CN102940551A - 一种高浓度胶原海绵护创贴及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高浓度胶原海绵护创贴及其制备方法。该高浓度胶原海绵护创贴,包括:医用基布层;贴合在该医用基布层上的外隔离层;分别贴合在该医用基布层表面并呈阶梯状的第一内隔离层和第二内隔离层;以高浓度胶原蛋白海绵为主体的吸水垫层,该吸水垫层贴合在该医用基布层之上;以及粘附在该外隔离层边缘的易拉签。该吸水垫层为低温冷冻条件下形成的高浓度胶原蛋白海绵或高浓度的胶原蛋白液与药物复合的复合胶原蛋白海绵,该海绵胶原蛋白纯度高,羟脯氨酸含量达11%,胶原结构保留完整,与接触创面后,机械止血的同时可诱导生理凝血,促进创面修复。本发明具有使用方便卫生,止血修复和抑制疤痕的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种能够促进创面止血修复的医疗用品,特别是涉及一种高浓度胶原海绵护创贴及其制备方法。
背景技术
护创贴是用医用基布、吸水垫和隔离膜组成一体的医用敷料,主要用于保护各种创伤,隔离外部感染。有一部分吸水垫往往由纱布、海绵等物品组成,其中明胶海绵和低浓度的胶原海绵已被应用,这些海绵存在的缺点是:纯度低,活性低,抗原性强,安全性低,易发生致热和致敏反应,且对面积稍大和伤口较深的创面的所需的加快愈合和修复效果尚达不到。
目前的护创贴结构设计普遍较简单,并同时或多或少存在着一些问题,如使用时创面较易被污染,对消毒要求严格的创面不能兼顾等缺陷,因而仍需要进一步改进的必要。
发明内容
为了克服上述技术缺陷,本发明的目的在于提供一种高浓度胶原海绵护创贴,使用更加卫生方便,且含胶原纯度高,具有活性高,免疫原性低,不易污染等特点,适用于各种皮肤开放性损伤,可促进止血修复,减少疤痕形成。
另外,本发明的另一目的在于提供一种高浓度胶原海绵护创贴的制备方法。
本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的:
一种高浓度胶原海绵护创贴,其包括:医用基布层;贴合在该医用基布层上的外隔离层;分别贴合在该医用基布层表面并呈阶梯状的第一内隔离层和第二内隔离层;以高浓度胶原蛋白海绵或高浓度的胶原蛋白原液与药物复合的复合胶原蛋白海绵为主体的吸水垫层,该吸水垫层贴合在该医用基布层之上;以及粘附在该外隔离层边缘的易拉签。
所述外隔离层的内层或上层贴附于医用基布层的非胶面一侧;所述医用基布层的胶面外缘部分分别粘附第一内隔离层和第二内隔离层的外边缘部分,该医用基布层的胶面中央部分粘附吸水垫层的一侧,该吸水垫层的另一侧分别由第一内隔离层和第二内隔离层覆盖;所述易拉签位于该护创贴结构的最外层或下层。
所述医用基布层为一侧涂有天然橡胶膏浆或医用热熔胶的无纺布、或聚乙烯防水布或膜、或聚氨基甲酸酯防水布或膜中的至少一种,其形状为圆形,或椭圆形,或方形,或图案形;即任何对称或不对称的有规则或无规则形状(具有一定表面积的任意形状)。
所述外隔离层的面积和形状与所述医用基布层相同。
所述医用基布层为一侧涂有天然橡胶膏浆或医用热熔胶的无纺布、聚乙烯防水布或聚乙烯防水膜、聚氨基甲酸酯防水布或聚氨基甲酸酯防水膜中的至少一种,该医用基布的形状为圆形,椭圆形,或方形,即任何对称或不对称的有规则或无规则形状(具有一定表面积的任意形状)。
所述外隔离层的面积和形状与医用基布相同。
所述第一内隔离层与第二内隔离层的外缘皆与医用基布外缘一致,所述第一内隔离层及第二内隔离层的中间位置覆盖在吸水垫层上,位于吸水垫层中央上方的第一内隔离层及第二内隔离层的其中一部分向远离吸水垫层方向折叠,第一隔离层的一部分可将第二隔离层的折叠部分覆盖。
所述第一隔离层或第二隔离层的材料为聚乙烯防水布或聚乙烯防水膜、或聚氨基甲酸酯防水布或聚氨基甲酸酯防水膜,或涂硅油的底纸中的至少一种。
上述高浓度胶原海绵护创贴的制备方法,其包括以下步骤:
1)吸水垫层的制备:高浓度的胶原蛋白原液在低温冷冻条件下形成海绵状物品经交联或不交联得到吸水垫层,或高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成海绵状物品经交联或不交联得到吸水垫层;吸水垫层不同面积规格的成型采用冻干时所用的模具,或冻干后的机械剪裁;
