CN102980959A - 豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，豆粕为干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕，包括下述步骤：A、初步提取豆粕与乙醇混合物的上清液；B、进一步提取豆粕与乙醇混合物的上清液；C、过滤上清液；D、检测棉籽糖和水苏糖含量。本发明的优点是：方法操作简便，运行人工成本低；降低了提取的能源损耗，提高了检测准确度和效率。
Description
技术领域
本发明涉及豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，所述豆粕包括干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕，是用液相色谱法检测豆粕中棉籽糖和水苏糖含量，属于精细化工和发酵工程技术领域。
背景技术
棉籽糖和水苏糖属于寡糖，是大豆低聚糖的主要成分，都是由半乳糖、葡萄糖和果糖组成的支链杂低聚糖，是在蔗糖分子的葡萄糖残基一侧以C(-1,6)键上接一个或者2个半乳糖而形成，两种糖都是难消化糖。不良寡糖（水苏糖、棉籽糖）通过干扰畜禽的正常消化和代谢功能而影响动物生产潜能的充分发挥，降低饲料的利用率。
长期以来，检测寡糖的方法有：薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法。其中，薄层色谱法是在纸色谱的基础上发展起来的，以薄层吸附剂为固定相，溶剂为流动相的分离分析技术。改法成本低，速度快，展开所需时间短，但薄层色谱做糖的分离鉴定只在负荷量很小的条件下才能达到满意效果，一般负荷量0.5微克，最大5微克，与气相色谱法、高效液相色谱法等近年来发展起来的分析方法相比，测量误差较大，不易进行定量分析。气相色谱法是以惰性气体为流动相的柱色谱法。该技术具有高效、高速、高灵敏度，样品用量小等优点。但因气相色谱用气体流动相被分析样品必须有一定蒸汽压，气化后才能在柱上分析。糖类没有足够的挥发性，测定时要预先将其制备成易挥发、对热稳定的衍生物。进样口的高温有时会使糖的衍生物分解，甚至可被留在进样口上的残留物催化。因此，在检测的应用上，薄层色谱法和气相色谱法在一定程度上受到了抑制。而高效液相色谱法则因为简便快速、操作方便、前处理简单、分离效果好的特点而被广泛应用。现有检测技术中对未发酵豆粕和已发酵豆粕中的棉籽糖、水苏糖的提取存在提取条件的差异，如用不同乙醇浓度提取、不同水浴温度提取、不同水浴提取时间、不同提取次数、不同固液质量体积比、不同离心转速和离心时间，都对提取率有不同程度的影响。如，用80%乙醇溶液，固液质量体积比为1:10时，70℃恒温水浴提取，提取率仍然达不到90%，因此，需要找到一种有效提取干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕中棉籽糖、水苏糖的提取方法，才能测准干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕中棉籽糖、水苏糖的含量。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法。豆粕为干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕，本方法操作简便，运行人工成本低；降低了提取的能源损耗，提高了检测准确度和效率。
本发明的技术方案是：豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其豆粕为干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕，包括下述步骤：
A、初步提取豆粕与乙醇混合物的上清液：先按准备豆粕，再准备一定浓度的乙醇溶液，再将该两种原料按一定比例投入水浴振荡器中振荡一段时间，再用离心机对经振荡处理的混合物进行离心沉淀，然后首次提取上清液；
B、进一步提取豆粕与乙醇混合物的上清液：将A步骤振荡处理后的残余混合物固体等同于A步骤的豆粕，然后以A步骤相同操作：将两种原料按一定比例投入水浴振荡器中振荡一段时间， 再用离心机对经振荡处理的混合物进行离心沉淀，最后再次提取上清液；
C、过滤上清液：将A步骤和B步骤所提取的上清液进行混合、浓缩、定容，然后用滤膜过滤，得到过滤液；
D、检测棉籽糖和水苏糖含量：提取一定量的C步骤的过滤液，然后将过滤液通过液相色谱仪用一定浓度的乙腈水溶液作为流动相，以氨基柱为色谱分离柱，用棉籽糖和水苏糖标准品做标准曲线进行外标法检测，最后得出豆粕中的棉籽糖和水苏糖含量。
进一步的技术方案是：
