CN102895315B - 一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物 - Google Patents
一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102895315B CN102895315B CN201210366517.3A CN201210366517A CN102895315B CN 102895315 B CN102895315 B CN 102895315B CN 201210366517 A CN201210366517 A CN 201210366517A CN 102895315 B CN102895315 B CN 102895315B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fructus forsythiae
- extracting solution
- water
- silver
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 60
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 title abstract 6
- 241001646719 Escherichia coli O157:H7 Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 36
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 33
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 27
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- KFFCKOBAHMGTMW-LGQRSHAYSA-N Forsythin Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1[C@H]1[C@@H](CO[C@@H]2C=3C=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=CC=3)[C@@H]2CO1 KFFCKOBAHMGTMW-LGQRSHAYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 12
- JJVGFDTWFVSBIM-UHFFFAOYSA-N Phillyrin Natural products COc1ccc(cc1OC)C2OCC3C2COC3c4ccc(OC)c(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)c4 JJVGFDTWFVSBIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- FDBMFXMFZNNOQV-UHFFFAOYSA-N silver;tetradecanoic acid Chemical compound [Ag].CCCCCCCCCCCCCC(O)=O FDBMFXMFZNNOQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 241001333951 Escherichia coli O157 Species 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012567 medical material Substances 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N tetradecanoic acid Chemical class CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 abstract 4
- 241000598860 Garcinia hanburyi Species 0.000 abstract 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 abstract 1
- 229940117709 gamboge Drugs 0.000 abstract 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 72
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 26
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 25
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 14
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 4
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000827798 Hemerocallis citrina Species 0.000 description 1
- 241000531795 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi A Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001754 anti-pyretic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种抑菌组合物，属于中药领域。抑菌组合物中连翘提取液与水溶性纳米银以比例混合，两种药物的合用对抑制大肠杆菌O157:H7、藤黄微球菌起到协同的作用。本发明的一种连翘提取物与纳米银抑菌剂与现有的技术相比，解决了常规抑菌方法中连翘抑菌剂用量较大的问题，同时采用两种低剂量的抑菌物质减少了微生物耐药的发生机率、降低了其对人体的毒性，更加的安全。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，尤其涉及一种中药抑菌剂。
