CN102893871B - 蕙兰杂交育种的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蕙兰杂交育种的方法，涉及中国兰花的育种领域，针对蕙兰不同的生长阶段选择出适合的培养基组分，以达到最高效的培养效果，节省了成本又提高了成活率，瓶苗的成活率达到94%以上，年生长量达8-10cm，大大降低了产业化生产育苗周期，另外，对于果实采用75%酒精杀毒消菌即可达到很好的效果，污染率低，减少了升汞等其他药剂对蒴果的药害作用，操作简单，有利于环保。

Description

蕙兰杂交育种的方法
技术领域
本发明涉及中国兰花的育种领域，具体地说是一种蕙兰杂交育种的方法。
背景技术
    蕙兰(Cymbidium faberi)是中国栽培历史最久和最普及的兰花之一，为我国二级重点保护野生物种。随着各国经济的发展和生活水平的提高，国民对兰花的需求也日益增加。美国、荷兰、日本、韩国等国家相继通过各种技术措施大力发展兰花产业，培育出观赏价值高的品种，带动了经济增长。我国的蕙兰主要集中在南方地区，以挖掘野生兰花资源，并依靠传统的分株方式进行繁殖；我国北方地区蕙兰资源少，传统分株方式繁殖慢，新品种的繁育速度大大落后于其他国家。通过人工杂交以及组织培养的方式可以大大加快蕙兰繁殖速度，是加快兰花产业化生产的重要途径之一。
发明内容
为解决上述存在的技术问题，本发明提供了一种蕙兰杂交育种的方法，根据蕙兰不同生长阶段所需要的生长条件，分阶段解决杂交授粉、果实消毒、原球茎诱导、根状茎增殖、根状茎分化、生根壮苗、幼苗移栽等技术问题，简单高效，易于产业化生产。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本蕙兰杂交育种的方法，通过如下步骤实现：
（1）杂交授粉：选择开放4-7天的蕙兰植株作为母本，取当天开花的蕙兰植株作为父本，取下父本和母本药帽中的花粉，将父本的花粉放入母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去，挂牌注明授粉组合和授粉时间，授粉后遮光75%，24～26℃条件下生长，待人工授粉5～6个月，子房膨大明显；
（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，阴凉处晾干果实表面水分后，将其放入冰箱低温冷藏处理2～3天，处理后的果实用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次，取出其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，并将其置于23～27℃下暗培养，种胚开始萌发，所述诱导原球茎的培养基为B11、1.0～1.5mg/LNAA、1.0～2.0 mg/L6-BA、100～150mg/L 椰汁、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，PH=5.5±0.1； 
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中继续繁殖，所述根状茎增殖培养基为MS、0.5～1.5mg/L NAA、0.1～0.5mg/L 6-BA、1.5～2.0g/L蛋白胨、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，PH=5.5±0.1，将处理好的增殖培养基放置在光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养，根状茎快速增殖，继续将增殖后的根状茎进行几次继代培养，得到一定的规模；
（4）不定芽诱导:将增殖后得到的根状茎接到分化培养基上，使其分化出不定芽，所述分化培养基为H、1.0～2.0mg/LNAA、2.0～5.0mg/L6-BA、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和100～120g/L香蕉泥的混合物，PH=5.5±0.1，将处理好的分化培养基放置在光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养； 
（5）生根壮苗：当不定芽高度增长到4～5cm时将其转移到生根壮苗培养基中，所述生根壮苗培养基为1/2MS、0.5～ 2.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，PH=5.5±0.1，将处理好的生根壮苗培养基置于光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养；
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm以上，根多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中3～7天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长2～5天，即可将其从培养瓶中取出移栽，将组培苗取出移栽时，用甲基托布津溶液1.10%～1.15%浸泡半小时左右,置于营养杯中，用腐殖三年以上的质量比为松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%:15%:15%:25%:30%的混合物作为基质填埋；将幼苗上盆之后，放到温室大棚中，保证通风、空气湿度 70～80 %、光线1500～2000lx的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴、甲基托布津或苯醚甲环唑，预防病虫害，根据基质的含水量情况来决定喷水量。 
优选的，所述的诱导原球茎的培养基为B11、1.0mg/LNAA、1.0 mg/L6-BA、100mg/L 椰汁、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，PH=5.5。
优选的，所述根状茎增殖培养基为MS、1.0mg/L NAA、0.5mg/L 6-BA、1.5g/L蛋白胨、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，PH=5.5。
优选的，所述分化培养基为H、1.0mg/LNAA、4.0mg/L6-BA、25g/L蔗糖、7g/L琼脂和100g/L香蕉泥的混合物，PH=5.5。
优选的，所述生根壮苗培养基为1/2MS、1.0mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，PH=5.5。
本发明针对蕙兰不同的生长阶段选择出适合的培养基组分，以达到最高效的培养效果，节省了成本又提高了成活率，瓶苗的成活率达到94%以上，年生长量达8—10cm，大大降低了产业化生产育苗周期，另外，对于果实采用75%酒精杀毒消菌即可达到很好的效果，污染率低，减少了升汞等其他药剂对蒴果的药害作用，操作简单，有利于环保。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细描述：
本发明所阐述的蕙兰杂交育种的方法，通过如下步骤实现：
