CN102973634A - 金银花提取方法 - Google Patents

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周英
林冰
王慧娟
赵致
俸婷婷
刘雄利
陈琳
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Abstract

本发明公开了一种金银花提取方法，将干燥金银花切成约2cm的段，加入提取溶剂中浸渍，然后进行回流提取；金银花与提取溶剂的液料比为1：10～15，回流提取温度为55～95℃，提取次数为2～3次，每次提取时间为0.5～2小时；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行干燥后，获得金银花提取物。本发明对水提法及醇提法的工艺参数进行优选，提高了金银花提取的浸膏得率，并提高了浸膏中绿原酸的含量，而且本发明工艺条件简单，易于产业化，生产质量容易控制，成本低廉。本发明方法简单，使用效果好。

Description

金银花提取方法
技术领域
本发明涉及提取工艺，尤其是一种金银花提取方法。 
背景技术
金银花为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)忍冬LonicerajaponicaThunb.植物的干燥花蕾，为中医常用药，具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能。几千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果。 
目前，金银花提取物广泛用于加工各种金银花产品，而金银花提取物中主要的活性成分为绿原酸，别的药性成分还有黄酮类、挥发油等。如何提高金银花提取物中的绿原酸的含量则是一个难题。现在金银花通常的提取方法有水提法、醇提法及酶解法，提取获得的金银花提取物的绿原酸得率及浸膏得率，是判断提取工艺优劣的重要指标。 
发明内容
本发明的目的是：提供一种金银花提取方法，它获得的金银花提取物中，绿原酸得率及浸膏得率都非常理想。 
本发明是这样实现的：金银花提取方法，其特征在于：将干燥金银花切成1～3cm的段，加入提取溶剂中浸渍，然后进行回流提取；金银花粉末与提取溶剂的液料比为1：10～15，回流提取温度为55～95℃，提取次数为2～3次，每次提取时间为0.5～2小时；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行干燥后，获得金银花提取物。 
在第一次提取前先冷浸0.5h，再进行加热回流提取。目的使金银花组织细胞膨胀, 易于有效成分浸出，从而获得更高的提取率。 
对滤液减压浓缩在真空度0.07MPa下进行，浓缩温度为50～85℃。 
将浓缩液进行干燥的方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。 
所述的提取溶剂为水或乙醇，乙醇的质量百分比浓度为50～80%。 
第一次回流提取的料液比为1：13～15，第二次回流提取及第三次回流提取的料液比均为1：10。 
为了进一步验证本发明的技术效果，特进行以下实验。 
1.1实验设计 
以绿原酸得率及浸膏得率为指标，优选出金银花提取的实验室最佳工艺。
材料、仪器和试剂
1.2.1材料
金银花原材料由贵州道真千山药业提供。
1.2.2仪器 
RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）
RE-6000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）
SHZ-95B型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）
KA-1000A型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）
SG8200HPT型超声波清理器（上海冠特超声仪器有限公司）
FA2004型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）
DGG-9246电热鼓风干燥箱（上海齐心仪器有限公司）
HH-S2s数显恒温水浴锅（金坛市大地自动仪器厂）
BCD-525S型冰箱（青岛海尔）
DZF-6020型真空干燥箱（上海博讯实业有限公司）
安捷伦1260高效液相仪
1.2.3 试剂
绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院）
木犀草苷对照品（中国食品药品检定研究院）
医用酒精（重庆川东化工集团有限公司）
蒸馏水（贵州大学生化工程中心）
乙腈（色谱纯）
1.3含量测量方法
样品中绿原酸及木犀草苷的含量均按《中国药典》2010年版金银花项下方法进行。
色谱条件：C18柱，乙腈－0.4%磷酸溶液（13：78）为流动相，检测波长327nm。 
计算方法
1.4.1浸膏得率
Figure 508709DEST_PATH_IMAGE001
1.4.2绿原酸含量和绿原酸得率
绿原酸含量指的是浸膏干燥物中绿原酸的含量。