2)护创贴生产:采用现有护创贴生产工艺,分别将易拉签、外隔离层、医用基布层、吸水垫层、第一内隔离层、第二内隔离层按所述护创贴结构生产胶原海绵护创贴。护创贴生产后,护创贴包装方法可采用:在包装线上单个护创贴独立封装,虚线分切后,将数个装护创贴袋成卷一起入盒。
上述步骤1)中,所述胶原蛋白的提取方法包括以下步骤:
(1)预处理:称取牛筋原料20g,去除表皮、肌肉、脂肪等,洗净捣碎;
(2)酸性酶解:加入10倍体积含0.8%~1.5%胃蛋白酶的0.8M~1.5M醋酸,搅拌,4℃酶解24h-72h;
(3)终止酶解:将酶解液以10000rpm,4℃离心20min,取上清液;在上清液中加入8mM~15mM EDTA,搅拌1h,10000rpm,4℃离心20min;
(4)中性盐析:取100ml清液,加10M NaOH调pH至中性,加入NaCl至终浓度2.3M,缓慢搅拌,4℃静置盐析24h,10000rpm,4℃离心30min取沉淀;
(5)酸溶:称量沉淀重量,加入10倍体积0.5M HAc搅拌,4℃静置过夜;
(6)透析:将溶液装入透析袋对纯水透析3d;将胶原提取液转至烧杯,4℃保存。
所述吸水垫层为复合胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成的海绵状物品经交联得到;所述吸水垫层的制备方法为:
配制浓度为9mg/ml的胶原蛋白溶液,加硫酸庆大霉素溶液使其质量百分比浓度为0.0005%,混匀倒入冻干槽,在-30℃至-50℃间循环冻干48h;
交联工艺:向海绵中加适量50mmol/L的EDAC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)的乙醇溶液,室温下孵育交联24h,于0.1mol/L的Na2HPO4溶液中浸泡1h,然后将海绵用纯化水洗涤多次。
所述的吸水垫层为高浓度胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成的海绵状物品未经交联得到。
借由上述技术方案,本发明具有如下优点和有益效果:
1)本发明的高浓度胶原海绵护创贴使用安全,效果显著,由于其吸水垫层结构中含有胶原蛋白海绵纯度高,所含羟脯氨酸含量可达11%,与机体组织中理论含量相当,胶原保持三螺旋结构具有高的生物活性,端肽经酶法切除能够保证发明极低的免疫原性。该海绵接触创面后,机械止血的同时胶原蛋白的表面基团可以迅速与血小板表面受体相互作用,诱导更多血小板附着,启动一系列凝血途径,释放凝血因子达到生理凝血的效果,迅速止血。
2)高浓度的胶原蛋白能够为伤口细胞提供营养,加快皮肤新陈代谢,促进创面修复;高活性的胶原蛋白具有引导成纤维细胞有序排列生长的作用,能够明显减轻皮肤疤痕形成,降低色素沉着。复合胶原蛋白海绵复合承载的药物可缓释产生相应的药物功效。
3)本发明的隔离层和易拉签结构方便去除,能够很好地避免创面卫生无污染。
4)本发明提到的交联方法单独采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂,相比现有技术,并未与其他交联剂共用,交联效果优良,效率高,海绵外观好,有效改善胶原的降解,此方法不仅可降低工艺成本,更重要的在于后续交联剂去除更容易,产品使用更安全有效。
附图说明
图1为本发明的剖面结构示意图;
图2为本发明的方形仰视示意图;
图3为本发明的草莓形仰视示意图。
1:外隔离层
2:第一内隔离层
3:第二内隔离层
4:吸水垫层
5:医用基布层
6:易拉签
具体实施方式
以下通过具体较佳实施例结合附图,对本发明的高浓度胶原海绵护创贴作进一步详细说明,但本发明并不仅限于以下的实施例。
实施例1
请参照图1、图2所示,一种高浓度胶原海绵护创贴,其结构包括医用基布层5、贴合在该医用基本层5上的外隔离层1、分别贴合在该医用基布层5表面并呈阶梯状的第一内隔离层2和第二内隔离层3,以高浓度胶原蛋白海绵为主体的吸水垫层4,该吸水垫层4贴合在该医用基布层5之上,且在第一内隔离层2、第二内隔离层3之下非贴合;以及粘附在该外隔离层1边缘的易拉签6。