（1）杂交授粉：选择开放4～7天的蕙兰植株作为母本，取当天开花的蕙兰植株作为父本，取下父本和母本药帽中的花粉，将父本的花粉放入母本蕊柱先端下侧的蕊腔中。为防止昆虫的再次授粉，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去，挂牌注明授粉组合和授粉时间。授粉后遮光75%，24～26℃条件下生长，待人工授粉5～6个月，子房膨大明显。
（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，阴凉处晾干果实表面水分后，将其放入冰箱低温冷藏处理2～3天，处理后的果实用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次，将处理好的果实放入已经灭菌处理带有滤纸的培养皿中，令果实上面的水分被充分吸收。用高温灭菌过刀片沿着果实的棱将其纵切，用镊子将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上。并将其置于23～27℃下暗培养，种胚开始萌发，出现白色的原球茎，继续培养。所述诱导原球茎的培养基为B11、1.0～1.5mg/L NAA、1.0～2.0 mg/L 6-BA、100～150mg/L 椰汁、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，PH=5.5±0.1。
（3）根状茎增殖：出现大量的白色原球茎之后，将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中继续繁殖，增大品种规模。所述根状茎增殖培养基为MS、0.5～1.5mg/L NAA、0.1～0.5mg/L 6-BA、1.5～2.0g/L蛋白胨、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3.0g/L活性炭的混合物，PH=5.5±0.1，将处理好的增殖培养基放置在光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养，根状茎快速增殖，根状茎既多又壮绿，达到分瓶的效果，继续将增殖后的根状茎进行几次继代培养，得到一定的规模。其中B11、 H和MS是基本培养基，NAA为α-萘乙酸， 6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，下文不再赘述。
（4）不定芽诱导:将增殖后得到的根状茎接到分化培养基上，使其分化出不定芽，所述分化培养基为H、1.0～2.0mg/LNAA、2.0～5.0mg/L6-BA、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和100～120g/L香蕉泥的混合物，PH=5.5±0.1，将处理好的分化培养基放置在光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养，分化培养基中相继分化出不定芽。 
（5）生根壮苗：当不定芽高度增长到4-5cm时将其转移到生根壮苗培养基中，所述生根壮苗培养基为1/2MS、0.5～ 2.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3.0g/L活性炭的混合物，PH=5.5±0.1，将处理好的生根壮苗培养基置于光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养，让其分化出根的同时使叶片更加强壮，使之为适应温室环境打下基础。
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm以上，根多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中3～7天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长2～5天，即可将其从培养瓶中取出移栽，将组培苗取出移栽时，用甲基托布津溶液1.12%～1.15%浸泡40～60分钟,置于营养杯中，用腐殖三年以上的质量比为松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%:15%:15%:25%:30%的混合物作为基质填埋，幼苗不可埋的太深，将根部盖起后，添加薄层基质即可。将幼苗上盆之后，放到温室大棚中，保证通风、空气湿度 70%～80 %、光线1500～2000lx的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴、甲基托布津或苯醚甲环唑，预防病虫害，根据基质的含水量情况来决定喷水量。可使瓶苗的成活率达到94%，年生长量达8～10cm。
实施例1:
蕙兰（新极品×元字）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：
（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种新极品与元字，取开放4天的蕙兰植株作母本，取当天开花的新极品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。24℃条件下生长，人工授粉5个月时子房膨大明显，结实率90%。
（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理3天。用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于23℃下暗培养。诱导原球茎的培养基为B11、1.0mg/L NAA、1.0 mg/L 6-BA、100mg/L 椰汁、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，PH=5.4，培养2个月种胚萌发。
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为MS、0.5mg/L NAA、0.2mg/L 6-BA、1.5g/L蛋白胨、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，PH=5.6。将处理好的增殖培养基放置在光照1500lx，温度25℃，12h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到310%。
（4）不定芽诱导:增殖2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为H、1.0mg/LNAA、2.0mg/L6-BA、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和100g/L香蕉泥的混合物，PH=5.4。将处理好的分化培养基放置在光照1500lx，温度24℃，13h/d光照的无菌室中培养。分化率达到85%。
（5）生根壮苗：诱导3个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高4cm的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为100%。生根壮苗培养基为1/2MS、1.0mg/LNAA、20g/L蔗糖、8g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，PH=5.5。将处理好的生根壮苗培养基置于光照1500lx、温度23℃、12h/d光照的无菌室中培养。
