancer Metastasis Rev 18(4):421-5和Taylor等，(1992) Nucleic Acids Research 20: 6287-6295；Tomizuka等，(2000) Proc Natl Acad Sci USA 97(2): 722-727，每一篇的内容通过引用以其整体并入本文。

通过例如免疫印迹，通过诸如夹心测定法或斑点测定等酶免疫测定，或放射免疫测定，来筛选细胞培养上清液中的所期需抗体。

为分离抗体，可通过例如硫酸铵沉淀、针对诸如聚乙二醇等吸湿材料进行的透析、经由选择性膜的过滤等等方法，来浓缩培养上清液或腹水中的免疫球蛋白。如果需要和/或期望，通过常用色谱法来纯化所述抗体，所述常用色谱法例如凝胶过滤、离子交换色谱法、经由DEAE-纤维素的色谱和/或(免疫)亲和色谱，例如，用源自补体组分C5-表达细胞系的一种或多种表面多肽或用蛋白A或蛋白G进行的亲和色谱。

另一实施方案提供用于在适合的哺乳动物中制备分泌针对蛋白(例如补体蛋白或干扰素α)的抗体的细菌细胞系的方法。按照本领域周知的方法(例如在通过引用并入本文的各种参考文献中公开的方法)构建自免疫的兔产生的噬菌体展示文库，并淘选所需抗体。

亦公开分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。优选杂交瘤细胞遗传稳定，分泌本文所述的具有所期需特异性的单克隆抗体，其可通过体外融化和繁殖从深冻培养物或作为腹水在体内扩增。

在另一实施方案中，提供用于制备分泌针对感兴趣蛋白(例如C5蛋白或干扰素α)的单克隆抗体的杂交瘤细胞系的方法。在该方法中，用一种或多种感兴趣的多肽抗原或其抗原性片段，免疫适合的哺乳动物例如Balb/c小鼠。免疫的哺乳动物的抗体生产细胞在培养基中短时生长，或与适合的骨髓瘤细胞系的细胞融合。克隆融合获得的杂交细胞，选择分泌所需抗体的细胞克隆。用于制备杂交瘤细胞系的方法包括通过将含有感兴趣蛋白(或其免疫原性片段)的免疫原性组合物，在几个月(例如2-4个月)内皮下和/或腹膜内注射几次例如4-6次，使Balb/c小鼠免疫。最后一次注射的2-4天后采取免疫小鼠的脾细胞，并在融合促进剂优选聚乙二醇存在下与骨髓瘤细胞系PAI的细胞融合。优选骨髓瘤细胞与来自免疫小鼠的3倍到20倍过量的脾细胞，在含有约30%-约50%约4000分子量的聚乙二醇的溶液中融合。融合后，细胞在如上所述适合的培养基中扩繁，所述培养基中以有规律的间隔补充选择培养基，例如HAT培养基，为了阻止正常骨髓瘤细胞生长超过所需杂交瘤细胞。

抗体及其片段可以是“嵌合的”。嵌合抗体及其抗原结合片段包含源自2种或更多种不同物种(例如小鼠和人)的部分。嵌合抗体可以用将具有所需特异性的小鼠可变区剪接到人恒定域基因区段来产生(例如美国专利号4,816,567)。以该方式，可修饰非人抗体以使其更适合于人临床应用(例如，用于在人受试者中治疗或预防德戈斯病的方法)。

本公开内容的单克隆抗体包括非人(例如小鼠)抗体的“人源化”形式。人源化或CDR-移植mAb作为治疗剂对人尤其有用，因为其不像小鼠抗体一样快速地清除出循环，并通常不会激起有害免疫反应。制备人源化抗体的方法通常在本领域众所周知。例如，人源化可基本按照Winter及同事(参见例如，Jones等，(1986) Nature 321:522-525；Riechmann等，(1988) Nature 332:323-327和Verhoeyen等，(1988)Science 239:1534-1536)的方法，通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列来进行。亦参见例如Staelens等，(2006) Mol Immunol 43:1243-1257。在一些实施方案中，非人(例如小鼠)抗体的人源化形式是其中受体抗体的超变(CDR)区残基被来自非人物种(供体抗体)的具有所需特异性、亲和力和结合能力的超变区残基取代的人抗体(受体抗体)，所述非人物种例如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类。在一些情况下，人免疫球蛋白框架区残基也被相应的非人残基取代(所谓“回复突变”)。另外，噬菌体展示文库可用于改变在抗体序列内的所选位置的氨基酸。通过选择人框架亦影响人源化抗体的特性。此外，可修饰人源化抗体和嵌合抗体，使其包含受体抗体或供体抗体中不存在的残基，以便进一步改善抗体特性，例如亲和力或效应子功能。

本公开内容中也提供完全人抗体。术语“人抗体”包括具有得自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果有的话)的抗体。人抗体可包括不为人种系免疫球蛋白序列所编码的氨基酸残基(例如通过随机或位点特异性体外诱变或通过体内体细胞突变而引入的突变)。然而，术语“人抗体”不包括这样的抗体：其中得自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已经移植到人框架序列上(即人源化抗体)。完全人抗体或人抗体可得自携带人抗体基因(携带可变区(V)、多变区(D)、结合区(J)和恒定区(C)外显子)的转基因小鼠或者得自人细胞。例如，目前有可能产生转基因动物(例如小鼠)，其在免疫后能够在内源免疫球蛋白的产生不存在时产生人抗体的完全库(full repertoire)。参见例如Jakobovits等(1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:2551；Jakobovits等(1993) Nature 362:255-258；Bruggemann等(1993) Year in Immunol 7:33；和Duchosal等(1992) Nature 355:258。转基因小鼠品系可经改造而含有来自非重排人免疫球蛋白基因的基因序列。人序列可编码人抗体的重链和轻链两者并且在小鼠中可正确地起作用，经历重排而提供类似于在人中那样宽的抗体库。转基因小鼠可用靶蛋白来免疫，以产生一系列特异性抗体及其编码RNA。然后可将编码这类抗体的抗体链组分的核酸从动物中克隆到展示载体上。通常，将编码重链序列和轻链序列的核酸的单独群体克隆，再将单独群体在插入时重组到载体中，使得载体的任何给定拷贝接受重链和轻链的随机组合。载体经设计以表达抗体链，使得它们可被装配和展示在含有所述载体的展示包装体(display package)的外表面。例如，可将抗体链与来自噬菌体外表面的噬菌体外壳蛋白一起表达为融合蛋白。然后，可针对与靶标结合的抗体的展示来筛选展示包装体。

另外，人抗体可得自噬菌体展示文库(Hoogenboom等(1991) J Mol Biol 227:381；Marks等(1991) J Mol Biol 222:581-597；和Vaughan等(1996) Nature Biotech 14:309 (1996))。可构建合成噬菌体文库，其使用合成人抗体V区的随机组合。通过基于抗原的选择，可制备完全人抗体，其中V区在特性上非常类似于人。参见例如美国专利号6,794,132、6,680,209、4,634,666和Ostberg等(1983) Hybridoma 2:361-367，所述文献各自的内容通过引用以其整体并入到本文中。

对于人抗体的产生，亦参见Mendez等，(1998) Nature Genetics 15:146-156和Green和Jakobovits(1998) J Exp Med 188:483-495，所述文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。在以下文献中进一步讨论和描述人抗体：美国专利号：5,939,598、6,673,986、6,114,598、6,075,181、6,162,963、6,150,584、6,713,610和6,657,103以及美国专利公开号2003-0229905 A1、2004-0010810 A1、US 2004-0093622 A1、2006-0040363 A1、2005-0054055 A1、2005-0076395 A1、2005-0287630 A1。亦参见国际公开号WO 94/02602、WO 96/34096和WO 98/24893和欧洲专利号EP 0 463 151 B1。上述引用的专利、申请和参考文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文。

