CN102961606A - 治疗缺血性中风病的中药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其由生地黄、石斛、生黄芪、葛根、水蛭、川芎、地龙、巴戟天、黄芩制成,本发明可显著降低脑血管通透性,减轻神经功能缺损症状,降低脑梗死的发生率,并能使梗死总体积、皮层和皮层下的梗死体积不同程度减少,显著提高皮层神经元的存活率,对缺血性中风疗效好。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体是一种治疗缺血性中风病的中药组合物。
背景技术
缺血性中风是指脑血栓形成或脑血栓的基础上导致脑梗塞、脑动脉堵塞而引起的偏瘫和意识障碍。脑血栓形成多在50岁以后起病,男性较多,常于休息、静止或睡眠时发生症状,发病情况较脑出血缓慢。常有先兆症状,如头晕、一侧肢体麻木或无力等,在血压低时更易发生。
中医药治疗缺血性中风呈现了得天独厚的优势,其不仅表现为抗炎药效可靠、能独当重任、毒副作用小,而且其治法的研究也日趋成熟客观。CN 1504221公开了一种治疗缺血性中风的中药组合物,但是疗效不够理想。因此若研制出一种中药新药,既能快速起效,又具有稳定的效果,将深受缺血性中风患者的欢迎,必将具有很大的市场潜力。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种治疗缺血性中风病的中药组合物。
一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其特征在于其由以下重量份数的原料药制成:生地黄8-16份,石斛8-16份,生黄芪8-16份,葛根12-20份,水蛭1-5份,川芎5-12份,地龙6-12份、巴戟天8-16份、黄芩8-16份。
所述的一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其特征在于其由以下重量份数的原料药制成:生地黄12-14份,石斛12-14份,生黄芪12-14份,葛根14-18份,水蛭2-3份,川芎8-10份,地龙6-8份、巴戟天12-16份、黄芩10-14份。
所述的一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其特征在于其由以下重量份数的原料药制成:生地黄13.6份,石斛13.6份,生黄芪13.6份,葛根16.4份,水蛭2.7份,川芎9.1份,地龙7份,巴戟天1 5份,黄芩11份。
所述的中药组合物,其特征在于其剂型是颗粒剂。
所述的中药组合物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)将葛根、水蛭、地龙、巴戟天、黄芩粉碎成粗粉,按渗漉法提取,用70%乙醇作溶剂,浸渍48小时后,以每公斤按每分钟5ml的速度缓缓渗漉,收集药材8倍重量的漉液,回收乙醇至无醇味,得醇提液和药渣,备用;
2)将川芎粉碎成10目粗粒,加10倍量水,浸泡60分钟,加热蒸溜提取挥发油,挥发油经 10%β-环糊精水溶液包合制成包合液,静置,滤过,备用,蒸溜后的水溶液另行收集;
3)石斛先加10倍量水,浸泡60分钟,先煎煮4h后,药渣和药液与加10倍量水,浸泡60分钟后的生地黄、黄芪饮片合并,加入提挥发油后并加10倍量水的川芎药渣以及葛根、水蛭、地龙、巴戟天、黄芩醇提后药渣,煎煮1小时,分离药液;
4)将步骤3)所得药渣再加10倍量水,煎煮1小时,分离药液;
5)将步骤3)和步骤4)二次煎煮液与蒸溜后的水溶液,用100目筛滤过,滤液浓缩至相对密度为1.06时,用管式高速离心机以16000转/分的速度离心,药液浓缩至相对密度约为1.10,得提取液;
6)加入挥发油包合物和步骤1)得到的醇提液,再加糊精适量,搅拌均匀,加适量蒸馏水,最终得提取液相对密度为1.12;
7)用80目筛滤过,滤液经喷雾干燥得粉末后,干挤制粒,得颗粒,检验,包装即成。本发明的中药养阴生津,益气活血,适用于缺血性中风中经络急性期(脑血栓形成、脑梗塞),阴亏气虚,瘀阻脑络证,证见半身不遂,口舌歪斜,舌强语蹇或不语,偏身麻木等。口服,一次5.5g,一日2次,21天为一个疗程或遵医嘱。孕妇慎用。