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm，根有多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中4天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长3天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用1.10%甲基托布津溶液侵泡40分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%：15%：15%：25%：30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度75%、光线1500lx的调控，定期喷施抗菌剂百菌清或甲基托布津，预防病虫害，定期施肥（花宝5号、KH2PO4）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到95%。
实施例2:
蕙兰（老极品×新上海）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：
（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种老极品与新上海，取开放6天的新上海植株作母本，取当天开花的老极品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。26℃条件下生长，人工授粉6个月时子房膨大明显，结实率100%。
（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理3天。用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于27℃下暗培养。诱导原球茎的培养基为B11、1.2mg/L NAA、1.5 mg/L 6-BA、120mg/L 椰汁、25g/L蔗糖、8g/L琼脂和1.5g/L活性炭的混合物，PH=5.5，培养40天种胚萌发。
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为MS、1.5mg/L NAA、0.3mg/L 6-BA、1.7g/L蛋白胨、30g/L蔗糖、6g/L琼脂和3g/L活性炭的混合物，PH=5.4。将处理好的增殖培养基放置在光照1700lx，温度24℃，14h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到280%。
（4）不定芽诱导:增殖2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为H、1.5mg/LNAA、5.0mg/L6-BA、25g/L蔗糖、6g/L琼脂和120g/L香蕉泥的混合物，PH=5.6。将处理好的分化培养基放置在光照1700lx，温度25℃，12h/d光照的无菌室中培养。分化率达到90%。
（5）生根壮苗：诱导3个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高5cm的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为95%。生根壮苗培养基为1/2MS、2.0mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂和3g/L活性炭的混合物，PH=5.6。将处理好的生根壮苗培养基置于光照2000lx、温度27℃、14h/d光照的无菌室中培养。
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm，根有多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中5天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长5天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用 1.13%甲基托布津溶液侵泡30分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%：15%：15%：25%：30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度70%、光线2000lx等的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴或甲基托布津，预防病虫害，定期施肥（花宝5号、KH2PO4）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到90%。
实施例3:
蕙兰（新上海×大一品）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：
（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种新上海与大一品，取开放7天的蕙兰大一品做母本，取当天开花的新上海确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。25℃条件下生长，人工授粉160天时子房膨大明显，结实率95%。
（2）无菌播种：将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理3天。用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于25℃下暗培养。诱导原球茎的培养基为B11、1.5mg/L NAA、2.0 mg/L 6-BA、130mg/L 椰汁、30g/L蔗糖、6g/L琼脂和3g/L活性炭的混合物，PH=5.6，培养50天种胚萌发。
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为MS、1.0mg/L NAA、0.5mg/L 6-BA、2.0g/L蛋白胨、25g/L蔗糖、8g/L琼脂和1.5g/L活性炭的混合物，PH=5.5。将处理好的增殖培养基放置在光照2000lx，温度23℃，13h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到300%。
（4）不定芽诱导:增殖2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为H、2.0mg/LNAA、3.0mg/L6-BA、30g/L蔗糖、8g/L琼脂和110g/L香蕉泥的混合物，PH=5.5。将处理好的分化培养基放置在光照2000lx，温度23℃，14h/d光照的无菌室中培养。分化率达到80%。