在一个替代方法中，包括GenPharm International，Inc.的其它人已利用“微基因座(minilocus)”方法。在微基因座方法中，通过包含来自Ig基因座的碎片(单独基因)而模拟外源Ig基因座。因此，将一个或多个V_H基因、一个或多个D_H基因、一个或多个J_H基因、μ恒定区和第二恒定区(优选γ恒定区)构建到用于插入动物中的构建体中。该方法描述于例如美国专利号：5,545,807、5,545,806、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650和5,814,318、5,591,669、5,612,205、5,721,367、5,789,215、5,643,763、5,569,825、5,877,397、6,300,129、5,874,299、6,255,458和7,041,871，其公开内容通过引用结合于本文中。另参见欧洲专利号0 546 073 B1、国际专利申请公开号WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852和WO 98/24884，其各自的公开内容通过引用以其整体结合于本文中。另参见Taylor等(1992) Nucleic Acids Res 20：6287；Chen等(1993) Int Immunol 5：647；Tuaillon等(1993) Proc Natl Acad Sci USA 90：3720-4；Choi等(1993) Nature Genetics 4：117；Lonberg等(1994) Nature 368：856-859；Taylor等(1994) International Immunology 6：579-591；Tuaillon等(1995) J. Immunol. 154：6453-65；Fishwild等(1996) Nature Biotechnology 14：845以及Tuaillon等(2000) Eur J Immunol 10：2998-3005，其各自的公开内容通过引用以其整体结合于本文中。

在某些实施方案中，提供去免疫化抗体或其抗原结合片段。去免疫化抗体或其抗原结合片段是经修饰以便使所述抗体或其抗原结合片段对给定物种(例如对人)无免疫原性或较少的免疫原性的抗体。可通过利用本领域技术人员已知的多种技术的任一种修饰抗体或其抗原结合片段，来达到去免疫化(参见例如PCT公开号WO 04/108158和WO 00/34317)。例如，抗体或其抗原结合片段可通过以下方式而去免疫化：通过鉴别抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列内的潜在T细胞表位和/或B细胞表位并使用例如重组技术从抗体或其抗原结合片段中去除一个或多个潜在T细胞表位和/或B细胞表位。然后任选可制备和检测经修饰的抗体或其抗原结合片段，以鉴别保留一种或多种所需生物活性(例如结合亲和力)、但具有降低的免疫原性的抗体或其抗原结合片段。可使用本领域已知技术进行鉴别潜在T细胞表位和/或B细胞表位的方法，所述技术例如计算方法(参见例如PCT公开号WO 02/069232)、体外或芯片(in silico)技术、以及生物测定或物理方法(例如，测定肽与MHC分子的结合，测定肽:MHC复合物与来自接受抗体或其抗原结合片段的物种的T细胞受体的结合，用具有接受抗体或其抗原结合片段的物种的MHC分子的转基因动物来测试蛋白质或其肽部分，或用经来自接受抗体或其抗原结合片段的物种的免疫系统细胞重构的转基因动物进行测试，等等)。在不同实施方案中，本文所述去免疫化抗体包括去免疫化抗原结合片段、Fab、Fv、scFv、Fab’和F(ab’)₂、单克隆抗体、鼠抗体、工程抗体(例如，嵌合抗体、单链抗体、CDR移植抗体、人源化抗体、完全人抗体和人工选择抗体)、合成抗体和半合成抗体。

在某些实施方案中，制备包含编码抗体(例如抗C5抗体或抗干扰素α抗体)的重链可变域和/或轻链可变域的插入片段的重组DNA，并将其转染到宿主细胞用于表达所述抗体。术语DNA包括编码单链DNA、由所述编码DNA及其互补DNA组成的双链DNA、或这些互补(单链) DNA本身。

此外，编码抗C5抗体的重链可变域和/或轻链可变域的DNA，可经酶促合成或化学合成，以含有编码重链可变域和/或轻链可变域的真实DNA序列，或其突变体。真实DNA的突变体是编码这样的上述抗体的重链可变域和/或轻链可变域的DNA：其中一个或多个氨基酸被缺失、插入或与一个或多个其它氨基酸交换。优选地在人源化和表达优化应用中，所述修饰在抗体的重链可变域和/或轻链可变域的CDR之外。术语突变DNA也包括沉默突变体，其中一个或多个核苷酸被具有编码相同氨基酸的新密码子的其它核苷酸取代。术语突变序列也包括简并序列。简并序列是在遗传密码含义内的简并，因为无限制数量的核苷酸被其它核苷酸取代，而不导致原来所编码的氨基酸序列的变化。由其不同限制位点和/或特定宿主、特别是大肠杆菌优选的特定密码子的频率所致，可使用这类简并序列以获得重链鼠可变域和/或轻链鼠可变域的最佳表达。

术语突变体意指包括按照本领域已知方法通过真实DNA的体外诱变而获得的DNA突变体。

对于完整的四聚体免疫球蛋白分子的装配和嵌合抗体的表达，将编码重链可变域和轻链可变域的重组DNA插入片段与编码重链恒定域和轻链恒定域的相应DNA融合，然后转移至合适的宿主细胞中(例如在掺入杂合载体之后)。

另一实施方案涉及编码重组多肽的重组DNA，其中重链可变域和轻链可变域通过间隔基的方式连接，所述重组DNA任选包含促进抗体在宿主细胞中加工的信号序列和/或编码促进抗体纯化的肽和/或切割位点和/或肽间隔基和/或某种物质的DNA序列。编码某种物质的DNA意指编码可用于诊断性或治疗性应用的物质的DNA。因此，特别是指作为毒素或酶、尤其是能够催化前药活化的酶的物质分子。编码这类物质的DNA具有编码天然存在的酶或毒素的DNA的序列，或其突变体，并且可通过本领域众所周知的方法制备。

因此，本公开内容的单克隆抗体或抗原结合片段可以是未与其它物质(例如治疗药或可检测标记)缀合的裸露抗体或抗原结合片段。或者，所述单克隆抗体或抗原结合片段可与例如以下物质缀合：细胞毒性剂、小分子、激素、酶、生长因子、细胞因子、核酶、肽模拟物、化学物、前药、包括编码序列的核酸分子(例如反义物、RNAi、基因打靶构建体等)、或可检测标记(例如NMR或X射线造影剂、荧光分子等)。在某些实施方案中，抗C5抗体或抗原结合片段(例如Fab、Fv、单链scFv、Fab’和F(ab’)₂)与延长抗体或抗原结合片段半衰期的分子连接(参见以上)。

可获得用于在哺乳动物细胞中表达克隆重链和轻链基因的若干可能的载体系统。一类载体依赖于所需基因序列整合至宿主细胞基因组。可通过同时引入药物抗性基因例如大肠杆菌gpt (Mulligan和Berg (1981) Proc Natl Acad Sci USA，78:2072)或Tn5 neo (Southern和Berg (1982) Mol Appl Genet 1:327)来选择具有稳定整合的DNA的细胞。选择标记基因可与待表达的DNA基因序列连接或可通过共转染导入同一细胞中(Wigler等(1979) Cell 16:77)。第二类的载体利用赋予染色体外质粒自主复制能力的DNA元件。这些载体可来源于动物病毒，例如牛乳头瘤病毒(Sarver等(1982) Proc Natl Acad Sci USA，79:7147)、多瘤病毒(Deans等(1984) Proc Natl Acad Sci USA 81:1292)或SV40病毒(Lusky和Botchan (1981) Nature 293:79)。

因为免疫球蛋白cDNA仅由代表编码抗体蛋白的成熟mRNA的序列组成，因此对于免疫球蛋白mRNA合成需要调节基因转录和RNA加工的其它基因表达元件。这些元件可包括剪接信号，转录启动子(包括诱导型启动子)、增强子和终止信号。掺入这类元件的cDNA表达载体包括描述于以下文献的载体：Okayama和Berg (1983) Mol Cell Biol 3:280；Cepko等(1984) Cell 37:1053；以及Kaufman (1985) Proc Natl Acad Sci USA 82:689。

在本公开内容的治疗实施方案中，预期双特异性抗体。双特异性抗体是单克隆抗体，优选人抗体或人源化抗体，其对至少两种不同的抗原具有结合特异性。就本发明而言，一种结合特异性是针对人补体蛋白或干扰素α蛋白，另一种则是针对任何其它抗原。

双特异性抗体的制备方法在本领域技术人员的见识之内。传统上，双特异性抗体的重组制备基于两条免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中两条重链具有不同特异性(Milstein和Cuello (1983) Nature 305:537-539)。可将具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。融合优选与免疫球蛋白重链恒定域(包括铰链的至少一部分、C_H2区和C_H3区)进行。将编码免疫球蛋白重链融合物和(如需要的话)免疫球蛋白轻链的DNA，插入到单独的表达载体中，并共转染到合适的宿主生物中。对于制备双特异性抗体的说明性的目前已知方法的进一步详述，参见例如Suresh等(1986) Methods in Enzymology 121:210；PCT公开号WO 96/27011；Brennan等(1985) Science 229:81；Shalaby等, J Exp Med (1992) 175:217-225；Kostelny等(1992) J Immunol 148(5):1547-1553；Hollinger等(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448；Gruber等(1994) J Immunol 152:5368；以及Tutt等(1991) J Immunol 147:60。双特异性抗体也包括交联抗体或异型缀合抗体(heteroconjugate antibody)。可使用任何适宜交联方法制备异型缀合抗体。合适的交联剂以及多种交联技术是本领域众所周知的，并公开于美国专利号4,676,980。