背景技术
连翘又称黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹，是中国临床常用传统中药之一，主要生长于山西、河南、山东等地，具有清热解毒、消肿散结之功效。连翘苷类是连翘所含的主要有效的化学成分，经研究表明，连翘具有抗病原微生物、抗炎、解热、护肝等作用，其中对伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、白喉杆菌及霍乱弧菌、葡萄球菌、链球菌都有抑制作用。由于连翘具有多种药理作用，且在我国资源丰富，广受人们的关注。
中药制剂浓缩液制成口服液或抑菌剂、涂覆剂等一次用剂量大，且长期使用影响人体健康。
发明内容
针对连翘抑菌剂一次性使用量大和长期使用影响人体健康问题，本发明人经过大量实验，发现纳米银能有效增强连翘提取液抑菌性能，减少连翘抑菌剂的用量，且采用两种低剂量的抑菌组合物，更加的安全。本发明的目的在于提供一种连翘纳米银抑菌剂，减少连翘抑菌剂一次的用剂量和降低药品对人体的毒性。
本发明提供如下技术方案:
一种抑菌剂，含有连翘提取液、水溶性纳米银；
连翘提取液的制备包括如下步骤：取干药材连翘，加水量为连翘重量的9倍，经95 ℃水浴提取4 h，再经过减压浓缩得到提取液；所得的提取液经过0.22 μm滤膜过滤。最后提取液经高压液相色谱法对提取液中的连翘苷进行标准定量。
水溶性纳米银颗粒粒径为3～10 nm，纳米银外表包覆两性聚合物。
水溶性纳米银粒径为3～10 nm，外表为羧基，依照下列方法制备：取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氢氧化钠析出沉淀，过滤，将沉淀加入到100 mL浓度为10 mol/L水溶性的硝酸银溶液中得到十四烷酸银；称取6.7 g 浓度为20 mmoL/L 十四烷酸银于100 mL烧杯中，向烧杯中加入58 mL浓度为40 mmoL/L的三乙胺，80℃下电磁搅拌2 h，白色的十四烷酸银粉末逐渐变成棕色，不溶的前体消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽滤，用丙酮洗涤沉淀数次后，真空干燥，即得到纳米银粒子粉末。依照本方法制备的水溶性纳米银颗粒与连翘提取液具有良好的协同抗菌作用。
抑制大肠杆菌O157:H7时连翘提取液、水溶性纳米银的体积比为75～100:1。为了达到更好的效果，连翘提取液与水溶性纳米银体积比为75-100:1，优选为100:1。
抑制藤黄微球菌时连翘提取液、水溶性纳米银的体积比为1～25:1。
在算体积比时所用的连翘提取液中连翘苷的浓度为9.3mg/g，所用的水溶性纳米银浓度为10mg/mL。
本发明还涉及上述的抑菌组合物在抑制大肠杆菌O157:H7中的应用。
本发明还涉及上述的抑菌组合物在抑制藤黄微球菌中的应用。
本发明的有益效果是：水溶性纳米银的应用能有效增强连翘抑菌性能，降低连翘抑菌剂的用量，更令人意向不到的是两种药物的合用对抑制大肠杆菌O157:H7和藤黄微球菌起到协同作用，同时本抑菌剂采用两种低剂量的抑菌物质，相对于使用高剂量的连翘或者水溶性纳米银，更加的安全，可以作为安全可靠地外用涂覆剂等。
附图说明
图1连翘提取液与纳米银之比为100:1对大肠杆菌O157:H7协同抑菌作用
图1a 200 μL连翘提取液对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图1b 2 μL的纳米银对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图1c 100 μL连翘提取液与1 μL纳米银对大肠杆菌O157:H7的协同抑菌作用。
图2连翘提取液与纳米银之比为75:1对大肠杆菌O157:H7协同抑菌作用
图2a 150 μL连翘提取液对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图2b 2 μL的纳米银对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图2c 75 μL连翘提取液和1 μL纳米银对大肠杆菌O157:H7的协同抑菌作用。
图3 连翘提取液与纳米银之比为25:1对藤黄微球菌协同抑菌作用
图3a 400 μL连翘提取液对藤黄微球菌的抑制作用，图3b 16 μL的纳米银对藤黄微球菌的抑制作用，图3c 200 μL连翘提取液和8 μL纳米银对藤黄微球菌的协同抑菌作用。
图4 连翘提取液与纳米银之比为20:1对藤黄微球菌协同抑菌作用
图4a 320 μL连翘提取液对藤黄微球菌的抑制作用，图4b 16 μL的纳米银对藤黄微球菌的抑制作用，图4c 160 μL连翘提取液与8 μL纳米银对藤黄微球菌的协同抑菌作用。
实施例中所用试剂均为常规试剂，依照常规方式配制即可。
具体实施方式
实施例1
1、连翘提取液的制备过程：称取干药材连翘50 g，加水量为450 mL，在95 ℃下提取4 h，经过真空旋转浓缩仪后，用0.22 μm滤膜除去提取液中的杂质和细菌，最后用高效液相色谱法测得提取液中连翘苷含量为9.3 mg/g。
2、水溶性银纳米颗粒制备：
a、取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4g的氢氧化钠析出沉淀，过滤，将沉淀加入到100 mL浓度为10 mol/L水溶性的硝酸银溶液中得到十四烷酸银。
b、称取6.7 g 浓度为20 mmoL/L 十四烷酸银于100 mL烧杯中，向烧杯中加入58 mL浓度为40 mmoL/L的三乙胺，80℃下电磁搅拌2 h，白色的十四烷酸银粉末逐渐变成棕色，不溶的前体消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽滤，用丙酮洗涤沉淀数次后，真空干燥，即得到纳米银粒子粉末。
3、连翘提取液与水溶性纳米银协同抑菌作用。
a 细菌的培养
挑取LB琼脂培养基上的大肠杆菌O157:H7的单菌落于10 mL LB肉汤培养基中，置于37 ℃培养箱中培养16 h，再按1％的接种量接种于5 mL的LB肉汤培养基中，37 ℃培养4 h后。取1 mL上述菌液用0.1%的蛋白胨水连续稀释三个梯度，最终的菌液大约为106 CFU/mL。