（5）生根壮苗：诱导2个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高4cm以上的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为88%。生根壮苗培养基为1/2MS、0.5mg/LNAA、25g/L蔗糖、7g/L琼脂和1.5g/L活性炭的混合物，PH=5.6。将处理好的生根壮苗培养基置于光照1800lx、温度25℃、13h/d光照的无菌室中培养。
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm，根有多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中7天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长2天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用1.15%甲基托布津溶液侵泡20分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%：15%：15%：25%：30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度70%、光线1800lx等的调控，定期喷施抗菌剂百菌清或咯菌晴，预防病虫害，定期施肥（花宝5号、KH2PO4）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到92%。
实施例4:
蕙兰（大一品×元字）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：
（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种大一品与元字，取开放5天的蕙兰元字植株作母本，取当天开花的大一品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。25℃条件下生长，人工授粉165天时子房膨大明显，结实率100%。
（2）无菌播种：将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理2天。用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于25℃下暗培养。诱导原球茎的培养基为B11、1.3mg/L NAA、1.5 mg/L 6-BA、150mg/L 椰汁、20g/L蔗糖、8g/L琼脂和2.5g/L活性炭的混合物，PH=5.5，培养2个月种胚萌发。
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为MS、1.5mg/L NAA、0.1mg/L 6-BA、2.0g/L蛋白胨、25g/L蔗糖、6g/L琼脂和2.5g/L活性炭的混合物，PH=5.6。将处理好的增殖培养基放置在光照1800lx，温度27℃，13h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到280%。
（4）不定芽诱导:增殖2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为H、1.5mg/LNAA、4.0mg/L6-BA、30g/L蔗糖、6g/L琼脂和120g/L香蕉泥的混合物，PH=5.6。将处理好的分化培养基放置在光照1800lx，温度27℃，12h/d光照的无菌室中培养。分化率达到90%。
（5）生根壮苗：诱导2个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高5cm以上的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为90%。生根壮苗培养基为1/2MS、1.5mg/LNAA、20g/L蔗糖、6g/L琼脂和2.5g/L活性炭的混合物，PH=5.4。将处理好的生根壮苗培养基置于光照1800lx、温度25℃、13h/d光照的无菌室中培养。
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm，根有多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中3天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长4天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用1.12%甲基托布津溶液侵泡30分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%：15%：15%：25%：30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度80%、光线1800lx的调控，定期喷施抗菌剂甲基托布津，预防病虫害，定期施肥（花宝5号、KH2PO4）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到95%。
实施例5:
蕙兰（新极品×温州素）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：
（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种新极品与温州素，取开放6天的蕙兰温州素植株作母本，取当天开花的新极品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。25℃条件下生长，人工授粉6个月时子房膨大明显，结实率90%。
（2）无菌播种：将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理3天。用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于25℃下暗培养。诱导原球茎的培养基为B11、1.4mg/L NAA、1.0 mg/L 6-BA、140mg/L 椰汁、30g/L蔗糖、7g/L琼脂和2.0g/L活性炭的混合物，PH=5.5，培养70天种胚萌发。
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为MS、1.5mg/L NAA、0.4mg/L 6-BA、1.8g/L蛋白胨、30g/L蔗糖、8g/L琼脂和2.0g/L活性炭的混合物，PH=5.5。将处理好的增殖培养基放置在光照2000lx，温度23℃，12h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到300%。
（4）不定芽诱导:增殖2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为H、1.0mg/LNAA、5.0mg/L6-BA、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和100g/L香蕉泥的混合物，PH=5.5。将处理好的分化培养基放置在光照2000lx，温度25℃，12h/d光照的无菌室中培养。分化率达到80%。