图2所示为方形的医用基布层5,以及贴合在该医用基布层5上的易拉签6。外隔离层1内层或上层贴附于医用基布层5的非胶面一侧,该医用基布层5胶面外缘部分分别粘附第一内隔离层2和第二内隔离层3的外边缘部分,该医用基布层5的胶面中央部分粘附吸水垫层4的一侧,该吸水垫层4的另一侧分别由第一内隔离层2和第二内隔离层3覆盖,该易拉签6位于本发明护创贴结构最外层或下层。
该医用基布层5是一侧涂有医用热熔胶的聚乙烯防水膜,为边长10cm、面积为98.2cm2的方形设计。该外隔离层1采用聚氨基甲酸酯防水膜,其面积和形状与该医用基布层5相同。该第一内隔离层2及第二内隔离层3都采用聚氨基甲酸酯防水膜,其外缘与医用基布层5的外缘一致。第一内隔离层2及第二内隔离层3分别呈阶梯状覆盖在该吸水垫层4上。位于该吸水垫层4中央上方的第一内隔离层2向远离该吸水垫层4方向折叠,第二内隔离层3将折叠部分覆盖。
该吸水垫层4为高浓度胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液在低温冷冻条件下形成的海绵状物品未经交联得到的。
该胶原的提取方法包括以下步骤:
(1)预处理:称取牛筋原料20g,去除表皮、肌肉、脂肪等,洗净捣碎;
(2)酸性酶解:加入10倍体积含1.2%胃蛋白酶的0.5M醋酸,搅拌,4℃酶解72h;
(3)终止酶解:将酶解液以10000rpm,4℃离心20min,取上清液;在上清液中加入10mM EDTA,搅拌1h,10000rpm,4℃离心20min;
(4)中性盐析:取100ml清液,加10M NaOH调pH至中性,加入NaCl至终浓度2.3M,缓慢搅拌,4℃静置盐析24h,10000rpm,4℃离心30min取沉淀;
(5)酸溶:称量沉淀重量,加入10倍体积0.5M HAc搅拌,4℃静置过夜;
(6)透析:将溶液装入透析袋对纯水透析3d;将胶原提取液转至烧杯,4℃保存;
该胶原蛋白海绵的主要成分为胶原蛋白,每100mg胶原蛋白海绵含胶原蛋白大于80mg,其余为水和无机盐。
吸水垫层的制备方法为:配制浓度为9mg/ml的胶原蛋白溶液倒入模具,在-30℃至-50℃间循环冻干48h。吸水垫层规格的成型采用冻干时所用的模具。
护创贴生产:采用现有护创贴生产工艺,分别将易拉签6、外隔离层1、医用基布层5、吸水垫层4、第一内隔离层2、第二内隔离层3按上述护创贴层状结构生产胶原海绵护创贴。护创贴生产后,护创贴包装方法可采用:在包装线上单个护创贴独立封装,虚线分切后,将数个装护创贴袋成卷一起入盒。
实施例2
请参照图1、图3所示,一种高浓度胶原海绵护创贴,其结构包括外隔离层1、第一内隔离层2、第二内隔离层3、以高浓度的胶原蛋白液与药物复合的复合胶原蛋白海绵为主体的吸水垫层4、医用基布层5以及易拉签6。该外隔离层1的内层或上层贴附于该医用基布层5非胶面一侧,该医用基布层5的胶面外缘分别粘附第一内隔离层2和第二内隔离层3的外边缘,该医用基布层5的胶面中央部分粘附该吸水垫层4的一侧,该吸水垫层4的另一侧分别由呈阶梯状的第一内隔离层2和第二内隔离层3覆盖,该易拉签6粘附于该外隔离层1的边缘,位于本发明护创贴结构最外层或下层。
该医用基布层5是一侧涂有天然橡胶膏浆的无纺布,为图3所示的草莓形,外形可爱,适宜儿童使用,经面积测量器测为62.7cm2。该外隔离层1采用涂硅油的底纸,其面积和形状与该医用基布层5相同。该第一内隔离层2与第二内隔离层3同样采用涂硅油的底纸,其外缘与医用基布层5外缘一致。该第一内隔离层2和第二内隔离层3分别呈阶梯状覆盖在该吸水垫层4上。位于吸水垫层4中央上方的第一内隔离层2向远离该吸水垫层2方向折叠,该第二内隔离层3将折叠部分覆盖。
该吸水垫层4为复合胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成的海绵状物品经交联得到。
该胶原的提取方法包括以下步骤:
(1)预处理:称取牛筋原料20g,去除表皮、肌肉、脂肪等,洗净捣碎;
(2)酸性酶解:加入10倍体积含1.2%胃蛋白酶的0.5M醋酸,搅拌,4℃酶解72h.
