CN102964326B - 具有mek抑制功能的化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了具有MEK抑制功能的化合物及其制备方法与应用。本发明化合物，结构如式I。本发明化合物的制备，主要采用Pechmann反应形成香豆素环，再进行不同位点的结构修饰。本发明化合物与MEK的结合实验中，结合活性最高达到54.57nM；对黑色素瘤细胞A375的抗增殖作用IC50值达到1.23μM；对结肠癌细胞HT-29的抗增殖作用IC50值达到2.13μM，活性高于阳性对照U0126。本发明设计并合成了一类新结构类型的香豆素类具有MEK抑制功能的化合物，表现出良好的MEK结合活性、MEK抑制活性、ERK通路抑制活性、抗肿瘤作用和抗病毒作用，有广阔的应用价值。？

Description

具有MEK抑制功能的化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及化合物及其制备方法与应用，特别是涉及具有MEK抑制功能的化合物及其制备方法与应用。该类化合物有明显的抗肿瘤和抗病毒作用，因而有可能被用于肿瘤和病毒性疾病的治疗。
背景技术
丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase,MAPK）是1980年代中期发现的具有重要作用的蛋白激酶，是细胞中一条重要的核心信号通路。MAPK通路主要分为四类亚族：细胞外信号调节激酶ERK（extracellularsignal-regulatedkinase）通路，JNK通路，p38通路和ERK5通路。ERK通路是MAPK通路中的一个重要家族，主要由三个核心蛋白激酶Raf、MEK（Mitogen-activatedandExtracellularsignal-regulatedKinase）和ERK组成，相互间顺序激活，共同组成一个准确高效的信号网络通路，在机体中发挥重要的调节作用。在静息细胞内ERK/MAPK为低活性状态，当其接受上游活化分子的磷酸化调控后即变成有活性的状态。ERK/MAPK接受膜受体转换与传递的信号并将其带入细胞核内，在核内可使一些转录因子发生磷酸化，最终通过调节转录因子，如Elk-1、c-fos等，从而提高基因表达水平；另外，ERK/MAPK也可以使其他的酶发生磷酸化而使其活化。
Raf/MEK/ERK信号通路主要参与细胞发育、生长、分化等重要过程，其活性持续上调与肿瘤的发生密切相关。所以抑制该通路早已成为新型抗肿瘤药物的研究焦点之一，如Raf抑制剂索拉非尼已于2005年由FDA批准上市，用于晚期肾癌等实体肿瘤的治疗。目前还有一些Raf抑制剂和MEK抑制剂处于抗肿瘤临床实验中。越来越多的研究证实，ERK通路在病毒感染和复制中也发挥着极其重要的作用。选择性阻断此通路可阻止多种病毒的繁殖，包括流感病毒、单纯疱疹病毒、肝炎病毒、痘苗病毒、免疫缺陷病毒、水泡性口炎病毒等等。我们前期研究中也发现，用RNAi特异性阻断MEK1的mRNA表达，可显著地抑制HSV-2、EV71等病毒的增殖复制，抑制率高达96.8%。
MEK激酶是ERK通路的核心，其具有独特的结构和功能特点，在该通路中起关键的承上启下作用。就目前所知，只有MEK能激活ERK，ERK也是MEK的唯一底物，这一点是非常特别的，预示着MEK抑制剂阻断ERK通路的作用将是高度特异性的。另外，本专利涉及的MEK抑制剂是以ATP非竞争性结合方式作用于MEK的特异性结合口袋，这种变构结合引起MEK激酶活化环和C螺旋构象的明显改变，从而使未被磷酸化的MEK处于一种关闭的、催化失活状态。这种独特的结合模式使我们的MEK抑制剂具有高度的激酶选择性。功能方面，由于正常细胞ERK通路处于低活性的静息状态，这种状态足以维持正常细胞基本的代谢需要。而肿瘤的发生、发展和病毒在细胞内复制时需要持续激活ERK通路，且肿瘤发展以及病毒繁殖迅速，故阻断ERK通路对肿瘤发展和病毒复制作用的抑制性强，而对正常细胞的毒性小。此外，有实验证明，MEK抑制剂U0126在体内、外发挥抗病毒作用时，未发现对细胞和机体明显的细胞毒性。此外，研究表明ERK通路小分子抑制剂是通过“抑制细胞生长”而发挥抗癌作用，而不是通过“细胞毒性”发挥作用的。即药物本身可能不“杀死”肿瘤细胞，其抑制肿瘤细胞生长时对细胞凋亡的诱导作用较温和，且作用是可逆的。因此MEK抑制剂作为新作用机制的抗肿瘤药物和抗病毒药物将具有安全性高、毒性低、不易产生耐药性、特异性高等特点，显示重要的临床意义和应用价值。
已见报道的与MEK特异性结合的化合物均为MEK抑制剂，按作用机制分为两种：ATP竞争性抑制剂和ATP非竞争性抑制剂。
ATP竞争性抑制剂与ATP作用于同一结合位点，与ATP相互竞争，作用效果容易受到ATP浓度的影响。由于这种抑制剂对激酶的选择性不高，不能产生特异性的作用，所以可能会使毒副作用较大。ATP竞争性MEK抑制剂主要包括氰基喹啉类和天然产物。
ATP非竞争性抑制是MEK抑制剂所特有的一种作用机制，其特点是：①不与ATP竞争目标激酶的ATP结合位点，亦不与ERK竞争MEK结合位点。②为变构结合的抑制剂，修饰改变MEK的三维结构，使得MEK不能被上游激酶磷酸化，而且抑制磷酸基转移到ERK的活性位点。③其结合部位在其它激酶上没有同源序列，是所有激酶抑制剂中特异性最高的。④抑制作用可逆，停用后激酶可被重新激活。研究最多的ATP非竞争性MEK抑制剂是二芳基胺类系列化合物，代表性的如PD0325901和ARRY-142886（AZD6244）。
发明内容
本发明的目的是提供一类具有MEK抑制功能的化合物及其制备方法与应用。
本发明所提供的具有MEK抑制功能的化合物，及其药学上可接受的盐，结构如式I，
式I
其中，R1为氢，芳基亚甲基或取代芳基亚甲基，杂环或稠杂环，1到10个碳的直链、支链烷基或取代烷基，O5，SR5，NR5，COR6或CSR6等；
R2为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，芳基亚甲基或取代芳基亚甲基，苯基或取代苯基，杂环或稠杂环，羧基，氰基，卤素，酰胺基，硝基，醛基，OR5，SR5或NR5，等；
R3为氢，卤素，羟基，烷氧基，氰基，硝基，醛基等；
R4为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，烯基，CR7R7R5，SCONR5R8，OCSNR5R8，(1到4个碳的烷基)OCONR5R8，NR12SO2R5，NR5COOR13，NR5COR5OCOR8，NR5CH2CHR11，NCONR5R8CH2CHR11，NR5C=NHNR5，NCONR5OCH2CH2CHR11，NR5COR5，NR5COR9，NR5CH2CH2OR8，COR5，CHR5R5，CH2NR5R8，CH2NR5COOR13，CN，CH=NOR5，CH2OPO(OR5)(OR8)，CH2NHCH2CHR10，COR9，CHR5，CHR5CN，CHR5COOR5，CHR9R10，CHR5OCONR5R8，CH2NHCH2CHR11，(1到4个碳的烷基)C(O)，R9，OR9，SR5，NR5，OR5，SOR5，SO2R5，SO2R5，CH2R5，CR12R12R9，CH2NR5COOR8，(1到3个碳的烯烃基)OR5，(1到2个碳的烯烃基)OR9，CR5R12R8，CR5R12R9，CR12R5PO(OR5)(OR8)，COCONR5R8，C=CR10，CN，CF2R9，CH2SOR5，CH2SOR9，NR5R8，NR5R9，NR5COR8，CR5COR9，OCONR5R8，CR12R5CONR5R8，CH2NR5R8，CONR5R8，CH2SR9，NR5CONR5R8，OCOR5或OSO2R5等；
R5为氢，羟基，卤素，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，烷氧基，芳基或取代芳基等；
R6为氢，羟基，卤素，氨基或取代胺基，烷基或取代烷基，烷氧基，芳基或取代芳基等；
R7为氢，卤素等；
R8为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，芳基或取代芳基等；
R9为杂环或稠杂环等；
R10为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，三甲基硅基，SO2R11等；
R11为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，苯基等；
R12为氢，卤素，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，苯基等；
R13为氢，羟基，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，苯基等。
这里，1到10个碳的直链、支链烷基及取代烷基、环烷烃基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、2-甲基丙基、丁-2-基、正戊基、羟甲基、甲氧羟甲基、环丙基，环丙基甲基等；芳基或取代芳基，如苯基，对甲基苯基等；芳基亚甲基或取代芳基亚甲基，如苄基，对氟苄基，4-硝基苄基等；杂环或稠杂环，如咪唑-2-基、四氢吡咯-2-基、吲哚-3-基，苯并噻唑-2-基等；
式I中R1为苄基的化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)β酮酸酯与溴苄在乙醇钠或氢化钠作用下发生取代反应，得到式II化合物；
2)式II结构化合物在浓硫酸作用下，与式III结构化合物发生Pechmann反应，环合得到式IV化合物；
3)式IV化合物在氢化钠作用下与酰氯反应，得到式I中R1为苄基的化合物。
式II式III式IV
其中，R2为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，芳基亚甲基或取代芳基亚甲基，苯基或取代苯基，杂环或稠杂环，羧基，氰基，卤素，酰胺基，硝基，醛基，OR5，SR5，NR5，等；
R3为氢，卤素，羟基，烷氧基，氰基，硝基，醛基等。
式I中R1为苯并噻唑基，R2为羧基的化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)取代的二羟基苯甲醛在哌啶的作用下，与苯并噻唑-2-乙腈反应形成香豆素环，得到式V化合物；
2)式V化合物在氰化钠作用下，4位氰基化，得到式VI化合物；
3)式VI化合物水解成羧酸，得到式VII化合物；
4)式VII化合物在氢化钠作用下与酰氯反应，得到式I中R1为苯并噻唑基，R2为羧基的化合物。
式V式VI式VII
其中，R3为氢，卤素，羟基，烷氧基，氰基，硝基，醛基等。
式I中R1为苯甲酰基，R2为羧基的化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)2-羟基苯甲醛和苯甲酰乙酸乙酯在哌啶的作用下，反应形成香豆素环，得到式VIII化合物；
2)式VIII化合物在氰化钠作用下，4位氰基化，得到式IX化合物；
3)式IX化合物水解成羧酸，得到式X化合物；
式VIII式IX式X
其中，R10为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基，环烷烃基，三甲基硅基等。
需要注意的是以上所描述的合成路径是为了阐明本发明化合物的制备，而制备决不仅限于此，即其他合成方法同样可行，所述方法是指熟练人员一般知识内的合成方法。
如果需要，本发明化合物可以利用本领域已知的方法转变为它们的可药用盐或酯形式。
本发明的另一个目的是提供本发明化合物的用途。
本发明发明人通过实验证实，本发明化合物具有良好的与MEK结合作用、抑制MEK的活性、抑制ERK通路的活性及抗肿瘤、抗病毒活性，特别是3-对氟苄基-4-甲基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素，可以用于制备抗肿瘤和抗病毒药物，广泛用于肿瘤和病毒性疾病的治疗。
因此，本发明提出了本发明所述化合物或其药学上接受的盐在制备MEK抑制剂中的应用。其中，所述的MEK抑制剂具有对磷酸化MEK的活性抑制以及对未活化的MEK的抑制作用。及
所述化合物或其药学上接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。及
所述化合物或其药学上接受的盐在制备抗病毒药物中的应用。及
所述化合物或其药学上接受的盐在制备ERK通路的抑制剂中的应用。
附图说明
图1为验证化合物与MEK1的结合能力的实验原理图；
图2为验证化合物对磷酸化MEK1的抑制作用的实验原理图；
图3为不同化合物对ERK通路活化的影响；
图4为不同化合物对ERK通路活化的影响；
图5为化合物作用细胞6h后对细胞形态的影响；
图6为不同浓度的化合物M5对ERK通路活化的影响；
图7为不同化合物对ERK通路活化的影响；
M5全程存在，即更换培养液时，新换培养液中M5的浓度仍保持30μM不变；
图8为不同化合物对ERK通路活化的影响；
M5仅预处理细胞1h，之后更换的培养液中不加入化合物；
图9为M5抗病毒作用；
（A）M5抗EV71（MOI=1.5）作用RD细胞24h的细胞病变图（CPE）（B）EV71的衣壳蛋白VP1的表达（C）上清液中EV71的滴定（D）、（E）M5抗HSV2的CPE及gB蛋白的表达（HEK393细胞）。
具体实施方式
下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的保护范围。
实施例1、3-苄基-4-甲基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M2)的合成
第一步
将金属钠（50mmol,1.15g）缓慢加入20ml无水乙醇中，生成醇钠后，80℃搅拌下加入50mmol乙酰乙酸乙酯，继续搅拌10分钟；在反应物微沸回流时，滴加55mmol溴卞无水乙醇溶液，在加热回流至反应物几乎为中性。冷却，过滤除去固体溴化钠，滤液无水硫酸镁干燥，柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯=50：1)（v/v），得3-苄基乙酰乙酸乙酯，黄色油状液体7.17g，产率65.1%。1HNMR(300MHz,CDCl3):δ1.16-1.21(t,J=7.1Hz,3H,CH3),2.17(s,1H,CH3),3.14-3.16(d,J=7.5Hz,2H,PhCH2),3.76-3.81(t,J=7.5Hz,1H,CH),4.09-4.17(d,J=7.2Hz,2H,CH 2CH3),7.16-7.28(m,5H,PhH)。
第二步
将间苯二酚（5mmol,0.55g）和3-苄基乙酰乙酸乙酯（5mmol,1.10g）溶于6ml70%硫酸中，反应4h。混合物溶液中加入冰水，析出固体，将固体过滤水洗得粗产物。粗产物用乙醇重结晶得3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素(化合物M1)0.84g，淡黄色固体，产率63.2%，mp:228-230℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ2.40(s,3H,CH3),3.93(s,2H,CH2),6.71-6.72(d,J=2.4Hz,1H,PhH),6.80-6.83(dd,J=2.4,8.8Hz,1H,PhH),7.17-7.28(m,5H,PhH),7.63-7.66(d,J=8.8Hz,1H,PhH),10.46(s,1H,OH)。