b水溶性纳米银与连翘提取液在抑菌性能上的协同作用
分别取1 mL上述已稀释好的菌液于1.5 mL灭菌的离心管中，向1号离心管中分别加入200 μL连翘提取液，向2号离心管中加入2 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，向3号离心管中加入100 μL连翘提取液（连翘苷浓度为9.3 mg/g）和1 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，不加入任何上述抑菌剂。为保证每管液体最终体积相等，差量用0.1%的蛋白胨水补齐。置于37 ℃培养2 h。每组实验平行三次。
c平板计数
将实验组待测液用PBS连续稀释两个梯度，100、10-1、10-2各取出200μL分别均匀涂布在LB固体平板上；空白组连续稀释四个梯度，从10-2、10-3、10-4三个梯度分别均涂布在LB固体平板上。平板吹干后，37℃倒置培养12 h，长出菌落后计数，以30-300个菌落形成单位（CFU）为有效的计数范围。每毫升原菌液活菌数=平板计数*稀释倍数*5
| 抑菌物质 | 加入抑菌剂后能数出来的菌落数 |
| 空白组 | 6.5×107 CFU/mL |
| 200 μL的连翘提取液 | 1.5×106 CFU/mL |
| 含2 μL浓度为10 mg/mL的纳米银 | 4.8×102 CFU/mL |
| 含100 μL的连翘提取液和1 μL浓度为10 mg/mL的纳米银溶液 | 0 CFU/mL |
如图1所示，图1a 150 μL连翘提取液对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图1b 2 μL的纳米银对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图1c 100 μL连翘提取液与1 μL纳米银对大肠杆菌O157:H7的协同抑菌作用。
实验表明：本发明提供的抑菌组合物具有减少连翘抑菌剂一次用量的作用，且两种药物的合用对抑制大肠杆菌O157:H7起到协同的作用
具体实施方式2
1、连翘提取液的制备过程：称取干药材连翘50 g，加水量为450 mL，在95 ℃下提取4 h，经过真空旋转浓缩仪后，用0.22 μm滤膜除去提取液中的杂质和细菌，调整浓度，用高效液相色谱法测得提取液中连翘苷含量为9.3 mg/g。
2、水溶性银纳米颗粒制备：
同实施例1。
3、连翘提取液与水溶性纳米银协同抑菌作用。
a 细菌的培养
挑取LB琼脂培养基上的大肠杆菌O157:H7的单菌落于10 mL LB肉汤培养基中，置于37 ℃培养箱中培养16 h，再按1％的接种量接种于5 mL的LB肉汤培养基中，37 ℃培养4 h后。取1 mL上述菌液用0.1%的蛋白胨水连续稀释三个梯度，最终的菌液大约为106 CFU/mL。
b水溶性纳米银与连翘提取液在抑菌性能上的协同作用
分别取1 mL上述已稀释好的菌液于1.5 mL灭菌的离心管中，向1号离心管中分别加入150 μL连翘提取液，向2号离心管中加入2 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，向3号离心管中加入75 μL连翘提取液（连翘苷浓度为9.3mg/g）和1 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，不加入任何上述抑菌剂。为保证每管液体最终体积相等，差量用0.1%的蛋白胨水补齐。置于37 ℃培养2 h。每组实验平行三次。
c平板计数
将实验组待测液用PBS连续稀释两个梯度，100、10-1、10-2各取出200μL分别均匀涂
布在LB固体平板上；空白组连续稀释四个梯度，从10-2、10-3、10-4三个梯度分别均涂布在
LB固体平板上。平板吹干后，37℃倒置培养12 h，长出菌落后计数，以30-300个菌落形成单位（CFU）为有效的计数范围。每毫升原菌液活菌数=平板计数*稀释倍数*5
| 抑菌物质 | 加入抑菌剂后能数出来的菌落数 |
| 空白组 | 5.7×106 CFU/mL |
| 150 μL的连翘提取液 | 2.0×106 CFU/mL |
| 含2 μL浓度为10 mg/mL的纳米银 | 4.8×102 CFU/mL |
| 含75 μL的连翘提取液和1 μL浓度为10 mg/mL的纳米银溶液 | 0 CFU/mL |
如图2所示，图2a 150 μL连翘提取液对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图2b 2 μL的纳米银对大肠杆菌O157:H7的抑制作用，图2c 75 μL连翘提取液与1 μL纳米银对大肠杆菌O157:H7的协同抑菌作用。
实验表明：本发明提供的抑菌组合物具有减少连翘抑菌剂一次用量的作用，且两种药物的合用对抑制大肠杆菌O157:H7起到协同的作用
实施例3
1、连翘提取液的制备过程：称取连翘50 g，加水量为450 mL，在95 ℃下提取4 h，经过真空旋转浓缩仪后，用0.22 μm滤膜除去提取液中的杂质和细菌，最后用高效液相色谱法测得提取液中连翘苷含量为9.3mg/g。
2、水溶性银纳米颗粒制备：
同实施例1。
3、连翘提取液与水溶性纳米银协同抑菌作用。
a 、细菌的培养
挑取牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的藤黄微球菌单菌落于5mL 牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于30 ℃培养箱中培养24 h，再按1％的接种量接种于5 mL的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30 ℃培养12 h后。取1 mL上述菌液用PBS与液体培养基按4:1比例混合的混合液中连续稀释三个梯度，最终的菌液大约为106～107 CFU/mL。
b、水溶性纳米银与连翘提取液在抑菌性能上的协同作用