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其水浴振荡器中的豆粕与一定浓度的乙醇溶液比为：按重量克计的豆粕 ：按毫升计的一定浓度的乙醇溶液＝1：15～25；所述乙醇溶液浓度为75～85%。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其水浴振荡器中温度为恒温，选值范围为65～75℃；振荡时间为25～40分钟。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其离心机的转速为4000～6000转/分钟，离心沉淀时间为5～20分钟。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其滤膜过滤是用0.40～0.50微米滤膜过滤。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其A步骤所取的上清液的量与B步骤所取的上清液的量相同，均为10～50 微升。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其D步骤中，过滤液是通过液相色谱仪用60～75%的乙腈水溶液作为流动相，工作温度为恒温。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其D步骤中用于液相色谱检测的所述过滤液的量为8～50 微升。
所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其流动相流速为0.5～2毫升/分钟，工作温度为恒温，选值范围为30～40℃。
本发明的技术效果显著：提高了提取棉籽糖、水苏糖提取率，能达到90%及以上；降低了提取的能源损耗，提高了豆粕和发酵豆粕中棉籽糖和水苏糖的检测准确度和效率。使用本发明的方法，用Hypersil—氨基柱（150×4.6mm，5μm）分离柱检测，最后得出豆粕中的棉籽糖和水苏糖含量回收率可达98%以上，相对标准偏差在1%以下。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步说明如下：
实施例1：为本发明的基本实施例。豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其豆粕为干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕，包括下述步骤：A、初步提取豆粕与乙醇混合物的上清液：先按准备豆粕，再准备一定浓度的乙醇溶液，再将该两种原料按一定比例投入水浴振荡器中振荡一段时间，再用离心机对经振荡处理的混合物进行离心沉淀，然后首次提取上清液；B、进一步提取豆粕与乙醇混合物的上清液：将A步骤振荡处理后的残余混合物固体等同于A步骤的豆粕，然后以A步骤相同操作：将两种原料按一定比例投入水浴振荡器中振荡一段时间， 再用离心机对经振荡处理的混合物进行离心沉淀，最后再次提取上清液；C、过滤上清液：将A步骤和B步骤所提取的上清液进行混合、浓缩、定容，然后用滤膜过滤，得到过滤液；D、检测棉籽糖和水苏糖含量：提取一定量的C步骤的过滤液，然后将过滤液通过液相色谱仪用一定浓度的乙腈水溶液作为流动相，以氨基柱为色谱分离柱，用棉籽糖和水苏糖标准品做标准曲线进行外标法检测，最后得出豆粕中的棉籽糖和水苏糖含量。
实施例2：为优选的实施例，与实施例1不同的是：所述水浴振荡器中的豆粕与一定浓度的乙醇溶液比为：按重量克计的豆粕 ：按毫升计的一定浓度的乙醇溶液＝1：15～25；所述乙醇溶液浓度为75～85%。所述水浴振荡器中温度为恒温，选值范围为65～75℃；振荡时间为25～40分钟。
实施例3：为优选的实施例，与实施例2不同的是：所述滤膜过滤是用0.40～0.50微米滤膜过滤。所述A步骤所取的上清液的量与B步骤所取的上清液的量相同，均为10～50 微升。所述D步骤中，过滤液是通过液相色谱仪用60～75%的乙腈水溶液作为流动相，工作温度为恒温。D步骤中用于液相色谱检测的所述过滤液的量为8～50 微升。所述流动相流速为0.5～2毫升/分钟，工作温度为恒温，选值范围为30～40℃。
实施例4：为优选的实施例，与实施例3不同的是：所述离心机的转速为4000～6000转/分钟，离心沉淀时间为5～20分钟。
实施例5：为优选的实施例，在实施例1的基础上，本实施例所述水浴振荡器中的豆粕与一定浓度的乙醇溶液比，按重量克计的豆粕 ：按毫升计的一定浓度的乙醇溶液＝1：20；按所述比例操作，投入水浴振荡器中的豆粕为10克，80%浓度的乙醇溶液为200毫升。所述水浴振荡器中温度为70℃恒温；振荡时间为30分钟。离心机的转速为5000转/分钟，离心沉淀时间为10分钟。用0.45微米滤膜过滤。A步骤所取的上清液的量与B步骤所取的上清液的量相同，均为15 微升。D步骤中，过滤液是通过液相色谱仪用68%的乙腈水溶液作为流动相，流动相流速为1毫升/分钟，工作温度为35℃恒温。用于液相色谱检测的所述过滤液的量为10 微升。本实施例实测含棉籽糖1.95%，含水苏糖2.48%。经校验，棉籽糖和水苏糖提取率达95%，最后得出豆粕中的棉籽糖和水苏糖含量回收率达99%，相对标准偏差为0.3%。
