CN102960721A - 一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法 - Google Patents

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陈合
王野
舒国伟
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Abstract

本发明公开了一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，用压力喷嘴将双歧杆菌胶液挤压入含有乳化剂体积分数为0.2～1.0%的大豆油中，双歧杆菌胶液与大豆油的体积比为1∶4～7，充分搅拌，乳化5～20min，然后加入质量浓度为1～5%的氯化钡溶液，静置20min以上；待静置分层后，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊并用生理盐水充分洗涤，得到含除氧剂的双歧杆菌微胶囊。本发明通过加入了除氧剂，解决了在制备微胶囊过程中因为双歧杆菌与氧气的接触所受到的毒害，加入了除氧剂后其每克胶囊活菌数明显提高可达到1010～1011cfug-1；其活菌数显著高于不加除氧剂的双歧杆菌微胶囊。

Description

一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法
技术领域
本发明属于益生菌饮品技术领域，涉及一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法。
背景技术
经过众多专家学者的不断探索实验，已确认双歧杆菌是肠内最有益的菌群，双歧杆菌数量的减少乃消失是“不健康”状态的标志，双歧杆菌是人体健康的晴雨表。虽然双歧杆菌作为食品中最受关注、最安全、也是使用最多的一种益生菌，对人越来越多的保健作用被证实。
但是双歧杆菌是一种专性厌氧菌，它对营养条件要求高，对氧极为敏感，对低pH的抵抗力差，活性保持较困难，因而目前市场上销售的双歧杆菌产品液体或粉体制剂活菌数下降很快，产品的贮存稳定性极差，保健功效损失快。
另外，双歧杆菌要对人体产生有益作用，首先它必须通过胃环境、十二指肠以大量的存活菌到达肠道病定殖于肠黏膜上。但由于双歧杆菌耐酸、耐胆盐能力差，双歧杆菌的活菌数在此过程中也会大幅度下降。再者，在双歧杆菌微胶囊的制备过程中也会受到氧气的影响而导致其活菌数大量下降。因此利用微胶囊技术最大限度的提高双歧杆菌在肠道内的数量的研究成为研究的热点，但是大多数研究忽略了氧气对双岐杆菌的毒害。
除氧剂（FreshPac）又称为脱氧剂，可用在食品、制药或其他产品中。通过使用除氧剂它可以使包装内的含氧量少于0.1%,并继续维持在该水平上。常见的除氧剂有抗坏血酸、抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠、半胱氨酸盐酸盐。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，通过除氧剂技术对双歧杆菌进行保护，其活菌数显著高于不加除氧剂的双歧杆菌微胶囊。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
1）将双歧杆菌的菌悬液和海藻酸钠溶液按照1：5～20的质量比例混合，并加入除氧剂至其质量分数为0.03～0.09%，充分混均后得到双歧杆菌胶液；
所述的双歧杆菌的菌悬液是将双歧杆菌以1.0×1011cfumL-1的浓度悬浮在质量浓度为0.85～0.9%的无菌生理盐水中；
所述的海藻酸钠溶液中海藻酸钠的质量浓度为1～3%；
2）用压力喷嘴将双歧杆菌胶液挤压入含有乳化剂体积分数为0.2～1.0%的大豆油中，双歧杆菌胶液与大豆油的体积比为1：4～7，充分搅拌，乳化5～20min，然后加入质量浓度为1～5%的氯化钡溶液，静置20min以上；
3）待静置分层后，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊并用生理盐水充分洗涤，得到含除氧剂的双歧杆菌微胶囊。
所述的双歧杆菌为两歧双歧杆菌、长双歧杆菌或乳双歧杆菌中的一种。
所述的除氧剂为半胱氨酸盐酸盐、抗坏血酸、抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠中的两种或两种以上。
所述海藻酸钠溶液中还含有氯化钠，其质量浓度为0.85～0.9%。
所述的双歧杆菌为接种于MRS培养基经过增殖培养所获得的。
所述的乳化剂为吐温-80。
所述的除氧剂预先配成浓溶液，并过滤除菌。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，通过加入了除氧剂，解决了在制备微胶囊过程中因为双歧杆菌与氧气的接触所受到的毒害，加入了除氧剂后其每克胶囊活菌数明显提高可达到1010～1011；其活菌数显著高于不加除氧剂的双歧杆菌微胶囊。
本发明提供的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，在制备双歧杆菌微胶囊的的过程中将乳化法和挤压法结合，采用压力喷嘴将含有除氧剂的菌胶液雾化成小液滴喷入大豆油中，比传统的注射器挤压法省时省力。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）将0.4g双歧杆菌冻干菌粉接（两歧双歧杆菌）种于18mL MRS液体培养基（购买于青岛高科园海博生物技术有限公司）中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积0.05%的半胱氨酸盐酸盐，在37℃培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37℃培养条件下培养20～24h,第三次在37℃培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与0.85～0.9%无菌生理盐水混合配制成浓度为1.0×1011cfumL-1菌悬液以备使用。
（2）配制浓度1%的海藻酸钠溶液，110℃，灭菌15min。所述的除氧剂为半胱氨酸盐酸盐、抗坏血酸的混合。
（3）制备除氧剂，配制除氧剂的浓溶液，过滤除菌以备使用。
（4）将菌悬液和海藻酸钠溶液按照1：10的比例混合,除氧剂按照菌胶液总量的0.03%的添加量加入，然后在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
（5）使用压力喷嘴，将上述混合液以喷雾的方式喷入大豆油中（含0.4%的吐温80），同时用磁力搅拌器搅拌800rpm，乳化10min，然后快速加入浓度为1%的氯化钡溶液，静置40min，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊(500rpm，10min)，用生理盐水洗涤3次。
实施例2
含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）将0.4g双歧杆菌冻干菌粉（长双歧杆菌）接种于18mL MRS液体培养基（购买于青岛高科园海博生物技术有限公司）中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积0.05%的半胱氨酸盐酸盐，在37℃培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37℃培养条件下培养20～24h,第三次在37℃培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与0.85～0.9%无菌生理盐水混合配制成浓度为1.0×1011cfumL-1菌悬液以备使用。
（2）配制浓度1.5%的海藻酸钠溶液，110℃，灭菌15min。
（3）制备除氧剂，配制除氧剂的浓溶液，过滤除菌以备使用。所述的除氧剂为抗坏血酸、异抗坏血酸的混合。
（4）将菌悬液和海藻酸钠溶液按照1：12的比例混合,除氧剂按照菌胶液总量的0.05%的添加量加入，然后在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
（5）使用压力喷嘴，将上述混合液以喷雾的方式喷入大豆油中（含0.4%的吐温80），同时用磁力搅拌器搅拌800rpm，乳化10min，然后快速加入浓度为2%的氯化钡溶液，静置40min，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊(500rpm，10min)，用生理盐水洗涤3次。
实施例3
含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）将0.4g双歧杆菌冻干菌粉（乳双歧杆菌）接种于18mL MRS液体培养基（购买于青岛高科园海博生物技术有限公司）中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积0.05%的半胱氨酸盐酸盐，在37℃培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37℃培养条件下培养20～24h,第三次在37℃培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与0.85～0.9%无菌生理盐水混合配制成浓度为1.0×1010cfumL-1菌悬液以备使用。
（2）配制浓度2%的海藻酸钠溶液，110℃，灭菌15min。
（3）制备除氧剂，配制除氧剂的浓溶液，过滤除菌以备使用。所述的除氧剂为半胱氨酸盐酸盐、抗坏血酸钠、异抗坏血酸钠中的两种或三种。
（4）将菌悬液和海藻酸钠溶液按照1：10的比例混合,除氧剂按照菌胶液总量的0.07%的添加量加入，然后在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
（5）使用压力喷嘴，将上述混合液以喷雾的方式喷入大豆油中（含0.4%的吐温80），同时用磁力搅拌器搅拌800rpm，乳化10min，然后快速加入浓度为3%的氯化钡溶液，静置40min，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊(500rpm，10min)，用生理盐水洗涤3次。
实施例4
含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
（1）将0.4g双歧杆菌冻干菌粉（长双歧杆菌）接种于18mL MRS液体培养基（购买于青岛高科园海博生物技术有限公司）中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积0.05%的半胱氨酸盐酸盐，在37℃培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37℃培养条件下培养20～24h,第三次在37℃培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与0.85～0.9%无菌生理盐水混合配制成浓度为1.0×1011cfumL-1菌悬液以备使用。
（2）配制浓度2.5%的海藻酸钠溶液，110℃，灭菌15min。
（3）制备除氧剂，配制除氧剂的浓溶液，过滤除菌以备使用。所述的除氧剂为抗坏血酸、抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠中的两种或两种以上。
（4）将菌悬液和海藻酸钠溶液按照1：10的比例混合,除氧剂按照菌胶液总量的0.09%的添加量加入，然后在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
（5）使用压力喷嘴，将上述混合液以喷雾的方式喷入大豆油中（含0.4%的吐温80），同时用磁力搅拌器搅拌800rpm，乳化10min，然后快速加入浓度为3%的氯化钡溶液，静置40min，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊(500rpm，10min)，用生理盐水洗涤3次。

