CN102944617A - 一种测定化妆品中性激素含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种测定化妆品中性激素含量的方法，包括如下步骤：将待测化妆品利用固相萃取的方法进行前处理制样；将已知浓度的性激素标准溶液分别通过液相色谱－质谱仪测试，得到相应的响应值，按照各激素响应值与标准溶液浓度的线性关系，得到标准曲线；将处理过的化妆品待测溶液通过液相色谱质谱仪测得样品中待测物质的响应值；根据待测样品的响应值，利用标准曲线计算待测化妆品中性激素的浓度。本发明采用液相色谱－质谱联用仪测定化妆品中性激素含量，前处理过程优于传统气质联用的方法，定性能力优于传统的液相色谱法，定量分析检出限更低。为化妆品中性激素的检测提供了一种可靠的便于实施的方法。

Description

一种测定化妆品中性激素含量的方法

技术领域

本发明涉及一种测定化妆品中性激素的方法，具体地说，涉及一种使液相色谱－质谱联用技术测定化妆品中的性激素含量的方法。

背景技术

性激素是由动物体的性腺以及胎盘，肾上腺皮质网状带等组织合成的甾体激素，具有促进性器官成熟，副性征发育及维持性功能等作用。化妆品中添加雌激素、雄激素、孕激素等性激素，在短时间内能促进毛发生长，防止皮肤老化，有除皱、增加皮肤弹性等作用，因此，性激素在化妆品工艺中常被违规添加在抗皱、生发、抗衰老等化妆品中。但长久使用会导致色素沉积，皮肤萎缩变薄，对肝功能、心血管系统等均有不良影响，甚至具有致癌性，引发细胞癌、乳腺癌、卵巢癌等疾病，给消费者带来健康损害。

现有测定化妆品中性激素的《化妆品卫生规范》采用高效液相色谱－二级管阵列检测器法、高效液相色谱－紫外检测器/荧光检测器法以及气相色谱－质谱法。气相色谱法－质谱法需要将样品先衍生化才能上机分析，与液相色谱法比较，步骤相对复杂。而单纯的高效液相色谱法的检出限相对较高，选择性也略差。

发明内容

（一）要解决的技术问题

本发明要解决的技术问题是：降低传统液相色谱法的检出限，解决传统液相色谱法定性不准、气相色谱法样品前处理过程复杂的问题。

（二）技术方案

为了解决上述技术问题，本发明提供一种测定化妆品中性激素的方法，包括如下步骤：

将待测化妆品利用固相萃取的方法进行前处理制样；

将已知浓度的性激素标准溶液分别通过液相色谱－质谱仪测试，得到相应的响应值，按照各激素响应值与标准溶液浓度的线性关系，得到标准曲线；

取进行前处理的待测化妆品，将待测化妆品通过液相色谱质谱仪测得待测样品的响应值；

根据待测样品的响应值，利用标准曲线计算待测化妆品中性激素的浓度。

（三）有益效果

上述技术方案具有如下优点：本发明采用液相色谱－质谱联用的方法测定化妆品中性激素含量，结合了液相色谱仪有效分离热不稳性及高沸点化合物的分离能力与质谱仪很强的组分鉴定能力。用于定量分析检出限更低。是一种分离分析复杂有机混合物的有效手段。采用本发明的方法检测化妆品中性激素的含量，快速有效，RSD小于10%，雌激素最低检出限小于0.5mg/L，雄激素和孕激素最低检出限小于0.04mg/L。本发明采用液相色谱－质谱联用仪测定化妆品中性激素含量，前处理过程优于传统气质联用的方法，定性能力优于传统的液相色谱法，定量分析检出限更低。为化妆品中性激素的检测提供了一种可靠的便于实施的方法。

附图说明

图1本发明一种实施例的流程图；

图2是雌激素已烯雌酚、已烷雌酚、雌二醇、雌酮、雌三醇、炔雌醇的分离色谱图；

图3是雄激素和孕激素孕酮、睾酮、甲基睾酮、醋酸甲地孕酮和甲羟孕酮乙酸酯的分离色谱图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

如图1所示，为本发明的一种实施例的流程图，包括如下步骤:步骤S101:样品的前处理

1.1待处理的化妆品包括化妆水，精油，乳液，膏霜，具体处理过程如下：

化妆水：准确称取化妆水0.5g，用水定容至5mL。

精油：准确称取精油样品0.5g，加入甲醇5mL，混合均匀后，8000转离心5min，提取甲醇层，重复提取两次，合并甲醇层，在水浴上蒸去甲醇至2mL左右，加水至25mL。

乳液、膏霜：准确称取样品0.5g，加标。加入5mL甲醇，在超声波振荡器中超声萃取15min，样品在甲醇中均匀分散。用高速离心机8000转/min离心5min。吸取上层溶液，加水至25mL。