第三步
3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（1.5mmol,0.40g）溶于10mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（3mmol,0.12g），室温反应15分钟后，加入N,N-二甲基甲酰氯（3mmol,0.28ml），继续搅拌1小时，反应结束。将反应液倾入饱和碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取3次，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=3：1)（v/v）得产物3-苄基-4-甲基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M2)0.44g，白色固体，产率86.8%，mp:130-133℃。1HNMR(300MHz,CDCl3):δ2.44(s,3H,CH3),3.03(s,3H,NCH3),3.13(s,3H,NCH3),4.06(s,2H,CH2),7.16-7.19(dd,J=2.4,8.1Hz,1H,PhH),7.21(d,J=2.4Hz,1H,PhH),7.08-7.30(m,5H,PhH),7.58-7.61(d,J=8.1Hz,1H,PhH)。
实施例2、3-苄基-4-甲基-6-氯-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M4)的合成
第一步
将4-氯间苯二酚（5mmol,0.72g）和3-苄基乙酰乙酸乙酯（5mmol,1.10g）溶于11ml70%硫酸中，室温反应24h。混合物溶液中加入冰水，析出固体，将固体过滤水洗得粗产物。粗产物用乙醇重结晶得产物3-苄基-4-甲基-6-氯-7-羟基香豆素（化合物M3）0.652g，白色粉末，产率43.5%，mp:261-263℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ2.40(s,3H,CH3),3.93(s,2H,CH2),6.89(s,1H,PhH),7.15-7.28(m,5H,PhH),7.79(s,1H,PhH),11.26(s,1H,OH)。
第二步
3-苄基-4-甲基-6-氯-7-羟基香豆素（1mmol,0.30g）溶于12mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（1.25mmol,0.038g），室温反应30分钟后，加入N,N-二甲氨基甲酰氯（1.5mmol,0.14ml），继续搅拌24小时，反应结束。将反应液倾入冰水中，乙醚萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。粗产物用乙醇重结晶得产物3-苄基-4-甲基-6-氯-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素（化合物M4）0.193g，白色固体，产率52%，mp:156-157℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.41(s,3H,CH3),3.04(s,3H,NCH3),3.16(s,3H,NCH3),4.05(s,2H,CH2),7.18-7.29(m,6H,PhH),7.64(s,1H,PhH).MS(ESI):m/e372.2(M+H+),394.1(M+Na+)。
实施例3、3-对氟苄基-4-甲基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M5)的合成
第一步
向3.76ml(10mmol)21%乙醇钠溶液中加入乙酰乙酸乙酯(10mmol,1.26ml),80℃回流反应，在反应物微沸时，滴加4-氟溴卞的无水乙醇溶液，继续反应至溶液几乎为中性。冷却，过滤除去固体溴化钠，滤液无水硫酸镁干燥，柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯=50：1)（v/v），得3-对氟苄基乙酰乙酸乙酯1.41g，黄色油状液体，产率59%。
1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.18-1.23(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH 3),2.12(s,3H,CH 3CO),3.11-3.14(dd,J=1.2,7.2Hz,2H,CH2Ph),3.70-3.75(t,J=7.6Hz,1H,CH),4.12-4.16(ddd,J=1.2,7.2,11.6Hz,2H,CH 2CH3),6.93-6.98(m,2H,PhH),7.12-7.16(m,2H,PhH)。
第二步
将间苯二酚（3.43mmol,0.377g）和3-对氟苄基乙酰乙酸乙酯（3.78mmol,0.900g）溶于7ml70%硫酸中，室温反应2h。将反应液倾入冰水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，得粗产物3-对氟苄基-4-甲基-7-羟基香豆素0.762g。粗产率78％。粗产品直接用于下一步反应。
第三步
3-对氟苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（1mmol,0.284g）溶于8mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（1.8mmol,0.054g），室温反应15分钟后，加入N,N-二甲氨基甲酰氯（1.1mmol,0.103ml），继续搅拌1小时，反应结束。将反应液倾入冰水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯=3：1)（v/v），得3-对氟苄基-4-甲基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素0.173g，白色粉末，产率65.3%，mp:149-150℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.44(s,3H,CH3),3.03(s,3H,NCH3),3.12(s,3H,NCH3),4.02(s,2H,CH2),6.93-6.97(m,2H,PhH),7.09-7.11(m,2H,PhH),7.20-7.23(m,2H,PhH),7.58-7.61(d,J=8.6Hz,1H,PhH).MS(ESI):m/e356.2(M+H+),378.1(M+Na+)。
实施例4、3-对氟苄基-4-丙基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M27)的合成
第一步
丁酰乙酸乙酯(10mmol,1.59ml)加入30ml无水THF中，0℃氮气环境中加入氢化钠(12mmol,0.36g)，15min后向反应液中滴加对氟溴苄(11mmol,1.37ml)，60℃加热反应12小时。将反应液倾入饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=50：1)（v/v）得产物3-对氟苄基丁酰乙酸乙酯2.086g，无色油状液体，产率78.3%。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.83-0.86(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.18-1.22(t,J=7.2Hz,3H,OCH2CH 3),1.52-1.58(sext,J=7.2Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.28-2.36(dt,J=7.2Hz,1H,CH2Ph),2.48-2.56(dt,J=7.2Hz,1H,CH2Ph),3.07-3.17(m,2H,CH 2C2H5),3.71-3.75(t,J=7.6Hz,1H,CHCH2Ph),4.11-4.17(dd,J=7.2Hz,2H,OCH 2CH3),6.93-6.97(m,2H,PhH),7.11-7.15(m,2H,PhH).MS(ESI):m/z267.1(M+H+),289.1(M+Na+),305.1(M+K+)。
第二步
将间苯二酚（3mmol,0.33g）和3-对氟苄基丁酰乙酸乙酯（3.3mmol,0.878g）溶于5ml70%硫酸中，反应24h。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=10:1)（v/v），用乙醇重结晶得3-对氟苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M26）0.631g，白色固体，产率67.4%，mp:130-131℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.02-1.06(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.47-1.57(sext,J=7.2Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.75-2.90(t,J=8.0Hz,2H,CH 2C2H5),3.97(s,2H,CH2Ph),6.80-6.83(dd,J=2.4,8.8Hz,1H,H-6),6.92-7.00(m,3H,PhH,H-8),7.19-7.23(m,2H,PhH),7.47-7.49(d,J=8.8Hz,1H,H-5).MS(ESI):m/z313.1(M+H+),335.1(M+Na+),351.1(M+K+)。
第三步
3-对氟苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M26）（0.5mmol,0.156g）溶于3mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（1mmol,0.03g），室温反应30分钟后，加入N,N-二甲基甲酰氯（1mmol,0.09ml），继续搅拌0.5小时，反应结束。将反应液倾入饱和碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取3次，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=5：1)（v/v）得产物3-对氟苄基-4-丙基-7-N,N-二甲氨基甲酸酯基香豆素（化合物M27）0.175g，白色粘稠液体，产率91.6%。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.01-1.05(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.47-1.57(sext,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.77-2.82(t,J=7.6Hz,2H,CH 2C2H5),3.03(s,3H,NCH3),3.12(s,3H,NCH3),3.99(s,2H,CH2Ph),7.15-7.27(m,6H,ArH),7.56-7.59(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ14.45,22.52,31.12,31.97,36.55,36.81,110.35,115.19,115.40,116.86,118.32,123.58,125.31,129.57,129.65,134.72,151.43,153.36,153.96,160.30,161.99,162.73.HRMS(ESI)calcd.forC22H23FNO4 +:384.16056(M+H+),found:384.16069(M+H+)。
实施例5、3-对氟苄基-4-乙基-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M29)的合成
第一步
丙酰乙酸乙酯(10mmol,1.42ml)加入30ml无水THF中，0℃氮气环境中加入氢化钠(12mmol,0.36g)，15min后向反应液中滴加对氟溴苄(11mmol,1.37ml)，60℃加热反应12小时。将反应液倾入饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=50：1)（v/v）得产物3-对氟苄基丙酰乙酸乙酯0.522g，无色油状液体，产率21%。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.98-1.02(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH 3),1.18-1.22(t,J=7.2Hz,3H,OCH2CH 3),2.31-2.39(dt,J=7.2Hz,1H,CH2Ph),2.53-2.61(dt,J=7.2Hz,1H,CH2Ph),3.11-3.14(q,J=4.8Hz,2H,CH 2CH3),3.72-3.76(t,J=7.6Hz,1H,CHCH2Ph),4.11-4.17(dd,J=7.2Hz,2H,OCH 2CH3),6.93-6.97(m,2H,PhH),7.11-7.15(m,2H,PhH).MS(ESI):m/z253.1(M+H+),275.1(M+Na+),291.1(M+K+)。
第二步
将间苯二酚（2mmol,0.22g）和3-对氟苄基丙酰乙酸乙酯（2mmol,0.51g）溶于4ml70%硫酸中，反应12h。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。重结晶（乙酸乙酯/石油醚）得3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M28）0.183g，淡黄色固体，产率31%，mp:131-132℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ1.00-1.05(t,J=7.6Hz,3H,CH3),279-2.85(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),3.90(s,2H,CH2Ph),6.73(s,1H,H-8),6.81-6.83(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.06-7.11(t,J=8.8Hz,2H,PhH),7.23-2.27(t,2H,PhH),7.63-7.66(d,J=8.8Hz,1H,H-5),10.47(s,1H,OH).13CNMR(100MHz,DMSO):δ13.47,21.52,30.87,102.18,111.01,113.11,114.91,115.12,119.12,126.55,129.62,129.70,135.76,153.85,153.99,159.45,160.41,161.61.MS(ESI):m/z299.1(M+H+),321.1(M+Na+),337.1(M+K+)。
