CN102949306B

CN102949306B - 花的提取物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102949306B
Application number: CN201210224528.8A
Authority: CN
Inventors: 陈贤; 李成亮
Original assignee: Shanghai Laibo Bio-chemical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Zhina Biotechnology Co.,Ltd.
Priority date: 2012-06-29
Filing date: 2012-06-29
Publication date: 2014-08-06
Anticipated expiration: 2032-06-29
Also published as: CN102949306A

Abstract

本发明公开了一种花的提取物及其制备方法和应用。该制备方法包括如下步骤：将原料置于10%~30%体积百分比的乙醇水溶液浸泡，然后回流提取，过滤得滤液，然后滤液中加入壳聚糖水溶液均匀混合进行絮凝，之后过滤即得；其中，所述的原料包括桃花20~60重量份，荷花20~60重量份，桂花和/或芙蓉花10~50重量份，以及，梅花和/或腊梅花10~50重量份，原料总份数为100重量份。该花的提取物在制备护肤品或洗护产品中的应用效果良好，具有良好美白、抗衰老、保湿、控油作用。

Description

花的提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种花的提取物及其制备方法和应用。

背景技术

美白、抗衰老、保湿、控油类产品一直是护肤品市场最重要的几类产品，美白常用的曲酸、果酸等原料具有脱色或脱皮作用等安全隐患，保湿常用的尿素因易分解而使产品不稳定，抗衰老常用的VA、VC同样存在遇光、热分解的隐患，控油产品常添加清洁力较强的表面活性剂或含高浓度的酒精，久用会造成皮肤刺痛、脱皮及泛红的副作用。

中药或天然植物提取物含皂苷、多糖、黄酮、有机酸等多种活性成分，具有多种护肤功效，并且具有悠久的使用历史，安全性比较高。目前已有一些天然的具有美白、抗衰老、保湿、控油功效的原料或组方被发现，但多数因起效浓度高，稳定性差，颜色深，耐热性差或功效单一等原因，很少有适合添加或大剂量应用到产品配方的。

因此，开发功效显著的天然组方并通过现代中药制备技术制备成成分稳定、颜色合理的提取物，是目前护肤领域研究的热点之一。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了传统美白、抗衰老、保湿或控油类护肤产品的原料不稳定、副作用大，而现有的天然原料及其提取物存在起效浓度高、稳定性差、颜色深、耐热性差且功效单一等的缺陷，而提供了一种具有良好美白、抗衰老、保湿、控油的花的提取物及其制备方法和应用。

本发明的花的提取物的制备方法包括如下步骤：将原料置于10%~30%体积百分比的乙醇水溶液浸泡，然后回流提取，过滤得滤液，然后滤液中加入壳聚糖水溶液均匀混合进行絮凝，之后过滤即得；其中，所述的原料包括桃花20~60重量份，荷花20~60重量份，桂花和/或芙蓉花10~50重量份，以及，梅花和/或腊梅花10~50重量份，原料总份数为100重量份。

本发明中，所述的桃花、荷花、桂花、芙蓉花、梅花、腊梅花均为本领域常规原材料术语定义材料，根据国际化妆品原料标准中文名称目录2010年收录的名称定义。其中，各原料按本领域常规，一般为干的花瓣，水分质量含量<10%。

本发明中，所述的乙醇水溶液的用量为本领域常规用量，较佳的为原料的5~15重量倍数。

本发明中，所述的浸泡为本领域常规操作，较佳的浸泡时间为1.5~3h，更佳的为2h。

本发明中，所述的回流提取的时间可为本领域常规提取时间，较佳的为2h~4h。

本发明中，所述的壳聚糖水溶液的用量为本领域常规絮凝用量，较佳的为滤液量质量百分比的1%~5%。

本发明中，所述的壳聚糖水溶液的浓度为本领域常规，较佳的为质量百分比1%。

本发明中，所述的壳聚糖为本领域常规使用絮凝专用壳聚糖，CAS号9012-76-4，较佳的购自国药集团化学试剂有限公司、郑州众信化工产品有限公司或浙江澳兴生物科技有限公司。

本发明中，所述的絮凝为本领域常规操作，较佳的絮凝时间为10min~60min，更佳为30min。

本发明中，在获得本发明的花的提取物之后，一般还按照本领域常规操作浓缩，得浓缩液，较佳的为以75℃~80℃减压浓缩至浓度为0.5~1g生药/ml，更佳的为浓缩至浓度1g生药/ml。

