CN104490760B - 辣椒碱‑胶原蛋白海绵的制备方法及其应用 - Google Patents
辣椒碱‑胶原蛋白海绵的制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及增生性瘢痕的外用药物的技术领域，特别是涉及辣椒碱‑胶原蛋白海绵的制备方法及其应用，制备方法包括以下步骤：步骤一，利用动物跟腱制得胶原蛋白粉末；步骤二，利用胃蛋白酶提取胶原蛋白粉末得到提取液；步骤三，离心收集上清液；步骤四，通过加入氢氧化钠析出胶原蛋白，水洗，制得高纯度的胶原蛋白；步骤五，用醋酸回溶胶原蛋白；步骤六，将胶原蛋白溶液、甘油和辣椒碱混合均匀然后冷冻干燥，即制得辣椒碱‑胶原蛋白海绵。本发明所制备的辣椒碱‑胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生，具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
Description
技术领域
本发明涉及增生性瘢痕的外用药物的技术领域，特别是涉及辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法及其应用。
背景技术
增生性瘢痕属病理性瘢痕的一种，是皮肤软组织受到创伤后，创面异常愈合的产物，以成纤维细胞过度增殖和细胞外基质过度沉积为特征。常发生在外科手术、外伤及烧伤后，是损伤皮肤修复3月后的并发症。增生性瘢痕不仅影响美观，而且会出现瘙痒、疼痛等症状，甚至会引起严重的功能障碍。现有技术中，临床上常见的外用药物载体主要有硅胶膜、硅凝胶、软膏等，但这些外用药物载体的疗效不理想，主要原因是与这些药物不易进入瘢痕组织内有关。而且这些外用药物一般都含有具有毒性的化学交联剂，从而使得这些外用药物的安全性和生物相容性不好。另外，由于瘢痕组织的特殊病理结构，现有技术中的外用药物经皮渗透性差，使得治疗效果不理想。
另外，临床烧伤科常用无菌纱布覆盖切痂后的创面，但由于纱布不能降解吸收，不能诱导皮肤组织再生修复且与创面粘结，因此，在除去纱布时给病人带来很大的痛苦。
辣椒碱是一种天然的植物碱，是辣椒中的主要生物活性成分，有研究表明辣椒碱有显著的抗纤维化作用，可抑制增生性成纤维细胞增殖能力和胶原合成能力，用于瘢痕过度增生的防治。但是，辣椒碱具有高度的肝脏首过效应，且其半衰期比较短，因此辣椒碱适合局部经皮给药，制成的形式如霜剂和贴剂，然而，经皮给药时会引起不同程度的皮肤刺激性。
发明内容
本发明的目的之一在于针对现有技术中的不足之处而提供辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
本发明的目的之二在于针对现有技术中的不足之处而提供辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用。
为达到上述目的之一，本发明通过以下技术方案来实现。
提供辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，它包括以下步骤：
步骤一，将富含胶原蛋白的牛跟腱机械去除筋膜、肌肉和脂肪后，充分粉碎，粉碎后用纯水清洗，得到胶原蛋白粉末；
步骤二，将步骤一得到的胶原蛋白粉末溶解于稀酸溶液中，并向所述稀酸溶液中加入胃蛋白酶，然后于一定温度下搅拌提取一定时间后，得到提取液；
步骤三，对步骤二得到的提取液进行离心并收集上清液；
步骤四，往步骤三所得的上清液中加入氢氧化钠溶液至所述上清液的酸碱度为中性，所述上清液中即析出胶原蛋白，然后水洗析出的胶原蛋白，即得到高纯度的胶原蛋白；
步骤五，将步骤四得到的高纯度的胶原蛋白用醋酸回溶，得到胶原蛋白溶液；
步骤六，往步骤五得到的胶原蛋白溶液中加入一定量的甘油和辣椒碱，混合均匀后，分装于容器中，然后在一定温度下冷冻干燥一定时间后，即得到辣椒碱-胶原蛋白海绵。
上述技术方案中，在所述步骤六后，还包括步骤七，对步骤六中得到的辣椒碱-胶原蛋白海绵用Co60照射灭菌，然后包装，入库。
上述技术方案中，所述步骤一中，动物跟腱包括牛跟腱、猪跟腱和羊跟腱中的任意一种或两种以上的组合物。
上述技术方案中，所述步骤二中，所述醋酸溶液的pH值为2~3；所述胶原蛋白粉末与所述胃蛋白酶的重量比为40~60:0.5~1.5；所述胃蛋白酶的活性为1:10000。
上述技术方案中，所述步骤二中，于3℃~5℃下搅拌提取24小时~48小时。
上述技术方案中，所述步骤四中，所述氢氧化钠溶液的浓度为8mol/L~12mol/L。
上述技术方案中，所述步骤五中，所得到的胶原蛋白溶液的浓度为8mg/mL~10mg/mL；所述醋酸的浓度为0.3mol/L~1mol/L。
上述技术方案中，所述步骤六中，所述胶原蛋白溶液与所述甘油的重量比为95~98:2~5；所述辣椒碱占所述胶原蛋白溶液和所述甘油的总重量的0.025%~0.075%。
上述技术方案中，所述步骤六中，采用真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，冷冻干燥的温度为-40℃~-50℃，冷冻干燥的时间为24小时~48小时。
为达到上述目的之二，本发明通过以下技术方案来实现。
上述所述的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵的应用，所述辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生，其经皮渗透性好，无药物肝脏首过效应，对皮肤刺激性小。
本发明的有益效果：