本发明权利要求保护范围不限于上述实施例。
Claims (9)
1.豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，豆粕为干的未发酵豆粕和/或干的已发酵豆粕，包括下述步骤：
A、初步提取豆粕与乙醇混合物的上清液：先按准备豆粕，再准备一定浓度的乙醇溶液，再将该两种原料按一定比例投入水浴振荡器中振荡一段时间，再用离心机对经振荡处理的混合物进行离心沉淀，然后首次提取上清液；
B、进一步提取豆粕与乙醇混合物的上清液：将A步骤振荡处理后的残余混合物固体等同于A步骤的豆粕，然后以A步骤相同操作：将两种原料按一定比例投入水浴振荡器中振荡一段时间， 再用离心机对经振荡处理的混合物进行离心沉淀，最后再次提取上清液；
C、过滤上清液：将A步骤和B步骤所提取的上清液进行混合、浓缩、定容，然后用滤膜过滤，得到过滤液；
D、检测棉籽糖和水苏糖含量：提取一定量的C步骤的过滤液，然后将过滤液通过液相色谱仪用一定浓度的乙腈水溶液作为流动相，以氨基柱为色谱分离柱，用棉籽糖和水苏糖标准品做标准曲线进行外标法检测，最后得出豆粕中的棉籽糖和水苏糖含量。
2.根据权利要求1所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，水浴振荡器中的豆粕与一定浓度的乙醇溶液比为：
按重量克计的豆粕 ：按毫升计的一定浓度的乙醇溶液＝1：15～25；
所述乙醇溶液浓度为75～85%。
3.根据权利要求1所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，水浴振荡器中温度为恒温，选值范围为65～75℃；振荡时间为25～40分钟。
4.根据权利要求1所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，离心机的转速为4000～6000转/分钟，离心沉淀时间为5～20分钟。
5.根据权利要求1所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，滤膜过滤是用0.40～0.50微米滤膜过滤。
6.根据权利要求1所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，A步骤所取的上清液的量与B步骤所取的上清液的量相同，均为10～50 微升。
7.根据权利要求1所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，D步骤中，过滤液是通过液相色谱仪用60～75%的乙腈水溶液作为流动相，工作温度为恒温。
8.根据权利要求7所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，D步骤中用于液相色谱检测的所述过滤液的量为8～50 微升。
9.根据权利要求7所述豆粕中棉籽糖和水苏糖含量的检测方法，其特征在于，流动相流速为0.5～2毫升/分钟，工作温度为恒温，选值范围为30～40℃。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108982718A (zh) * | 2018-07-30 | 2018-12-11 | 湖北邦之德牧业科技有限公司 | 一种发酵豆粕指纹图谱构建方法及其在品质控制中的应用 |
| CN108982699A (zh) * | 2018-08-09 | 2018-12-11 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种测定发酵豆粕中水苏糖含量的方法 |
| US11358909B2 (en) * | 2020-04-15 | 2022-06-14 | Innovations for World Nutrition, LLC | Fertilizer containing a seed grind and a method of using the fertilizer to enhance plant growth |
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| 宋志峰 等: "吉林省部分大豆品种(系)低聚糖含量分析", 《大豆科学》 * |
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