CN102875592A - 天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种天然的 L- α - 甘油磷脂酰胆碱的制备方法，属于天然药物分离纯化技术领域。步骤：先用酸液对大孔型阳离子交换树脂浸泡，放尽酸液并用水冲洗，再用碱液浸泡，用水冲洗，再用酸液浸泡，用去离子水冲洗，再用低碳醇置换；将粉末磷脂加入低碳醇中，加碱反应后抽滤，用低碳醇洗涤，调 pH 至弱碱性，减压浓缩并冷却后转入分液漏斗中，静置，分出下层低碳醇相；将粉末磷脂与醇相树脂装柱，将醇解混合液上柱吸附，用低碳醇洗涤树脂除杂，用纯水对树指洗脱；用脱色剂脱色，经减压浓缩，得到成品。优点：工艺步骤简短，满足工业化生产要求；节约资源，降低成本；得到成品的总收率达 65.47-86.08% 、外标含量达 99% 以上，光学纯度达 99% 。

Description

天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法

技术领域

本发明属于天然药物分离纯化技术领域，具体涉及一种天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法。 

背景技术

甘油磷脂酰胆碱（英文名称为：L-α-glycerophosphorylCholine，缩写为L-α-GPC）为人体内天然存在的水溶性磷脂代谢产物，同时也是合成乙酰胆碱和磷脂酰胆碱（PC）的前体，其结构由胆碱、甘油和磷脂酰基组成。L-α-GPC属于胆碱酯酶抑制剂，能够有效地预防和治疗脑缺血性中风，不仅可以改善患者的记忆力和认知能力，治疗阿尔茨海默病和脑神经受伤等作用，而且还可以抵抗肌肉萎缩，抵抗高血脂及动脉硬化，保护血管等作用，因此被广泛应用于医药和保健品等行业。 

L-α-GPC的制备方法有溶剂萃取法（简称纯化萃取法）、沉淀法、重结晶法和色谱柱层析法等。最早的纯化萃取法是从牛胰脏中萃取纯化得到L-α-GPC纯品（GSchmidt，J.Biochem,1945,161-523）。1954年，美国专利US2864848公开了汞盐沉淀法，该方法是以汞盐的形式沉淀副产物，并且通过硫化氢和碳酸钡除去过量的汞离子，但是难以将汞离子充分除去，由于残留有未反应的PC，因此需要添加钙盐沉淀 L-α-GPC将汞离子去除，最后用树脂去除钙盐。可见该方法效率较低，过程较复杂，最终得率也并不理想。随后，Brockerhoff用重结晶法制备L-α-GPC纯品，但是需要除去催化剂，并且对产品进行重结晶纯化，整个过程比较复杂，成本比较高，不适合商业规模的生产。 

中国发明专利申请公布号CN102093410A公开了一种用硅胶柱层析法分离纯化甘油磷脂酰胆碱的方法，该专利方案的制备方法是将卵磷脂水解，由于水解物成份比较复杂，必须先用树脂纯化，再用硅胶柱层析法进一步纯化，最后再用树脂纯化。由于整个纯化需要两次树脂，一次硅胶进行纯化，才能达到纯化的目的，操作比较繁琐，控制要求高，硅胶不易回收套用，成本高，不易适应工业化的要求。 

中国发明专利申请公布号CN102516292A公开了一种天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱及其制备方法，该专利方案的制备方法是：向带有冷凝回流的三口烧瓶中加入1重量份的卵磷脂，并且用5-20重量份的低碳醇将卵磷脂溶解，搅拌状态下加热至20-100℃，待温度恒定后加入0.1-0.4重量份的催化剂（非离子型有机胺）搅拌反应2-5h，得到混合液，再将混合液在40-60℃下蒸发得到产物，接着用1-2倍体积的低碳醇将产物溶解，又接着用2-10 倍体积的非极性溶媒进行沉淀，弃去上清液，最后重复2-3次低碳醇溶解和非极性溶媒沉淀，得到天然L-α-GPC。该专利申请方案采用溶剂沉淀法进行纯化，存在的欠缺之一，使用的卵磷脂的磷脂酰胆碱含量为80%以上才可以得到纯的甘油磷脂酰胆碱L-α-GPC，然而由于自然界的大豆卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量仅为20~23%，因此要想得到80%以上含量的磷脂酰胆碱，就必须对卵磷脂进行深加工，从而无疑会提高制备成本；之二，由于用大量非极性溶剂进行沉淀以去除未反应的卵磷脂、催化剂及反应生成的脂肪酸酯类，因此造成生产成本高并且操作繁琐；之三，由于卵磷脂的磷脂酰胆碱含量为80%以下，并且卵磷脂水解得到的混合物包括甘油磷脂酰胆碱L-α-GPC、甘油磷脂酰丝氨酸L-α-GPS和甘油磷脂酰乙醇胺L-α-GPE，因此纯度无法保证。 