（5）生根壮苗：诱导三个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高4cm以上的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为95%。生根壮苗培养基为1/2MS、1.0mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂和2.0g/L活性炭的混合物，PH=5.5。将处理好的生根壮苗培养基置于光照1800lx、温度25℃、13h/d光照的无菌室中培养。
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm，根有多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中4天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长2天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用1.10%甲基托布津溶液侵泡30分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%：15%：15%：25%：30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度75%、光线2000lx的调控，定期喷施抗菌剂甲基托布津或预防病虫害，定期施肥（花宝5号、KH2PO4）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到95%。
当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，通过如下步骤实现：
（1）杂交授粉：选择开放4-7天的蕙兰植株作为母本，取当天开花的蕙兰植株作为父本，取下父本和母本药帽中的花粉，将父本的花粉放入母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去，挂牌注明授粉组合和授粉时间，授粉后遮光75%，24～26℃条件下生长，待人工授粉5～6个月，子房膨大明显；
（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，阴凉处晾干果实表面水分后，将其放入冰箱低温冷藏处理2～3天，处理后的果实用75%的酒精进行表面消毒杀菌10分钟，再用无菌水冲洗3次，取出其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，并将其置于23～27℃下暗培养，种胚开始萌发，所述诱导原球茎的培养基为B11、1.0～1.5mg/LNAA、1.0～2.0 mg/L6-BA、100～150mg/L 椰汁、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，pH =5.5±0.1； 
（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中继续繁殖，所述根状茎增殖培养基为MS、0.5～1.5mg/L NAA、0.1～0.5mg/L 6-BA、1.5～2.0g/L蛋白胨、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，pH =5.5±0.1，将处理好的增殖培养基放置在光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养，根状茎快速增殖，继续将增殖后的根状茎进行几次继代培养，得到一定的规模；
（4）不定芽诱导:将增殖后得到的根状茎接到分化培养基上，使其分化出不定芽，所述分化培养基为H、1.0～2.0mg/LNAA、2.0～5.0mg/L6-BA、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和100～120g/L香蕉泥的混合物，pH =5.5±0.1，将处理好的分化培养基放置在光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养； 
（5）生根壮苗：当不定芽高度增长到4～5cm时将其转移到生根壮苗培养基中，所述生根壮苗培养基为1/2MS、0.5～ 2.0mg/LNAA、20～30g/L蔗糖、6～8g/L琼脂和1.5～3g/L活性炭的混合物，pH =5.5±0.1，将处理好的生根壮苗培养基置于光照1500～2000lx、温度23～27℃、12～14h/d光照的无菌室中培养；
（6）炼苗移栽：当幼苗生长到10cm以上，根多于3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中3～7天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长2～5天，即可将其从培养瓶中取出移栽，将组培苗取出移栽时，用甲基托布津溶液1.10%～1.15%浸泡20～40分钟,置于营养杯中，用腐殖三年以上的质量比为松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石=15%:15%:15%:25%:30%的混合物作为基质填埋；将幼苗上盆之后，放到温室大棚中，保证通风、空气湿度 70～80 %、光线1500～2000lx的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴、甲基托布津或苯醚甲环唑，预防病虫害，根据基质的含水量情况来决定喷水量。
2.根据权利要求1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述的诱导原球茎的培养基为B11、1.0mg/LNAA、1.0 mg/L6-BA、100mg/L 椰汁、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，pH =5.5。
3.根据权利要求1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述根状茎增殖培养基为MS、1.0mg/L NAA、0.5mg/L 6-BA、1.5g/L蛋白胨、20g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，pH =5.5。
4.根据权利要求1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述分化培养基为H、1.0mg/LNAA、4.0mg/L6-BA、25g/L蔗糖、7g/L琼脂和100g/L香蕉泥的混合物，pH =5.5。
5.根据权利要求1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述生根壮苗培养基为1/2MS、1.0mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂和2g/L活性炭的混合物，pH =5.5。
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