本发明将养阴药生地黄、石斛,益气药生黄芪,通络药葛根,活血药水蛭、川芎、地龙,补肾药巴戟天,解毒药黄芩按照特殊比例进行配伍,可显著提高脑缺血再灌注损伤脑皮质SOD活力与6-Keto-PGF1α含量,显著降低脑缺血再灌注脑皮质MDA和TXB2的含量,可显著降低脑缺血的脑含水量,显著降低脑血管通透性,减轻神经功能缺损症状,降低脑梗死的发生率,并能使梗死总体积、皮层和皮层下的梗死体积不同程度减少,显著提高皮层神经元的存活率,对缺血性中风疗效好。
具体实施方式
实施例1
原料药配方:生地黄1360g,石斛1360g,生黄芪1360g,葛根1640g,水蛭270g,川芎910g,地龙700g,巴戟天1500g,黄芩1100g。
制备方法:将葛根、水蛭、地龙、巴戟天、黄芩粉碎成粗粉。按渗漉法提取,用70%乙醇作溶剂,浸渍48小时后,以每公斤按每分钟5ml的速度缓缓渗漉,收集药材8倍的漉液,回收乙醇至无醇味,得醇提液和药渣,备用。川芎粉碎成10目粗粒,加10倍量水,浸泡60分钟,加热蒸溜提取挥发油。挥发油经10%β-环糊精水溶液包合制成包合液,静置,滤过,备用,蒸溜后的水溶液另器收集。石斛先加10倍量水,浸泡60分钟,先煎煮4h后,药渣和药液与加10倍量水,浸泡60分钟后的生地黄、黄芪饮片合并,加入提挥发 油后的川芎药渣以及葛根、水蛭、地龙、巴戟天、黄芩醇提后药渣(加10倍量水),煎煮1小时,分离药液,药渣再加10倍量水,煎煮1小时,分离药液,合并二次煎煮液与蒸溜后的水溶液,用100目筛滤过,滤液浓缩至相对密度为1.06(50~60℃)时,用管式高速离心机离心(16000转/分),药液浓缩至相对密度约为1.10(50~60℃),得提取液约5L,加入挥发油包合物和以上经70%乙醇渗漉提取的醇提液,再加糊精适量,搅拌均匀,加适量蒸馏水,最终得提取液相对密度为112(50~60℃),用80目筛滤过,滤液经喷雾干燥得粉末后,干挤制粒,得颗粒1000g,检验,包装即成。
实施例1的药效学实验
(一)对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究
采用四血管阻断法(4VO法)制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察本制剂对脑缺血再灌注损伤的保护作用。
1.动物:实验动物均采用雄性SD大鼠,体重300~350g,10月龄。
2.分组与给药:SD大白鼠随机分为7组,即正常对照组(假手术对照组);单纯脑缺血组(脑缺血模型组);缺血再灌注组(脑缺血再灌注损伤模型组);再灌注本发明实施例1制剂治疗组(分2g·Kg-1/24h、1g·Kg-1/24h、0.5·Kg-1/24h大中低三个剂量组);维脑路通组(100mg·Kg-1/24h,阳性药对照组)。
将本发明制剂和维脑路通片用生理盐水制成口服液,按上述用量灌胃给药,每日早晚各一次,连续3天,并于手术前1h追加一次。假手术对照组、脑缺血组及脑缺血再灌注组按同样方法灌服等量生理盐水。
3.动物模型:大鼠脑缺血再灌注损伤模型采用改良的Pulsinelli四血管阻断法(4VO法)。大鼠用10%水合氯醛(0.4ml/100g)腹腔注射麻醉,腹卧位固定,无菌枕部切口,暴露第一颈椎横突翼小孔,用尖端约0.5mm电针电凝闭双侧翼小孔内的椎动脉。然后改为背部固定,颈正中切口,分离双侧颈总动脉,穿线备用。次日在清醒的状态下,用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉。假手术组除不行椎动脉凝闭和颈总动脉夹闭外,余手术过程相同。模型成功的标准:实验动物意识丧失,四肢瘫痪,角膜反射及翻正反射消失;EEG描记的脑电波频率减慢,波幅降低以至出现脑电波几乎成一条直线。
脑缺血再灌注组于颈总动脉夹闭后30min放开动脉夹,使血流再通30min后迅速断头取脑,以备检测有关指标。假手术组于手术后60mim,单纯脑缺血组于术后30min迅速断头取脑。