鉴于上述已有技术，本申请人作了有益的反复尝试，终于形成了下面将要介绍的技术方案。 

发明内容

本发明的任务在于提供一种有助于简化工艺步骤并且操作便捷而藉以满足工业化放大生产要求、有利于将分离纯化材料重复利用而藉以节约资源并降低制备成本和有益于获得理想的纯度的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法。 

本发明的任务是这样来完成的，一种天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，包括以下步骤： 

A）制取醇相树脂，先用酸溶液对大孔型阳离子交换树脂浸泡，放尽酸溶液并用水冲洗，再用碱液浸泡，放尽碱液并再次用水冲洗，然后，再次用酸液浸泡，放尽酸液并且进而用去离子水冲洗，放尽水，最后用低碳醇置换，得到醇相树脂； 

B）醇解反应，将粉末磷脂加入低碳醇中，在室温下加碱搅拌反应，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，用低碳醇洗涤，滤液用醋酸调节pH 至弱碱性，减压浓缩并冷却后转入分液漏斗中，静置，分出下层低碳醇相，得到醇解混合液； 

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与醇相树脂装柱，将醇解混合液上柱吸附，并且控制醇解混合液流经树脂柱的流量，用低碳醇洗涤树脂除杂，最后用纯水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液； 

D）脱色浓缩，在室温下用脱色剂对含有L-α-GPC的水溶液脱色，经过滤得到无色液体，再经减压浓缩，得到天然的L-α-GPC，低碳醇回收并重复使用于步骤A）。 

在本发明的一个具体的实施例中，步骤A）中所述的酸溶液与大孔型阳离子交换树脂的重量比为3-5∶1，所述的酸溶液为质量百分比浓度为3-5%的盐酸溶液或硫酸溶液， 所述的对大孔型阳离子交换树脂浸泡的时间为150-210min，所述的用水冲洗所用的水为去离子水，并且冲洗至pH5-7；所述碱液与大孔型阳离子交换树脂的重量比为3-5∶1，所述的碱液为质量百分比浓度为3-5%的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，所述碱液浸泡的时间为150-210min，所述再次用水冲洗所用的水为去离子水，并且冲洗至pH7-10；所述的酸液与大孔型阳离子交换树脂的重量比为3-5∶1，所述的酸液为质量百分比浓度为3-5%的盐酸溶液或硫酸溶液，酸液浸泡的时间为150-210min，所述进而用水冲洗所用的水为去离子水，并且冲洗至pH值为中性。 

在本发明的另一个具体的实施例中，所述的大孔型阳离子交换树脂为丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂。 

在本发明的又一个具体的实施例中，步骤B）中所述的粉末磷脂与低碳醇的重量比为1∶1-8；所述的在室温下加碱搅拌反应的反应时间为2-18h；所述的碱与粉末磷脂的摩尔比为1-3∶2；所述的滤液用醋酸调节至pH6.0-7.5；所述的减压浓缩是将pH6.0-7.5的滤液浓缩至粉末磷脂重量的1.2~1.8倍；所述的静置的时间为40-80min。 

在本发明的再一个具体的实施例中，步骤B）中所述的醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物。 

在本发明的还有一个具体的实施例中，步骤C）中所述的粉末磷脂与醇相树脂的重量体积比为1∶1-5；所述的控制醇解混合液流经树脂柱的流量是将流量控制为50-80ml/h。 

在本发明的更而一个具体的实施例中，步骤D）中所述的脱色剂为活性炭，活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0.05~0.2：1，；所述的减压浓缩的浓缩温度为45-70℃，减压压力为-0.09~-0.1 MPa。 

在本发明的进而一个具体的实施例中，所述的低碳醇为甲醇、乙醇、正丙醇。 

在本发明的又更而一个具体的实施例中，其特征在于所述的在室温下加碱搅拌反应的反应时间为4h，其特征在于所述的碱为甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、氢氧化钾。 

在本发明的又进而一个具体的实施例中，所述的粉末磷脂与醇相树脂按重量体积比为1∶2；所述的控制醇解混合液流经树脂柱的流量是将流量控制为80ml/h。 

本发明提供的技术方案相对于已有技术具有工艺步骤简短而得以满足工业化放大生产要求；由于能将步骤D）中的低碳醇回收并重复使用于步骤A），因而可节约资源并且降低制备成本；得到的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的总收率达65.47-86.08%、外标含量达99%以上，光学纯度达99%。 