第三步
3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M28）（0.36mmol,0.107g）溶于2mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（0.72mmol,0.022g），室温反应30分钟后，加入N,N-二甲基甲酰氯（0.72mmol,0.065ml），继续搅拌0.5小时，反应结束。将反应液倾入饱和碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取3次，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=5：1)（v/v）得产物3-对氟苄基-4-乙基-7-N,N-二甲氨基甲酸酯基香豆素（化合物M29）0.090g，白色粘稠液体，产率68%。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.12-1.16(t,J=7.6Hz,3H,CH3),2.83-2.88(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),3.02(s,3H,NCH3),3.12(s,3H,NCH3),3.99(s,2H,CH2Ph),6.92-6.96(t,J=8.0Hz,2H,PhH),7.09-7.14(m,2H,H-6,H-8),7.20-7.23(t,J=6.4Hz,2H,PhH),7.59-7.61(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.28,22.25,31.77,36.54,36.79,110.37,115.17,115.39,116.51,118.38,123.16,125.23,129.60,129.68,134.72,152.83,153.40,153.96,160.27,162.04,162.70.HRMS(ESI)calcd.forC21H21FNO4 +:370.14491(M+H+),found:370.14511(M+H+)。
实施例6、3-苄基-4-甲基-7-乙酸酯基香豆素(化合物M30)的合成
3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）(0.5mmol,0.13g)溶于2ml干燥DMF中，加入氢化钠(1.75mmol,0.053g)，室温搅拌30min后，0℃条件下缓慢滴加乙酰氯(0.75mmol,0.053ml)的干燥THF溶液(1ml)，室温反应2小时。将反应液倒入20ml1N盐酸溶液中，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=10:1)（v/v），得白色固体0.082g，产率55%，mp:165-166℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.34(s,3H,CH 3CO),2.44(s,3H,CH 3),4.06(s,2H,CH 2Ph),7.05-7.07(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.11(s,1H,H-8),7.19-7.26(m,5H,CH2Ph),7.61-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ15.51,21.11,32.97,110.16,118.00,118.47,124.85,125.43,126.40,128.25,128.60,138.69,146.98,152.34,152.90,161.61,168.82.HRMS(ESI)calcd.forC19H17O4 +:309.11214(M+H+),C19H16NaO4 +:331.09408(M+Na+),found:309.11175(M+H+),331.09374(M+Na+)。
实施例7、3-苄基-4-甲基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M31)的合成
合成方法同实施例6，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和丙酰氯，得白色固体，产率87%，mp:118-119℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.26-1.30(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),2.45(s,3H,CH 3),2.60-2.66(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),4.07(s,2H,CH 2Ph),7.05-7.07(d,J=8.4Hz,1H,H-6),7.10(s,1H,H-8),7.19-7.29(m,5H,CH2Ph),7.60-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ8.93,15.50,27.74,32.97,110.12,118.00,118.38,124.78,125.38,126.39,128.26,128.60,138.71,147.00,152.50,152.92,161.64,172.35.HRMS(ESI)calcd.forC20H19O4 +:323.12779(M+H+),found:323.12765(M+H+),345.10937(M+Na+),361.08330(M+K+).
实施例8、3-苄基-4-甲基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M32)的合成
合成方法同实施例6，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和丁酰氯，得白色固体产率89%，mp:139-140℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.04-1.07(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),1.77-1.83(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),2.44(s,3H,CH 3),2.56-2.59(t,J=7.6Hz,2H,CH 2CH2CH3),4.06(s,2H,CH 2Ph),7.04-7.06(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.09(s,1H,H-8),7.19-7.26(m,5H,CH2Ph),7.60-7.62(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.61,15.51,18.34,32.97,36.17,110.14,118.04,118.37,124.77,125.39,126.39,128.26,128.60,138.72,147.00,152.48,152.91,161.63,171.52.HRMS(ESI)calcd.forC21H21O4 +:337.14344(M+H+),found:337.14308(M+H+),359.12508(M+Na+)。
实施例9、3-对氟苄基-4-乙基-7-乙酸酯基香豆素(化合物M34)的合成
合成方法同实施例6，起始原料换成3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M28）和乙酰氯得白色固体，产率70%，mp:122-123℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.14-1.18(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),2.34(s,3H,CH 3CO),2.84-2.89(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),4.00(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.97(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.06-7.08(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.12(s,1H,H-8),7.20-7.26(m,2H,ArH),7.62-7.64(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.27,21.11,22.26,31.82,110.47,115.25,115.46,117.15,118.14,123.72,125.43,129.59,129.67,134.52,134.55,152.33,152.56,153.45,160.33,161.83,162.76,168.83.HRMS(ESI)calcd.forC20H18FO4 +:341.11836(M+H+),found:341.11816(M+H+),363.10008(M+Na+).
实施例10、3-对氟苄基-4-乙基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M35)的合成
合成方法同实施例6，起始原料换成3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M28）和丙酰氯得白色固体，产率81%，mp:97-98℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.14-1.18(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),1.26-1.30(t,J=7.6Hz,3H,COCH2CH 3),2.61-2.66(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),2.84-2.90(q,J=7.6Hz,2H,COCH 2CH3),4.00(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.98(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.06-7.08(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.12(s,1H,H-8),7.20-7.24(m,2H,ArH),7.61-7.64(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ8.93,13.27,22.26,27.74,31.82,110.43,115.25,115.46,117.04,118.14,123.65,125.38,129.60,129.68,134.54,134.57,152.49,152.57,153.47,160.33,161.87,162.76,172.35.HRMS(ESI)calcd.forC21H20FO4 +:355.13401(M+H+),found:355.13383(M+H+),377.11579(M+Na+).
实施例11、3-对氟苄基-4-乙基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M36)的合成
合成方法同实施例6，起始原料换成3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M28）和丁酰氯，得白色固体，产率84%，mp:79℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.04-1.08(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.14-1.78(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),1.78-1.83(m,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.56-2.60(t,J=7.6Hz,2H,CH 2CH2CH3),2.84-2.90(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),4.00(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.98(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.05-7.08(d,J=8.4Hz,1H,H-6),7.11(s,1H,H-8),7.20-7.24(m,2H,ArH),7.61-7.63(d,J=8.4Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.27,13.60,18.34,22.26,31.82,36.17,110.46,115.25,115.46,117.04,118.17,123.66,125.37,129.59,129.67,134.53,134.57,152.47,152.56,153.47,160.34,161.85,162.77,171.54.HRMS(ESI)calcd.forC22H22FO4 +:369.14966(M+H+),found:369.14937(M+H+),391.13124(M+Na+).
实施例12、3-苄基-4-乙基-7-乙酸酯基香豆素(化合物M37)的合成
第一步
丙酰乙酸乙酯(5mmol,0.716ml)加入15ml无水THF中，0℃氮气环境中加入氢化钠(7.5mmol,0.18g)，15min后向反应液中滴加溴苄(5.5mmol,0.65ml)，60℃加热反应24小时。将反应液倾入饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=100：1)（v/v）得产物3-苄基丙酰乙酸乙酯0.799g，无色油状液体，产率68.11%。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.97-1.02(t,J=7.2Hz,3H,COCH2CH 3),1.17-1.22(t,J=7.2Hz,3H,OCH2CH 3),1.49-1.59(m,1H,CH2Ph),2.53-2.60(m,1H,CH2Ph),3.15-3.17(q,J=7.6Hz,2H,COCH 2CH3),3.76-3.81(dt,J=2.4,5.2Hz,1H,CHCH2Ph),4.11-4.17(q,J=7.2Hz,2H,OCH 2CH3),7.15-7.28(m,5H,PhH).MS(ESI):m/z235.1(M+H+),257.1(M+Na+),273.1(M+K+).