(3)终止酶解:将酶解液以10000rpm,4℃离心20min,取上清液;在上清液中加入10mM EDTA,搅拌1h,10000rpm,4℃离心20min;
(4)中性盐析:取100ml清液,加10M NaOH调pH至中性,加入NaCl至终浓度2.3M,缓慢搅拌,4℃静置盐析24h,10000rpm,4℃离心30min取沉淀;
(5)酸溶:称量沉淀重量,加入10倍体积0.5M HAc搅拌,4℃静置过夜;
(6)透析:将溶液装入透析袋对纯水透析3d;将胶原提取液转至烧杯,4℃保存。
该复合胶原蛋白海绵的主要成分胶原蛋白,每100mg胶原蛋白海绵含胶原蛋白大于80mg,其余为药物、水和无机盐。
吸水垫层的制备方法为:配制浓度为9mg/ml的胶原蛋白溶液,加硫酸庆大霉素溶液使其质量百分比浓度为0.0005%,混匀倒入冻干槽,在-30℃至-50℃间循环冻干48h。
交联工艺:向海绵中加适量50mmol/L的EDAC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)的乙醇溶液,室温下孵育交联24h,于0.1mol/L的Na2HPO4溶液中浸泡1h,然后将海绵用纯化水洗涤10次。洗涤顺序为:1~3次每隔2h换一次纯化水,4~6次每隔4h换一次纯化水,7~10次每隔8h换一次纯化水。检测EDAC残留,进行二次冷冻干燥。吸水垫层规格的成型采用冻干后的机械剪裁。
护创贴生产:采用现有护创贴生产工艺,分别将易拉签6、外隔离层1、医用基布层5、吸水垫层4、第一内隔离层2、第二内隔离层3按上述护创贴层状结构生产胶原海绵护创贴。护创贴生产后,护创贴包装方法可采用:在包装线上单个护创贴独立封装,虚线分切后,将数个装护创贴袋成卷一起入盒。
实施例3
本实施例的高浓度胶原海绵护创贴,其结构同上述实施例2。
所述的吸水垫层为复合胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液在低温冷冻条件下形成的海绵状物品经交联得到。
该胶原的提取方法包括以下步骤:
(1)预处理:称取牛筋原料20g,去除表皮、肌肉、脂肪等,洗净捣碎;
(2)酸性酶解:加入10倍体积含1.2%胃蛋白酶的0.5M醋酸,搅拌,4℃酶解72h;
(3)终止酶解:将酶解液以10000rpm,4℃离心20min,取上清液;在上清液中加入10mM EDTA,搅拌1h,10000rpm,4℃离心20min;
(4)中性盐析:取100ml清液,加10M NaOH调pH至中性,加入NaCl至终浓度2.3M,缓慢搅拌,4℃静置盐析24h,10000rpm,4℃离心30min取沉淀;
(5)酸溶:称量沉淀重量,加入10倍体积0.5M HAc搅拌,4℃静置过夜;
(6)透析:将溶液装入透析袋对纯水透析3d;将胶原提取液转至烧杯,4℃保存;
吸水垫层的制备方法为:配制浓度为9mg/ml的胶原蛋白溶液倒入模具,在-30℃至-50℃间循环冻干48h。吸水垫层规格的成型采用冻干时所用的模具。
交联工艺:向海绵中加适量50mmol/L的EDAC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)的乙醇溶液,室温下孵育交联24h,于0.1mol/L的Na2HPO4溶液中浸泡1h,然后将海绵用纯化水洗涤10次。洗涤顺序为:1~3次每隔2h换一次纯化水,4~6次每隔4h换一次纯化水,7~10次每隔8h换一次纯化水。检测EDAC残留,进行二次冷冻干燥。吸水垫层规格的成型采用冻干后的机械剪裁。
护创贴生产:采用现有护创贴生产工艺,分别将易拉签6、外隔离层1、医用基布层5、吸水垫层4、第一内隔离层2、第二内隔离层3按上述护创贴层状结构生产胶原海绵护创贴。护创贴生产后,护创贴包装方法可采用:在包装线上单个护创贴独立封装,虚线分切后,将数个装护创贴袋成卷一起入盒。