具体实施方式

实施例1 

A）制取醇相树脂，先用质量百分比浓度为3%的盐酸溶液对丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂浸泡，其中质量百分比浓度为3%的盐酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为5∶1，浸泡的时间为150min，浸泡结束后放尽盐酸溶液即放尽酸溶液并且用去离子水冲洗至pH7，再改用质量百分比浓度为3%的氢氧化钠溶液（即碱液）浸泡，该氢氧化钠溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为4∶1，碱液浸泡的时间为150min，碱液浸泡结束后放尽氢氧化钠溶液即放尽碱液，并且再次用去离子水冲洗至pH10，然后再次用质量百分比浓度为3%的盐酸溶液浸泡150min，该盐酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为5∶1，再次浸泡结束后放尽酸液即放尽盐酸溶液并且进而用去离子水冲洗，冲洗结束后放尽水，最后用乙醇置换，将树脂中的水份置换成乙醇溶液，得到醇相树脂，本步骤中所述的丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂优选使用由中国上海华震科技有限公司生产的并且在本专利申请提出以前在市场广为销售的牌号为HD-2、DK110、D152或D113等； 

B）醇解反应，将粉末磷脂加入乙醇中，粉末磷脂与乙醇的重量比为1∶8，在室温下加入甲醇钠，搅拌反应4h，甲醇钠与粉末磷脂的mol比为1∶2，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，该醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物，用乙醇对醇解反应有机相洗涤，滤液用醋酸调节至pH7，而后减压浓缩浓缩温度为20℃，减压压力为-0.1MPa。当浓缩至粉末磷脂重量的1.5倍时停止浓缩，冷却后转入分液漏斗中，静置60min，得到醇解混合液； 

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与由步骤A）得到的醇相树脂按重量体积比1∶5装柱，并将由步骤B）得到的醇解混合液上柱吸附，将醇解混合液流经树脂柱的流量控制为80ml/h，用乙醇洗涤树脂除杂，最后用去离子水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液； 

D）脱色浓缩，在室温下用活性炭对由步骤C）得到的含有L-α-GPC的水溶液脱色活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0.05：1，经过滤得到无色液体，对无色液体减压浓缩，浓缩温度为70℃，减压压力为-0.1MPa，得到天然的L-α-GPC，低碳醇即乙醇回收并重复使用于步骤A）的所述置换。 

本实施例的总收率为86.08%，经HPLC-ELSD检测，外标含量99.2%，化学纯度ee为99%，［α］²⁰ _D=-2.6⁰（C=10，H₂O，pH=5.5） 

实施例2 

A）制取醇相树脂，先用质量百分比浓度为5%的盐酸溶液对丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂浸泡，其中质量百分比浓度为5%的盐酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为4∶1，浸泡的时间为210min，浸泡结束后放尽盐酸溶液即放尽酸溶液并且用去离子水冲洗至pH5，再改用质量百分比浓度为5%的氢氧化钾溶液（即碱液）浸泡，该氢氧化钾溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为4∶1，碱液浸泡的时间为210min，碱液浸泡结束后放尽氢氧化钾溶液即放尽碱液，并且再次用去离子水冲洗至pH7，然后再次用质量百分比浓度为5%的盐酸溶液浸泡210min，该盐酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为4∶1，再次浸泡结束后放尽酸液即放尽盐酸溶液并且进而用去离子水冲洗，冲洗结束后放尽水，最后用甲醇置换，将树脂中的水份置换成甲醇溶液，得到醇相树脂，本步骤中所述的丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂优选使用由中国上海华震科技有限公司生产的并且在本专利申请提出以前在市场广为销售的牌号为HD-2、DK110、D152或D113等； 

B）醇解反应，将粉末磷脂加入甲醇中，粉末磷脂与甲醇的重量比为1∶1，在室温下加入乙醇钠，搅拌反应18h，乙醇钠与粉末磷脂的mol比为2∶2，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，该醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物，用甲醇对醇解反应有机相洗涤，滤液用醋酸调节至pH6.5，而后减压浓缩浓缩温度为40℃，减压压力为-0.095MPa。当浓缩至粉末磷脂重量的1.8倍时停止浓缩，冷却后转入分液漏斗中，静置80min，得到醇解混合液； 

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与由步骤A）得到的醇相树脂按重量体积比1∶1装柱，并将由步骤B）得到的醇解混合液上柱吸附，将醇解混合液流经树脂柱的流量控制为50ml/h，用甲醇洗涤树脂除杂，最后用去离子水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液； 

D）脱色浓缩，在室温下用活性炭对由步骤C）得到的含有L-α-GPC的水溶液脱色活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0.2：1，经过滤得到无色液体，对无色液体减压浓缩，浓缩温度为45℃，减压压力为-0.09MPa，得到天然的L-α-GPC，低碳醇即甲醇回收并重复使用于步骤A）的所述置换。 

本实施例的总收率为82.22%%，经HPLC-ELSD检测，外标含量99.5%，化学纯度ee为99%，[α]²⁰ _D=-2.7°（C=10，H₂O，PH=5.8）。 