第二步
将间苯二酚（1.364mmol,0.15g）和3-苄基丙酰乙酸乙酯（1.5mmol,0.352g）溶于3ml70%硫酸中，反应18h。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=5:1)（v/v），得3-苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M55）0.251g，黄色固体，产率56.3%，mp:140-141℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ1.00-1.04(t,J=7.6Hz,3H,CH3),279-2.85(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),3.91(s,2H,CH2Ph),6.72-6.73(d,J=2.8Hz,1H,H-8),6.80-6.83(dd,J=2.4,8.8Hz,1H,H-6),7.17-7.29(m,5H,PhH),7.63-7.65(d,J=8.8Hz,1H,H-5),10.45(s,1H,OH).MS(ESI):m/z281.1(M+H+),303.1(M+Na+),319.1(M+K+).
第三步
3-苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M55）(0.5mmol,0.14g)溶于2ml干燥DMF中，加入氢化钠(1.75mmol,0.053g)，室温搅拌30min后，0℃条件下缓慢滴加乙酰氯(1.5mmol,0.11ml)的干燥THF溶液(1ml)，室温反应2小时。将反应液倒入20ml1N盐酸溶液中，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=20:1)（v/v），得白色固体0.11g，产率66%，mp:123-125℃。HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.12-1.16(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),2.34(s,3H,CH 3CO),2.84-2.90(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),4.04(s,2H,CH 2Ph),7.05-7.08(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.12(s,1H,H-8),7.19-7.29(m,5H,CH2Ph),7.61-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.20,21.12,22.28,32.56,110.43,117.26,118.05,123.90,125.39,126.40,128.19,128.59,138.91,152.24,152.52,153.46,161.91,168.84.HRMS(ESI)calcd.forC20H19O4 +:323.12779(M+H+),found:323.12751(M+H+),345.10923(M+Na+),361.08309(M+K+).
实施例13、3-苄基-4-乙基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M38)的合成
3-苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M55）(0.5mmol,0.14g)溶于2ml干燥DMF中，加入氢化钠(1.75mmol,0.053g)，室温搅拌30min后，0℃条件下缓慢滴加丙酰氯(1.5mmol,0.13ml)的干燥THF溶液(1ml)，室温反应2小时。将反应液倒入20ml1N盐酸溶液中，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=20:1)（v/v），得白色固体0.143g，产率85%,mp:124℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.13-1.17(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),1.26-1.30(t,J=7.6Hz,3H,COCH2CH 3),2.62-2.64(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),2.86-2.88(q,J=7.6Hz,2H,COCH 2CH3),4.05(s,2H,CH 2Ph),7.05-7.07(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.12(s,1H,H-8),7.19-7.29(m,5H,CH2Ph),7.61-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ8.94,13.21,22.28,27.74,32.56,110.39,117.16,118.06,123.82,125.34,126.39,128.20,128.58,138.93,152.40,152.54,153.48,161.95,172.37.HRMS(ESI)calcd.forC21H21O4 +:337.14344(M+H+),found:337.14303(M+H+),359.12504(M+Na+).
实施例14、3-苄基-4-乙基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M39)的合成
合成方法同实施例13，起始原料换成3-苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M55）和丁酰氯得白色固体，产率100%,mp:102℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.04-1.07(t,J=7.2Hz,3H,COCH2CH2CH 3),1.12-1.16(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),1.78-1.83(m,J=7.2Hz,2H,COCH2CH 2CH3),2.56-2.60(t,J=7.2Hz,2H,COCH 2CH2CH3),2.84-2.90(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),4.04(s,2H,CH 2Ph),7.04-7.07(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.11(s,1H,H-8),7.19-7.29(m,5H,CH2Ph),7.60-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.20,13.61,22.28,29.71,32.57,36.17,110.42,117.15,118.08,123.82,125.34,126.38,128.19,128.58,138.94,152.38,152.53,153.48,161.93,171.55.HRMS(ESI)calcd.forC22H23O4 +:351.15909(M+H+),found:351.15891(M+H+),373.14081(M+Na+),389.11448(M+K+).
实施例15、3-对氟苄基-4-乙基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M52)的合成
合成方法同实施例13，起始原料换成3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M28）和N,N-二乙基甲酰氯，得白色固体，产率63%，mp:74-75℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.13-1.17(t,J=7.6Hz,3H,CH 3),1.20-1.29(dt,J=6.8Hz,6H,N(CH2CH 3)2),2.83-2.89(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),3.38-3.48(m,J=6.8Hz,4H,N(CH 2CH3)2),4.00(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.98(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.10-7.11(d,1H,H-6),7.13(s,1H,H-8),7.20-7.24(m,2H,ArH),7.59-7.61(d,J=8.4Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ18.27,19.24,27.24,36.79,47.03,47.42,115.34,120.20,120.41,121.42,123.34,128.16,130.12,134.58,134.66,139.67,139.70,157.73,158.30,158.47,165.30,167.03,167.73.HRMS(ESI)calcd.forC23H25FNO4 +:398.17621(M+H+),found:398.17617(M+H+),420.15785(M+Na+),436.13206(M+K+).
实施例16、3-苄基-4-丙基-7-N,N-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M54)的合成
第一步
丁酰乙酸乙酯(5mmol,0.79ml)加入15ml无水THF中，0℃氮气环境中加入氢化钠(7.5mmol,0.18g)，15min后向反应液中滴加溴苄(5.5mmol,0.65ml)，60℃加热反应48小时。将反应液倾入饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=100：1)（v/v）得产物3-苄基丁酰乙酸乙酯0.949g，无色油状液体，产率76.4%。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.82-0.85(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.17-1.21(t,J=7.2Hz,3H,OCH2CH 3),1.49-1.59(sext,J=7.2Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.27-2.35(dt,J=7.2Hz,1H,CH2Ph),2.47-2.55(dt,J=7.2Hz,1H,CH2Ph),3.14-3.16(t,J=7.2Hz,2H,CH 2C2H5),3.76-3.80(t,J=7.6Hz,1H,CHCH2Ph),4.10-4.16(q,J=7.2Hz,2H,OCH 2CH3),7.16-7.28(m,5H,PhH).MS(ESI):m/z249.1(M+H+),271.1(M+Na+),287.1(M+K+).
第二步
将间苯二酚（1.364mmol,0.15g）和3-苄基丁酰乙酸乙酯（1.5mmol,0.374g）溶于6ml70%硫酸中，反应24h。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=5:1)（v/v），得3-苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M53）0.185g，白色固体，产率46%，mp:139-140℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ0.94-0.97(t,J=7.2Hz,3H,CH3),1.35-1.42(m,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.75-2.79(t,J=8.0Hz,2H,CH 2C2H5),3.91(s,2H,CH2Ph),6.71-6.72(d,J=2.4Hz,1H,H-8),6.80-6.83(dd,J=2.0,8.8Hz,1H,H-6),7.15-7.28(m,5H,PhH),7.62-7.65(d,J=8.8Hz,1H,H-5),10.44(s,1H,OH).MS(ESI):m/z295.1(M+H+),317.1(M+Na+),333.1(M+K+).MS(ESI):m/z295.1(M+H+),317.1(M+Na+),333.1(M+K+).
第三步
3-苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M53）（0.5mmol,0.147g）溶于3mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（3mmol,0.12g），室温反应15分钟后，加入N,N-二甲基甲酰氯（3mmol,0.28ml），继续搅拌1小时，反应结束。将反应液倾入饱和碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取3次，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=5：1)（v/v）得产物3-苄基-4-丙基-7-N,N-二甲氨基甲酸酯基香豆素（化合物M54）0.44g，白色固体，产率86.8%，mp:117-118℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ0.95-0.99(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.38-1.45(m,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.82-2.86(t,J=8.0Hz,2H,CH 2C2H5),2.93(s,3H,NCH3),3.06(s,3H,NCH3),3.97(s,2H,CH2Ph),7.15-7.27(m,7H,ArH),7.82-7.85(d,J=8.8Hz,1H,H-5).HRMS(ESI)calcd.forC22H24NO4 +:366.16998(M+H+),found:366.17006(M+H+),388.15222(M+Na+).
实施例17、3-苄基-4-乙基-7-N,N-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M56)的合成
3-苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M55）（0.441mmol,0.134g）溶于3mlDMF，氮气保护下加入氢化钠（1mmol,0.024g），室温反应15分钟后，加入N,N-二甲基甲酰氯（1mmol,0.092ml），继续搅拌1小时，反应结束。将反应液倾入饱和碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取3次，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=5：1)（v/v）得产物0.147g，白色固体，产率94.6%，mp:85-86℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.12-1.16(t,J=7.6Hz,3H,CH3),2.83-2.89(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),3.03(s,3H,NCH3),3.13(s,3H,NCH3),4.04(s,2H,CH2Ph),7.09(d,J=2.0Hz,1H,H-8),7.11-7.13(dd,J=2.0,7.6Hz,1H,H-6),7.17-7.29(m,5H,ArH),7.58-7.61(d,J=8.8Hz,1H,H-5).HRMS(ESI)calcd.forC21H22NO4 +:352.15433(M+H+),found:352.15437(M+H+),374.13662(M+Na+).
实施例18、3-苄基-4-乙基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M62)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-乙基-7-羟基香豆素（化合物M55）和N,N-二乙基甲酰氯，得乳白色固体，产率62.4％，mp:64-65℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.13-1.17(t,J=7.6Hz,3H,CH 3),1.21-1.29(dt,J=6.8Hz,6H,N(CH2CH 3)2),2.84-2.90(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),3.38-3.49(m,J=6.8Hz,4H,N(CH 2CH3)2),4.05(s,2H,CH 2Ph),7.11-7.13(m,2H,H-6andH-8),7.20-7.30(m,5H,CH2Ph),7.60-7.62(d,J=8.4Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.26,13.35,14.30,22.30,32.54,42.06,43.43,110.33,116.54,118.34,123.28,125.17,126.34,128.20,128.57,139.08,152.81,153.37,153.45,162.17.HRMS(ESI)calcd.forC23H26NO4 +:380.18563(M+H+),found:380.18545(M+H+),402.16736(M+Na+),418.14141(M+K+).
实施例19、3-苄基-4-甲基-6-氯-7-丙酰氧基香豆素(化合物M65)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-甲基-6-氯-7-羟基香豆素（化合物M3）和丙酰氯，得白色固体，产率44%，mp:124-126℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.30-1.33(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH 3),2.43(s,3H,CH 3),2.67-2.70(q,7.2Hz,2H,CH 2CH3),4.06(s,2H,CH 2Ph),7.15(s,1H,H-8),7.19-7.28(m,5H,CH2Ph),7.67(s,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ8.99,15.56,27.45,33.07,112.33,119.63,123.00,125.66,126.01,126.52,128.25,128.67,138.34,145.92,148.51,151.18,161.05,171.48.HRMS(ESI)calcd.forC20H18ClO4 +:357.08881(M+H+),found:357.08905(M+H+),379.07086(M+Na+),395.04497(M+K+).