4.检测指标:断头取脑,制备脑匀浆,指标测定均按其测定试剂盒说明书进行。
5.结果:
(1)养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注大鼠脑皮质SOD活力和MDA含量影响
对SOD活力的影响(表1)。脑缺血再灌注组与正常对照组、脑缺血组相比均具有显著差异;本发明制剂各剂量组与脑缺血再灌注组相比均具有显著差异,本发明制剂各组量效成正相关;本发明制剂作用优于维脑路通组。提示本发明制剂可显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质SOD活力。
对MDA含量的影响(表1)。脑缺血再灌注组、脑缺血组与正常对照组相比均具有显著差异;脑缺血再灌注组与脑缺血组相比具有显著差异;本发明制剂各剂量组、维脑路通组与脑缺血再灌注组相比均具有显著差异。提示本发明制剂能显著降低脑缺血再灌注大鼠脑皮质MDA含量。
表1本发明制剂对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质SOD活力和MDA含量的影响(`X±SE)
(2)本发明制剂对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质6-Keto-PGF1α和TXB2含量的影响对脑皮质6-Keto-PGF1α含量影响(表2)。脑缺血再灌注组与正常对照组相比具有显著差异;本发明制剂大、中剂量组与脑缺血再灌注组相比具有显著差异,本发明制剂各剂量组量效呈正相关。提示本发明制剂能显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质6-Keto-PGF1α的含量。
对脑皮质TXB2含量影响(表2)。脑缺血再灌注组、脑缺血组与正常对照组相比均具有显著差异;脑缺血再灌注组与脑缺血组相比具有显著差异;本发明制剂各剂量组、维脑路通组与脑缺血再灌注组相比均具有显著差异。提示本发明制剂能显著降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质TXB2的含量。
表2本发明制剂对脑缺血再灌注损伤大鼠脑6-Keto-PGF1α和TXB2含量的影响(`X±SE)
(二)对大鼠脑缺血脑含水量、脑指数和脑血管通透性的影响
采用大鼠急性不完全性脑缺血模型,观察本发明制剂对大鼠脑缺血脑含水量和脑指数等方面的影响。
1.动物:健康雄性SD大白鼠,体重280-320g。
2.分组与给药:随机分组,并给予相应药物。即a.正常对照组(假手术对照组);b.脑缺血模型组;c.本发明实施例1制剂治疗组(分2g·Kg-1/24h、1g·Kg-1/24h、0.5·Kg-1/24h大中低三个剂量组);d.血栓心脉宁胶囊组(1g·Kg-1/24h),共6组。实验时将上药配成所需浓度的口服液,于实验前1天上、下午及实验当天术前1小时各灌胃给药1次。由模型组和假手术对照组则按同样方法灌服等量的生理盐水。
3.动物模型:急性不完全性脑缺血模型:结扎SD大鼠双侧颈总动脉形成急性实验性不完全性脑缺血模型。假手术组除不行颈总动脉结扎外,余手术过程相同。
4.检测指标:
(1)脑含水量及脑指数测定:双侧颈总动脉结扎3小时以后,快速断头,开颅取脑,称重,从断头至称重在5分钟内完成。计算脑指数(脑指数=脑重×100/体重)。然后在85℃恒温干燥箱内烤60小时至恒重,计算脑含水量%=(湿重-干重)/湿重×100%。
(2)毛细血管通透性检查:假手术对照组于股静脉注射伊文思蓝50mg/kg,不结扎双侧颈总动脉。缺血模型组及各药物实验组则在结扎双侧颈总动脉前5分钟由股静脉注射伊文思蓝50mg/kg,结扎3小时以后,快速断头、开颅、取脑、称重,并分别浸泡于甲酰胺溶液中,在45℃恒温箱中温育72小时,待脑组织中色素全部浸出,取色素液200μl,用550型酶标仪,655nm进行测定。根据标准曲线计算出脑组织内伊文思蓝的含量,以μg/g(脑湿重)表示。