分别取1 mL上述已稀释好的菌液于1.5 mL灭菌的离心管中，向1号离心管中分别加入400 μL连翘提取液（连翘苷浓度为9.3 mg/g），向2号离心管中加入16 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，向3号离心管中加入200 μL连翘提取液（连翘苷浓度为9.3mg/g）和8 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，4号离心管作为空白对照，不加入任何上述抑菌剂。为保证每管液体最终体积相等，差量用PBS与液体培养基按4:1比例混合的混合液补齐。置于30℃摇床培养箱培养6 h。每组实验平行三次，
c 、平板计数
将实验组待测液用PBS连续稀释两个梯度，10-1、10-2、10-3各取出100μL分别均匀涂
布在牛肉膏蛋白胨固体平板上；空白组连续稀释四个梯度，从10-2、10-3、10-4三个梯度分别均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体平板上。平板吹干后，30℃倒置培养48 h，长出菌落后计数，以20-200个菌落形成单位（CFU）为有效的计数范围。每毫升原菌液活菌数=平板计数*稀释倍数*10
如图3 所示，图3a 400 μL连翘提取液对藤黄微球菌的抑制作用，图3b 16 μL的纳米银对藤黄微球菌的抑制作用，图3c 200 μL连翘提取液和8 μL纳米银对藤黄微球菌的协同抑菌作用。
实验表明：本发明提供的抑菌组合物具有减少连翘抑菌剂一次用量的作用，且两种药物的合用对抑制藤黄微球菌起到协同的作用。
实施例4
1、连翘提取液的制备过程：称取连翘50 g，加水量为450 mL，在95 ℃下提取4 h，经过真空旋转浓缩仪后，用0.22 μm滤膜除去提取液中的杂质和细菌，最后用高效液相色谱法测得提取液中连翘苷含量为9.3 mg/g。
2、水溶性银纳米颗粒制备：
同实施例1。
3、连翘提取液与水溶性纳米银协同抑菌作用。
a 、细菌的培养
挑取牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上的藤黄微球菌单菌落于5mL 牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于30 ℃培养箱中培养24 h，再按1％的接种量接种于5 mL的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30 ℃培样12 h后。取1 mL上述菌液在用PBS与液体培养基按4:1比例混合的混合液中连续稀释三个梯度，最终的菌液大约为106～107 CFU/mL。
b、水溶性纳米银与连翘提取液在抑菌性能上的协同作用
分别取1 mL上述已稀释好的菌液于1.5 mL灭菌的离心管中，向1号离心管中分别加入320 μL连翘提取液（连翘苷浓度为9.3 mg/g），向2号离心管中加入16 μL浓度为10 mg/mL水溶性纳米银，向3号离心管中加入160 μL连翘提取液（连翘苷浓度为9.3mg/g）和8 μL浓度为10 mg/mL的水溶性纳米银，4号离心管作为空白对照，不加入任何上述抑菌剂。为保证每管液体最终体积相等，差量用PBS与液体培养基按4:1比例混合的混合液补齐。置于30℃摇床培养箱培养6 h。每组实验平行三次。
c 、平板计数
将实验组待测液用PBS连续稀释两个梯度，10-1、10-2、10-3各取出100μL分别均匀涂
布在牛肉膏蛋白胨固体平板上；空白组连续稀释四个梯度，从10-2、10-3、10-4三个梯度分别均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体平板上。平板吹干后，30℃倒置培养48 h，长出菌落后计数，以20-200个菌落形成单位（CFU）为有效的计数范围。每毫升原菌液活菌数=平板计数*稀释倍数*10
如图4所示，图4a 320 μL连翘提取液对藤黄微球菌的抑制作用，图4b 16 μL的纳米银对藤黄微球菌的抑制作用，图4c 160 μL连翘提取液和8 μL纳米银对藤黄微球菌的协同抑菌作用。
实验表明：本发明提供的抑菌组合物具有减少连翘抑菌剂一次用量的作用，且两种药物的合用对抑制藤黄微球菌起到协同的作用。
Claims (4)
1.一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物，其特征在于由连翘提取液、水溶性纳米银组成； 所述的连翘提取液的制备包括如下步骤：取干药材连翘，加水量为连翘重量的9倍，经95 ℃水浴提取4 h，再经过减压浓缩得到提取液； 所述水溶性纳米银依照下列方法制备：取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氢氧化钠析出沉淀，过滤，将沉淀加入到100 mL浓度为10 mol/L水溶性的硝酸银溶液中得到十四烷酸银；称取6.7 g 浓度为20 mmoL/L 十四烷酸银于100 mL烧杯中，向烧杯中加入58 mL浓度为40 mmoL/L的三乙胺，80℃下电磁搅拌2 h，白色的十四烷酸银粉末逐渐变成棕色，不溶的前体消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽滤，用丙酮洗涤沉淀数次后，真空干燥，即得到纳米银粒子粉末；所述的菌为大肠杆菌O157:H7或藤黄微球菌；抑制大肠杆菌O157:H7时连翘提取液、水溶性纳米银的体积比为75～100:1，抑制藤黄微球菌时连翘提取液、水溶性纳米银的体积比为1～25:1，连翘提取液中连翘苷的浓度为9.3mg/g，水溶性纳米银浓度为10 mg/mL。
2.如权利要求1所述的抑菌组合物，其特征在于所得的提取液经过0.22 μm滤膜过滤。
3.如权利1～2任一所述的抑菌组合物在制备抑制大肠杆菌O157:H7药物中的应用。
4.如权利1～2任一所述的抑菌组合物在制备抑制藤黄微球菌药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210366517.3A CN102895315B (zh) | 2012-09-28 | 2012-09-28 | 一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210366517.3A CN102895315B (zh) | 2012-09-28 | 2012-09-28 | 一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102895315A CN102895315A (zh) | 2013-01-30 |
