CN102924547A - 一种红霉素b纯品的纯化方法 - Google Patents

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李学兵
孙瑞君
邹学锋
张志�
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Abstract

本发明涉及一种红霉素B对照品的纯化方法,将红霉素配制成溶液,利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离,将洗脱液pH调为酸性,加入醋酸丁酯振摇,静置分层,再将水相pH调节为碱性,用三氯甲烷萃取,弃去水层,三氯甲烷层再用纯化水洗两次,收集三氯甲烷层,蒸干,即得红霉素B纯品。本发明可以解决欧洲标准品价格昂贵,使用后成本高的缺点。

Description

一种红霉素B纯品的纯化方法
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域,特别是一种红霉素B纯品的纯化方法。
背景技术
在《中国药典》2010版红霉素质量标准中,规定用高效液相色谱法对相关物质红霉素B进行测定,在红霉素B定性时,以相对保留时间进行。该法的弊端是,当采用不同型号的色谱柱时,红霉素B相对保留时间会有所不同。
欧洲药典委员会有红霉素B对照品出售,但其到货价格比较贵,约1700~2000元/支(每支50mg),不利于普及使用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术不足,提供一种红霉素B纯品的纯化方法。
本发明的目的按照下述方案实现:
一种红霉素B对照品的纯化方法,将红霉素配制成溶液,利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离,将洗脱液pH调为酸性,加入醋酸丁酯振摇,静置分层,再将水相pH调节为碱性,用三氯甲烷萃取,弃去水层,三氯甲烷层再用纯化水洗两次,收集三氯甲烷层,蒸干,即得红霉素B纯品。
本方法采用制备液相色谱仪,将红霉素B与红霉素及其他组分分离,溶液用三氯甲烷进行萃取,低温挥干,得到红霉素B纯品,再用欧洲红霉素B对照品标定,得到含量。
从我们现在掌握的文献资料,未搜索到关于制备红霉素B纯品的文献。采用该方法可以制备红霉素B纯品,具有如下优势:①可以解决欧洲标准品价格昂贵,使用后成本高的缺点;②解决中国药品生物制品鉴定研究院未向市场供应红霉素B标准品的不足;③解决《中国药典》2010版红霉素质量标准中,因使用不同色谱柱,红霉素B相对保留时间变化给定性带来的困难。
具体实施方式
实施例1
1红霉素B的分离:
1.1色谱条件:色谱柱:Sinochrom300A ODS-AP10um;流动相:以磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾8.7g,加水1000ml,用20%磷酸调节pH值至8.2)-乙腈(40:60)为流动相;流速:22ml/min;检测波长:210nm。
1.2仪器型号:大连依利特P230制备液相色谱仪
1.3溶液制备:
样品溶液制备:抽取一批红霉素B含量较高的样品,准确称取1.0g,加乙腈10ml使溶解,加流动相稀释至100ml,摇匀,即可。
对照溶液制备:精密称取红霉素B对照品10mg,置50ml容量瓶中,加10ml乙腈使溶解,加流动相稀释至刻度。
1.4溶液分离:取对照溶液10ml注入液相色谱仪,记录色谱图,确定红霉素B保留时间。再取样品溶液10ml,注入液相色谱仪进行分离,在红霉素B对照品出峰起始时间,开始收集红霉素B溶液,至红霉素B峰尾部结束,置4℃左右冰箱中保存。反复收集若干次,合并。
1.5红霉素B纯化:将洗脱液pH调为5.0,加入醋酸丁酯适量,振摇,静置分层,弃去有机相。再将水相pH调节为10.2,用三氯甲烷萃取,弃去水层,三氯甲烷层再用纯化水洗两次,收集三氯甲烷层,于60℃蒸干,即得红霉素B纯品。
1.6红霉素B含量测定:取自制红霉素B纯品,按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件,以欧洲药典委员会红霉素B对照品为参考,对自制红霉素B纯品含量进行测定,结果为92.8%。
实施例2
1、红霉素B的分离:
1.1色谱条件:色谱柱:Sinochrom300A ODS-AP10um;流动相:以磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾8.7g,加水1000ml,用20%磷酸调节pH值至8.2)-乙腈(45:55)为流动相;流速:24ml/min;检测波长:210nm。
1.2仪器型号:大连依利特P230制备液相色谱仪
1.3溶液制备:
样品溶液制备:抽取一批红霉素B含量较高的样品,准确称取1.0g,加乙腈10ml使溶解,加流动相稀释至100ml,摇匀,即可。
对照溶液制备:精密称取红霉素B对照品10mg,置50ml容量瓶中,加10ml乙腈使溶解,加流动相稀释至刻度。
1.4溶液分离:取对照溶液10ml注入液相色谱仪,记录色谱图,确定红霉素B保留时间。再取样品溶液10ml,注入液相色谱仪进行分离,在红霉素B对照品出峰起始时间,开始收集红霉素B溶液,至红霉素B峰尾部结束,置4℃左右冰箱中保存。反复收集若干次,合并。
1.5红霉素B纯化:将洗脱液pH调为5.3,加入醋酸丁酯适量,振摇,静置分层,弃去有机相。再将水相pH调节为10.0,用三氯甲烷萃取,弃去水层,三氯甲烷层再用纯化水洗两次,收集三氯甲烷层,于60℃蒸干,即得红霉素B纯品。
1.6红霉素B含量测定:取自制红霉素B纯品,按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件,以欧洲药典委员会红霉素B对照品为参考,对自制红霉素B纯品含量进行测定,结果为93.4%。

Claims (1)

1.一种红霉素B纯品的纯化方法,将红霉素配制成溶液,利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离,将洗脱液pH调为酸性,加入醋酸丁酯振摇,静置分层,再将水相pH调节为碱性,用三氯甲烷萃取,弃去水层,三氯甲烷层再用纯化水洗两次,收集三氯甲烷层,蒸干,即得红霉素B纯品。
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CN108864229A (zh) * 2018-07-13 2018-11-23 广东东阳光药业有限公司 分离红霉素b的方法以及制备红霉素b对照品的方法

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