本发明中，在获得所述的浓缩液之后，较佳的还将浓缩液上离子交换树脂柱，收集过柱液作为最终产品。

其中，所述的离子交换树脂较佳的为购自陕西深蓝特种树脂有限公司LS-35型树脂，所述的离子交换树脂的用量较佳的为≥0.8ml浓缩液/克干树脂，所述的上离子交换树脂柱的上样速度较佳的为按直径1.5厘米的层析柱计为0.5~1.5ml/min。所述的离子交换树脂在使用前按本领域常规进行预处理即可。

本发明还提供前述的花的提取物的制备方法制得的花的提取物。

本发明还提供上述花的提取物在制备护肤品或洗护产品中的应用。

本发明所用试剂和原料除特殊说明外，均市售可得。

在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征的优选条件可以任意组合得到本发明较佳实例。

本发明的积极进步效果在于：

1、本发明的花的提取物具有多种明显的护肤作用，对自由基（以DPPH抑制率为指标）有很好的清除作用，并能明显提高皮肤的弹性，具有延缓衰老的作用；对络氨酸酶和B16黑素细胞的增殖有很好的抑制作用，具有很好的美白作用；对5α-还原酶有明显的抑制作用，具有减少皮肤油腻的作用；具有明显的保湿效果；其具有的多重功效，在追求多重功效的护肤产品时，其添加量和成本优势有更加明显优势。

2、本发明的花的提取物起效浓度低，仅添加10%即可产生明显的效果；稳定性好，48℃放置1个月不变色；颜色淡黄色至深黄色，10%稀释后基本无色；耐热性好，可承受煮沸0.5h不变色、不浑浊，在膏霜等工艺的初期加入，参与乳化过程，具有很好的工艺适应性。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

下述实施例中原料份数均为重量份数。使用的原料均为干的花瓣，水分质量含量<10%。使用的离子交换树脂为购自陕西深蓝特种树脂有限公司LS-35型树脂。

实施例1

（1）将桃花：40份，荷花：40份，桂花：10份，梅花10份，加入15倍30%的乙醇水溶液浸泡1.5h；

（2）回流提取4h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量1%的1%壳聚糖水溶液（国药集团化学试剂有限公司），絮凝10min，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成0.5g生药/ml的浓溶液；

（5）过LS-35树脂柱（直径1.5厘米的层析柱），上样速度为1ml/min，收集过柱液，即得花组合提取物。

实施例2

（1）将桃花：60份，荷花：20份，桂花：10份，梅花10份，加入5倍20%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取3h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量3%的1%壳聚糖水溶液（国药集团化学试剂有限公司），絮凝30min，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成0.75g生药/ml的浓溶液；

（5）过LS-35树脂柱（直径1.5厘米的层析柱），上样速度为0.5ml/min，收集过柱液，即得花组合提取物。

实施例3

（1）将桃花：20份，荷花：60份，桂花：10份，梅花10份，加入10倍10%的乙醇水溶液浸泡3h；

（2）回流提取2h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量5%的1%壳聚糖水溶液（国药集团化学试剂有限公司），絮凝60min，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

（5）过LS-35树脂柱（直径1.5厘米的层析柱），上样速度为1.5ml/min，收集过柱液，即得花组合提取物。

实施例4

（1）将桃花：20份，荷花：20份，桂花：50份，梅花10份，加入10倍20%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取3h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量1%的1%壳聚糖水溶液（郑州众信化工产品有限公司），絮凝30min，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

实施例5

（1）将桃花：20份，荷花：20份，桂花：10份，梅花50份，加入10倍20%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取3h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量3%的1%壳聚糖水溶液（郑州众信化工产品有限公司），絮凝0.5h，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

实施例6

（1）将桃花：20份，荷花：20份，桂花：30份，梅花30份，加入10倍20%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取3h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量5%的1%壳聚糖水溶液（郑州众信化工产品有限公司），絮凝0.5h，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

实施例7

（1）将桃花：20份，荷花：20份，芙蓉花：30份，腊梅花30份，加入10倍20%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取3h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量1%的1%壳聚糖水溶液（浙江澳兴生物科技有限公司），絮凝0.5h，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

实施例8

（1）将桃花：20份，荷花：20份，芙蓉花：10份，腊梅花50份，加入15倍10%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取4h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量5%的1%壳聚糖水溶液（浙江澳兴生物科技有限公司），絮凝0.5h，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

实施例9

（1）将桃花：20份，荷花：20份，芙蓉花：50份，腊梅花10份，加入5倍30%的乙醇水溶液浸泡2h；

（2）回流提取2h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量3%的1%壳聚糖水溶液（浙江澳兴生物科技有限公司），絮凝0.5h，过滤，取滤液；

（4）以75℃~80℃减压浓缩成1g生药/ml的浓溶液；

实施例10

（2）回流提取4h，过滤，取滤液；

（3）加入滤液量1%的1%壳聚糖水溶液（国药集团化学试剂有限公司），絮凝10min，过滤，取滤液，即可。

实施例11

（2）回流提取4h，过滤，取滤液；

（4）浓缩成0.5g生药/ml的浓溶液，即可。

效果实施例

用纯化水将实施例中得到的花的提取物稀释（10×C）倍后作为待测样品（实施例1-9，11均稀释，实施例10不稀释）进行以下1-6编号实验，其中C为浓缩液的浓缩比例，以实施例1为例，为0.5g生药/ml的浓溶液，需稀释10×0.5=5倍。

1、DPPH自由基清除率的测定

用移液器取90μl浓度为2×10^-4mol/L二苯基苦基苯肼自由基（DPPH·）加入到96孔板中，再分别加入10μl待测样品，室温避光反应30min，反应后迅速在MD酶标仪517nm下测定吸光度。

每个浓度设置三个平行，设置control组和空白组：

control组：无水乙醇

空白组：90μl DPPH·溶液和10μl无水乙醇溶液。

自由基清除率/%=[1-Ai／A0]×100％

A0：空白对照扣掉control组吸光值；

Ai：药物组扣掉control组吸光值。

DPPH·自由基清除率结果记载于表1。

表1

编号	清除率	编号	清除率
				实施例1	89.6%	实施例7	85.1%
实施例2	88.3%	实施例8	83.9%
				实施例3	88.6%	实施例9	84.0%
实施例4	84.7%	实施例10	89.1%
				实施例5	85.2%	实施例11	92.3%
实施例6	84.4%	/	/

2、皮肤弹性测试

以35~45岁女性为测试对象，在手背中心区划出3×3cm实验区域，左手做测试，右手作为空白，每天涂抹待测样品1次，1ml/次，连续使用3个月，用皮肤弹性测试仪MP580测试皮肤弹性值变化，重复测试三次，取平均值。皮肤弹测试结果，以实施例1为样品，测试12人，取平均值，如表2。

表2

3、络氨酸酶抑制实验

取1.5ml 0.1mol/L pH6.5的磷酸缓冲液、0.5ml 50mmol/L儿茶酚、100μL待测样品，放入紫外分光光度计中，然后加入0.5mL酪氨酸酶溶液启动反应，在120S内对该反应体系吸光值A进行时间扫描。取前120S吸光度对时间的变化率(△A／△t)为反应速率，按下式计算酪氨酸酶抑制率：

酪氨酸酶抑制率=[（Vo-Vi）／Vo]×100%。

式中：Vo为以溶剂代替样品时酶的反应速率

Vi为加入样品时酶的反应速率

络氨酸酶抑制实验结果如表3所示。

表3

编号	抑制率	编号	抑制率
				实施例1	66.5%	实施例7	64.1%
实施例2	67.2%	实施例8	63.9%
				实施例3	66.8%	实施例9	64.2%
实施例4	64.3%	实施例10	69.3%
				实施例5	63.5%	实施例11	68.3%
实施例6	64.4%	/	/

4、B16黑素细胞黑素合成抑制实验

取2×10⁴个/mL的B16黑素细胞液3ml加入6孔板中，待测样品用0.22μm滤膜过滤，培养24小时后添加待测样品200μL和10nm-100nmMSH，37℃、5％CO2孵箱中孵育72h。中间更换一次样品培养基，5天后取出上清液200ul，转入96孔板中，405nm波长下检测光吸收。

黑素合成抑制率=[1-(药物孔吸光度值÷药物孔细胞密度)÷(对照孔吸光度值÷对照孔细胞密度)]×100%

B16黑素细胞黑素合成抑制实验结果如表4所示。

表4

编号	抑制率	编号	抑制率
				实施例1	42.8%	实施例7	36.9%
实施例2	41.1%	实施例8	38.3%

实施例3	41.5%	实施例9	37.6%
				实施例4	38.3%	实施例10	45.5%
实施例5	37.5%	实施例11	45.1%
				实施例6	38.2%	/	/

5、5α-还原酶抑制实验

以睾酮（NADPH）为底物，利用分光光度计测定NADPH在340nm处的吸光度变化。在3ml比色皿中依次加入2.5ml 0.1mol/L pH 6.5的磷酸缓冲液，12.5μL 5mmol／L睾酮以及200μL待测样品，放入紫外分光光度计中在37℃下预热5min，然后加入100μL 5α-还原酶溶液启动反应，在10min内对该反应体系吸光值A进行时间扫描。底物睾酮以乙醇配置，NADPH以Tris-HCl缓冲液配置。

5α-还原酶抑制率=[(待测样品吸光率-无底物吸光率)／(空白吸光率-无底物吸光率)]×100%

5α-还原酶抑制实验结果如表5所示。

表5

编号	抑制率	编号	抑制率
				实施例1	62.5%	实施例7	59.1%
实施例2	58.3%	实施例8	59.6%
				实施例3	64.2%	实施例9	58.7%
实施例4	58.6%	实施例10	62.5%
				实施例5	59.3%	实施例11	64.3%
实施例6	58.5%	/	/

6、保湿效果测试

以35~45岁女性为测试对象，在手背中心区划出3×3cm实验区域，左手做测试，右手作为空白，待测样品使用量1ml，用Cormeometer CM825测试皮肤水分含量，重复测试三次，取平均值。

水合率=(测试值-空白值)／空白值×100%

以12个人测试的平均值为结果作表，并用同一组人对各实施例进行测试，如表6所示。

表6

7、理化指标考察结果

为考察本发明的花的提取物的稳定性，取实施例1~11的样品（均为直接制得样品未经稀释），分别进行测试：①将样品48℃放置1个月；②将样品煮沸0.5h；③以及样品在48℃放置一个月后总黄酮、多糖和总皂苷含量变化。其中，测定总黄酮为亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色比色法；测定多糖为硫酸-苯酚法；测定总皂苷为香草醛-冰醋酸显色比色法。结果记录于下表7中。

表7

Claims

1.一种花的提取物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将原料置于10%～30%体积百分比的乙醇水溶液浸泡，然后回流提取，过滤得滤液，然后滤液中加入壳聚糖水溶液均匀混合进行絮凝，之后过滤即得；其中，所述的原料包括桃花20～60重量份，荷花20～60重量份，桂花和/或芙蓉花10～50重量份，以及，梅花和/或腊梅花10～50重量份，原料总份数为100重量份；所述的乙醇水溶液的用量为原料的5～15重量倍数；所述的浸泡的时间为1.5～3h；所述的回流提取的时间为2h～4h；所述的壳聚糖水溶液的用量为滤液量质量百分比的1%～5%；所述的壳聚糖水溶液的浓度为质量百分比1%；所述的絮凝的时间为10min～60min。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的原料为干的花瓣，水分质量含量<10%。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的浸泡的时间为2h。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的壳聚糖为购自国药集团化学试剂有限公司、郑州众信化工产品有限公司或浙江澳兴生物科技有限公司。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的絮凝的时间为30min。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在获得所述的花的提取物之后，还浓缩得浓缩液。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩为以75℃～80℃减压浓缩至浓度为0.5～1g生药/ml。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩为以75℃～80℃减压浓缩至浓度为1g生药/ml。

9.如权利要求6～8中任一项所述的制备方法，其特征在于，在获得所述的浓缩液之后，还将浓缩液上离子交换树脂柱，收集过柱液作为最终产品。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的离子交换树脂为购自陕西深蓝特种树脂有限公司LS-35型树脂；所述的离子交换树脂的用量为≥0.8ml浓缩液/克干树脂，所述的上离子交换树脂柱的上样速度为按直径1.5厘米的层析柱计为0.5～1.5ml/min。

11.一种如权利要求1～10任一项所述的花的提取物的制备方法制得的花的提取物。

12.如权利要求11所述的花的提取物在制备护肤品或洗护产品中的应用。