Figure 19325DEST_PATH_IMAGE002
单因素考察
1.5.1水提单因素考察
以水为提取溶剂，分别考察提取温度、提取时间、提取次数及投料比对提取结果的影响。
1.5.1.1提取温度考察： 
投料：金银花药材10g；
相同条件：料液比为1:10，提取时间为1h，提取次数为一次；
不同条件：温度分别为55、65、75、85、95℃，每个条件做两组平行。结果见表1.1。
表1.1 温度对水提取结果的影响 
Figure 861379DEST_PATH_IMAGE003
由表1.1可知，当提取温度为85℃时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
1.5.1.2提取时间考察： 
投料：金银花药材）10g；
相同条件：料液比为1:10，提取温度为75℃，提取次数为一次；
不同条件：提取时间分别为0.5、1、1.5、2h，每个条件做两组平行。结果见表1.2。
表1.2 时间对水提取结果的影响 
Figure 256588DEST_PATH_IMAGE004
由表1.2可知，当提取时间为1.5h时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
1.5.1.3提取次数考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：料液比为1:10，提取温度为75℃，提取时间为1h；
不同条件：提取次数分别为1、2、3次，每个条件做两组平行。结果见表1.3：
表1.3 提取次数对水提取结果的影响
由表1.3可知，当提取次数为3次时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
1.5.1.4投料比考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：提取时间为1h，提取温度为75℃，提取次数为一次；
不同条件：料液比分别为1:5、1:10、1:15、1:20，每个条件做两组平行。结果见表1.4。
表1.4 投料比对水提取结果的影响 
Figure 362265DEST_PATH_IMAGE006
由表1.4可知，当投料比为1:15时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
1.5.2 醇提单因素考察 
以一定浓度的醇为提取溶剂，分别考察提取温度、提取时间、提取次数、投料比及醇浓度对提取结果的影响。
1.5.2.1提取温度考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：70%醇，料液比为1:10，提取时间为1h，提取次数为一次；
不同条件：温度分别为50、60、70、80、90℃，每个条件做两组平行。结果见表1.5。
表1.5 温度对醇提取结果的影响 
Figure 222773DEST_PATH_IMAGE007
由表1.5可知，当提取温度为80℃时，浸膏得率最高，提取温度为90℃时绿原酸得率最高，但与80℃时的得率相差不大。
1.5.2.2 提取时间考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：70%醇，料液比为1:10，提取温度为80℃，提取次数为一次；
不同条件：提取时间分别为0.5、1、1.5、2h，每个条件做两组平行。结果见表1.6。
表1.6 时间对醇提取结果的影响 
由表1.6可知，当提取时间为1.5h时，绿原酸得率最高，当提取温度为2h时，浸膏得率最高，但与1.5h时的得率相差不大。
1.5.2.3 提取次数考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：70%醇，料液比为1:10，提取温度为80℃，提取时间为1h；
不同条件：提取次数分别为1、2、3次，每个条件做两组平行。结果见表1.7。
表1.7 次数对醇提取结果的影响 
Figure 559394DEST_PATH_IMAGE009
由表1.7可知，当提取次数为两次时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
1.5.2.4 投料比考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：70%醇，提取时间为1h，提取温度为80℃，提取次数为一次；
不同条件：料液比分别为1:5、1:10、1:15、1:20，每个条件做两组平行。结果见表1.8。
表1.8 投料比对醇提取结果的影响 
Figure 146233DEST_PATH_IMAGE010
由表1.8可知，当投料比为1:20时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
1.5.2.5 醇浓度考察 
投料：金银花药材10g；
相同条件：料液比为1:10，提取温度为80℃，提取时间为1h，提取次数为一次；
不同条件：醇浓度分别为50%、60%、70%、80%，每个条件做两组平行。结果见表1.9。
表1.9 醇浓度对醇提取结果的影响 
Figure 369404DEST_PATH_IMAGE011
由表1.9可知，当醇浓度为70%时，浸膏得率及绿原酸得率最高。
正交试验
1.6.1 水提正交结果
根据单因素实验结果，固定提取次数为两次，选择三因素三水平正交表进行正交实验，每次实验均进行三次，取平均值计算，选择最佳提取条件。实验因素及水平见表1.10，以绿原酸含量及浸膏得率为考察指标的结果分别见表1.11及表1.10。
表1.10 金银花水提实验因素水平表 
Figure 106416DEST_PATH_IMAGE012
表1.11  金银花水提三因素三水平正交表，以绿原酸含量为考察指标
Figure 223276DEST_PATH_IMAGE013
表1.12  金银花水提三因素三水平正交表，以浸膏得率为考察指标
Figure 653120DEST_PATH_IMAGE014
由正交试验结果得水提最佳工艺如下：
以绿原酸含量为指标的最佳提取工艺为A1B1C1，即溶剂为水，料液比是1:10，提取时间1.0h，提取温度为75℃，提取次数两次，其中第一次提取前冷浸0.5h。
以浸膏得率为指标的最佳提取工艺为A3B2C3，即溶剂为水，料液比是1:20，提取时间是1.5h，提取温度为95℃，提取次数两次，其中第一次提取前冷浸0.5h。 
1.6.2      醇提正交结果 
根据单因素实验结果，固定提取次数为两次，选择四因素三水平正交表
进行正交实验，每次实验均进行三次，取平均值计算，选择最佳提取条件。实验因素及水平见表1.13，以绿原酸含量及浸膏得率为考察指标的结果分别见表1.14及表1.15。
                   表1.13  金银花醇提实验因素水平表 
Figure 425904DEST_PATH_IMAGE015
表1.14  金银花醇提四因素三水平正交表，以绿原酸含量为考察指标
Figure 701028DEST_PATH_IMAGE016
表1.15  金银花醇提四因素三水平正交表，以浸膏得率为考察指标
Figure 937974DEST_PATH_IMAGE017
由正交试验结果得醇提最佳工艺如下：
以绿原酸含量为指标的最佳提取工艺为A3B1C3D2，即溶剂为70%醇，料液比为1:10，提取时间2.0h，提取温度为80℃，提两次，其中第一次提取前冷浸0.5h。
以浸膏得率为指标的最佳提取工艺为A3B2C1D3：溶剂为70%醇，料液比是1:15，提取时间是1.0h，提取温度为90℃，提两次，其中第一次提取前冷浸0.5h。 
2.1 对上述实验优选出的金银花提取工艺进行中试验证。通过生产同步验证确认提取生产工艺是否具有操作性、稳定性和重现性。 
材料、仪器和试剂
2.2.1材料
金银花原材料由贵州道真千山药业提供。
2.2.2仪器 
中试生产线（温州天龙设备厂）
密度计
切片机
真空微波干燥仪
2.2.3 试剂
乙醇（95%）
蒸馏水（贵州大学生化工程中心）
2.3 吸水率考察
称取金银花药材约10g，加入溶剂150g，浸泡一定时间后，用200目尼龙滤布滤过，称量吸水后的金银花质量，按下式计算吸水率，实验重复三次，取平均值。
Figure 273141DEST_PATH_IMAGE018
2.3.1冷浸吸水率 
以水和70%乙醇为溶剂，吸水率实验结果见表2.1。
表2.1. 金银花冷浸吸水率实验数据 
Figure 533221DEST_PATH_IMAGE019
由表2.1可知，以水和70%乙醇为溶剂冷浸，金银花的吸水率均约为300%。
2.3.2 热浸吸水率 
称取金银花药材约10g，分别加150g 溶剂，冷浸30min之后再加热回流90min，测其吸水率，结果见表2.2。
表2.2 金银花热浸吸水率实验数据 
Figure 205510DEST_PATH_IMAGE020
由表2.2可知，以水溶剂冷浸30分钟后再加热回流90分钟，金银花的吸水率约为400%；以70%乙醇为溶剂冷浸30分钟后再加热回流90分钟，金银花的吸水率约为300%。
金银花提取生产工艺验证流程
金银花提取生产工艺流程示意图见图1： 
2.5.2 金银花浸渍工序 
将切碎后的金银花置提取罐内，加入蒸馏水140kg，浸渍30min，试验记录见表2.3。
表2.3. 金银花水提浸渍试验记录 
Figure 172329DEST_PATH_IMAGE021
2.5.3 金银花回流提取工序
    对浸渍后的金银花进行加热回流提取，第一次提取完成后，用200目工业尼龙滤布滤出提取液，继续向提取罐中加入提取溶剂加热回流提取。每次提取时间均为90min，合并两次滤液。试验记录见表2.4。
表2.4 金银花水提回流提取试验记录 
Figure 943976DEST_PATH_IMAGE022
2.5.4 滤液浓缩工序
金银花提取液的滤液经过两次浓缩。试验记录见表2.5。
表2.5 金银花水提滤液浓缩试验记录 
Figure 956932DEST_PATH_IMAGE023
2.5.5 浸膏干燥工序
     金银花提取物浸膏经真空微波干燥得到干燥物。试验记录见表2.6。 
表2.6 金银花水提浸膏干燥试验记录 
Figure 432912DEST_PATH_IMAGE024
2.5.6 含量检测
浸膏干燥物中绿原酸及木犀草苷的含量按“第一部分1.3”项下进行。结果见表2.7。
表2.7 金银花水提浸膏干燥物中绿原酸及木犀草苷的含量（质量百分比） 
Figure 785396DEST_PATH_IMAGE025
2.6 金银花醇提取生产过程
2.6.1 金银花切碎工序
    称取金银花10kg，用切片机切成约2cm的段，备用。
2.6.2 金银花浸渍工序 
将切碎后的金银花置提取罐内，加入70%乙醇130kg，
浸渍30min，试验记录见表2.8。
表2.8 金银花醇提浸渍试验记录 
Figure 196786DEST_PATH_IMAGE026
2.6.3 金银花回流提取工序
    对浸渍后的金银花进行加热回流提取，第一次提取完成后，用200目工业尼龙滤布滤出提取液，继续向提取罐中加入提取溶剂加热回流提取。每次提取时间均为90min，合并两次滤液。试验记录见表2.9。
表2.9 金银花醇提回流提取试验记录 
Figure 697038DEST_PATH_IMAGE027
2.6.4 滤液浓缩工序
金银花提取液的滤液经过两次浓缩。试验记录见表2.10。
表2.10 金银花醇提滤液浓缩试验记录 
2.6.5 浸膏干燥工序
     金银花提取物浸膏经真空微波干燥得到干燥物。试验记录见表2.11。 
表2.11金银花醇提浸膏干燥试验记录 
2.6.6 含量检测
浸膏干燥物中绿原酸及木犀草苷的含量按“第一部分1.3”项下进行。结果见表2.12。
表2.12 金银花醇提浸膏干燥物中绿原酸及木犀草苷的含量 
Figure 777709DEST_PATH_IMAGE030
由于采用了上述技术方案，本发明对水提法及醇提法的工艺参数进行优选，提高了金银花提取的浸膏得率，并提高了浸膏中绿原酸的含量，浸膏干燥物得率达30%以上，浸膏干燥物中绿原酸含量达12%以上。而且本发明工艺条件简单，易于产业化，生产质量容易控制，成本低廉。本发明方法简单，使用效果好。
附图说明
图1为金银花提取生产工艺流程图。 
具体实施方式
本发明的实施例1：金银花提取方法，将干燥金银花切成2cm的段，选用蒸馏水作为提取溶剂，将金银花加入提取溶剂中浸渍0.5h，然后进行回流提取；提取温度为75℃，提取次数为2次，每次提取时间为1小时，第一次回流提取的料液比为1：15，第二次回流提取的料液比均为1：10；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行真空微波干燥后，获得金银花提取物。 
本发明的实施例2：金银花提取方法，将干燥金银花切成1cm的段，选用蒸馏水作为提取溶剂，将金银花加入提取溶剂中浸渍0.5h，然后进行回流提取；提取温度为95℃，提取次数为2次，每次提取时间为1.5小时，第一次回流提取的料液比为1：13，第二次回流提取的料液比均为1：10；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行冷冻干燥后，获得金银花提取物。 
本发明的实施例3：金银花提取方法，将干燥金银花切成3cm的段，选用质量百分比为70%的乙醇作为提取溶剂，将金银花加入提取溶剂中浸渍0.5h，然后进行回流提取，回流提取温度为80℃，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，第一次回流提取的料液比为1：15，第二次回流提取的料液比均为1：10；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行真空干燥后，获得金银花提取物。 
本发明的实施例4：金银花提取方法，将干燥金银花切成约2cm的段，选用质量百分比为80%的乙醇作为提取溶剂，将金银花加入提取溶剂中浸渍0.5h，然后进行回流提取，回流提取温度为90℃，提取次数为2次，每次提取时间为1小时，第一次回流提取的料液比为1：13，第二次回流提取的料液比均为1：10；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行喷雾干燥后，获得金银花提取物。 

Claims (6)

1.一种金银花提取方法，其特征在于：将干燥金银花切成1～3cm的段，加入提取溶剂中浸渍，然后进行回流提取；金银花与提取溶剂的液料比为1：10～15，回流提取温度为55～95℃，提取次数为2～3次，每次提取时间为0.5～2小时；将提取物进行过滤后，合并滤液；再将滤液进行减压浓缩，将浓缩液进行干燥后，获得金银花提取物。
2.根据权利要求1所述的金银花提取方法，其特征在于：在第一次提取前先冷浸0.5h，再加热回流提取。
3.根据权利要求1所述的金银花提取方法，其特征在于：对滤液减压浓缩在真空度0.07MPa下进行，浓缩温度为50～85℃。
4.根据权利要求1所述的金银花提取方法，其特征在于：将浓缩液进行干燥的方式为微波干燥、冷冻干燥、真空干燥或喷雾干燥。
5.根据权利要求1所述的金银花提取方法，其特征在于：所述的提取溶剂为水或乙醇，乙醇的质量百分比浓度为50～80%。
6.根据权利要求1所述的金银花提取方法，其特征在于：第一次回流提取的料液比为1：13～15，第二次回流提取及第三次回流提取的料液比均为1：10。
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