也已描述了直接从重组细胞培养物中制备和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，使用亮氨酸拉链已制备出双特异性抗体。参见例如Kostelny等(1992) J Immunol 148(5):1547-1553。来自Fos蛋白和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽可通过基因融合而与两种不同抗体的Fab’部分连接。在铰链区可还原抗体同型二聚体，以形成单体，然后重新氧化而形成抗体异型二聚体。该方法也可用于产生抗体同型二聚体。以下文献所描述的“双抗体”技术已经提供了制备双特异性抗体片段的替代机制：Hollinger等(1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:6444-6448。所述片段包括通过接头与轻链可变域(VL)连接的重链可变域(VH)，所述接头太短而不允许同一链上的两个域之间配对。因此，一个片段的VH域和VL域被迫与另一片段的互补VL域和VH域配对，从而形成两个抗原结合位点。也已报道了通过使用单链Fv (scFv)二聚体而制备双特异性抗体片段的另一策略。参见例如Gruber等(1994) J Immunol 152:5368。或者，抗体可以是例如以下文献所述的“线性抗体”：Zapata等(1995) Protein Eng 8(10):1057-1062。简而言之，这些抗体包括一对串联Fd区段(V_H-C_H1-V_H-C_H1)，其形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性或单特异性的。

本公开内容也包括双特异性抗体的变体形式例如在Wu等(2007) Nat Biotechnol 25(11):1290-1297中描述的四价双重可变域免疫球蛋白(DVD-Ig)分子。DVD-Ig分子经设计，使得来自两种不同亲代抗体的两种不同轻链可变域(VL)通过重组DNA技术以串联形式直接连接或经由短接头连接，然后连接轻链恒定域。制备来自两种亲代抗体的DVD-Ig分子的方法进一步描述于例如PCT公开号WO 08/024188和WO 07/024715，其公开内容各自都通过引用以其整体结合到本文中。

药物组合物和制剂

可将含有补体抑制剂(例如人补体组分C5抑制剂，例如抗C5抗体或其抗原结合片段，或干扰素α抑制剂)的组合物配制为药物组合物，例如用于给予受试者以治疗德戈斯病。药物组合物通常包含药学上可接受的载体。本文所用“药学上可接受的载体”，是指并且包括生理上相容的任何及所有溶剂、分散介质、包衣材料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。组合物可包括药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐(参见例如，Berge等，(1977) J Pharm Sci 66:1-19)。

可按照标准方法配制组合物。药物配制是建立良好的领域，并进一步描述于例如Gennaro (2000) “Remington: The Science and Practice of Pharmacy,” 第20版, Lippincott, Williams & Wilkins (ISBN: 0683306472)；Ansel等(1999) “Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,” 第7版, Lippincott Williams & Wilkins Publishers (ISBN: 0683305727)；和Kibbe (2000) “Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association,” 第3版(ISBN: 091733096X)。在某些实施方案中，可将组合物配制为例如处于合适浓度并适合贮存于2-8℃的缓冲溶液剂。在某些实施方案中，可将组合物配制，用于贮存在0℃以下的温度(例如-20℃或-80℃)。

药物组合物可呈各种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液剂(例如注射用和输注用溶液剂)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、散剂、脂质体和栓剂。优选的形式部分地取决于预期给药方式和治疗应用。例如，预定用于全身或局部递送的含有抗C5抗体的组合物可呈注射用或输注用溶液剂的形式。因此，可配制组合物，用于经胃肠外模式(例如静脉内、皮下、腹膜内或肌内注射)给药。本文所用的“胃肠外给药”、“经胃肠外给予”和其它语法上等同的短语，是指并非肠道和局部给予的给药模式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、鼻内、眼内、肺部、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眼窝内、心内、皮内、肺内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、脑内、颅内、颈动脉内和胸骨内注射和输注(参见以下)。

可将组合物配制为溶液剂、微乳剂、分散剂、脂质体或适于以高浓度稳定贮存的其它有序结构。无菌注射用溶液剂可如下制备：通过将所需量的本文所述的抗体与以上列举的成分之一或组合(根据需要)掺入到合适溶剂中，接着过滤除菌。通常，如下制备分散剂：通过将本文所述的人补体抑制剂(例如抗C5抗体)和/或干扰素α抑制剂掺入到含有基础分散介质和所需的以上列举的其它成分的无菌溶媒中。在用于制备无菌注射用溶液剂的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其得到本文所述的抗体加上来自其先前过滤除菌的溶液的任何额外所需成分的粉末。例如，可通过使用包衣材料(例如卵磷脂)、在分散剂的情况下通过保持所需粒度、以及通过使用表面活性剂，来维持溶液剂的适当流动性。可通过在组合物中包含延缓吸收的试剂(例如单硬脂酸盐和明胶)，使注射用组合物的吸收延长。

在某些实施方案中，可将补体抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原结合片段)或干扰素α抑制剂与保护化合物以免快速释放的载体一起制备，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这类制剂的许多方法是本领域已知的。参见例如J.R. Robinson (1978) “Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,” Marcel Dekker, Inc., New York.。

在某些实施方案中，可将本文所述的抑制剂配制在适用于肺内给药(例如通过喷雾器给药)至哺乳动物例如人的的组合物中。制备这类组合物的方法是本领域众所周知的并描述于例如美国专利申请公开号20080202513；美国专利号7,112,341和6,019,968；和PCT公开号WO 00/061178和WO 06/122257，其公开内容各自通过引用以其整体结合到本文中。干粉吸入器制剂和用于给予所述制剂的合适系统描述于例如美国专利申请公开号20070235029、PCT公开号WO 00/69887；和美国专利号5,997,848。

在某些实施方案中，可对本文所述的人补体抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原结合片段)或干扰素α抑制剂进行修饰，例如用改善其在循环(例如血液、血清或其它组织)中的稳定性和/或滞留性的部分来修饰。稳定性部分可改善抗体的稳定性或滞留性达至少1.5 (例如至少2、5、10、15、20、25、30、40或50或更高)倍。

可将本文所述的人补体的核酸抑制剂(例如反义核酸或siRNA)整合至基因构建体，以作为基因治疗方案的一部分用于递送可用于在细胞内表达和生产作用剂的核酸。可以在任何生物学有效的载体中给予所述组分的表达构建体，所述载体例如任何能够在体内有效递送所述组分基因至细胞的制剂或组合物。方法包括将主题基因插入至病毒载体或重组细菌或真核质粒中，所述病毒载体包括重组反转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、慢病毒和单纯疱疹病毒(HSV-1)。病毒载体可直接转染细胞；可在例如以下物质的帮助下递送质粒DNA：阳离子脂质体(lipofectin)或衍生的(例如抗体缀合的)、聚赖氨酸缀合物、短杆菌肽S、人工病毒包膜或其它这类胞内载体，以及直接注射基因构建体或在体内实施CaPO₄沉淀来递送质粒DNA。(亦参见“离体方法”，下述。)适合的反转录病毒的实例包括本领域技术人员已知的pLJ、pZIP、pWE和pEM (参见例如，Eglitis等，(1985) Science 230:1395-1398；Danos和Mulligan (1988) Proc Natl Acad Sci USA 85:6460-6464；Wilson等，(1988) Proc Natl Acad Sci USA 85:3014-3018；Armentano等，(1990) Proc Natl Acad Sci USA 87:6141-6145；Huber等，(1991) Proc Natl Acad Sci USA 88:8039-8043；Ferry等，(1991) Proc Natl Acad Sci USA 88:8377-8381；Chowdhury等，(1991) Science 254:1802-1805；van Beusechem等，(1992) Proc Natl Acad Sci USA 89:7640-7644；Kay等，(1992) Human Gene Therapy 3:641-647；Dai等，(1992) Proc Natl Acad Sci USA 89:10892-10895；Hwu等，(1993) J Immunol 150:4104- 4115；美国专利号4,868,116和4,980,286；PCT公开号WO89/07136、WO89/02468、WO89/05345和WO92/07573)。另一病毒基因递送系统利用源自腺病毒的载体(参见例如，Berkner等，(1988) BioTechniques 6:616；Rosenfeld等，(1991) Science 252:431-434和Rosenfeld等，(1992) Cell 68:143-155)。源自腺病毒毒株Ad 5型dl324或其它腺病毒毒株(例如Ad2、Ad3、Ad7等)的适合的腺病毒载体为本领域技术人员已知。又一用于递送主题基因的病毒载体系统是腺伴随病毒(AAV)。参见例如，Flotte等，(1992) Am J Respir Cell Mol Biol 7:349-356；Samulski等，(1989) J Virol 63:3822-3828和 McLaughlin等，(1989) J Virol 62: 1963-1973。

在一些实施方案中，可共同配制不止一种(例如2、3、4、5、6、7、8、9或10种或更多种)抑制剂(例如一种或多种人C5抑制剂)。例如，可将C5特异性siRNA和抗C5抗体配制在一起。

在一些实施方案中，可以与一种或多种可用于治疗德戈斯病或改善其症状的另外活性剂一起配制本文所述的人补体抑制剂(例如人补体抑制剂如抗C5抗体或其抗原结合片段)或干扰素α抑制剂。例如，抗C5抗体可以与免疫抑制剂一起配制。免疫抑制剂包括例如：皮质类固醇、苯基丁氮酮、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢菌素、他克莫司和麦考酚酸酯、环磷酰胺和抗CD20抑制剂例如利妥昔单抗(Rituxan^TM；Biogen Idec, Cambridge, MA)。在一些实施方案中，可将人补体抑制剂配制用于与静脉内免疫球蛋白疗法(IVIG)、红细胞输入、血浆置换或血浆交换一起给予受试者。参见例如 Dyrsen等，(2008) 见上和Zhu等，(2007) 见上。

在一些实施方案中，可将人补体抑制剂配制用于与抗血栓药和/或抗凝血剂联合治疗(例如同时或并行)，所述抗血栓药和/或抗凝血剂例如但不限于；氯吡格雷、阿司匹林、双嘧达莫、华法林(Coumadin)、肝素、苯茚二酮、磺达肝素(fondaparinux)、艾屈肝素(idraparinux)和凝血酶抑制剂(例如阿加曲班、来匹卢定、比伐卢定或达比加群)。亦可将人补体抑制剂(例如抗C5抗体)配制用于与纤维蛋白溶解剂(例如安克洛酶、ε-氨基己酸、抗纤维蛋白溶酶-a₁、前列环素和去纤苷)一起用于治疗德戈斯病。

在一些实施方案中，例如，当德戈斯病与传染相关时，人补体抑制剂和/或干扰素α抑制剂可与一种或多种用于治疗感染的作用剂一起配制。例如，C5抑制剂可与抗生素或抗病毒剂一起配制。

当将人补体抑制剂与第二活性剂组合使用时，或当使用两种或更多种人补体抑制剂(例如抗C5抗体和抗因子B抗体)时，可单独或一起配制所述作用剂。例如，可例如在临给予前混合单独的药物组合物并一起给予，或可以例如在相同或不同的时间分开给予单独的药物组合物(见下面)。

同样，当干扰素α抑制剂(例如抗干扰素α抗体)与第二活性剂组合使用时，或当使用两种或更多种干扰素α抑制剂时，可单独或一起配制所述作用剂。

如上所述，可以配制组合物以使其包含治疗有效量的人补体抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原结合片段)，或可配制组合物以包含亚治疗量的抑制剂和亚治疗量的一种或多种另外活性剂，使得总体组分对治疗德戈斯病治疗上有效。在一些实施方案中，可以配制组合物使其包含两种或更多种各自处于亚治疗剂量的人补体抑制剂，使得总体抑制剂处于对治疗德戈斯病在治疗上有效的浓度。可以配制组合物以使其包含治疗有效量的干扰素α抑制剂(例如抗干扰素α抗体或其抗原结合片段)，或可配制组合物以使其包含亚治疗量的抑制剂和亚治疗量的一种或多种另外活性剂，使得总体组分对治疗德戈斯病在治疗上有效。在一些实施方案中，可以配制组合物以包含两种或更多种各自处于亚治疗剂量的干扰素α抑制剂，使得总体抑制剂处于对治疗德戈斯病在治疗上有效的浓度。在一些实施方案中，组合物包含人补体抑制剂和干扰素α抑制剂。用于测定治疗有效剂量(例如抗C5抗体或抗干扰素抗体的治疗有效剂量)的方法在本领域中已知并在本文中阐述。

治疗方法

上述组合物尤其在治疗或预防受试者(例如人)德戈斯病的方法中有用。可部分视给药途径而定用多种方法将组合物给予受试者，例如人受试者。所述途径可例如是静脉注射或输注(IV)、皮下注射(SC)、腹膜内(IP)或肌内注射。

可以例如通过局部输注、注射或借助植入物的方法完成给药。植入物可以具有孔、无孔或为胶凝状的材料，包括膜例如硅橡胶膜，或纤维。可以配置植入物用于为受试者持续或定期性释放所述组合物。(参见例如，美国专利申请号20080241223；美国专利号5,501,856；4,863,457和3,710,795；EP488401和EP 430539，所述文献各自的公开内容通过引用以其整体并入本文)。可将组合物通过基于以下系统的可植入装置来递送给受试者：例如扩散系统、易蚀系统或对流系统，例如渗透泵、生物可降解植入物；电扩散系统、电渗系统、蒸气压泵、电解泵、泡腾泵、压电泵、基于蚀的系统或机电系统。

能治疗或预防受试者的德戈斯病的人补体抑制剂(例如抗C5抗体或其片段)或干扰素α抑制剂(例如抗干扰素α抗体)的适合剂量，可视包括例如待治疗的受试者的年龄、性别和体重及使用的具体抑制剂化合物在内的多种因素而定。例如，与治疗同一患者所需的抗C5抗体剂量比较，可能需要不同剂量的人C5的特异性siRNA来治疗德戈斯病的受试者。影响给予受试者的剂量的其它因素包括例如德戈斯病的类型和严重性。例如，具有皮肤型的德戈斯病受试者与全身型的德戈斯病受试者相比可能需要给予不同剂量的抑制剂。其它的因素可以包括例如，同时或先前影响受试者的其它医学病症、受试者的一般健康、受试者的遗传素因、饮食、给予时间、排泄速度、药物组合和给予受试者的任何其它另外的治疗剂。还应该了解，对任何特定受试者的具体剂量和治疗方案将视治疗医师(例如医生或护士)的判断而定。

抑制剂可作为固定剂量或以毫克/千克(mg/kg)剂量给予。在一些实施方案中，亦可以选择剂量以降低或避免产生针对组合物中的一种或多种活性剂的抗体或其它宿主免疫应答。尽管绝无意限制，但补体抑制剂(例如抗C5抗体)和/或干扰素α抑制剂的例示性剂量包括例如：1-100μg/kg、0.5-50μg/kg、0.1-100μg/kg、0.5-25μg/kg、1-20μg/kg和1-10μg/kg、1-100 mg/kg、0.5-50 mg/kg、0.1-100 mg/kg、0.5-25 mg/kg、1-20 mg/kg和1-10 mg/kg。本文所述抗体的例示性剂量包括但不限于：0.1μg/kg、0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg、4μg/kg和8μg/kg、0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、4 mg/kg和8 mg/kg。

在一些实施方案中，可以约每12 (例如约每10、11、13、14、15、16、17、18、19、20、21、28、30、42或49或更多)天以约900 mg的剂量将抗C5抗体(例如依库珠单抗)在静脉内给予人。参见例如，Hill等，(2005) Blood 106(7):2559。

在一些实施方案中，可以每周、任选2周或更多周(例如3、4、5、6、7或8或更多周)以约600 (例如，约625、650、700、725、750、800、825、850、875、900、925、950或1,000或更多) mg的剂量将抗C5抗体(例如依库珠单抗)在静脉内给予人。初始治疗后，可例如作为维持剂量约每14 (例如约每15、16、17、18、19、20、21、28、30、42或49或更多)天给予人约900 mg剂量的抗体。参见例如，Hillmen等，(2004) N Engl J Med. 350(6):552-9和Dmytrijuk等，(2008) The Oncologist 13(9):993。

药物组合物可以包含治疗有效量的人补体组分C5抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原结合片段)和/或治疗有效量的干扰素α抑制剂。本领域一般技术人员可部分基于给予抑制剂的效果，或如果使用不止一种作用剂的话则基于所述抗体和一种或多种另外的活性剂的组合效果，容易地确定所述有效量。人补体抑制剂(例如抗C5抗体)的治疗有效量亦可按照以下因素而变化：例如个体疾病状态、年龄、性别和体重以及抗体(和一种或多种另外的活性剂)在个体中引发所期需应答的能力，所述所期需应答例如改善至少一种病况参数，例如，改善德戈斯病的至少一种症状。例如，治疗有效量的人补体抑制剂(例如抗C5抗体)可以抑制(减轻其严重性或消除其发生)和/或预防德戈斯病和/或本领域已知的或本文所述的德戈斯病的任何一种症状。治疗有效量也是所述组合物在治疗上有益的效应超过其任何有毒的或有害的效应的量。

术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”或本文所用相似术语，意指会引发所期需生物或医学应答(例如，德戈斯病一种或多种症状的改善)的作用剂(例如人补体抑制剂)的量。在一些实施方案中，本文所述组合物含有治疗有效量的人补体组分C5抑制剂。在一些实施方案中，本文所述组合物含有治疗有效量的与补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，组合物含有2种或更多种(例如3、4、5、6、7、8、9、10或11种或更多种)不同的人补体抑制剂以使所述组合物作为整体治疗有效。例如，组合物可以含有与人C5蛋白结合的抗体和与编码人C5蛋白的mRNA结合并促进其降解的siRNA，其中所述抗体和siRNA各自均处于当组合时是治疗上有效的浓度。在一些实施方案中，组合物含有抑制剂和一种或多种第二活性剂，以使所述组合物作为整体治疗有效。例如，组合物可以含有与人C5蛋白结合的抗体和可用于治疗或预防德戈斯病的另一作用剂。

在一些实施方案中，本文所述组合物含有治疗上有效量的抗干扰素α抗体或其抗原结合片段。

可通过已知的药物程序在细胞培养或实验动物中测定所述组合物的毒性和治疗功效。可将这些程序用于例如测定LD₅₀ (群体的50%致死的剂量)和ED₅₀ (群体的50%治疗有效的剂量)。毒性作用和疗效之间的剂量比是治疗指数，其可表示为比率LD₅₀/ED₅₀。优选展示出高治疗指数的组合物或组合物的补体抑制剂(例如抗C5抗体)。虽然可使用展示出毒副作用的组合物，但应该小心设计将所述化合物靶向受累及的组织部位的递送系统，并使对正常细胞的潜在损伤最小化，藉此降低副作用。

可将自细胞培养测定和动物研究获得的数据用于配制供人使用的一系列剂量。所述抑制剂的剂量通常在抑制剂(例如抗C5抗体、抗干扰素α抗体或其抗原结合片段)的循环浓度范围内，所述范围包括具有小的毒性或没有毒性的ED₅₀。剂量可以视所使用的剂型和给予途径在该范围内变化。对于如本文所述使用(例如用于治疗或预防德戈斯病)的人补体组分C5的抑制剂(例如抗C5抗体)，治疗有效剂量最初可以从细胞培养测定评估。例如可通过高效液相色谱法来测量例如受治疗人或动物的血浆中的补体抑制剂水平。

在一些实施方案中，可以基于受试者血液中抑制剂所针对的补体蛋白的浓度来确定所需的人补体抑制剂(例如抗C5抗体)的剂量。例如，具有更高浓度的循环人C5蛋白水平的受试者可以比具有更低水平的循环人C5的受试者需要更高剂量的人C5抑制剂。用于测定受试者的衍生自血液的液体样品中人补体浓度的方法在本领域已知。例如，用于测定血清C5水平的方法在例如 Rawal等，(1998) J Biol Chem 273(27):16828-16835中阐述。

本文所用“受试者”可以是任何哺乳动物。例如，受试者可以是人、非人灵长类(例如猴、狒狒或黑猩猩)、马、奶牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠或小鼠。在一些实施方案中，受试者是婴儿(例如人婴儿)。

在一些实施方案中，受试者对给予以治疗德戈斯病的一种或多种另外的治疗剂抗拒。本文所用的对治疗“抵抗”、对治疗“抗拒”和类似的语法短语，指患者处于这样的临床状态，其中在治疗或治愈特定病症(例如德戈斯病)中的给定疗法的有效性降低，或在改善与所述病症相关的一种或多种症状中的治疗有效性降低。例如，IVIg对罹患德戈斯病的患者的治疗益处可随时间而减少，以致所述疾病在甚至用IVIg治疗时仍保留或进展。参见例如De Breucker等，(2008)，见上。

本文所用 “需要预防”、“需要治疗”或“有需要”的受试者，指通过适当的医师(例如，在人情况下为医生、护士或执业护士；在非人哺乳动物情况下为兽医）的判断会从给定治疗(例如用包含人补体抑制剂或干扰素α抑制剂的组合物进行的治疗)获得合理的益处的受试者。

本文所用“处于发展德戈斯病的风险中”的受试者，是具有一种或多种(例如2、3、4、5、6、7或8种或更多种)发展所述病症的风险因子的受试者。德戈斯病的风险因子在医学领域众所周知，包括例如发展所述病况的倾向，即该病况的家族史或与德戈斯病相关的遗传状态，例如蛋白S缺乏。参见例如Gileberte等，(2005) Br J Dermatol 153(3):666-7。德戈斯病的风险因子亦包括那些与德戈斯病相关的病况，例如但不限于：病毒感染(例如HIV或B19细小病毒感染)、促凝血状态(例如因子V Leiden)或自身免疫性疾病例如LE、皮肌炎、硬皮病和抗磷脂综合征。在下文中，德戈斯病的这类表现合适时可被称为例如“感染相关德戈斯病”或“自身免疫相关德戈斯病”。从以上可清楚的是，“处于发展德戈斯病的风险中”的受试者不是目的种类内的所有受试者。

“疑似患有德戈斯病”的受试者是具有一种或多种(例如2、3、4、5、6、7、8、9或10种或更多种)该病况的症状的受试者。该病况的症状为医学领域的技术人员所知，并包括例如皮肤病损(例如，一个或多个隆起的肤色或玫瑰色的丘疹，该丘疹发展为具有白色中心和周围红斑和毛细管扩张的凹陷疤痕)、胃肠出血、呕吐、肠外瘘、神经症状(例如面部和肢端感觉异常、头痛、眩晕、吞咽不能、截瘫、凝视麻痹、癫痫、记忆丧失或知觉改变)、中风、复视、下垂、视野缺损、虚弱、呼吸急促和胸痛。在一些实施方案中，德戈斯病与患者存在抗心磷脂抗体、狼疮抗凝物、抗磷脂抗体或血管IgA沉积相关。参见例如上述Englert等，(1984)；上述Crowson等，(2002)和Grattan和Burton (1991) Semin Dermatol 10(3):152-159。从上述可清楚的是，“疑似患有德戈斯病”的受试者不是目的种类内的所有受试者。

在一些实施方案中，所述方法可以包括鉴定受试者为患有、疑似患有德戈斯病或处于发展为德戈斯病的风险中的受试者。用于鉴定受试者的适合的方法在本领域中已知。例如，Ackerman阐述了用于阳性鉴定德戈斯病相关的皮肤病损的组织学方法。Am J Dermatopathol (1985) 7(2):105-7。如上所述，德戈斯病可以与患者存在抗心磷脂抗体、狼疮抗凝物和/或抗磷脂抗体相关。亦在工作实施例中例举组织学诊断方法。用于检测患者血液中这些抗体的存在情况的合适的方法在本领域中已知，并在例如Caux等，(1994) Ann Dermatol Venereol 121:537-542中阐述。在一些实施方案中，德戈斯病可以与IgA在皮肤血管内的沉积相关。用于检测所述沉积的方法在本领域中已知。参见例如，上述Crowson等，(2002)。

此外，如工作实施例所述，德戈斯病可以与显著的血管C5b-9 MAC沉积以及提高的血清C活性蛋白及因子VIII水平相关。用于检测这些参数中的每一个的方法在本文中例举。

在一些实施方案中，可以将组合物预防性地给予受试者，以预防德戈斯病的良性形式进展为疾病的全身性多器官形式。例如，可以给予具有皮肤形式的德戈斯病的受试者本文所述组合物，以预防或减轻患者发展致命的全身形式的德戈斯病的可能性。类似地，可以给予具有德戈斯病相关B19细小病毒感染、HIV感染或自身免疫性疾病的受试者本文所述组合物，以预防或减轻患者发展德戈斯病的可能性。