（1）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵具有经皮渗透性好，能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
（2）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵具有高吸水性和外形美观的特点，而且，所制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵具有良好的多孔形态结构，从而有利于提高其药物渗透性，并避免药物肝脏首过效应。
（3）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，由于辣椒碱-胶原蛋白海绵中的胶原蛋白为独特的三股螺旋结构，从而赋予胶原蛋白良好的生物相容性、生物可降解性和无毒性，因此，将辣椒碱与胶原蛋白形成海绵载药体系，能够使辣椒碱到达特定部位缓慢释放，并能够减少对皮肤的刺激性，增加药物疗效。
（4）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，由于将胶原蛋白和甘油联合使用，能够使制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵的柔韧度好，并能够减少临床止血操作中因为海绵的拉扯而刺激创面。
（5）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，由于不含有化学交联剂，从而避免了具有毒性的化学交联剂的使用，大大提高了所制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵的安全性和生物相容性。
（6）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，具有方法简单，生产成本低，能够适用于大规模生产和广泛推广的特点。
（7）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的应用，该辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生，其具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
（8）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的应用，用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的辣椒碱-胶原蛋白海绵具有性能优越，价格适中的特点，能够用于烧、烫伤及创伤引起的皮肤缺损治疗，并且能够保持创面干净，有效减轻疼痛，并能诱导自体皮肤修复。
（9）本发明提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的应用，用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的辣椒碱-胶原蛋白海绵能够应用于软组织创面的止血、填充和修复。
附图说明
图1是本发明的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法中所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵的图片。
图2是本发明的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法中所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵的受力效果图。
图3是本发明的辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用中对大鼠创面愈合的情况图。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
其中，本发明提及的胃蛋白酶的活性为1:10000，是表示1g胃蛋白酶中含有含有10000个酶活力国际单位（IU）。其中，1IU（一个酶活力国际单位，又称U），是指在特定条件下，1分钟内转化1微摩尔底物，或者底物中1微摩尔有关基团所需的酶量。
其中，本发明的步骤四中得到的高纯度的胶原蛋白的纯度为60%~70%。
实施例1。
本实施例提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，它包括以下步骤：
步骤一，将富含胶原蛋白的牛跟腱机械去除筋膜、肌肉和脂肪后，充分粉碎，粉碎后用纯水清洗，得到胶原蛋白粉末；
步骤二，将步骤一得到的胶原蛋白粉末溶解于稀酸溶液中，并向稀酸溶液中加入活性为1:10000的胃蛋白酶，然后于4℃下搅拌提取36小时后，得到提取液；本实施例中，该醋酸溶液的pH值为2.5。本实施例中，胶原蛋白粉末与胃蛋白酶的重量比为50:1。
步骤三，对步骤二得到的提取液进行离心并收集上清液；
步骤四，往步骤三所得的上清液中加入浓度为10mol/L氢氧化钠溶液至上清液的酸碱度为中性，上清液中即析出胶原蛋白，然后水洗析出的胶原蛋白，即得到高纯度的胶原蛋白；本实施例中，胶原蛋白的纯度为65%；
步骤五，将步骤四得到的高纯度的胶原蛋白用浓度为0.5mol/L醋酸回溶，得到胶原蛋白溶液；本实施例中，所得到的胶原蛋白溶液的浓度为9mg/mL；
步骤六，往步骤五得到的胶原蛋白溶液中加入甘油和辣椒碱，混合均匀后，分装于容器中，然后采用真空冷冻干燥机在-40℃下冷冻干燥28小时后，即得到辣椒碱-胶原蛋白海绵。本实施例中，胶原蛋白溶液与甘油的重量比为98:2，辣椒碱占胶原蛋白溶液和甘油的总重量的0.05%。