| CN102895315B true CN102895315B (zh) | 2014-02-26 |
Family
ID=47568001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210366517.3A Active CN102895315B (zh) | 2012-09-28 | 2012-09-28 | 一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102895315B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6379712B1 (en) * | 2000-09-13 | 2002-04-30 | Globoasia, L.L.C. | Nanosilver-containing antibacterial and antifungal granules and methods for preparing and using the same |
| US6660058B1 (en) * | 2000-08-22 | 2003-12-09 | Nanopros, Inc. | Preparation of silver and silver alloyed nanoparticles in surfactant solutions |
| CN1598691A (zh) * | 2004-09-27 | 2005-03-23 | 北京化工大学 | 一种纳米脂肪酸银粉体的制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100519889B1 (ko) * | 2004-12-29 | 2005-10-10 | 가이아인포넷(주) | 항균 세정제 조성물 |
| KR100535916B1 (ko) * | 2005-09-13 | 2005-12-09 | 강석주 | 은나노분말을 이용한 항균섬유의 제조방법 |
-
2012
- 2012-09-28 CN CN201210366517.3A patent/CN102895315B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6660058B1 (en) * | 2000-08-22 | 2003-12-09 | Nanopros, Inc. | Preparation of silver and silver alloyed nanoparticles in surfactant solutions |
| US6379712B1 (en) * | 2000-09-13 | 2002-04-30 | Globoasia, L.L.C. | Nanosilver-containing antibacterial and antifungal granules and methods for preparing and using the same |
| CN1598691A (zh) * | 2004-09-27 | 2005-03-23 | 北京化工大学 | 一种纳米脂肪酸银粉体的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 张恩户等.连翘及其制剂抗菌效价的生物测定法.《中国中医基础医学杂志》.2005,第11卷(第10期),第782-784页，尤其是第782页第1.2节. |
| 连翘及其制剂抗菌效价的生物测定法;张恩户等;《中国中医基础医学杂志》;20051231;第11卷(第10期);第782-784页，尤其是第782页第1.2节 * |
| 陈孝治等.第十九章妇产科用药.《药物处方手册》.湖南科学技术出版社,2010,(第二版),第806页妇炎净纳米银抗菌洁阴洗液. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102895315A (zh) | 2013-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102895325B (zh) | 中药抑菌组合物 | |
| CN113383798A (zh) | 一种新型复合制剂及其在细菌性病害中的应用 | |
| CN104855684B (zh) | 一种抗菌中药微生物发酵制剂及其制备方法和用途 | |
| CN104178370A (zh) | 一种含中药成分的杀菌洗衣液及其制备方法 | |
| CN104719671A (zh) | 一种预防仔猪腹泻的复方精油及其制备方法和应用 | |
| CN102895286B (zh) | 一种抑菌剂 | |
| CN103814967A (zh) | 一种水产消毒用的中草药颗粒制剂及其制备方法 | |
| CN104381343A (zh) | 一种水溶性复配抑菌剂及其制备方法 | |
| CN108624409A (zh) | 一种氧化石墨烯抑菌消炎洗涤剂 | |
| CN113995744B (zh) | 一种组合物及其抗菌应用 | |
| CN102895341B (zh) | 黄连提取物与纳米银抑菌组合物 | |
| CN103054969B (zh) | 一种复合皮肤消毒剂及其制备方法 | |
| CN104840401A (zh) | 一种护肤品用植物防腐剂 | |
| CN102895315B (zh) | 一种含连翘提取液的纳米银抑菌组合物 | |
| CN107012029A (zh) | 一种抗菌肥皂及其制备方法 | |
| CN107535540A (zh) | 一种抗菌剂及其制备方法 | |
| CN102895282B (zh) | 一种板蓝根提取液与纳米银抑菌组合物 | |
| CN104983795B (zh) | 一种用于治疗呼吸道疾病的复方兽用抗菌制剂 | |
| CN103861069B (zh) | 一种腐植酸盐复方鱼药及制备方法 | |
| CN110583755A (zh) | 双组氨酸/铁皮石斛多糖复合抗菌剂及制备方法和应用 | |
| CN107115369A (zh) | 马齿苋益生菌剂及其应用 | |