实施例20、3-对氟苄基-4-甲基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M81)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-对氟苄基-4-甲基-7-羟基香豆素和乙酰氯，得白色固体，产率61%，mp:119-120℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.34(s,3H,CH 3CO),2.44(s,3H,CH 3),4.02(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.97(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.06-7.11(m,2H,H-6andH-8),7.12(s,1H,H-8),7.21-7.26(m,2H,ArH),7.61-7.64(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ15.47,21.11,32.21,110.19,115.26,115.47,118.09,118.36,124.69,125.49,129.66,129.74,134.31,134.34,146.97,152.43,152.88,160.32,161.52,162.75,168.80.HRMS(ESI)calcd.forC19H16FO4 +:327.10271(M+H+),found:327.10315(M+H+),349.08500(M+Na+),365.05920(M+K+).
实施例21、3-对氟苄基-4-甲基-7-丙酰氧基香豆素(化合物M82)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-对氟苄基-4-甲基-7-羟基香豆素和丙酰氯(1.5mmol,0.131ml)，得白色固体，产率48%，mp:115-116℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.26-1.30(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),2.45(s,3H,CH 3),2.60-2.66(q,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),4.02(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.97(t,J=8.0Hz,2H,ArH),7.06-7.10(m,2H,H-6andH-8),7.20-7.26(m,2H,ArH),7.61-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ8.93,15.47,27.73,32.22,110.16,115.26,115.48,118.09,118.27,124.63,125.43,129.67,129.75,134.33,134.36,146.98,152.59,152.91,160.33,161.56,162.76,172.33.HRMS(ESI)calcd.forC20H18FO4 +:341.11836(M+H+),found:341.11829(M+H+),363.10044(M+Na+),379.07431(M+K+).
实施例22、3-对氟苄基-4-甲基-7-丁酰氧基香豆素(化合物M83)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-对氟苄基-4-甲基-7-羟基香豆素和丁酰氯，得白色固体，产率69%，mp:85-86℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.04-1.07(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.77-1.83(m,J=7.2Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.45(s,3H,CH3),2.56-2.59(t,J=7.2Hz,2H,CH 2CH2CH3),4.02(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.97(t,J=8.0Hz,2H,ArH),7.05-7.10(m,2H,H-6andH-8),7.20-7.26(m,2H,ArH),7.61-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.61,15.47,18.34,32.22,36.16,110.18,115.26,115.47,118.13,118.27,124.63,125.43,129.67,129.75,134.33,134.36,146.99,152.57,152.90,160.32,161.54,162.75,171.51.HRMS(ESI)calcd.forC21H20FO4 +:355.13401(M+H+),found:355.13422(M+H+),377.11617(M+Na+),393.09024(M+K+).
实施例23、3-对氟苄基-4-丙基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M90)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-对氟苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M26）和乙酰氯。重结晶（乙酸乙酯），得白色固体0.127g，产率72%，mp:150-151℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.05-1.09(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.52-1.58(m,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.36(s,3H,CH 3CO),2.80-2.85(m,2H,CH 2CH2CH3),4.02(s,2H,CH 2Ph),6.95-7.00(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.07-7.10(dd,J=2.0,8.4Hz,1H,H-6),7.13-7.14(d,J=2.0Hz,1H,H-8),7.21-7.25(m,2H,ArH),7.62-7.64(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ14.49,21.12,22.52,31.14,32.01,110.43,115.25,115.46,117.47,118.08,124.11,125.54,129.57,129.65,134.58,151.20,152.30,153.37,160.34,161.78,162.77,168.82.HRMS(ESI)calcd.forC21H20FO4 +:355.13401(M+H+),found:355.13436(M+H+),377.11631(M+Na+),393.09050(M+K+).
实施例24、3-对氟苄基-4-丙基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M91)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-对氟苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M26）和丙酰氯，得白色固体，产率61%，mp:94-95℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.03-1.07(t,J=7.2Hz,3H,CH2CH2CH 3),1.26-1.30(t,J=7.6Hz,3H,COCH2CH 3),1.50-1.56(m,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),2.61-2.66(q,J=7.6Hz,2H,COCH 2CH3),2.78-2.82(t,J=7.6Hz,2H,CH 2CH2CH3),4.00(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.98(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.05-7.07(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.11(s,1H,H-8),7.19-7.23(m,2H,ArH),7.59-7.61(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ8.93,14.49,22.53,27.74,31.14,32.01,110.39,115.24,115.45,117.37,118.09,124.03,125.49,129.58,129.66,134.58,134.61,151.23,152.46,153.38,160.34,161.82,162.77,172.35.HRMS(ESI)calcd.forC22H22FO4 +:369.14966(M+H+),found:369.15020(M+H+),391.13211(M+Na+),407.10587(M+K+).
实施例25、3-对氟苄基-4-丙基-7-丁酰氧基香豆素(化合物M92)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-对氟苄基-4-丙基-7-羟基香豆素（化合物M26）和丁酰氯，得白色固体，产率64%，mp:88-90℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.05-1.07(m,6H,CH3),1.50-1.56(m,J=7.6Hz,2H,CH2CH 2CH3),1.77-1.83(m,J=7.2Hz,2H,COCH2CH 2CH3),2.56-2.60(t,J=7.2Hz,2H,COCH 2CH2CH3),2.78-2.82(t,J=7.6Hz,2H,CH 2CH2CH3),4.00(s,2H,CH 2Ph),6.93-6.98(t,J=8.4Hz,2H,ArH),7.04-7.06(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.10(s,1H,H-8),7.21-7.22(m,2H,ArH),7.59-7.61(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.60,14.49,18.35,22.53,31.14,32.01,36.17,110.42,115.24,115.45,117.37,118.12,124.03,125.48,129.58,129.65,134.58,151.22,152.44,153.38,160.34,161.81,162.77,171.53.HRMS(ESI)calcd.forC23H24FO4 +:383.16531(M+H+),found:383.16575(M+H+),405.14765(M+Na+),421.12162(M+K+).
实施例26、3-苄基-4-甲基-7-新戊酰氧基香豆素(化合物M43)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和新戊酰氯得白色固体g，产率90%，mp:157-158℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ1.37(s,3H,C(CH 3)3),2.44(s,3H,CH 3),4.06(s,2H,CH 2Ph),7.00-7.02(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.06(s,1H,H-8),7.19-7.26(m,5H,CH2Ph),7.59-7.62(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ15.51,27.08,32.99,39.24,110.06,117.98,118.29,124.72,125.33,126.38,128.28,128.60,138.75,147.00,152.94,161.63,176.52.HRMS(ESI)calcd.forC22H23O4 +:351.15909(M+H+),found:351.15890(M+H+),373.14087(M+Na+),389.11450(M+K+).
实施例27、3-苄基-4-甲基-7-戊酰氧基香豆素(化合物M44)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和戊酰氯，得白色固体，产率86%，mp:110-111℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ0.96-1.00(t,J=7.6Hz,3H,CH2CH 3),1.43-1.48(m,J=7.6Hz,2H,CH 2CH3),1.73-1.77(m,J=7.6Hz,2H,CH 2CH2CH3),2.44(s,3H,CH 3),2.57-2.61(t,J=7.6Hz,2H,COCH 2),4.06(s,2H,CH 2Ph),7.04-7.06(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.09(s,1H,H-8),7.18-7.25(m,5H,CH2Ph),7.60-7.62(d,J=8.8Hz,1H,H-5).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ13.71,15.50,22.23,26.86,32.97,34.07,110.13,118.03,118.37,124.76,125.39,126.38,128.27,128.60,138.73,147.00,152.50,152.91,161.62,171.70.HRMS(ESI)calcd.forC22H23O4 +:351.15909(M+H+),found:351.15892(M+H+),373.14081(M+Na+),389.11455(M+K+).
实施例28、3-苄基-4-甲基-7-苯磺酰氧基香豆素(化合物M45)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和苯磺酰氯，得白色固体，产率68%，mp:131-132℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.43(s,3H,CH 3),4.04(s,2H,CH 2Ph),6.84(s,1H,H-8),7.05-7.08(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.19-7.29(m,5H,CH2Ph),7.53-7.58(m,3H,H-5andPhSO3),7.68-7.72(t,J=7.6Hz,1H,PhSO3),7.85-7.87(d,J=7.6Hz,2H,PhSO3).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ15.54,33.03,110.61,118.69,119.57,125.67,125.80,126.51,128.31,128.46,128.64,129.43,134.70,135.03,138.45,146.56,150.76,152.59,161.20.HRMS(ESI)calcd.forC23H19O5S+:407.09477(M+H+),found:407.09446(M+H+),429.07635(M+Na+),445.05041(M+K+).
实施例29、3-苄基-4-甲基-7-苯甲酰氧基香豆素(化合物M46)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和苯甲酰氯，得白色固体，产率97%，mp:149-150℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.47(s,3H,CH 3),4.08(s,2H,CH 2Ph),7.18-7.27(m,7H,ArH),7.52-7.55(t,2H,ArH),7.65-7.69(t,2H,ArH),8.20-8.22(d,J=7.6Hz,2H,ArH).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ15.55,33.01,110.33,118.18,118.55,124.88,125.49,126.41,128.29,128.62,128.72,128.91,130.33,134.02,138.72,147.03,152.69,152.99,161.64,164.62.HRMS(ESI)calcd.forC24H19O4 +:371.12779(M+H+),found:371.12762(M+H+),393.10954(M+Na+),409.08341(M+K+).
实施例30、3-苄基-4-甲基-7-对甲苯磺酰氧基香豆素(化合物M48)的合成
合成方法同实施例17，起始原料换成3-苄基-4-甲基-7-羟基香豆素（化合物M1）和对甲苯磺酰氯，得白色固体，产率49%，mp:138-139℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ2.43(s,3H,CH 3),2.46(s,3H,CH 3),4.03(s,2H,CH 2Ph),6.82(s,1H,H-8),7.07-7.09(d,J=8.8Hz,1H,H-6),7.18-7.28(m,5H,CH2Ph),7.32-7.34(d,J=8.0Hz,2H,PhSO3),7.56-7.58(d,J=8.8Hz,1H,H-5),7.71-7.73(d,J=8.0Hz,2H,PhSO3).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ15.54,21.79,33.02,110.59,118.80,119.49,125.57,125.79,126.50,128.31,128.48,128.63,130.07,131.96,138.48,146.00,146.65,150.88,152.55,161.26.HRMS(ESI)calcd.forC24H21O5S+:421.11042(M+H+),found:421.11003(M+H+),443.09190(M+Na+),459.06602(M+K+).
实施例31、3-苯并噻唑-4-羧基-7-甲氧基香豆素(化合物M13)的合成
第一步
将2，4-二甲氧基苯甲醛（60mmol,10g）加入200ml干燥二氯甲烷中，缓慢加入氯化铝（150mmol,20g），室温反应1小时。反应液中加入50ml3NHCl，二氯甲烷萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干得无色至淡黄色产品。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=20：1)（v/v），得2-羟基-4-甲氧基苯甲醛7.917g，白色粉末，产率86.7%，mp:35-36℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.86(s,3H,CH3),6.43(d,J＝2.4Hz,1H,PhH),6.53-6.56(dd,J＝2.4,8.8Hz,1H,PhH),7.42-7.44(d,J＝8.8Hz,1H,PhH),9.72(s,1H,OH),11.49(s,1H,CHO).
第二步
2-羟基-4-甲氧基苯甲醛(20mmol,3.043g)和苯并噻唑-2-乙腈(20mmol,3.485g)加入60ml乙醇中，加入0.2ml哌啶，室温反应17小时。有黄色沉淀从溶液中析出，收集沉淀，将其在2%的盐酸中回流2小时。冷却，加入过量醋酸钠调节pH至中性。将沉淀过滤，滤饼用水洗，烘干，DMF重结晶得3-苯并噻唑-7-甲氧基香豆素（化合物M11）5.5g，黄色固体，产率89%，mp:239℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ3.92(s,3H,OCH3),7.07-7.09(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H,H-6),7.17(d,J＝2.0Hz,1H,H-8),7.44-7.58(dt,J＝7.6Hz,2H,H-5’,H-6’),8.00-8.01(d,J＝8.0Hz,2H,H-4’,H-7’),8.16-8.18(d,J＝8.0Hz,1H,H-5),9.21(s,1H,H-4).MS(ESI):m/z310.1(M+H+),332.1(M+Na+),348.0(M+K+).
第三步
3-苯并噻唑-7-甲氧基香豆素（M11）（16mmol,4.949g）溶于40mlDMF中，加入氰化钾（32mmol,2.08g）,40℃反应1小时。滤掉沉淀，反应温度降至0℃，加入碘（16mmol,5.35g），在此温度下继续反应1小时。收集反应产生的沉淀，将沉淀用水洗，甲醇洗，烘干。DMF重结晶得3-苯并噻唑-4-氰基-7-甲氧基香豆素（化合物M12）4.5g,红色针状晶体,产率84.2%，mp:192-193℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ3.96(s,3H,OCH3),7.21-7.24(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H,H-6),7.28(d,J＝2.4Hz,1H,H-8),7.57-7.64(dt,J＝7.2Hz,2H,H-5’,H-6’),7.93-7.95(d,J＝8.8Hz,1H,H-5),8.14-8.27(d,J＝8.0Hz,2H,H-4’,H-7’).MS(EI):m/z334.1(M+,100),309.9(15),306.0(27),291.0(60),281.0(3),265.9(8),262.9(17),234.7(20).
第四步
3-苯并噻唑-4-氰基-7-甲氧基香豆素（M12）（10mmol,3.343g）溶于30ml50%H2SO4中，100℃反应12小时。向反应体系中加入200ml水，有固体析出。将固体收集后溶于5%NaHCO3溶液，过滤，收集滤液，用浓盐酸将滤液酸化，析出黄色固体，过滤，烘干得产物3-苯并噻唑-4-羧基-7-甲氧基香豆素（化合物M13）3.202g，产率91%，mp:247-248℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ3.94(s,3H,OCH3),7.13-7.15(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H,H-6),7.23(d,J＝2.4Hz,1H,H-8),7.48-7.52(t,J＝7.2Hz,1H,H-5’orH-6’),7.56-7.60(m,2H,H-6’orH-5’,H-5),7.97-8.20(d,J＝8.0Hz,2H,H-4’,H-7’).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ56.9,101.5,110.0,110.9,114.7,122.5,123.1,126.0,127.0,129.0,136.1,146.6,152.1,155.7,158.9,160.2,164.7,166.4.MS(ESI):m/z354.04(M+H+).
实施例32、3-苯并噻唑-4-羧基-7-N,N-二甲基甲酰氧基香豆素(化合物M18)的合成
第一步
2,4-二羟基苯甲醛(1mmol,0.138g)和苯并噻唑-2-乙腈(1mmol,0.174g)加入3ml乙醇中，加入2滴哌啶，室温反应2小时。有黄色沉淀从溶液中析出，收集沉淀，将其在2%的盐酸中回流4小时。冷却，加入过量醋酸钠调节pH至中性。将沉淀过滤，滤饼用水洗，烘干，DMF/异丙醇重结晶得3-苯并噻唑-7-羟基香豆素（化合物M15）0.235g，黄色固体，产率80%，mp:278-279℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ6.85(d,J＝2.0Hz,1H,H-8),6.91-6.93(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H,H-6),7.43-7.57(dt,J＝7.6Hz,2H,H-5’,H-6’),7.90-7.92(d,J＝8.8Hz,1H,H-5),8.03-8.16(d,J＝8.0Hz,2H,H-4’,H-7’),9.15(s,1H,H-4),11.1(brs,0.8H,OH).MS(ESI):m/z296.0(M+H+),318.0(M+Na+),334.0(M+K+).
第二步
3-苯并噻唑-7-羟基香豆素（化合物M15）（20mmol,5.9g）溶于180mlDMF中，加入氰化钠（40mmol,1.92g）,40℃反应3小时，0℃加入碘（20mmol,5.22g），继续反应1.5小时。收集反应产生的沉淀，将沉淀用水洗，甲醇洗，烘干。DMF重结晶得3-苯并噻唑-4-氰基-7-羟基香豆素（化合物M16）5.106g，红色粉末,产率80％，mp:230℃升华。1HNMR(400MHz,DMSO):δ6.92(d,J＝2.0Hz,1H,H-8),7.05-7.08(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H,H-6),7.53-7.64(dt,J＝7.6Hz,2H,H-5’,H-6’),7.86-7.88(d,J＝9.2Hz,1H,H-5),8.11-8.24(d,J＝8.0Hz,2H,H-4’,H-7’),11.38(s,1H,OH).MS(ESI):m/z321.0(M+H+),343.0(M+Na+).
第三步
3-苯并噻唑-4-氰基-7-羟基香豆素（化合物M16）（10mmol,3.203g）溶于50ml50%H2SO4中，105℃回流反应20小时。将反应体系中的固体过滤收集后溶于5%NaHCO3溶液，过滤，收集滤液，用浓盐酸将滤液酸化，析出黄色固体，过滤，烘干，粗产率95%。取少量用DMF重结晶得3-苯并噻唑-4-羧基-7-羟基香豆素（化合物M17），黄色固体，mp:293-294℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ6.86(d,J=1.6Hz,1H,H-8),6.90-6.93(dd,1H,H-6),7.41-7.53(dt,J=7.6Hz,2H,H-5’,H-6’),7.61-7.63(d,J=8.8Hz,1H,H-5),7.93-8.12(d,J=8.0Hz,2H,H-4’,H-7’),11.5(brs,0.75H,OH).MS(ESI):m/z338.0(M-H+).
第四步
3-苯并噻唑-4-羧基-7-羟基香豆素（化合物M17）（0.885mmol,0.3g）溶于10mlDMF中，加入氢化钠（1.77mmol），室温搅拌30min后，加入N,N-二甲基甲酰氯（1.77mmol），继续反应4小时。常规后处理，柱层析分离(二氯甲烷：乙醇=30:1)（v/v），得3-苯并噻唑-4-羧基-7-N,N-二甲基甲酰氧基香豆素（化合物M18）0.122g，黄色固体，产率34%，mp:280-281℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ2.96(s,3H,CH3),3.01(s,3H,CH3),7.27-7.29(d,J＝8.4Hz,1H,H-6),7.41-7.42(d,J＝2.0Hz,1H,H-8),7.47-7.58(dt,J＝7.6Hz,2H,H-5’,H-6’),7.71-7.73(d,J＝8.8Hz,1H,H-5),8.00-8.18(d,J＝8.0Hz,2H,H-4’,H-7’).MS(ESI):m/z409.05(M-H+).
实施例33、3-苯并噻唑-4-羧基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M23)的合成
3-苯并噻唑-4-羧基-7-羟基香豆素（化合物M17）(0.5mmol,0.17g)溶于2ml干燥DMF中，加入氢化钠(1.75mmol,0.053g)，室温搅拌30min后，0℃条件下缓慢滴加乙酰氯(0.75mmol,0.053ml)的干燥THF溶液(1ml)，室温反应2小时。将反应液倒入40ml1N盐酸溶液中，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(二氯甲烷：甲醇：醋酸=50:1:0.1)（v/v），得黄色固体0.082g，产率43%，mp:215-216℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ2.35(s,3H,CH3),7.33-7.36(d,J＝8.8Hz,1H,H-6),7.50-7.62(m,3H,H-5’,H-6’,H-8),7.69-7.72(d,J＝8.4Hz,1H,H-5),8.00-8.02(d,J＝8.0Hz,1H,H-7’),8.20-8.22(d,J＝8.0Hz,1H,H-4’).MS(ESI):m/z380.02309(M-H+).
实施例34、3-苯甲酰基-4-羧基-7-甲氧基香豆素(化合物M14)的合成
第一步
2-羟基-4-甲氧基苯甲醛(1mmol,0.152g)和苯甲酰乙酸乙酯(1mmol,0.192g)置于反应瓶中，加入0.25ml哌啶，室温搅拌10min至形成粉红色固体。向体系中加入20ml1N盐酸，二氯甲烷萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。用二氯甲烷/石油醚重结晶，得3-苯甲酰基-7-甲氧基香豆素（化合物M9）0.269g，黄色簇状针晶，产率96%。mp:149-150℃。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ3.92(s,3H,OCH3),6.87(d,J＝2.0Hz,1H,H-8),6.90-6.93(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H,H-6),7.46-7.51(m,3H,Ph-m,H-5),7.58-7.60(m,1H,Ph-p),7.85-7.87(m,2H,Ph-o),8.10(s,1H,H-4).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ56.0,100.7,111.9,113.6,123.0,128.5,129.5,130.5,133.4,136.8,146.4,157.2,158.8,164.7(C=O),192.0(C=O).MS(ESI):m/z281.1(M+H+),303.1(M+Na+),319.0(M+K+).
第二步
3-苯甲酰基-7-甲氧基香豆素（9mmol,2.523g）溶于20mlDMF中，加入氰化钠（18mmol,0.864g），室温搅拌1小时，加入碘（9mmol,1.143g），继续搅拌1小时，停止反应。向反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，溶液减压蒸干。柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯=30:1)（v/v），得3-苯甲酰基-4-氰基-7-甲氧基香豆素（化合物M10）0.76g，黄色固体，产率28%，mp:175-176℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ3.93(s,3H,OCH3),7.14-7.17(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H,H-6),7.2(d,J＝2.0Hz,1H,H-8),7.56-7.60(t,J＝7.6Hz,2H,Ph-m),7.74-7.77(m,2H,Ph-p,H-5),8.07-8.09(d,J＝7.2Hz,2H,Ph-o).MS(ESI):m/z328.1(M+Na+),344.0(M+K+).