步骤七，对步骤六中得到的辣椒碱-胶原蛋白海绵用Co60照射灭菌，然后包装，入库。
本实施例1的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，具有方法简单，生产成本低，能够适用于大规模生产和广泛推广的特点，而且所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵在组织创伤修复以及组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用方面，具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
实施例2。
本实施例提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，它包括以下步骤：
步骤一，将富含胶原蛋白的猪跟腱机械去除筋膜、肌肉和脂肪后，充分粉碎，粉碎后用纯水清洗，得到胶原蛋白粉末；
步骤二，将步骤一得到的胶原蛋白粉末溶解于稀酸溶液中，并向稀酸溶液中加入活性为1:10000的胃蛋白酶，然后于3℃下搅拌提取48小时后，得到提取液；本实施例中，该醋酸溶液的pH值为2。本实施例中，胶原蛋白粉末与胃蛋白酶的重量比为40:0.5。
步骤三，对步骤二得到的提取液进行离心并收集上清液；
步骤四，往步骤三所得的上清液中加入浓度为8mol/L氢氧化钠溶液至上清液的酸碱度为中性，上清液中即析出胶原蛋白，然后水洗析出的胶原蛋白，即得到高纯度的胶原蛋白；本实施例中，胶原蛋白的纯度为60%；
步骤五，将步骤四得到的高纯度的胶原蛋白用浓度为0.3mol/L醋酸回溶，得到胶原蛋白溶液；本实施例中，所得到的胶原蛋白溶液的浓度为10mg/mL；
步骤六，往步骤五得到的胶原蛋白溶液中加入甘油和辣椒碱，混合均匀后，分装于容器中，然后采用真空冷冻干燥机在-48℃下冷冻干燥36小时后，即得到辣椒碱-胶原蛋白海绵。本实施例中，胶原蛋白溶液与甘油的重量比为97:3，辣椒碱占胶原蛋白溶液和甘油的总重量的0.025%。
步骤七，对步骤六中得到的辣椒碱-胶原蛋白海绵用Co60照射灭菌，然后包装，入库。
本实施例2的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，具有方法简单，生产成本低，能够适用于大规模生产和广泛推广的特点，而且所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵在组织创伤修复以及组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用方面，具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
实施例3。
本实施例提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，它包括以下步骤：
步骤一，将富含胶原蛋白的羊跟腱机械去除筋膜、肌肉和脂肪后，充分粉碎，粉碎后用纯水清洗，得到胶原蛋白粉末；
步骤二，将步骤一得到的胶原蛋白粉末溶解于稀酸溶液中，并向稀酸溶液中加入活性为1:10000的胃蛋白酶，然后于5℃下搅拌提取24小时后，得到提取液；本实施例中，该醋酸溶液的pH值为3。本实施例中，胶原蛋白粉末与胃蛋白酶的重量比为60:1.5。
步骤三，对步骤二得到的提取液进行离心并收集上清液；
步骤四，往步骤三所得的上清液中加入浓度为12mol/L氢氧化钠溶液至上清液的酸碱度为中性，上清液中即析出胶原蛋白，然后水洗析出的胶原蛋白，即得到高纯度的胶原蛋白；本实施例中，胶原蛋白的纯度为70%；
步骤五，将步骤四得到的高纯度的胶原蛋白用浓度为1mol/L醋酸回溶，得到胶原蛋白溶液；本实施例中，所得到的胶原蛋白溶液的浓度为8mg/mL；
步骤六，往步骤五得到的胶原蛋白溶液中加入甘油和辣椒碱，混合均匀后，分装于容器中，然后采用真空冷冻干燥机在-50℃下冷冻干燥24小时后，即得到辣椒碱-胶原蛋白海绵。本实施例中，胶原蛋白溶液与甘油的重量比为95:5，辣椒碱占胶原蛋白溶液和甘油的总重量的0.075%。
步骤七，对步骤六中得到的辣椒碱-胶原蛋白海绵用Co60照射灭菌，然后包装，入库。
本实施例3的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，具有方法简单，生产成本低，能够适用于大规模生产和广泛推广的特点，而且所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵在组织创伤修复以及组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用方面，具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
实施例4。
本实施例提供的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，它包括以下步骤：
步骤一，将富含胶原蛋白的牛跟腱、猪跟腱和羊跟腱机械去除筋膜、肌肉和脂肪后，充分粉碎，粉碎后用纯水清洗，得到胶原蛋白粉末；
步骤二，将步骤一得到的胶原蛋白粉末溶解于稀酸溶液中，并向稀酸溶液中加入活性为1:10000的胃蛋白酶，然后于3.5℃下搅拌提取40小时后，得到提取液；本实施例中，该醋酸溶液的pH值为2.8。本实施例中，胶原蛋白粉末与胃蛋白酶的重量比为45:0.8。
步骤三，对步骤二得到的提取液进行离心并收集上清液；
步骤四，往步骤三所得的上清液中加入浓度为9mol/L氢氧化钠溶液至上清液的酸碱度为中性，上清液中即析出胶原蛋白，然后水洗析出的胶原蛋白，即得到高纯度的胶原蛋白；本实施例中，胶原蛋白的纯度为67%；
步骤五，将步骤四得到的高纯度的胶原蛋白用浓度为0.8mol/L醋酸回溶，得到胶原蛋白溶液；本实施例中，所得到的胶原蛋白溶液的浓度为8.5mg/mL；
步骤六，往步骤五得到的胶原蛋白溶液中加入甘油和辣椒碱，混合均匀后，分装于容器中，然后采用真空冷冻干燥机在-45℃下冷冻干燥48小时后，即得到辣椒碱-胶原蛋白海绵。本实施例中，胶原蛋白溶液与甘油的重量比为96:4，辣椒碱占胶原蛋白溶液和甘油的总重量的0.06%。
步骤七，对步骤六中得到的辣椒碱-胶原蛋白海绵用Co60照射灭菌，然后包装，入库。
本实施例4的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，具有方法简单，生产成本低，能够适用于大规模生产和广泛推广的特点，而且所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵在组织创伤修复以及组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用方面，具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。
实施例5。
本实施例将实施例1辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法中所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用，将实施例1制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵覆盖于机体组织的创面，能够使增生性瘢痕创面具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。而且，该辣椒碱-胶原蛋白海绵能够用于烧、烫伤及创伤引起的皮肤缺损治疗，并且能够保持创面干净，有效减轻疼痛，并能诱导自体皮肤修复。
实施例6。
本实施例将实施例2辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法中所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用，将实施例2制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵覆盖于机体组织创面，能够使增生性瘢痕创面具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。而且，该辣椒碱-胶原蛋白海绵能够用于烧、烫伤及创伤引起的皮肤缺损治疗，并且能够保持创面干净，有效减轻疼痛，并能诱导自体皮肤修复。
实施例7。
本实施例将实施例3辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法中所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用，将实施例3制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵覆盖于机体组织的创面，能够使增生性瘢痕创面具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。而且，该辣椒碱-胶原蛋白海绵能够用于烧、烫伤及创伤引起的皮肤缺损治疗，并且能够保持创面干净，有效减轻疼痛，并能诱导自体皮肤修复。
实施例8。
本实施例将实施例4辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法中所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵用于组织创伤修复以及在组织创伤修复过程中抑制增生性瘢痕产生的应用，将实施例4制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵覆盖于机体组织的创面，能够使增生性瘢痕创面具有经皮渗透性好，且能够避免药物肝脏首过效应，并能够减少对皮肤的刺激性的优点。而且，该辣椒碱-胶原蛋白海绵能够用于烧、烫伤及创伤引起的皮肤缺损治疗，并且能够保持创面干净，有效减轻疼痛，并能诱导自体皮肤修复。
性能测定实验
见图1。上述实施例1至4分别制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵，均为疏松多孔的海绵结构，且其色泽洁白，外形美观。
柔韧性检测
对实施例1和实施例2分别制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵进行柔韧性检测，从图2中辣椒碱-胶原蛋白海绵的受力效果图可知，本发明所制备的辣椒碱-胶原蛋白海绵具有柔软的特性，并且具有较好的韧性。
吸水率检测
对实施例1至实施例4分别制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵进行吸水率检测，吸水率检测结果请见表1。
表1 实施例1至实施例4的辣椒碱-胶原蛋白海绵的吸水率情况表
| 实施例 | 吸水率 |
| 1 | 1256.52%±1.73 |
| 2 | 1206.64%±1.66 |
| 3 | 1237.82%±1.45 |
| 4 | 1249.38%±1.71 |
由表1的吸水率数据表明，本发明制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵均具有高吸水性的特点。
孔隙率检测
对实施例1至实施例4分别制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵进行孔隙率检测，孔隙率检测结果请见表2。
表2 实施例1至实施例4的辣椒碱-胶原蛋白海绵的孔隙率情况表
| 实施例 | 孔隙率 |
| 1 | 111.66%±0.03 |
| 2 | 129.53%±0.02 |
| 3 | 125.75%±0.01 |
| 4 | 118.61%±0.02 |
由表2的孔隙率数据表明，本发明制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵均具有疏松多孔，且高孔隙率（均大于90%）的特点，从而使得本发明制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵提供足够的空间来吸收创面的血液并高粘附于创面，促进止血和修复伤口。
动物试验
选取三只SD大鼠（分别标记为A、B、C）为试验对象，然后对A、B、C标记的三只SD大鼠分别切除2.0cm×2.0cm的全层皮肤，对A的切除部位只涂生理盐水，对B的切除部位覆盖胶原蛋白海绵，对C的切除部位覆盖本发明实施例1制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵，然后于第1天、第5天、第10天、第15天和第20天分别观察A、B、C三只SD大鼠的创面愈合情况（见图3所示）。
由图3可知，A的切除部位由于只涂生理盐水，而未覆盖本发明制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵，A的切除部位在第20天时仍未完全愈合。B的切除部位由于是覆盖胶原蛋白海绵，B的切除部位是在第20天时才完全愈合。C的切除部位由于覆盖了实施例1制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵，使得C的切除部位在第15天就完全愈合了，而且毛发再生良好，在整个实验过程中均无感染情况发生。因此，表明，本发明制得的辣椒碱-胶原蛋白海绵对治疗创伤的愈合情况良好，而且，具有诱导自体皮肤再生，之后自行脱落，抑制瘢痕增生，抑菌抗感染的功能。
最后应当说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (8)
1.用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：它由以下步骤组成：
步骤一，将富含胶原蛋白的动物跟腱机械去除筋膜、肌肉和脂肪后，充分粉碎，粉碎后用纯水清洗，得到胶原蛋白粉末；
步骤二，将步骤一得到的胶原蛋白粉末溶解于稀酸溶液中，并向所述稀酸溶液中加入胃蛋白酶，然后于一定温度下搅拌提取一定时间后，得到提取液；
步骤三，对步骤二得到的提取液进行离心并收集上清液；
步骤四，往步骤三所得的上清液中加入氢氧化钠溶液至所述上清液的酸碱度为中性，所述上清液中即析出胶原蛋白，然后水洗析出的胶原蛋白，即得到高纯度的胶原蛋白；
步骤五，将步骤四得到的高纯度的胶原蛋白用醋酸回溶，得到胶原蛋白溶液；
步骤六，往步骤五得到的胶原蛋白溶液中加入一定量的甘油和辣椒碱，混合均匀后，分装于容器中，然后在一定温度下冷冻干燥一定时间后，即得到辣椒碱-胶原蛋白海绵；
步骤七，对步骤六中得到的辣椒碱-胶原蛋白海绵用Co60照射灭菌，然后包装，入库。
2.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，动物跟腱包括牛跟腱、猪跟腱和羊跟腱中的任意一种或两种以上的组合物。
3.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，所述稀酸溶液的pH值为2~3；所述胶原蛋白粉末与所述胃蛋白酶的重量比为40~60:0.5~1.5；所述胃蛋白酶的活性为1:10000。
4.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，于3℃~5℃下搅拌提取24小时~48小时。
5.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，所述氢氧化钠溶液的浓度为8mol/L~12mol/L。
6.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤五中，所得到的胶原蛋白溶液的浓度为8mg/mL~10mg/mL；所述醋酸的浓度为0.3mol/L~1mol/L。
7.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤六中，所述胶原蛋白溶液与所述甘油的重量比为95~98:2~5；所述辣椒碱占所述胶原蛋白溶液和所述甘油的总重量的0.025%~0.075%。
8.根据权利要求1所述的用于治疗增生性瘢痕的辣椒碱-胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于：所述步骤六中，采用真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，冷冻干燥的温度为-40℃~-50℃，冷冻干燥的时间为24小时~48小时。
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