5.结果:
(1)本发明制剂对大鼠脑缺血脑含水量和脑指数的影响
结果(表3)可见,脑缺血模型组脑含水量及脑指数与正常对照组相比具有极显著差异,提示脑含水量显著增加;本发明制剂各剂量组、血栓心脉宁组与脑缺血模型组相比脑含水量均显著减少。本发明制剂量效关系呈正相关,大剂量组与脑缺血模型相比,其脑含水量和脑指数均显著降低。
表3本发明制剂对脑缺血大鼠脑含水量和脑指数的影响(`X±SE)
注:脑缺血组与正常对照组相比*P<0.05,**P<0.01;
给药组与脑缺血模型组相比△P<0.05,△△P<0.01。
(2)本发明制剂对大鼠脑缺血脑血管通透性的影响
结果(表4)可见,脑缺血模型组伊文思蓝含量与正常对照组相比具有极显著差异;本发明制剂各剂量组、血栓心脉宁组与脑缺血模型组相比具有显著性差异;本发明制剂大剂量组降低伊文思蓝含量的作用显著优于血栓心脉宁组(P<0.05);本发明制剂各治疗组量效关系呈正相关。表明脑缺血后脑组织内伊文思蓝含量明显增加,脑血管通透性增加,各给药组可显著降低脑血管通透性。
表4本发明制剂对脑缺血大鼠脑血管通透性的影响(`X±SE)
注:脑缺血组与正常对照组相比*P<0.05,**P<0.01;
给药组与脑缺血模型组相比△P<0.05,△△P<0.01。
(三)对大鼠大脑中动脉局灶性缺血的保护作用
用线栓法造成大鼠大脑中动脉暂时性局灶性脑缺血(30min),分别于再灌0时和再灌注后6h各灌胃给药一次,观察本发明制剂对脑缺血引起的神经功能缺损症状、脑梗死发生率、梗死体积、神经元死亡的影响。
1.动物:Sprague-Dawley成年健康大鼠,体重257±17g,均为雄性。
2.分组与给药:将SD大白鼠随机分为6组。即假手术组(正常组);脑缺血再灌注组(对照组);本发明实施例1制剂(2g.Kg-1/24h、1g.Kg-1/24h、0.5g.Kg-1/24h);尼莫地平组(2mg.Kg-1/24h)。将本发明制剂和尼莫地平胶囊临用前用生理盐水配成混悬液,分别于再灌0时和再灌注后6h各灌胃给药一次,假手术组与模型组灌服等量生理盐水。
3.实验方法:腹腔注射10%水合氯醛0.4g/kg麻醉动物,按照Ludmila Belayev等的方法进行大脑中动脉局灶性栓塞(MCAo),缺血30min后拔出尼龙线进行再灌注。模型成功的标志是动物苏醒后出现同侧Horner征和对侧以前肢为重的偏瘫。组织学证实,梗死灶位于同侧额顶叶皮质及尾状核与壳核外侧部。
4.检测指标:
(1)大鼠参照Bederson等的0~3分分级方法,在大鼠清醒后观察并记录神经功能缺失症状:无神经功能缺失症状为0级;提尾时病灶对侧肢体屈曲为1级;除1级征象外伴有向病灶对侧的侧推阻力下降为2级;除1级2级征象外伴有活动时有向瘫痪侧旋转征象为3级。大鼠手术过程中死亡或死亡后解剖发现为颅底出血者剔除。
(2)再灌注24小时后分别断头取脑,并迅速置于冰箱-20℃冷冻10~15min,待一定硬度取出,自前脑额极起沿标尺用锋利刀片切出5片冠状切片,每片厚2.5mm,将脑片置于2%TTC染色液中,于37℃下孵育30min。然后将脑片置于新鲜配制的10%甲醛溶液中固定1周。将固定的脑片按切片顺序排列,用数码相机拍照后输入计算机,用图像分析的方法计算每一片的缺血面积。再计算梗死灶体积的近似值。
取自额极起第4片脑片(离额极7.5~10mm),经石蜡包埋切片,片厚6mm,常规HE染色后,光镜下观察并通过摄像头将镜下图象(×400)输入计算机,采用自行设计的ZUNL-SIMAGE1.0细胞图像处理软件,对海马CA1区中段及颞叶皮层III~IV层单位面积内的神经元进行计数。
5.结果
(1)本发明制剂对神经功能缺损症状的影响
结果(表5)可见养阴通脑颗粒及尼莫地平均能使大鼠的神经功能缺损症状减轻。本发明制剂2g/kg的作用优于尼莫地平,0.5、1g/kg则与尼莫地平组相比无显著性差异。
表5本发明制剂对大鼠脑缺血后神经功能缺损症状的影响
*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,与对照组比较,t检验;