第三步
3-苯甲酰基-4-氰基-7-甲氧基香豆素（化合物M10）（0.33mmol,100mg）溶于5ml50%H2SO4中，100℃反应15小时。常规后处理，柱层析分离(二氯甲烷：乙醇=10:1)（v/v），得3-苯甲酰基-4-羧基-7-甲氧基香豆素（化合物M14）0.03g，淡黄色固体，产率28%，mp:196-197℃。1HNMR(400MHz,DMSO):δ3.90(s,3H,OCH3),7.00-7.03(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H,H-6),7.10(d,J＝2.4Hz,1H,H-8),7.47-7.51(t,J＝8.0Hz,2H,Ph-m),7.61-7.65(t,J＝7.6Hz,1H,Ph-p),7.86-7.89(m,3H,Ph-o,H-5).MS(ESI):m/z323.05(M-H+).
实施例35、化合物与MEK1的结合能力
在结合实验中采用HTRF分析方法，（homogeneoustime-resolvedfluorescenceassay）技术结合了荧光共振能量转移（FRET）和时间分辨荧光（TRF）两种技术。该技术是利用了具有穴状结构的Eu元素的螯和标记物作为一个供体（Donor），是基于Eu穴状化合物的供体与受体（第二荧光标记物）之间的荧光共振能量转移（FRET）。在荧光共振能量转移中，受体发射荧光的寿命等同于供体的发射荧光的寿命。因为Eu的荧光衰减周期较长，所以含Eu的供体会诱导XL665受体长时间地发射荧光，受体激发后产生的荧光便能持续较长时间，这样通过时间分辨就可以区分那些短寿命的自身散射的荧光，这样从短寿命荧光背景中就很容易区分出FRET信号。
当由于生物分子相互作用导致两个荧光基团接近时，在激发时被穴状化合物捕获的部分能量释放，发射波长为620nm；另一部分能量转移到受体（acceptor）上，发射波长为665nm。665nm的发射光仅仅由供体（donor）引起的FRET产生。所以，当生物分子相互作用时，有两个激发光620nm和665nm；当不存在相互作用时，只有620nm一个激发光。实验原理如图1所示。
先将化合物配成10mMDMSO溶液，再用缓冲液稀释成所需浓度的溶液。缓冲液成分为50mMHEPESpH7.5,0.01%Brij-35,10mMMgCl2and1mMEGTA。采用384孔板Proxiplate-384Fplussolidbackplate(PerkinElmer)，加入5nMActiveGST-MEK1:M02-10G(SignalChem)，2nMEu-Anti-GST:PV5594(Invitrogen)作为能量供体（donor），2nMKinasetracer236:PV5592(Invitrogen)作为能量受体（acceptor），再加入不同浓度的待测化合物，反应30min后采用酶标仪PHERAStarplatereader(BMGLabtech,Durham,NC)检测信号.使用作图软件GraphPadPrism4.0对数据进行处理。试验中，如果化合物可以与MEK1结合，则影响tracer与MEK1的结合，因此减少激发出665nm的激发光；而如果化合物与MEK1没有结合作用，则tracer与MEK1结合作用不受影响，激发出665nm的激发光。通过比较665nm的信号和620nm的信号的比值，检测化合物与MEK1的结合作用。
采用上述方法测定了化合物在20μM和2μM浓度下与MEK1的结合活性，选取20μM浓度下结合率大于40%的化合物进行了IC50测试，部分化合物测试结果如表1所示。
表1本发明化合物对MEK1的结合活性
化合物编号 R4 R2 R1 R3 Mean IC50(nM)
M 29 N(CH3)2COO Et 4-Fluorobenzyl H 54.57
M 34 CH3COO Et 4-Fluorobenzyl H 91.2
M 35 EtCOO Et 4-Fluorobenzyl H 140.4
M 27 N(CH3)2COO Pr 4-Fluorobenzyl H 157.8
M 56 N(CH3)2COO Et Bn H 163.5
M 91 EtCOO Pr 4-Fluorobenzyl H 175.6
M 37 CH3COO Et Bn H 175.7
M 82 EtCOO Me 4-Fluorobenzyl H 189.9
M 2 N(CH3)2COO Me Bn H 222.8
M 81 CH3COO Me 4-Fluorobenzyl H 247.6
M 90 CH3COO Pr 4-Fluorobenzyl H 252.1
M 4 N(CH3)2COO Me Bn Cl 307.3
M 65 EtCOO Me Bn Cl 325.5
M 32 PrCOO Me Bn H 352.9
M 38 EtCOO Et Bn H 391.1
M 5 N(CH3)2COO Me 4-Fluorobenzyl H 407.8
M 39 PrCOO Et Bn H 473.3
M 30 CH3COO Me Bn H 519.8
M 83 PrCOO Me 4-Fluorobenzyl H 824.5
M 36 PrCOO Et 4-Fluorobenzyl H 908.6
M 92 PrCOO Pr 4-Fluorobenzyl H 944.1
M 31 EtCOO Me Bn H 1033
M 54 N(CH3)2COO Pr Bn H 1035
M 52 N(Et)2COO Et 4-Fluorobenzyl H 2190
M 62 N(Et)2COO Et Bn H 6600
实施例36、化合物对磷酸化MEK1的抑制作用
同样采用HTRF方法，原理和结合实验类似，如图2所示。本实验共分为两步，分别是激酶反应步骤和检测反应步骤，激酶反应步骤是MEK1磷酸化ERK2的步骤，加入由激酶反应缓冲液50mMpH=7.0HEPESbuffer，10mMMgCl2，1mMDTT，0.5mMOrthovanadate，0.01%BSA稀释的化合物，40nMinactiveERK2GSTtagged-(PV3314)(Invitrogen)，5.72nMactiveMEK1-07-041(Carna)，30μMATP，室温反应2小时；第二步是检测反应步骤，加入cisbio公司抗体MAbAnti-phosphop44/42-K(61P10KAZ)和MAbAntiGST-XL665(61GSTXLA)，反应3小时后采用酶标仪FlexStation3(MolecularDevices)检测信号，使用作图软件GraphPadPrism5对数据进行处理。实验重复3次。以已知MEK抑制剂CI-1040作为阳性对照。
如果化合物对MEK1有抑制作用，则磷酸化的底物ERK2就会减少，相应的与ERK2结合的抗磷抗体减少，因此激发的MAbAntiGST-XL665的信号也会相应降低。通过检测665nm的信号和620nm的信号的比值，检测化合物对活化的MEK1的抑制作用。部分化合物测试结果如表2所示。
表2本发明化合物对磷酸化MEK1的抑制活性
实施例37、化合物对非活化MEK1的抑制作用
同样采用HTRF方法，原理和化合物对磷酸化MEK1的抑制作用实验类似。本实验共分为两步，分别是激酶反应步骤和检测反应步骤，激酶反应步骤是BRAF磷酸化MEK1的步骤，加入由激酶反应缓冲液50mMpH=7.0HEPESbuffer，10mMMgCl2，1mMDTT，0.5mMOrthovanadate，0.01%BSA稀释的化合物，0.42ng/μlactiveBRAF(09-122)(Carna)，40nMinactiveMEK1GSTtagged-(07-141-10)(Carna)，100μMATP，室温反应2小时；第二步是检测反应步骤，加入cisbio公司抗体MAbAnti-phosphoMEK1/2-K(61P17KAE)和MAbAntiGST-XL665(61GSTXLA)，反应3小时后采用酶标仪FlexStation3(MolecularDevices)检测信号，使用作图软件GraphPadPrism5对数据进行处理。实验重复3次。以已知MEK抑制剂U0126作为阳性对照。
如果化合物对inactiveMEK1有抑制作用，则会抑制inactiveMEK1的磷酸化，相应的与MEK1结合的抗磷抗体减少，因此激发的MAbAntiGST-XL665的信号也会相应降低。通过检测665nm的信号和620nm的信号的比值，检测化合物对inactiveMEK1的抑制作用。部分化合物测试结果如下表3所示。
表3本发明化合物对非活化MEK1的抑制活性
实施例38、化合物抗黑色素瘤细胞增殖作用
将黑色素瘤细胞A375接种于96孔细胞培养板中，每孔3500个（190μL），设3个复孔，置二氧化碳培养箱中于37℃，孵育18h，待细胞贴壁生长。然后将溶于PBS溶液中不同浓度的化合物10μL分别加入到细胞培养孔中，使各实验组最终化合物的浓度梯度均为：40、20、10、5、2.5、1.25、0.63μmol/L，另设溶剂对照孔和空白参比孔各3个复孔。以MEK抑制剂U0126为阳性对照。将细胞培养板置培养箱中孵育72小时。孵育完毕后，吸弃培养液，每孔加入10%三氯乙酸200μL，在4℃冰箱中放置1h固定细胞。培养板各孔用去离子水洗涤5遍，去除三氯乙酸。在空气中干燥后，每孔加0.4%SRB（以1%醋酸配制）100μL，室温下放置15min，弃去各孔内液体后用1%乙酸洗涤5遍，去除未结合染料，空气中干燥后用pH10.5，10mmol/LTris碱100μL溶解，在平板振荡器上振荡10min，置酶标仪中测定每孔吸收度OD值（540nm），按下式计算抑制率，使用GraphPad2.0软件计算出IC50值。部分化合物测试结果如下表4所示。
表4本发明化合物对黑色素瘤细胞A375的抗增殖作用
化合物编号 R4 R2 R1 R3 MeanIC50(μM)
M 4 N(CH3)2COO Me Bn Cl 1.23
M 5 N(CH3)2COO Me 4-Fluorobenzyl H 8.46
M 29 N(CH3)2COO Et 4-Fluorobenzyl H 10.2
M 56 N(CH3)2COO Et Bn H 5.49
U0126 1.33
实施例39、化合物抗结肠癌细胞增殖作用
用标准的基于Am-Blue荧光检测法测定待测化合物抑制肿瘤细胞增殖的作用。使用Am-Blue对细胞进行着色。不同细胞系种植在96孔微量培养板上，在每个孔中加入6*103个HT-29细胞（人结肠癌细胞系），24小时后，分别加入不同浓度的待测化合物（0.1-10mM）作用72h，每个浓度3个复孔，以0.1％DMSO作为溶剂对照。然后加入10％细胞悬液体积的Am-Blue检测试剂，在细胞培养箱内孵育2-4h。用荧光酶标仪进行检测，激发光波长在530-560nm之间，发射光波长为590nm，记录相对荧光单位（RFU）最后用计算机收集数据并处理数据。实验重复3次。部分化合物测试结果如下。
表5本发明化合物对结肠癌细胞HT-29的抗增殖作用
化合物编号 R4 R2 R1 R3 Mean IC50(μM)
M 2 N(CH3)2COO Me Bn H 4.26
M 4 N(CH3)2COO Me Bn Cl 4.39
M 5 N(CH3)2COO Me 4-Fluorobenzyl H 9.57
M 29 N(CH3)2COO Et 4-Fluorobenzyl H 2.13
M 56 N(CH3)2COO Et Bn H 4.09
实施例40、化合物对细胞静息状态下ERK通路的抑制作用
将1＊106个HEK293细胞加入到35mm培养皿中，然后置于37℃培养箱中培养，待细胞覆盖率达到80%～90%时，将浓度如图3、图4所示的小分子化合物加入到相应的培养皿中，并平行设置U0126阳性对照组和DMSO阴性对照组。加药6h后收集细胞，4℃、3600rpm离心20min，弃上清得到细胞沉淀。将收集的细胞裂解，使用BCAProteinAssayKit测定细胞裂解液中总蛋白浓度，Westernblot（WB）检测细胞磷酸化ERK蛋白的水平。