| CN107115368A (zh) | 预防动物腹泻的石榴皮微生态制剂及其应用 | |
| CN110100876A (zh) | 复配防腐剂及其制备和应用 | |
| CN107898876A (zh) | 疗效好的板青颗粒及其制备方法 | |
| CN108721167B (zh) | 一种含有藤茶提取物的防腐剂组合物及其在制备化妆品中的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Huang Qingxi Inventor before: Wei Hua Inventor before: Xiong Yonghua Inventor before: Xu Hengyi Inventor before: Wang Lijun Inventor before: Guo Liang Inventor before: Xu Feng Inventor before: Wan Cuixiang Inventor before: Lai Weihua |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170623 Address after: 410000, Hunan Province, Changsha Town, Yuhua Town, Hunan environmental protection science and Technology Industrial Park Management Committee, office building, 2 floor Patentee after: ANSON BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 999 No. 330031 Jiangxi province Nanchang Honggutan University Avenue Patentee before: Nanchang University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Nano-silver bacteriostatic composition containing fructus forsythiae extracting solution Effective date of registration: 20200601 Granted publication date: 20140226 Pledgee: Changsha Rural Commercial Bank Co.,Ltd. dezhengyuan sub branch Pledgor: ANSON BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2020980002659 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20200903 Granted publication date: 20140226 Pledgee: Changsha Rural Commercial Bank Co.,Ltd. dezhengyuan sub branch Pledgor: ANSON BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2020980002659 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A nano silver antibacterial composition containing Forsythia suspensa extract Effective date of registration: 20201118 Granted publication date: 20140226 Pledgee: Bank of Changsha Co.,Ltd. Jincheng sub branch Pledgor: ANSON BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2020980008173 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20221024 Granted publication date: 20140226 Pledgee: Bank of Changsha Co.,Ltd. Jincheng sub branch Pledgor: ANSON BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2020980008173 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A nano silver antibacterial composition containing forsythia suspensa extract Effective date of registration: 20221103 Granted publication date: 20140226 Pledgee: Bank of Changsha Co.,Ltd. Jincheng sub branch Pledgor: ANSON BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2022430000097 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20231107 Granted publication date: 20140226 Pledgee: Bank of Changsha Co.,Ltd. Jincheng sub branch Pledgor: ANSON BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2022430000097 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |