CN102971336B - 用作药物、特别是用于治疗癌症的肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及具有序列SEQ.1：INWLKIAKKVAGML-NH₂的肽及其一种或多种选自SEQ.2至SEQ.25的变体，或其混合物中的一种。具体地，所述肽被用作药物，特别是用于治疗癌症。本发明还涉及包含所述肽的药物组合物。

Description

用作药物、特别是用于治疗癌症的肽

本发明涉及包含至少一种特殊肽的药物组合物，及其作为药物在治疗癌症中的应用。

对于癌症的治疗而言，通常存在三种类型的疗法：以移除肿瘤为目的的手术、以通过射线破坏肿瘤为目的的放射疗法、和药物治疗（化学疗法）。手术和放射疗法为患者难以忍受的彻底性治疗。此外，由于这三种治疗是互补的，因此，通常它们必须联合使用。它们必须在程序化策略的背景下联合使用。

关于药物治疗，它们的目的是通过施用抗癌药物来治疗不仅仅是受影响的器官，并且还有全身。因此，与仅在局部治疗肿瘤的手术和放射疗法不同，只有药物治疗具有全身性作用，这使得有可能治疗已经扩散或正在扩散过程中的肿瘤。存在几种类型的药物治疗：细胞毒化学疗法和激素疗法是最常规的；免疫疗法、基因疗法和非细胞毒疗法尚处于研究过程中。

文献WO00/02581涉及一种肽在生产旨在治疗或预防癌症的药物中的应用，所述肽具体由序列EARPALLTSRLRFIPK、DGLRPIVNMDYVVGAR、GVPEYGCVVNLRKTVVNF、ILAKFLHVVL或ELLRSFFYV组成。

来自BiochimicaetBiophysicaActa,2008,2797至2805页的由BibianaMonsondeSouza和MarioSergioPalma发表的出版物“通过将氢/氘交换与电喷雾电离质谱组合来监测聚阳离子短肽在脂质双层模型中的定位（Monitoringthepositioningofshortpolycationicpeptidesinmodellipidbilayersbycombininghydrogen/deuteriumexchangeandelectrosprayionizationmassspectrometry）”描述了电喷雾电离质谱在分析Apoica-MPINWLKIAKKVAGML-NH2肽的氢/氘交换性质中的应用。

尽管该领域中已有深入的研究，但目前还没有药物能够同时有效地治疗癌症并保护人或动物体的健康细胞。目前的化学疗法总是引起严重程度或大或小的副作用。

本发明的目的是提出能够避免全部或部分这些副作用的新的肽类药物和新的药物组合物。

为达到该效果，本发明的主题是包含至少一种选自序列SEQ.2至SEQ.25的序列的肽。

本发明还涉及包含至少一种选自序列SEQ.1至SEQ.25的序列的肽，所述肽用作药物。

优选地，序列SEQ.1至SEQ.25的肽被用于治疗癌症。

具体地，被用作治疗癌症的活性成分的肽的序列如下所示（表I）：

表I

申请人对SEQ.1至SEQ.25这些肽的研究有可能出人意料地证实，这些肽对癌细胞具有细胞毒活性，同时对待治疗的宿主的细胞具有非常弱的毒性或者无毒性。事实上，本发明的活性肽特异性地改变癌细胞的微管。

微管是细胞骨架的三个丝状网络之一的组成成分，是复杂的、不稳定的聚合物，微管的基本单元是α-和β-微管蛋白二聚体。例如，它们负责多种细胞运动、轴突运输、或运动性，特别是，它们提供用于形成有丝分裂纺锤体的基本材料。微管不断地重新形成不同长度的中空管。因此，通过破坏癌细胞的微管动力学，本发明的肽还起到阻止癌细胞增殖的抗有丝分裂剂的作用（减慢或阻止癌细胞的有丝分裂）。

本发明的活性肽还显现出特异性地改变癌细胞的质膜，并且显现出在宿主生物体的健康细胞中不引起这些相同的改变。这可以通过以下这一事实得到解释：由于所述活性肽具有聚阳离子的性质，因此它们会作用在富含负电荷的癌细胞的质膜上。

因此，本发明的活性肽作用在两种不同的细胞隔室上：癌细胞的细胞内的细胞骨架和质膜。

仅包含10至14个氨基酸的活性肽还具有非常容易合成的优点。

优选地，表I中所引用的肽被用作治疗癌症的药物，具体地，可有效地治疗乳腺癌、胶质母细胞瘤、脑癌、子宫颈癌、结直肠癌、皮肤癌、子宫内膜癌、胃癌、肝癌、和胃肠道间质癌、恶性血液病（白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤（霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤）、肝细胞癌、卡波西氏肉瘤、喉癌、间皮瘤、食管癌、眼癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、皮肤（特别是口腔）癌、肺癌、前列腺癌、横纹肌肉瘤、肾癌、乳腺癌、睾丸癌和甲状腺癌、软组织癌、膀胱癌、骨髓瘤（骨癌）和浆细胞瘤。

根据本发明的另一个特点，通过化学合成产生序列SEQ.1至SEQ.25的肽。

本发明的另一个目的涉及包含上文所定义的肽之一的药物组合物。

有利地，所述组合物是水性悬浮液或溶液形式，或者是干燥状态的未包衣或包衣片剂形式，例如丸剂、凝胶胶囊、胶囊或者粉末。

如果所述药物组合物处于干燥状态，则它可以与一种或多种惰性稀释剂例如淀粉、纤维素、蔗糖、乳糖或二氧化硅等混合。它在干燥状态下还可以包含其他物质，例如一种或多种润滑剂如硬脂酸镁或滑石粉、着色剂、包衣（糖包衣片剂）或清漆。

如果本发明的药物组合物是液体形式，则它可以包括含有惰性稀释剂例如水、乙醇、甘油、植物油或液体石蜡的可药用的溶液、悬浮液、乳剂、糖浆剂和酏剂。所述药物组合物还可以包含除稀释剂以外的其他液体物质，例如润湿剂、甜味剂、增稠剂、调味剂或稳定剂产品。

优选地，所述组合物任选与可药用的无毒惰性赋形剂或介质组合，其特征在于，可以以皮肤、透皮或经皮；口服；胃肠外；鼻或支气管应用的形式局部施用所述组合物。

优选地，用于胃肠外施用的药物组合物可以是水性或非水性溶液、悬浮液或乳剂。这些制剂由作为溶剂或介质的水、丙二醇、植物油特别是橄榄油和芝麻油、可注射的有机酯例如油酸乙酯、或其他合适的有机溶剂制成。所述药物组合物还可以含有佐剂，特别是润湿剂、等渗剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。

对于局部施用来说，有利地，以软膏、乳膏、凝胶或斑贴的形式施用所述药物。

具体地，所述药物组合物是无菌的。

可以以多种方式进行灭菌，例如通过无菌过滤、通过在组合物中掺入杀菌剂、通过照射或通过加热。所述药物还可以被制备为无菌固体组合物的形式，所述无菌固体组合物在使用时可以被溶解在无菌水或任何其他可注射的无菌介质中。

另外，所述药物组合物可被单独使用或在给定的治疗中与其他药物联合使用，或者与放射疗法或手术联合。

在以下结合附图描述本发明的一个纯粹以非限制性说明的方式给出的具体实施方式的过程中，本发明将得到更清晰的理解，并且本发明的其它目的、细节、特点和优点将显得更加清楚。出于说明的目的，还提供了药物检测的实施例，但它们绝不应被解释为限制本发明的范围。

在这些图中:

-图1表示肽SEQ.1在23.3μM、46.6μM、70μM和93.3μM剂量下对健康大鼠脑微管的聚合的影响，以及还有未接受肽SEQ.1的对照样品的影响。具体地，图1表示在肽SEQ.1存在或不存下通过测量345nm波长下的光密度进行定量的作为以分钟为单位的时间的函数的大鼠脑微管体外聚合的变化；

-图2表示肽SEQ.1在46.6μM、70μM、93.3μM和116μM剂量下对健康大鼠脑微管的稳定性的影响，这是通过将在37°C下预先组装15分钟的微管在4°C下处理30分钟而引起的微管解聚百分数进行评估的；

-图3表示用15μM肽SEQ.1处理的和未用该肽处理（对照，0μM)的A549细胞系（肺癌）、用15μM肽SEQ.1处理的和未用该肽处理（对照）的NMT-1细胞系、以及用15μM肽SEQ.1处理的和未用该肽处理（对照）的PANC-1细胞系（胰腺癌）的照片；

-图4表示用15μM肽SEQ.1处理的和未用该肽处理（对照）的非肿瘤细胞系FIBRO1和FIBRO2（成纤维细胞）的照片；

-图5表示的四张图表示了作为肽SEQ.1浓度的函数的多种细胞系的存活率：T（Cos肾细胞系）、G（A549肺细胞系）、C（HepG2肝细胞系）、R（PANC1胰腺细胞系）、S（MiaPaCa胰腺细胞系）、X（H295R肾上腺细胞系）、Y（MNT-1黑色素瘤细胞系）、白血病淋巴细胞系L1（HL60）、L3（U937）、L4（NB4）、L5（MenoMac6）和正常淋巴细胞系L6；

-图6表示的A549癌细胞（肺癌）的四张相差图像显示了它们在肽SEQ.1不存在下的形态（对照图像A和B）以及它们由15μM肽SEQ.1引起的形态改变（图像C拍摄于注射肽SEQ.1后4小时，图像D拍摄于注射肽SEQ.1后2小时）；以及

-图7是示出了肽SEQ.1（浓度为15μM）对A549癌细胞的基质粘附性丧失的影响随时间变化的图。

A)材料和方法

A1)肽SEQ.1至SEQ.25的合成与纯化

通过使用N-9-氟代苯基甲氧基羰基和NovasynTGS树脂手动分离固相合成来制备所述肽。侧链保护的基团包括丝氨酸的叔丁基和赖氨酸的叔丁氧基羰基。为了制备具有乙酰化的Ｎ末端残基的肽，在连接了最后的氨基酸残基后，将乙酸酐加入到树脂-肽复合物中，并保持搅拌1小时以促进乙酰化。

通过用浓度为10mL.g-1的三氟乙酸/1,2-乙二硫醇/苯甲醚/苯酚/水（体积比82.5:2.5:5:5:5）在室温下处理2小时来剪切所述树脂-肽复合物。随后进行过滤以去除树脂。然后加入4°C的乙醚，使粗肽沉淀，随后在室温下以1000g离心15分钟后收集粗肽。随后将粗肽溶解在水中，并使用ShiseidoC-18半制备柱（250mmx10.0mm；5μm）在用含有0.1%（v/v）TFA的40%（v/v）乙腈以2mL/min的速率恒溶剂洗脱下通过RP-HPLC进行层析分离。用UV-DAD检测器（紫外线二极管阵列检测器）（Shimadzu，型号SPD-M10A）在215nm下调节洗脱，并且每个洗脱的馏分都被手动收集在2mL的玻璃小瓶中。通过HPLC和ESI-MS分析来测定合成的肽（乙酰化和非乙酰化两种肽）的序列。

A2）肽SEQ.1至SEQ.25

因此，在肽被合成、纯化并检验后，进行测试以确定它们的生物活性。它们中的大多数还被证实具有抗菌活性。

此外，显然、令人惊讶和出乎意料的是，本发明的肽、特别是肽SEQ.1显示出改变癌细胞微管的特性，肽SEQ.1的结果被描述在下面。该肽是14个氨基酸的短肽。该肽具有以下氨基酸序列：INWLKIAKKVAGML-NH₂（SEQ.1）。

序列SEQ.2至SEQ.25的肽是肽SEQ.1的变体或同系物。这些变体与肽SEQ.1的区别在于1至3个氨基酸（一个或更多个氨基酸的缺失或替换）和/或N末端处-NH₂基团的缺失。这些变体被证明像肽SEQ.1一样有效，或显示出比肽SEQ.1略低的有效性，但它们在对肽SEQ.1的响应不那么好的癌症类型上通常更有活性。

B)实验测试

B1）序列SEQ.1的肽对纯化的微管的特性的影响（图1）

通过体外方法制备从大鼠脑纯化的微管，所述体外方法取决于37°C的组装温度以及在GTP（鸟苷三磷酸）存在下4°C的去组装温度，所述体外方法由Fellous等(1977)描述在“微管的体外组装，组装促进因子的纯化（microtubuleassemblyinvitro,purificationofassembly-promotingfactors）”,EurJBiochem,15August1977,15;78(1):167-174中。

通过在15分钟的孵育期期间每30秒测定345nm下浊度的改变来监测微管的体外聚合。利用恒温在37°C下并配备了可以接收6个比色皿的自动装载器的Uvicon分光光度计对光密度进行测定。

如图1所示，与不包含肽SEQ.1并被用作微管聚合的对照的对照样品相比，肽SEQ.1在微管聚合的过程中诱导浊度大幅增加。在肽SEQ.1存在下观察到的吸光度增加与其浓度的增加一致并能达到非常高的水平，这只能通过单独的正常微管的聚合增加来解释。因此，这些数据暗示在肽SEQ.1存在下形成了异常的微管结构或形成了无序的微管蛋白聚集体。因此，图1显示了肽SEQ.1对纯化的微管具有直接作用，因此，细胞内微管会构成该肽的靶点。此外，这种异常微管的聚合类似于微管在存在高水平的已知抗癌剂紫杉醇下发生的聚合。

B2)肽SEQ.1的作用：与紫杉醇的作用相似（图2）

图2中示出的另一个论据强烈暗示肽SEQ.1与紫杉醇在其作用机制方面具有一定的相似性。

执行采用了与B1中相同的技术的相同类型的实验来评估在存在浓度增加的肽SEQ.1的条件下形成的微管的稳定性。通过这些微管在4°C处理30分钟后解聚的无能性来指示该稳定性。

事实上，当微管经4°C的温度处理30分钟时，在SEQ.1存在下观察到微管的解聚能力降低。SEQ.1的浓度越高，则这种降低越多。如果SEQ.1的浓度非常高，则变成完全降低。在存在非常高浓度的肽SEQ.1下形成的微管事实上丧失了它们经4°C的温度处理30分钟时解聚的能力。

肽SEQ.1具有与紫杉醇非常相近的作用机制，这一事实是本发明的明确优点。此外还应补充的是，由申请人作出的观察结果证明了，肽SEQ.1对微管特性的不可逆影响赋予了它超过其他对微管具有可逆影响的抗微管肽例如海兔毒素的主要优点。

细胞水平的检测证实了肽SEQ.1具有与紫杉醇相似的作用机制。这些检测事实上显示出肽SEQ.1异常且不可逆地增加聚合的和/或聚集的微管蛋白的细胞内浓度，由此导致有丝分裂过程的阻断。

然而，肽SEQ.1在微管蛋白上的结合位点似乎与紫杉醇不同，因为从乳腺肿瘤获得的几种细胞系对紫杉醇具有耐药性并在培养中保持了该耐药性。这些细胞在体外表现出对肽SEQ.1以及该肽的一些类似物的高度敏感性（参见B9部分）。

这一观察结果是一个重要的结果，因为将有可能设想出使用肽SEQ.1至25的有效的疗法用于对紫杉醇治疗没有响应或不再有响应的患者。

B3）通过免疫荧光标记组装的微管蛋白所测定的肽SEQ.1对癌细 胞的微管网络结构的改变的影响（图3）

为了证明肽SEQ.1可以通过改变微管网络（即通过具有与“紫杉醇样机制”相近的作用机制）而阻止癌细胞增殖这一假设，使用下面所描述的方法执行了由免疫荧光标记经或未经肽SEQ.1处理的细胞的微管结构构成的实验。

将多种细胞系的癌细胞（A549：肺癌；NMT1：黑色素瘤；Panc1：胰腺癌）与不同浓度的肽SEQ.1在载玻片上在37°C下孵育4小时。然后，将细胞用PFA固定，用PBS洗涤，并在含有1%BSA、0.1%TritonX100的PBS缓冲液（磷酸盐缓冲液）中在37°C下孵育30分钟。在用PBS洗涤后，将细胞与抗β微管蛋白的单克隆抗体在冷室中孵育过夜。接着，用PBS洗涤载玻片，并将细胞与异硫氰酸荧光素（FITC）偶联的山羊抗小鼠抗体在室温下孵育60分钟。在用PBS洗涤后，用荧光显微镜观察标记的细胞。使用dapi染色技术将细胞核标记成蓝色。

如图3所示，当用肽SEQ.1处理肺癌A549细胞时，即使在一段短时间内也形成了非常浓密的微管蛋白聚合物，所述聚合物是微管和聚集体的混合物。当未用肽SEQ.1处理这些细胞时，微管网络是非常有序和不间断的。图3还显示了肽SEQ.1对另外两种癌细胞MNT-1黑色素瘤细胞和PANC1胰腺细胞的影响。当用肽SEQ.1处理这些细胞时，它们的微管网络也被改变，表现为与未处理的细胞的荧光相比，荧光显著增加。然而，在处理过的MNT-1和PANC1细胞中观察到的微管改变不像A549细胞中的那么大。这可以通过处理时间不充分这一事实进行解释，或通过这一事实进行解释：MNT-1和PANC1细胞系的微管蛋白在其分子结构方面与A549细胞的微管蛋白存在差异，由此能够导致它们对肽SEQ.1的亲和性降低。

B4）肽SEQ.1对健康细胞的活性(图4）

图4中所示的实验证实了，肽SEQ.1对癌细胞具有特异性的活性，而对健康细胞无活性。使两种非致瘤的成纤维细胞FIBRO1和FIBRO2与肽SEQ.1接触，以观察健康细胞的微管网络是否也被该肽破坏。碰巧的是，图4证实了，至少在肽SEQ.1用于癌细胞的浓度（15μM）下，代表了多种正常细胞的人成纤维细胞对肽SEQ.1根本没有响应（聚合的微管蛋白密度没有改变）。该观察结果代表了本发明的一个重要进步。很少有抗肿瘤剂在对癌细胞和对宿主生物体的健康细胞的细胞毒性方面显示出非常大的差异（即对癌细胞具有非常强的毒性，而对宿主的健康细胞具有弱毒性）。

后面这点具有两个重要的结果：当肽SEQ.1及其类似物被用作哺乳动物、尤其是人的治疗剂时，事实上非常有可能发生很少的副作用。

此外，通过提高肽SEQ.1及其类似物的剂量或处理时间，有可能显著提高其功效。

B5)细胞增殖和细胞存活率的测定（图5）

分析以下细胞系（表II），以确定并定量肽SEQ.1的活性。在下面的表II中，成纤维细胞M和N为非肿瘤细胞，淋巴细胞L.1、L.3、L.4和L.5为白血病细胞，而淋巴细胞L.6为正常淋巴细胞。

以每孔0.2mL的体积将约10000个细胞接种到96孔微板中，24小时后，用肽SEQ.1进行处理。在存在或不存在各种浓度的肽SEQ.1的条件下将细胞在CO₂培养箱中在37°C下孵育48至72小时。

在孵育后，将MTT试剂或(3-(4,5-二甲基-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑（0.5mg/ml，在0.1ml的体积中）加入到每个孔中并在37°C下孵育2小时。

表II

然后，MTT所含有的四唑环被活细胞的琥珀酸脱氢酶还原产生甲臜。然后，去除上清，并加入0.1ml裂解缓冲液（含有10%tritonX100和10%1NHCl的异丙醇）以溶解所形成的蓝紫色甲臜沉淀。几分钟后，在室温下用酶标仪在562nm的检测波长下测定吸光度。使用不含肽SEQ.1的孔来证实对照细胞的存活率。通过处理后细胞的吸光度与对照细胞的吸光度的比率来评估每一种细胞的IC50（肽SEQ.1在这些细胞系上引起50%细胞毒性时的浓度）值。

使用了另一种测定细胞存活率的方法。该方法在于，在各种不同的处理条件下，在Malassez计数板（Malassezcell）的辅助下对细胞数目进行直接肉眼观察计数。与MTT试验相比，该方法使得能够更好地评估细胞死亡前的步骤（更加直观地在显微镜下直接观察细胞）。

如图5和表III所示，肽SEQ.1阻止了肿瘤细胞的增殖。肽SEQ.1的剂量越高，就能更强烈地阻止癌细胞的增殖。据观察，肽SEQ.1的对癌细胞有毒性的剂量对正常细胞例如正常淋巴细胞或成纤维细胞无毒性。根据本申请，肽SEQ.1有可能是通过改变有丝分裂纺锤体微管的形成来降低癌细胞的增殖。

还观察到，各种不同种类的肿瘤细胞的敏感性有所不同。下表III证明了，非常敏感的肿瘤细胞例如A549细胞种类（肺癌）的IC50值非常低。较不敏感的细胞种类例如胰腺细胞（PANC1细胞种类）或MNT1人黑色素瘤细胞种类（DU145细胞种类）或胶质母细胞瘤细胞种类（U87-M6）的IC50值较高。在后一种情况下，敏感性取决于胶质母细胞瘤细胞暴露于肽SEQ.1的时间。该观察结果表明，根据癌细胞类型，肽SEQ.1可能表现出不同的功效和作用。因此可以想象到调整治疗的剂量或时长以有效地作用于某些类型的癌症。表III中的这组结果清楚地显示出肽SEQ.1具有非常宽的抗肿瘤活性，对于抗击各种不同类型的癌症来说，该活性可能比紫杉醇的活性强。

表III还显示出肽SEQ.1对各种不同类型的正常细胞例如淋巴细胞或成纤维细胞具有非常低的毒性。

该表显示了肽SEQ.1对一大组癌细胞具有活性（细胞存活率测定）。

表III

B6)肽SEQ.1对质膜结构的影响（图6和7）

通过在相差显微镜下直接观察处理后细胞的实验以及通过对粘附于基质的细胞和丧失了粘附于基质的能力的细胞进行计数的实验来证实SEQ.1对质膜的结构和特性的影响。

图6显示，在存在肽SEQ.1的条件下，A549肿瘤细胞的数目大大降低（在处理2小时和4小时后），此外，作为质膜改变的结果，它们的细胞轮廓被明显改变。这是除了影响微管细胞骨架的改变之外的另一改变。

图7事实上显示了，保留了基质粘附特性的A549细胞的数目作为孵育时间的函数而降低，相反，由于丧失基质粘附性而悬浮在上清中的A549细胞的数目作为培养时间的函数而增加。

凭借其聚阳离子性质，肽SEQ.1通过使富含负电荷磷脂的癌细胞的脂质双层结构不稳定化而改变了这些细胞的质膜特性。这种膜不稳定化通过引起细胞质扩展或者细胞轮廓变形而导致了细胞变形，如图6中示出的实验所示的，在图6中，在处理后的细胞中观察到了异常的细胞轮廓和细胞体积增加。膜的不稳定化还导致功能的改变，例如丧失与培养基质的粘附，正如图7中示出的。

这些膜的改变是引起相当大量的细胞死亡的原因。因此，肽SEQ.1和某些变体发挥了抑制细胞生长（抑制有丝分裂）和细胞毒（细胞死亡）的双重效应。该双重效应增强了这些肽的抗肿瘤作用。

肽SEQ.1和某些类似物可能不仅仅改变癌细胞的膜。它们还可能改变其他细胞类型例如细菌或真菌细胞的膜。

B7）序列SEQ.1的肽的类似物的效应

在A594细胞系上测试了肽SEQ.1的类似物或变体，A594细胞系相当于仍然非常难治疗的肺癌。所测试的变体如下所示：SEQ.3、SEQ.4、SEQ.7、SEQ.9、SEQ.18、SEQ.19和SEQ.2。

对所测试的各种变体的活性的评估可以总结如下：

5μm<IC<10μm	SEQ.3、SEQ.4、SEQ.7、和SEQ.9	非常好的活性，接近于肽SEQ.1
			IC 50约15μM	SEQ.18、SEQ.19、和SEQ.2	中等活性

综合对肽SEQ.1变体的活性分析，有可能得出，至少有4种与SEQ.1相比具有改变的序列的肽即肽SEQ.3、SEQ.4、SEQ.7和SEQ.9具有与肽SEQ.1完全等效的对A549细胞的细胞毒活性。

另一个结果涉及肽SEQ.7。据发现，该肽不仅对A549细胞有活性，而且对MNT-1黑色素瘤细胞也表现出一定的活性，IC50在10和15μM之间，并且对T47乳腺癌细胞也表现出一定的活性，IC50在10和15μM之间。

另外，通过提高肽的剂量或者增加治疗时程，有可能提高对癌症的治疗功效。例如，通过提高SEQ.1的剂量，对于治疗中度敏感的肿瘤例如某些PANC-1胰腺肿瘤或者胶质母细胞瘤而言，有可能获得更好的结果。

B8)癌细胞对肽SEQ.1至25的耐药性

最后，根据初步实验的指示，肽SEQ.1及其类似物具有不诱导快速耐药过程的优点。

B9）耐紫杉醇细胞对序列SEQ.1和SEQ.7的肽的敏感性

该研究是在源自于对紫杉醇不再有响应的乳腺肿瘤的两种细胞系TX1和TX2上进行的。这两种细胞系对至少两种肽即肽SEQ.1和肽SEQ.7显示出非常好的敏感性。更具体地，在存在这些肽的条件下培养24小时后就已发现生长抑制结果是显著的。

在存在所述肽的条件下培养48小时后，生长抑制的估算如下所示：

对于这两种类型的耐药细胞TX1和TX2来说，肽SEQ.1和SEQ.7表现出非常好的敏感性，因为估算的IC50指数在3和7μM之间。

尽管已结合一个具体实施方式描述了本发明，但是相当显而易见的是，本发明绝不局限于此，本发明包含所描述的方法的所有技术等同物，并且如果所描述的方法的组合落在本发明的上下文中，则本发明还包含所述组合。

Claims (8)

1.由至少一种选自SEQIDNO：2，SEQIDNO：3，SEQIDNO：4，SEQIDNO：7，SEQIDNO：9，SEQIDNO：18和SEQIDNO：19的序列构成的肽。

2.权利要求1的肽在制备用于治疗癌症的药物中的应用。

3.权利要求1的肽在制备用于治疗以下疾病的药物中的应用：乳腺癌、胶质母细胞瘤、脑癌、结直肠癌、恶性血液病、淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、肺癌和骨髓瘤。

4.权利要求1的肽在制备用于治疗以下疾病的药物中的应用：肝细胞癌、多发性骨髓瘤或间皮瘤。

5.权利要求2或3的应用，其特征在于，通过合成产生权利要求1的肽。

6.药物组合物，其包含由选自SEQIDNO：2，SEQIDNO：3，SEQIDNO：4，SEQIDNO：7，SEQIDNO：9，SEQIDNO：18和SEQIDNO：19的序列构成的肽或肽的混合物。

7.权利要求6的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物是水性悬浮液或溶液形式，或者是干燥状态的未包衣或包衣片剂、丸剂、凝胶胶囊、胶囊或者粉末形式。

8.权利要求6或7的组合物，其任选与可药用的无毒惰性赋形剂或介质组合，其特征在于，以皮肤、透皮或经皮；口服；胃肠外；经鼻或支气管应用的形式局部施用所述组合物。