Claims (7)

1.一种含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将双歧杆菌的菌悬液和海藻酸钠溶液按照1：5～20的质量比例混合，并加入除氧剂至其质量分数为0.03～0.09%，充分混均后得到双歧杆菌胶液；
所述的双歧杆菌的菌悬液是将双歧杆菌以0.1～5.0×1011cfumL-1的浓度悬浮在质量浓度为0.85～0.9%的无菌生理盐水中；
所述的海藻酸钠溶液中海藻酸钠的质量浓度为1～3%；
2）用压力喷嘴将双歧杆菌胶液挤压入含有乳化剂体积分数为0.2～1.0%的大豆油中，双歧杆菌胶液与大豆油的体积比为1：4～7，充分搅拌，乳化5～20min，然后加入质量浓度为1～5%的氯化钡溶液，静置20min以上；
3）待静置分层后，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊并用生理盐水充分洗涤，得到含除氧剂的双歧杆菌微胶囊。
2.如权利要求1所述的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的双歧杆菌为两歧双歧杆菌、长双歧杆菌或乳双歧杆菌中的一种。
3.如权利要求1所述的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的除氧剂为半胱氨酸盐酸盐、抗坏血酸、抗坏血酸钠、异抗坏血酸、异抗坏血酸钠中的两种或两种以上。
4.如权利要求1所述的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述海藻酸钠溶液中还含有氯化钠，其质量浓度为0.85～0.9%。
5.如权利要求1所述的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的双歧杆菌为接种于MRS培养基经过增殖培养所获得的。
6.如权利要求1所述的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的乳化剂为吐温-80。
7.如权利要求1所述的含除氧剂的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的除氧剂预先配成浓溶液，并过滤除菌。
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