1.2分别用甲醇和水淋洗C8SPE小柱，将样品上柱，用甲醇：水=20:80淋洗样品，再用1ml甲醇：水=80:20溶液洗脱得到样品。步骤S102：标准曲线的制备

将已知浓度的性激素标准溶液分别通过液相色谱－质谱仪测试，得到相应的响应值，按照各性激素响应值与标准溶液浓度的线性关系，得到标准曲线。

取标准物质β－雌二醇、雌三醇、雌酮、已烯雌酚、已烷雌酚、炔雌醇、睾酮、甲基睾酮、孕酮、醋酸甲地孕酮和甲羟孕酮乙酸酯，用乙睛溶解，配制成1000mg/L的标准储备液。分别取雌激素标准储备液配制成各组分含量分别是0、1、2.5、5、10mg/L的混合标准使用溶液。其中六种雌激素可以同时测定，得到线性关系。另外五种孕激素和雌激素可以同时测定，得到线性关系。也就是说，这十一种激素因性质不同分成两次测试。取雄激素和孕激素标准储备液配制成各激素含量分别是0、0.25、0.5、1.0、2.5mg/L的混合标准使用溶液。通过液相色谱－质谱仪测试，得到各待测激素的响应值。

得到各激素的标准曲线及相关系数如表1所示。仪器条件步骤103。

表1标准曲线及相关系数

图2是雌激素已烯雌酚、已烷雌酚、雌二醇、雌酮、雌三醇、炔雌醇的分离色谱图，图3是雄激素和孕激素孕酮、睾酮、甲基睾酮、醋酸甲地孕酮和甲羟孕酮乙酸酯的分离色谱图。图中1表示雌三醇，2表示雌二醇，3炔雌醇，4雌酮，5已烯雌酚，6已烷雌酚，7睾酮，8甲基睾酮，9孕酮，10醋酸甲地孕酮，11甲羟孕酮乙酸酯。步骤S103：样品上机测试

用液相色谱－质谱仪测试。

液相色谱条件：

色谱柱：月旭C82.1×100mm 3μm    柱温：30℃

流动相：乙腈：水＝40：60     流速：0.3ml/min

质谱条件：

离子源：电喷雾离子源；

检测方式：多反应监测；

离子源温度：150℃；

其它质谱条件参数见下表2所示：

表2其它质谱条件

步骤S104：结果计算

依据仪器响应值、标准曲线，得到待测样品中的激素浓度C（mg/L），依据如下计算公式得到样品中激素的浓度：

$X=\frac{C\×V}{m}$

其中：X－样品中待测激素的浓度，单位mg/kg；V－样品前处理后定容体积，本例为1ml；m-样品质量，单位g。

5检出限、精密度及回收率

各激素检出限（S/N＝3）如表3，加标回收率及相对标准偏差如表4所示。

表3检出限

测定不含以上十一种性激素的化妆品样品（化妆水和含液贴膜，精油，乳液，膏霜、啫喱），分别进行添加率和精密度实验，得到回收率及精密度结果如表4。

表4加标回收率及合并相对标准偏差

本发明采用液相色谱－质谱联用的方法测定化妆品中性激素含量，结合了液相色谱仪有效分离热不稳性及高沸点化合物的分离能力与质谱仪很强的组分鉴定能力，用于定量分析检出限更低。采用本发明的方法检测化妆品中性激素的含量，快速有效，相对标准偏差小于10%，雌激素最低检出限小于0.5mg/L，雄激素和孕激素最低检出限小于0.04mg/L。本发明方法为化妆品中性激素的检测提供一种可靠且便于实施的依据，能够满足研究、生产和日常监督检测的需要。

Claims (5)

1.一种测定化妆品中性激素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将待测化妆品利用固相萃取的方法进行前处理制样；

将已知浓度的性激素标准溶液分别通过液相色谱-质谱仪测试，得到相应的响应值，按照各激素响应值与标准溶液浓度的线性关系，得到标准曲线；

将处理后化妆品待测溶液通过液相色谱质谱仪测得样品中待测物质的响应值；

根据样品中待测物质的响应值，利用标准曲线计算待测化妆品中性激素的浓度。

2.根据权利要求1所述的测定化妆品中性激素含量的方法，其特征在于，将待测化妆品利用固相萃取的方法进行前处理制样，包括：

化妆水或贴膜：称取化妆水或贴膜挤出的液体，用水定容；

精油：称取精油样品，加入甲醇，混合后，离心处理，提取甲醇层，在水浴上蒸去甲醇，再加水；

乳液，膏霜、啫喱：称取样品，加入甲醇，在超声波振荡器中超声萃取，样品在甲醇中均匀分散，离心处理，吸取上层溶液，再加水。

3.根据权利要求1所述的测定化妆品中性激素含量的方法，其特征在于，将待测化妆品利用固相萃取的方法进行前处理制样，包括：分别用甲醇和水淋洗C8固相萃取小柱，将待测样品处理溶液上柱，用甲醇：水=20:80淋洗样品，再用甲醇：水=85:15溶液洗脱得到待测样品溶液。

4.根据权利要求1所述的测定化妆品中性激素含量的方法，其特征在于，测定的性激素包括：β－雌二醇、雌三醇、雌酮、已烯雌酚、已烷雌酚、炔雌醇、睾酮、甲基睾酮、孕酮、醋酸甲地孕酮和甲羟孕酮乙酸酯。

5.根据权利要求1所述的测定化妆品中性激素含量的方法，其特征在于，根据待测样品的响应值，利用标准曲线计算待测化妆品中性激素的浓度，包括：依据待测样品的响应值和标准曲线，得到待测样品中的激素浓度C，根据如下计算公式得到样品中激素的浓度：

$X=\frac{C\×V}{m}$

其中：X-样品中待测激素的浓度；V-样品前处理后定容体积，；m-样品质量。

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