经WB检测发现，M2、M4、M5等化合物对细胞静息状态下ERK通路活化具有显著的抑制效果（图3、图4），与MEK抑制剂U0126作用相似，且处理6h对细胞形态无明显地影响（图5）。
实施例41、化合物M5最小抑制浓度实验
将1＊106个HEK293细胞加入到35mm培养皿中，然后置于37℃培养箱中培养，待细胞覆盖率达到80%～90%时，按照图6中所示的浓度将化合物M5加入到各培养皿中。化合物作用细胞6h后收集细胞，4℃3600rpm离心20min，弃上清，裂解细胞后进行Westernblot（WB）检测。
结论：和对照组相比，5μM的M5能够明显地抑制EKR通路活化（图6）。
实施例42、化合物M5抑制ERK通路激活的Timecourse
上述实验发现化合物M5可以明显抑制细胞静息状态下ERK通路的活化，为了进一步研究M5对ERK通路激活的影响，使用30μM化合物M5预处理细胞1h后，用高浓度血清刺激HEK293细胞，然后在不同的时间点上检测ERK通路的激活情况。将1*106个HEK293细胞加入到35mm培养皿中，然后置于37℃培养箱中培养，待细胞覆盖率达到80%～90%时，向各培养皿中加入30μM的化合物M5，预处理细胞1h，之后更换20%FBS培养液继续培养，图7中，M5全程存在，即更换培养液时，新换培养液中M5的浓度仍保持30μM不变，而图8中，M5仅预处理细胞1h，之后更换的培养液中不加入化合物。然后，在不同的时间点收集细胞检测细胞中ERK激活情况。
结论：化合物M5全程给药或仅预处理细胞时，均能有效地抑制ERK通路的激活情况。其中，全程给药时，M5从血清刺激细胞0.5h起发挥抑制ERK通路激活的作用；仅预处理细胞时，M5从血清刺激细胞1h发挥抑制ERK通路激活的作用。
实施例43、化合物M5的抗病毒实验
上述实验已经验证M5能够有效抑制ERK通路的激活，并且文献报道ERK通路在很多病毒的复制中发挥了重要作用。因此，为了进一步研究M5是否能够通过抑制ERK通路的激活，从而抑制病毒的复制，本实验使用M5预处理细胞1h后，向细胞中加入1.5MOI的病毒（EV71或HSV2）,然后检测M5对病毒复制的影响。具体步骤如下：待35mm培养皿中的细胞覆盖率达到80%～90%时，更换含有2%FBS的培养液过夜培养，然后向各培养皿中加入化合物M5（浓度见图9所示），预处理细胞1h后，向细胞中加入1.5MOI的EV71，病毒吸附穿入1h后，更换病毒维持液继续培养（含有M5），病毒感染24h后收集细胞以及细胞上清液检测ERK通路的激活情况，EV71VP1以及上清液中EV71的滴度。并且在病毒感染细胞的过程中，观测细胞的病变情况（CPE）（图9A,B,C）。M5对HSV2复制影响的实验步骤与上述步骤相同（图9D,E）。最后根据ERK通路的激活，病毒蛋白的表达，上清液中的病毒滴度以及CPE来说明M5的抗病毒作用。
结论：化合物M5能够明显抑制病毒引起的ERK通路的活化，且M5对肠道病毒EV71和单纯疱疹病毒HSV2的复制具有明显抑制作用。
以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.具有式I结构的化合物及其药学上可接受的盐，
其中，所述的化合物为：
3-苄基-4-甲基-6-氯-7-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M4)；
3-苯甲酰基-4-氰基-7-甲氧基香豆素(化合物M10)；
3-苯并噻唑-7-甲氧基香豆素(化合物M11)；
3-苯并噻唑-4-氰基-7-甲氧基香豆素(化合物M12)；
3-苯并噻唑-4-羧基-7-甲氧基香豆素(化合物M13)；
3-苯甲酰基-4-羧基-7-甲氧基香豆素(化合物M14)；
3-苯并噻唑-7-羟基香豆素(化合物M15)；
3-苯并噻唑-4-氰基-7-羟基香豆素(化合物M16)；
3-苯并噻唑-4-羧基-7-羟基香豆素(化合物M17)；
3-苯并噻唑-4-羧基-7-N,N-二甲基甲酰氧基香豆素(化合物M18)；
3-苯甲酰基-4-氰基-7-羟基香豆素(化合物M21)；
3-苯并噻唑-4-羧酸甲酯基-7-甲氧基香豆素(化合物M22)；
3-苯并噻唑-4-羧基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M23)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-羟基香豆素(化合物M28)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-N,N-二甲氨基甲酸酯基香豆素(化合物M29)；
3-苄基-4-甲基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M31)；
3-苄基-4-甲基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M32)；
3-苄基-4-甲基-6-氯-7-乙酸酯基香豆素(化合物M33)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-乙酸酯基香豆素(化合物M34)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M35)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M36)；
3-苄基-4-乙基-7-乙酸酯基香豆素(化合物M37)；
3-苄基-4-乙基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M38)；
3-苄基-4-乙基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M39)；
3-苄基-4-丙基-7-乙酸酯基香豆素(化合物M40)；
3-苄基-4-丙基-7-丙酸酯基香豆素(化合物M41)；
3-苄基-4-丙基-7-丁酸酯基香豆素(化合物M42)；
3-苄基-4-甲基-7-新戊酰氧基香豆素(化合物M43)；
3-苄基-4-甲基-7-戊酰氧基香豆素(化合物M44)；
3-苄基-4-甲基-7-苯磺酰氧基香豆素(化合物M45)；
3-苄基-4-甲基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M47)；
3-苄基-4-甲基-7-对甲苯磺酰氧基香豆素(化合物M48)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M52)；
3-苄基-4-乙基-7-新戊酰氧基香豆素(化合物M57)；
3-苄基-4-乙基-7-戊酰氧基香豆素(化合物M58)；
3-苄基-4-乙基-7-苯甲酰氧基香豆素(化合物M59)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-对甲苯磺酰基香豆素(化合物M60)；
3-对氟苄基-4-乙基-7-苯甲酰氧基香豆素(化合物M61)；
3-苄基-4-乙基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M62)；
3-苄基-4-甲基-6-氯-7-丙酰氧基香豆素(化合物M65)；
3-苄基-4-丙基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M66)；
4-丙基-7-苯磺酰氧基香豆素(化合物M69)；
3-对氟苄基-4-甲基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M81)；
3-对氟苄基-4-甲基-7-丙酰氧基香豆素(化合物M82)；
3-对氟苄基-4-甲基-7-丁酰氧基香豆素(化合物M83)；
3-对氟苄基-4-甲基-7-对甲苯磺酰氧基香豆素(化合物M88)；
3-对氟苄基-4-甲基-7-苯甲酰氧基香豆素(化合物M89)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-乙酰氧基香豆素(化合物M90)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-丙酰氧基香豆素(化合物M91)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-丁酰氧基香豆素(化合物M92)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-N,N-二乙氨基甲酸酯基香豆素(化合物M93)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-N,N-新戊酰氧基香豆素(化合物M94)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-苯磺酰氧基香豆素(化合物M95)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-对甲苯磺酰氧基香豆素(化合物M96)；
3-对氟苄基-4-丙基-7-苯甲酰氧基香豆素(化合物M97)。
2.制备权利要求1所述的化合物或其药学上接受的盐的方法，其特征在于所述的式I结构中R1为苄基的化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)β酮酸酯与溴苄在乙醇钠或氢化钠作用下发生取代反应，得到式II结构的化合物；
2)式II结构化合物在浓硫酸作用下，与式III结构化合物发生Pechmann反应，环合得到式IV结构的化合物；
3)式IV结构的化合物在氢化钠作用下与酰氯反应，得到式I中R1为苄基的化合物；
其中，R2为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基；
R3为氢，卤素。
3.制备权利要求1所述的化合物或其药学上接受的盐的方法，其特征在于所述的式I结构中R1为苯并噻唑基，R2为羧基的化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)取代的二羟基苯甲醛在哌啶的作用下，与苯并噻唑-2-乙腈反应形成香豆素环，得到式V结构的化合物；
2)式V结构的化合物在氰化钠作用下，4位氰基化，得到式VI结构的化合物；
3)式VI结构的化合物水解成羧酸，得到式VII结构的化合物；
4)式VII结构的化合物在氢化钠作用下与酰氯反应，得到式I中R1为苯并噻唑基，R2为羧基的化合物；
其中，R3为氢，卤素。
4.制备权利要求1所述的化合物或其药学上接受的盐的方法，其特征在于所述的式I结构中R1为苯甲酰基，R2为羧基的化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)2-羟基苯甲醛和苯甲酰乙酸乙酯在哌啶的作用下，反应形成香豆素环，得到式VIII结构的化合物；
2)式VIII结构的化合物在氰化钠作用下，4位氰基化，得到式IX结构的化合物；
3)式IX结构的化合物水解成羧酸，得到式X结构的化合物；
其中，R10为氢，1到4个碳的直链、支链烷基或取代烷基。
5.权利要求1所述化合物或其药学上接受的盐在制备MEK抑制剂中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的MEK抑制剂具有对磷酸化MEK的活性抑制以及对未活化的MEK的抑制作用。
7.权利要求1所述化合物或其药学上接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.权利要求1所述化合物或其药学上接受的盐在制备抗病毒药物中的应用。
9.权利要求1所述化合物或其药学上接受的盐在制备ERK通路的抑制剂中的应用。
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