术语“预防”为领域公认的，当关于病况使用时在本领域内被很好地理解，包括这样的组合物给予，其相对于没有接受组合物的受试者降低受试者医学病况的症状的频率，或延迟该症状发作。因此，预防德戈斯病包括例如与未治疗对照群体相比，减缓接受预防疗法的患者群体的德戈斯病从良性形式向疾病的全身性多器官形式的进展，和/或与未治疗对照群体相比，降低治疗群体的疾病的一种或多种症状的严重性和/或延迟所述症状的发作达例如统计学上和/或临床上显著的量。

在一些实施方案中，可将人补体抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原结合片段)和/或干扰素α抑制剂作为单一疗法给予受试者。或者，如上所述，可将抑制剂与另一种治疗(例如德戈斯病的另一种治疗)作为组合治疗给予受试者。例如，联合疗法可以包括给予受试者(例如人患者)一种或多种为患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的受试者提供治疗益处的另外作用剂(例如抗凝血药或抗炎剂)。在一些实施方案中，人补体抑制剂(例如抗C5抗体)或干扰素α抑制剂和一种或多种另外的活性剂同时给予。在其它实施方案中，在第一时间给予抑制剂，在第二时间给予一种或多种另外的活性剂。在一些实施方案中，在第一时间给予一种或多种另外的活性剂，在第二时间给予抑制剂。

人补体抑制剂或干扰素α抑制剂可以替代或增强之前或当前给予的治疗。例如，当用抗C5抗体或其抗原结合片段治疗时，一种或多种另外的活性剂的给予可以停止或减少，例如以更低水平给予。在一些实施方案中，可保留给予先前的疗法。在一些实施方案中，可保留先前的疗法直至人补体抑制剂(例如抗C5抗体)或干扰素α抑制剂的水平达到足够提供治疗效果的水平。这两种治疗可联合给予。

如本文所定义，针对德戈斯病的改善监测受试者(例如人患者)，意指评估受试者疾病参数的变化，例如，疾病的一种或多种症状的改善。例如，医师可在用本文所述补体抑制剂治疗之前和之后，检查血管C5b-9 MAC沉积的程度。所述症状包括本文所述的德戈斯病的任何症状。在一些实施方案中，在给予后至少1小时，例如至少2、4、6、8、12、24或48小时，或至少1天、2天、4天、10天、13天、20天或更多天，或至少1周、2周、4周、10周、13周、20周或更多周进行评估。可以在一个或多个以下时期评估受试者：开始治疗前；治疗期间；或给予一个或多个治疗要素之后。评估可以包括评估进一步治疗的需要，例如，评估剂量、给予频率或治疗的持续时间是否应改变。也可以包括评估增加或减少所选择的治疗方式的需要，例如，增加或减少本文所述的用于德戈斯病的任何治疗。

离体方法当人补体抑制剂或干扰素α抑制剂是多肽(例如抗体)或核酸(例如siRNA或反义核酸)时，用于治疗或预防德戈斯病的离体策略，可以涉及用编码蛋白的多核苷酸或核酸转染或转导从受试者获得的一种或多种细胞。例如，可以用编码抗C5抗体重链和轻链的单个载体转染细胞，或可以用编码抗体重链的第一载体和编码抗体轻链的第二载体转染细胞。

然后将转染或转导的细胞送回受试者。细胞可以是大范围类型的任何一种，包括但不限于：造血细胞(例如骨髓细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突细胞、T细胞或B细胞)、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、角化细胞或肌细胞。只要这类细胞在受试者体内存活，其就可以作为补体抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原结合片段，或抗C5 siRNA)或干扰素α抑制剂的来源(例如持续性或周期性来源)起作用。在一些实施方案中，可以配置所述载体和/或细胞用于诱导型或阻遏型表达抗体(参见例如，Schockett等，(1996) Proc Natl Acad Sci USA 93: 5173-5176和美国专利号7,056,897)。

优选将细胞自受试者获得(自体的)，但是除受试者外还可从潜在同一物种受试者获得(同种异体的)。

用于从受试者获得细胞并转导或转染所述细胞的适合的方法在分子生物学领域为已知的。例如，转导步骤可以通过用于离体基因治疗的任何标准手段完成，包括磷酸钙、脂转染、电穿孔、病毒转染(见上述)和生物弹射基因转移。参见例如，Sambrook等，(见上述)和Ausubel等，(1992) “Current Protocols in Molecular Biology,” Greene Publishing Associates。或者，可以使用脂质体或聚合微粒。可以例如针对编码序列或抗药基因的表达，选择已经成功转导的细胞。

试剂盒

本公开内容特征在于制品或试剂盒，其包括带标签的容器；和含有一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种或更多种)人补体抑制剂(例如抗C5抗体或其抗原集合片段)和/或一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种或更多种)干扰素α抑制剂(例如抗干扰素α抗体)的组合物。所述标签标明待将组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的受试者(例如人)。试剂盒可以任选包括用于给予受试者所述组合物的工具。例如，试剂盒可包括一个或多个注射器。

在一些实施方案中，试剂盒可以含有两种或更多种(例如，3、4、5、6、7、8、9或10种或更多种)不同类型的人补体抑制剂。例如，试剂盒可以含有抗C5抗体(或其抗原结合片段)和与编码人C5蛋白的mRNA结合的siRNA。在一些实施方案中，试剂盒可以含有抗C5抗体、siRNA和小分子补体抑制剂。

在一些实施方案中，试剂盒可以进一步包括一种或多种另外的活性剂，例如本文所述的那些中的任何一种。例如，试剂盒可以包括一种或多种抗凝血剂、抗血栓药或抗炎剂。试剂盒还可以包括一种或多种靶向B细胞的治疗，例如抗CD20抗体。试剂盒可以任选包括一种或多种用于检测抗心磷脂抗体、狼疮抗凝物、抗磷脂抗体和/或血管IgA沉积的存在情况的工具。

以下实施例意欲阐明而非限制本发明。

实施例

实施例 1 材料和方法

常规光学显微术用苏木精和伊红染色石蜡包埋的福尔马林固定组织的5微米厚切片，并且通过常规的光学显微术镜检。

MxA免疫组织化学评估将用于检测MxA蛋白的载玻片放置于Tissue Tek Slide Holder和染色碟(Miles, Elkhart, IL)中，并浸泡于200 mL EDTA缓冲液pH 8.0 (Zymed Laboratories, South San Francisco, CA)中。在用第一抗体孵育30分钟后，依照方案用市购Vision BioSystems限定试剂盒(Define Kit)进行染色。用以下稀释度实施第一抗体孵育：抗MxA抗体1:1600。关于基于对特定标记染色的细胞的大约百分比以及整个载玻片上的染色分布的染色程度进行半定性评估。在Consul自动玻片盖片机(cover-slipper)(ThermoShandon, Pittsburgh, PA)上利用Shandon Consul®-Mount Histology (产品号9990440)系统为载玻片盖上盖玻片。参见Magro等，(2009) J Cutan Pathol (11月4日，印刷前电子出版；PMID：19891658)。

组织免疫荧光研究对在Michael氏转移培养基中获得并随后贮存于-30℃的皮肤活组织检查材料进行了以下免疫荧光研究(如Crowson和Magro (1996) Human Pathol 27:15-19中所述)。通过在单独的活组织检查切片上覆盖缀合荧光素的第一抗体，来对病损皮肤进行了针对免疫球蛋白G (IgG)、IgA、IgM、纤维蛋白和补体组分C3 (DAKO, Carpinteria, CA, USA)的直接免疫荧光(DIF)研究。将用缀合荧光素的兔抗小鼠抗体进行的间接免疫荧光(IF)方法用于检测C5b-9 MAC (DAKO)的存在情况，其借助所述缀合荧光素的兔抗小鼠抗体与初始接触活组织检查切片的第一抗C5b-9抗体的结合来实现。