#P<0.05,与尼莫地平组比较,t检验。
(2)本发明制剂对大鼠脑缺血后脑梗死的影响
结果(表6)可见本发明制剂及尼莫地平均能降低大鼠MCAo后脑梗死的发生率,并能使梗死总体积、皮层和皮层下的梗死体积不同程度减少,与对照组相比具显著性差异,本发明制剂2g/kg使各部位缺血体积减少达80%以上。
剂2g/kg使各部位缺血体积减少达80%以上。
表6本发明制剂对大鼠脑缺血后脑梗死的影响
注1:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,与对照组比较,t检验;$P<0.05,$$P<0.01, $$$P<0.001,与对照组比较,X2检验。
(3)本发明制剂对颞叶皮层及海马CA1区神经元的影响
结果(表7)可见大鼠MCAo后,引起海马CA1区及皮层的神经元死亡,1、2g/kg本发明制剂及尼莫地平对海马CA1区的神经元均有一定的保护作用;2g/kg本发明制剂能显著提高皮层神经元的存活率。
表7本发明制剂对大鼠脑缺血后海马及皮层神经元的影响
#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001,与假手术组比较,t检验;*P<0.05,**P<0.01,与对照组比较,t检验;$P<0.05,$$P<0.01,与左侧比较,配对t检验。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其特征在于其由以下重量份数的原料药制成:生地黄8—16份,石斛8—16份,生黄芪8—16份,葛根12—20份,水蛭1—5份,川芎5—12份,地龙6—12份、巴戟天8—16份、黄芩8—16份。
2.如权利要求1所述的一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其特征在于其由以下重量份数的原料药制成:生地黄12— 14份,石斛12— 14份,生黄芪12—14份,葛根14—18份,水蛭2—3份,川芎8—10份,地龙6—8份、巴戟天12—16份、黄芩10—14份。
3.如权利要求1所述的一种治疗缺血性中风病的中药组合物,其特征在于其由以下重量份数的原料药制成:生地黄13.6份,石斛13.6份,生黄芪13.6份,葛根16.4份,水蛭2.7份,川芎9.1份,地龙7份,巴戟天15份,黄芩11份。
4.如权利要求1至3中任意一项所述的中药组合物,其特征在于其剂型是颗粒剂。
5.如权利要求4所述的中药组合物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)将葛根、水蛭、地龙、巴戟天、黄芩粉碎成粗粉,按渗漉法提取,用70%乙醇作溶剂,浸渍48小时后,以每公斤按每分钟5ml的速度缓缓渗漉,收集药材8倍重量的漉液,回收乙醇至无醇味,得醇提液和药渣,备用;
2)将川芎粉碎成10目粗粒,加10倍量水,浸泡60分钟,加热蒸溜提取挥发油,挥发油经10%β-环糊精水溶液包合制成包合液,静置,滤过,备用,蒸溜后的水溶液另行收集;
3)石斛先加10倍量水,浸泡60分钟,先煎煮4h后,药渣和药液与加10倍量水,浸泡60分钟后的生地黄、黄芪饮片合并,加入提挥发油后并加10倍量水的川芎药渣以及葛根、水蛭、地龙、巴戟天、黄芩醇提后药渣,煎煮1小时,分离药液;
4)将步骤3)所得药渣再加10倍量水,煎煮1小时,分离药液;
5)将步骤3)和步骤4)二次煎煮液与蒸溜后的水溶液,用100目筛滤过,滤液浓缩至相对密度为1.06时,用管式高速离心机以16000转/分的速度离心,药液浓缩至相对密度约为1.10,得提取液;
6)加入挥发油包合物和步骤1)得到的醇提液,再加糊精适量,搅拌均匀,加适量蒸馏水,最终得提取液相对密度为1.12;
7)用80目筛滤过,滤液经喷雾干燥得粉末后,干挤制粒,得颗粒,检验,包装即成。
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