实施例4
本实施例的高浓度胶原海绵护创贴,其结构同上述实施例1。
所述的吸水垫层为高浓度胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成的海绵状物品未经交联得到。
该胶原的提取方法包括以下步骤:
(1)预处理:称取牛筋原料20g,去除表皮、肌肉、脂肪等,洗净捣碎;
(2)酸性酶解:加入10倍体积含1.2%胃蛋白酶的0.5M醋酸,搅拌,4℃酶解72h;
(3)终止酶解:将酶解液以10000rpm,4℃离心20min,取上清液;在上清液中加入10mM EDTA,搅拌1h,10000rpm,4℃离心20min;
(4)中性盐析:取100ml清液,加10M NaOH调pH至中性,加入NaCl至终浓度2.3M,缓慢搅拌,4℃静置盐析24h,10000rpm,4℃离心30min取沉淀;
(5)酸溶:称量沉淀重量,加入10倍体积0.5M HAc搅拌,4℃静置过夜;
(6)透析:将溶液装入透析袋对纯水透析3d;将胶原提取液转至烧杯,4℃保存。
该复合胶原蛋白海绵的主要成分胶原蛋白,每100mg胶原蛋白海绵含胶原蛋白大于80mg,其余为药物、水和无机盐。
吸水垫层的制备方法为:配制浓度为9mg/ml的胶原蛋白溶液,加硫酸庆大霉素溶液使其质量百分比浓度为0.0005%,混匀倒入冻干槽,在-30℃至-50℃间循环冻干48h。
护创贴生产:采用现有护创贴生产工艺,分别将易拉签6、外隔离层1、医用基布层5、吸水垫层4、第一内隔离层2、第二内隔离层3按上述护创贴层状结构生产胶原海绵护创贴。护创贴生产后,护创贴包装方法可采用:在包装线上单个护创贴独立封装,虚线分切后,将数个装护创贴袋成卷一起入盒。
综上所述,本发明具有以下积极有益效果:
1、本发明涉及的胶原蛋白海绵免疫原性极低,使用安全,效果显著。
2、胶原蛋白海绵纯度高,所含羟脯氨酸含量可达11%,与机体组织中理论含量相当,胶原提取和保存时保持了三螺旋结构具有高的生物活性,该海绵接触创面后,机械止血的同时胶原蛋白的表面基团可以迅速与血小板表面受体相互作用,诱导更多血小板附着,启动一系列凝血途径,释放凝血因子达到生理凝血的效果,迅速止血。
3、高活性的胶原蛋白具有引导成纤维细胞有序排列生长的作用,能够明显减轻皮肤疤痕形成,降低色素沉着。
4、高浓度的胶原蛋白能为伤口细胞提供营养,加快皮肤新生代谢,促进创面修复。
5、复合胶原蛋白海绵复合承载的药物可缓释,产生相应的药物功效。
6、本发明的隔离层和易拉签结构方便去除,能够很好地避免创面卫生无污染。
7、本发明提到的交联方法效果优良,效率高,海绵外观好,能有效改善胶原的降解,降低工艺成本,后续去除交联剂更容易,产品使用更安全有效。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,故凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种高浓度胶原海绵护创贴,其特征在于其包括:医用基布层;贴合在该医用基布层上的外隔离层;分别贴合在该医用基布层表面并呈阶梯状的第一内隔离层和第二内隔离层;以高浓度胶原蛋白海绵或高浓度的胶原蛋白原液与药物复合的复合胶原蛋白海绵为主体的吸水垫层,该吸水垫层贴合在该医用基布层之上;以及粘附在该外隔离层边缘的易拉签。
2.根据权利要求1所述的高浓度胶原海绵护创贴,其特征在于:所述外隔离层的内层或上层贴附于医用基布层的非胶面一侧;所述医用基布层的胶面外缘部分分别粘附第一内隔离层和第二内隔离层的外边缘部分,该医用基布层的胶面中央部分粘附吸水垫层的一侧,该吸水垫层的另一侧分别由第一内隔离层和第二内隔离层覆盖;所述易拉签位于该护创贴结构的最外层或下层。