电子显微术将皮肤活组织检查组织放置于戊二醛固定剂中用于超微结构检查。

用于间接免疫荧光和蛋白质印迹研究的细胞培养让新生的人真皮血液微血管内皮细胞HMVEC-dBlNeo (Lonza, Walkersville, MD)，在37℃和5% CO₂下于完全培养基(EGM^®-2基本培养基，其补充有EGM^®-2 MV BulletKit^®试剂和5% Premium FBS)(Lonza)中培养。细胞培养足以在培养瓶中达到75%到80%汇合的时间。然后用温热的磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤细胞，并用1X胰蛋白酶-EDTA溶液(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)收获细胞。用PBS再洗一次之后，以2×10⁴个细胞/mL的密度让细胞于预先温热的完全培养基中再次接种到组织培养腔室载玻片(chamber slide)(Nunc Lab-Tek™ Chamber Slide System, 在Permanox™上的2个孔, Sigma-Aldrich)上。在37℃、5% CO₂条件下培养所述腔室载玻片24小时，然后弃掉培养基。移除培养基后，移出每个室的载玻片，用PBS漂洗，然后与纸巾结合风干吸除过量的PBS。在-80℃密闭容器中保存干燥载玻片直至用免疫荧光显微术检查。

蛋白质印迹研究用由0.05M氟化钠、1% Triton X-100、50mM Tris-HCl (pH 8.0)、150mM NaCl、1mM原钒酸钠、1mM苯甲磺酰基氟和1:200稀释的Calbiochem蛋白酶抑制剂混合物组III（Protease Inhibitor Cocktail Set III） (EMD Chemicals, Inc., Gibbstown, NJ)组成的裂解缓冲液，于4℃带有偶尔涡旋下裂解培养的HMVEC-dBlNeo细胞达30分钟。然后通过微量离心清除裂解物的细胞核和其它不可溶物质。接下来，将含有β-巯基乙醇(5%终浓度)的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)加样缓冲液加至细胞裂解物(1: 4稀释的5X加样缓冲液加入裂解物中)，然后煮沸2分钟。然后通过经由8%-16%梯度Tris-HCl SDS-PAGE凝胶(BioRad, Hercules, CA)的电泳解析裂解物，并转移到Whatman Protran硝酸纤维素膜(Sigma-Aldrich)。室温下在定轨摇床上于含0.1% Tween-20的Tris缓冲盐水(TBS-T)中用3%脱脂牛奶封闭溶液孵育膜6小时，然后将膜放入Miniblotter 25印迹歧管（blotting manifold）(Immunetics, Cambridge, MA)。用在含有0.2%牛血清白蛋白的TBS-T中以1:250稀释的患者血清或健康对照血清填充Miniblotter孔，让Miniblotter在4℃定轨摇床上轻轻摇动过夜。然后去除血清，用TBS-T洗孔两次，并将膜移出装置。在用TBS-T再次大量洗涤后，在室温用1:20,000稀释的缀合辣根过氧化物酶的山羊抗人Ig (重链和轻链)第二抗体(SouthernBiotech, Birmingham, AL)将膜染色2小时。在用TBS-T大量洗涤膜后，用Supersignal® West Pico化学发光底物(Thermo Scientific, Rockford, IL)检测了抗体复合物，在HyBlot CL™放射自显影膜(Denville Scientific, Inc., Metuchen, NJ)上显现化学发光条带。

检测抗内皮细胞抗体的存在情况的间接免疫荧光研究按1:100稀释系数稀释血清样品，并与人皮肤内皮细胞一起孵育。用缀合荧光素的山羊抗人IgG (用PBS以1:100稀释；Caltag, Burlingame, CA)检测了抗体结合。用Olympus显微镜显现荧光素-抗体复合物，并用数码相机记录图像。

实施例 2 结果

临床史在2年时间内先前健康的43岁男性发展出了无症状小皮肤损伤，其最初由结果为凹陷的白色疤痕的隆起的丘疹损伤限定。2009年7月23日，患者以3天间歇性低热史进入急救室，所述间歇性低热伴随剧烈腹痛和淡绿色呕吐物。实施剖腹探查术——移出了一小段肠。皮肤和肠样本二者均显示出德戈斯病相关的典型变化。未检测到抗心磷脂抗体、抗-β2糖蛋白抗体或狼疮抗凝物。另外的实验室检测证实了异常升高的血清因子VIII水平(超过正常，199)、升高的von Willebrand因子(VWF)水平(高于正常，217)和增加的血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平。尽管测定补体组分蛋白C2、C3和C4在正常水平内，但是C5水平升高了。

对患者实施胸腔穿刺术来减轻气胸。患者开始每天以490 mg静脉注射γ-球蛋白和Lovenox^®。在2009年8月12日的随访中，患者由于因持久腹痛引起的食欲降低导致减轻15磅。患者呼吸检查表明双基底区(bibasilar region)呼吸音减弱。患者的C反应蛋白、VWF和VEGF水平仍然分别提高到6.51、177和971。IVIG治疗4次后，患者皮肤损伤有一些改善，但患者仍继续遭受腹痛。2009年10月，患者发展出了胸痛和呼吸急促，这使其需要住院。患者血液动力学快速失调，被置于内科重症监护病房。注意到患者具有与大的心包和胸腔积液相关的14%的射血分数。获得心包活组织检查，证实了符合德戈斯病的严重血栓性微血管病。也观察到血管C5b-9沉积。然后给予患者依库珠单抗。几乎立即出现患者病况的改善。例如，患者射血分数显著改善。接受依库珠单抗24小时内，去除患者插管并且转移到内科病房。接下来几周内，患者症状良好，他的皮肤损伤外观有客观改善。

病理学从患者获得三套皮肤活组织检查。实施这些活组织检查的时间与治疗干预变更在时间上相关。第一套是在给予患者IVIG或依库珠单抗前从患者获得的，并包括他的皮肤损伤的两个演化阶段。一个活组织检查来自隆起的丘疹性损伤，其显示显著的间充质粘蛋白沉积，这一形态学发现2年前导致最初错误诊断为肿胀红斑狼疮。脉管系统检查显示的异常情况包括内皮细胞肿胀、坏死和分离以及病灶壁和管腔纤维蛋白沉积。典型的德戈斯病伴随的易碎凹陷瘢痕性丘疹的活组织检查显示显著的表皮变薄和具有血管脱落的真皮纤维化。血管显示广泛的闭合性血栓性微血管病，内皮细胞退化/坏死以及内皮细胞脱落到血管腔。所有活组织检查显示缺乏炎症细胞。肠样本显示影响粘膜下层较大口径动脉的广泛闭塞性血管病。

开始IVIG几周后，获得了另一个皮肤活组织检查，对其进行的分析显示持久的皮肤缺血性变化，包括粘蛋白、纤维化和上皮变薄。然而，活性血管损伤程度降低。未观察到含有显著管腔及壁纤维蛋白沉积的血管。

给予依库珠单抗2周后从患者获取另外一套活组织检查(第三套)。活组织检查的组织分析显示含血管脱离的表面纤维组织形成。血管变厚，这反映基底膜区加倍。仅有极少量的血管展示了内皮细胞损伤和血栓形成。

组织样品中干扰素α的评估在内皮细胞、炎性细胞和表皮角化细胞中有大量MxA蛋白表达。

C5b-9免疫荧光研究间接免疫荧光研究显示，在开始IVIG和或依库珠单抗之前的第一套活组织检查的皮肤血管内C5b-9的大量沉积。沉积模式是管腔内和壁两种。沉积程度非常突出，涉及整个真皮的数条血管。尽管IVIG一定程度减少C5b-9沉积，但在得自依库珠单抗治疗后的患者的活组织检查中观察到的C5b-9沉积的程度显著降低。只有三条血管显示壁C5b-9沉积。

电子显微术治疗前获得的活组织检查的组织的超微结构分析，显示表皮角化细胞和在整个真皮的内皮细胞中的大量管状网状结构。内层内皮细胞显示伴随细胞从血管腔脱离的极度退化性变化。血管基底膜区加倍，亦通过胶原沉积显示。

抗内皮细胞抗体测定将在依库珠单抗治疗之前获得的患者血清和依库珠单抗治疗两周之后获得的血清，与皮肤内皮细胞及缀合荧光素的人抗-IgG抗体孵育。在依库珠单抗治疗之前和之后的样品中的大部分内皮细胞中观察到粒状核染色。当患者血清与人脐静脉内皮细胞接触时未观察到染色。

用内皮细胞裂解物进行的蛋白质印迹研究亦在蛋白质印迹分析中使用了治疗前和治疗后的患者血清，以鉴定与患者血清中的人抗人抗体结合的一种或多种蛋白。如上所述，让治疗前和治疗后血清与含有经大小解析的内皮细胞蛋白的膜孵育，并借助缀合荧光素的第二抗体检测抗体与膜蛋白的任何结合。观察到对应于92 kDa分子量的不同免疫反应性条带。在正常对照情形中或在人脐静脉内皮细胞裂解物的蛋白质印迹中没有鉴定到类似的反应性条带。

血清干扰素α水平的评估患者的外周血中的干扰素α水平非常高——测量为20.56，这比得上红斑狼疮患者，为健康患者血液中的干扰素α水平的数倍。

讨论：本文所述患者发展出多病灶性肠、心包、心肌和皮肤缺血，其可归因于显著的内皮细胞损伤。患者的症状符合德戈斯病。用皮肤内皮细胞作为底物，利用间接免疫荧光和蛋白质印迹技术证实存在抗内皮细胞抗体。在蛋白质印迹分析的基础上分离显性抗原表位，但其身份(identity)还不清楚。鉴于抗内皮细胞抗体不与人脐静脉细胞反应的发现，很可能在该患者中观察到的抗内皮细胞抗体具有器官选择性，由此所选的基于内皮细胞的表位的免疫原性具有位点依赖性。

本文所述研究暗示，补体介导的内皮细胞损伤为可能的用依库珠单抗治疗的德戈斯病患者的效应机制。对给予所述药物有引人注目的客观性临床反应与病理反应。

在患者血清及其组织中干扰素α表达显著增加。已知干扰素α上调适应性和先天性免疫，增强任何抗原触发剂的作用。已经报道给予外源性干扰素α为皮肤血栓形成和溃疡形成的起因。患者的外周血中干扰素α的特征与SLE患者中观察到的特征极其相似，尽管其没有系统性红斑狼疮的特异性临床特征。本文所述发现支持抑制德戈斯病的患者的干扰素α可以用于治疗该疾病的结论。

总之，依库珠单抗明确了治疗要不然为致命的德戈斯病的重要的治疗方式。激活补体级联顺序的准确触发剂不清楚。虽然刺激经典的补体级联顺序激活的抗内皮细胞抗体(例如与内皮细胞上存在的92 kDa抗原结合的自身抗体)可能是C5b-9沉积的原因，但在组织损伤的自然过程中表位散布(epitope spreading)的作用排除确立这些抗体的直接因果效应。但是，在患者的临床过程的某个点处，降低这些抗体产生的另外的靶向B细胞的治疗可用于治疗德戈斯病，前提是自身抗体持续存在。

尽管已经参考其特定实施例来阐述本公开内容，但本领域技术人员应当理解，可进行各种变化并可取代等同物，而不背离本公开内容的真正精神和范围。此外，可进行很多修改，以使特定情况、材料、组合物、方法、一个或多个方法步骤适应本公开内容的目的、精神和范围。所有这些修改意欲落入本公开内容范围内。

Claims (52)

1.一种用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括以足够治疗所述疾病的量给予罹患德戈斯病的患者补体抑制剂。

2.一种用于治疗德戈斯病的患者的方法，所述方法包括长期以足够维持罹患德戈斯病的患者降低的补体活性水平的量和频率给予所述患者补体抑制剂，藉此治疗所述疾病。

3.一种用于治疗德戈斯病的方法，所述方法包括：

鉴定患者为罹患或可能罹患德戈斯病的患者；和

以足够治疗所述疾病的量给予所述患者补体抑制剂。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述德戈斯病与B19细小病毒感染或人免疫缺陷病毒感染相关。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述德戈斯病为特发性的。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述德戈斯病病理地影响胃肠道。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述德戈斯病病理地影响中枢神经系统。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述德戈斯病病理地影响心血管系统。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述德戈斯病为多器官全身性德戈斯病。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述德戈斯病对选自以下的至少一种治疗为抗拒的：抗炎剂、抗凝血剂、抗血栓药和静脉注射免疫球蛋白。

11.权利要求10的方法，其中所述抗炎药选自皮质类固醇、苯基丁氮酮、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢菌素、他克莫司和麦考酚酸酯。

12.权利要求10的方法，其中所述抗凝血剂或抗血栓药选自氯吡格雷、阿司匹林和双嘧达莫。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述补体抑制剂选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子。

14.权利要求13的方法，其中所述补体抑制剂选自可溶性CR1、LEX-CR1、MCP、DAF、CD59、因子H、眼镜蛇毒因子、FUT-175、补体结合抑制素和K76 COOH。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述补体抑制剂抑制人补体组分蛋白的表达。

16.权利要求1-14任一项的方法，其中所述补体抑制剂抑制补体组分C1s或补体组分C1r的激活或活性。

17.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述补体抑制剂抑制人补体组分C5、C4、C3或C2的裂解。

18.权利要求17的方法，其中所述补体抑制剂抑制补体组分C5裂解为C5a和C5b片段。

19.权利要求1-13或15-18中任一项的方法，其中所述补体抑制剂是与人补体组分蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。

20.权利要求19的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段与人补体组分C5蛋白结合。

21.权利要求20的方法，其中所述抗体与所述补体组分C5蛋白的α链结合。

22.权利要求20或21的方法，其中所述抗体与人补体组分C5的α链结合，其中所述抗体：(i)在人体液中抑制补体激活；(ii)抑制纯化的人补体组分C5与人补体组分C3b或人补体组分C4b的结合；和(iii)不与人补体激活产物游离C5a结合。

23.权利要求22的方法，其中所述抗体与所述具有SEQ ID NO:1-26中任一个所描述的氨基酸序列的人补体组分C5蛋白结合。

24.权利要求13的方法，其中所述多肽包含与补体组分C5片段C5b结合的抗体或其抗原结合片段。

25.权利要求19-24中任一项的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。

26.权利要求19-25中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)₂片段。

27.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述抑制剂为依库珠单抗。

28.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述抑制剂为培克珠单抗。

29.一种制品，其包含：

含有标签的容器；和

包含补体抑制剂的组合物，其中所述标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。

30.权利要求29的制品，其中所述抑制剂是与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。

31.权利要求29或30的制品，其中所述抑制剂是与人补体组分C5蛋白的片段结合的抗体或其抗原结合片段。

32.权利要求31的制品，其中所述人补体组分C5蛋白片段是C5a或C5b。

33.权利要求29-32中任一项的制品，其进一步包含一种或多种另外的活性剂。

34.权利要求33的制品，其中所述一种或多种另外的活性剂选自抗炎剂、抗凝血剂和抗血栓药。

35.一种用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括以足够治疗所述疾病的量给予罹患德戈斯病的患者干扰素α抑制剂。

36.一种用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括长期以足够维持罹患德戈斯病的患者降低的干扰素α表达水平或活性水平的量和频率给予所述患者干扰素α抑制剂，藉此治疗所述疾病。

37.一种用于治疗德戈斯病的方法，所述方法包括：

鉴定患者为患有或可能患有德戈斯病的患者；和

给予所述患者足够治疗所述疾病的量的干扰素α抑制剂。

38.权利要求35-37中任一项的方法，其中所述德戈斯病是多器官全身型的德戈斯病。

39.权利要求35-38中任一项的方法，其中所述干扰素α抑制剂选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子。

40.权利要求35-39中任一项的方法，其中所述干扰素α抑制剂抑制细胞的干扰素α或干扰素α受体的表达。

41.权利要求35-39中任一项的方法，其中所述干扰素α抑制剂抑制干扰素α或干扰素α受体的活性。

42.权利要求35-39中任一项的方法，其中所述干扰素α抑制剂与干扰素α蛋白结合。

43.权利要求42的方法，其中所述干扰素α抑制剂是与干扰素α蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。

44.权利要求35-39的方法，其中所述干扰素α抑制剂与干扰素α受体结合。

45.权利要求44的方法，其中所述干扰素α抑制剂是与干扰素α受体结合的抗体或其抗原结合片段。

46.权利要求43或45的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。

47.权利要求46的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)₂片段。

48.一种制品，其包含：

包含标签的容器；和

包含干扰素α抑制剂的组合物，其中所述标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。

49.权利要求48的制品，其中所述抑制剂是与干扰素α结合的抗体或其抗原结合片段。

50.权利要求48的制品，其中所述抑制剂是与干扰素α受体结合的抗体或其抗原结合片段。

51.权利要求48-50中任一项的制品，其进一步包含一种或多种另外的活性剂。

52.权利要求51的制品，其中所述一种或多种另外的活性剂选自抗炎剂、抗凝血剂和抗血栓药。