3.根据权利要求2所述的高浓度胶原海绵护创贴,其特征在于:所述医用基布层为一侧涂有天然橡胶膏浆或医用热熔胶的无纺布、或聚乙烯防水布或膜、或聚氨基甲酸酯防水布或膜中的至少一种,其形状为圆形,或椭圆形,或方形,或图案形。
4.根据权利要求3所述的高浓度胶原海绵护创贴,其特征在于:所述外隔离层的面积和形状与所述医用基布层相同。
5.根据权利要求4所述的高浓度胶原海绵护创贴,其特征在于:所述第一内隔离层与第二内隔离层的外缘皆与医用基布层外缘一致,所述第一内隔离层及第二内隔离层的中间位置覆盖在吸水垫层上,位于吸水垫层中央上方的第一内隔离层及第二内隔离层的其中一部分向远离吸水垫层方向折叠,第一隔离层的一部分可将第二隔离层的折叠部分覆盖。
6.根据权利要求5所述的高浓度胶原海绵护创贴,其特征在于:所述第一隔离层或第二隔离层的材料为聚乙烯防水布或聚乙烯防水膜、或聚氨基甲酸酯防水布或聚氨基甲酸酯防水膜,或涂硅油的底纸中的至少一种。
7.权利要求1-6中任一项所述的高浓度胶原海绵护创贴的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)吸水垫层的制备:高浓度的胶原蛋白原液在低温冷冻条件下形成海绵状物品经交联或不交联得到吸水垫层,或高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成海绵状物品经交联或不交联得到吸水垫层;吸水垫层不同面积规格的成型采用冻干时所用的模具,或冻干后的机械剪裁;
2)护创贴生产:采用现有护创贴生产工艺,分别将易拉签、外隔离层、医用基布层、吸水垫层、第一内隔离层、第二内隔离层按所述护创贴结构生产胶原海绵护创贴。
8.根据权利要求7所述的高浓度胶原海绵护创贴的制备方法,其特征在于:步骤1)中,所述胶原蛋白的提取方法包括以下步骤:
(1)预处理:称取牛筋原料20g,去除表皮、肌肉、脂肪等,洗净捣碎;
(2)酸性酶解:加入10倍体积含0.8%~1.5%胃蛋白酶的0.8M~1.5M醋酸,搅拌,4℃酶解24h-72h;
(3)终止酶解:将酶解液以10000rpm,4℃离心20min,取上清液;在上清液中加入8mM~15mM EDTA,搅拌1h,10000rpm,4℃离心20min;
(4)中性盐析:取100ml清液,加10M NaOH调pH至中性,加入NaCl至终浓度2.3M,缓慢搅拌,4℃静置盐析24h,10000rpm,4℃离心30min取沉淀;
(5)酸溶:称量沉淀重量,加入10倍体积0.5M HAc搅拌,4℃静置过夜;
(6)透析:将溶液装入透析袋对纯水透析3d;将胶原提取液转至烧杯,4℃保存。
9.根据权利要求8所述的高浓度胶原海绵护创贴的制备方法,其特征在于:所述吸水垫层为复合胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成的海绵状物品经交联得到;
所述吸水垫层的制备方法为:配制浓度为9mg/ml的胶原蛋白溶液,加硫酸庆大霉素溶液使其质量百分比浓度为0.0005%,混匀倒入冻干槽,在-30℃至-50℃间循环冻干48h;
交联工艺:向海绵中加适量50mmol/L的EDAC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)的乙醇溶液,室温下孵育交联24h,于0.1mol/L的Na2HPO4溶液中浸泡1h,然后将海绵用纯化水洗涤多次。
10.根据权利要求8所述的高浓度胶原海绵护创贴的制备方法,其特征在于:所述的吸水垫层为高浓度胶原蛋白海绵,为高浓度的胶原蛋白原液与药物溶液混匀在低温冷冻条件下形成的海绵状物品未经交联得到。
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