实施例3 

A）制取醇相树脂，先用质量百分比浓度为4%的盐酸溶液对丙烯酸系大孔型阳离子 交换树脂浸泡，其中质量百分比浓度为4%的盐酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为3∶1，浸泡的时间为180min，浸泡结束后放尽盐酸溶液即放尽酸溶液并且用去离子水冲洗至pH6，再改用质量百分比浓度为4%的氢氧化钠溶液（即碱液）浸泡，该氢氧化钠溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为3∶1，碱液浸泡的时间为180min，碱液浸泡结束后放尽氢氧化钠溶液即放尽碱液，并且再次用去离子水冲洗至pH8，然后再次用质量百分比浓度为4%的盐酸溶液浸泡180min，该盐酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为3∶1，再次浸泡结束后放尽酸液即放尽盐酸溶液并且进而用去离子水冲洗，冲洗结束后放尽水，最后用正丙醇置换，将树脂中的水份置换成正丙醇溶液，得到醇相树脂，本步骤中所述的丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂优选使用由中国上海华震科技有限公司生产的并且在本专利申请提出以前在市场广为销售的牌号为HD-2、DK110、D152或D113等； 

B）醇解反应，将粉末磷脂加入正丙醇中，粉末磷脂与正丙醇的重量比为1∶2，在室温下加入氢氧化钠，搅拌反应2h，氢氧化钠与粉末磷脂的mol比为3∶2，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，该醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物，用正丙醇对醇解反应有机相洗涤，滤液用醋酸调节至pH6.0，而后减压浓缩浓缩温度为30℃，减压压力为-0.098MPa。当浓缩至粉末磷脂重量的1.2倍时停止浓缩，冷却后转入分液漏斗中，静置40min，得到醇解混合液； 

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与由步骤A）得到的醇相树脂按重量体积比1∶2装柱，并将由步骤B）得到的醇解混合液上柱吸附，将醇解混合液流经树脂柱的流量控制为60ml/h，用正丙醇洗涤树脂除杂，最后用去离子水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液； 

D）脱色浓缩，在室温下用活性炭对由步骤C）得到的含有L-α-GPC的水溶液脱色活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0.1：1，经过滤得到无色液体，对无色液体减压浓缩，浓缩温度为60℃，减压压力为-0.09MPa，得到天然的L-α-GPC，低碳醇即正丙醇回收并重复使用于步骤A）的所述置换。 

本实施例的总收率为70.31%，经HPLC-ELSD检测，外标含量99.1%，光学纯度ee：99%，[α]²⁰ _D=-2.6°（C=10，H₂O，PH=5.6）。 

实施例4 

A）制取醇相树脂，先用质量百分比浓度为3%的硫酸溶液对丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂浸泡，其中质量百分比浓度为3%的硫酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂 的重量比为3∶1，浸泡的时间为180min，浸泡结束后放尽硫酸溶液即放尽酸溶液并且用去离子水冲洗至pH6，再改用质量百分比浓度为3%的氢氧化钾溶液（即碱液）浸泡，该氢氧化钾溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为3∶1，碱液浸泡的时间为180min，碱液浸泡结束后放尽氢氧化钾溶液即放尽碱液，并且再次用去离子水冲洗至pH8，然后再次用质量百分比浓度为3%的硫酸溶液浸泡180min，该硫酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为3∶1，再次浸泡结束后放尽酸液即放尽硫酸溶液并且进而用去离子水冲洗，冲洗结束后放尽水，最后用乙醇置换，将树脂中的水份置换成乙醇溶液，得到醇相树脂，本步骤中所述的丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂优选使用由中国上海华震科技有限公司生产的并且在本专利申请提出以前在市场广为销售的牌号为HD-2、DK110、D152或D113等； 

B）醇解反应，将粉末磷脂加入乙醇中，粉末磷脂与乙醇的重量比为1∶4，在室温下加入氢氧化钾，搅拌反应10h，氢氧化钾与粉末磷脂的mol比为2.5∶2，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，该醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物，用乙醇对醇解反应有机相洗涤，滤液用醋酸调节至pH6.0，而后减压浓缩浓缩温度为20℃，减压压力为-0.097MPa。当浓缩至粉末磷脂重量的1.4倍时停止浓缩，冷却后转入分液漏斗中，静置60min，得到醇解混合液； 

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与由步骤A）得到的醇相树脂按重量体积比1∶3装柱，并将由步骤B）得到的醇解混合液上柱吸附，将醇解混合液流经树脂柱的流量控制为70ml/h，用乙醇洗涤树脂除杂，最后用去离子水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液； 

D）脱色浓缩，在室温下用活性炭对由步骤C）得到的含有L-α-GPC的水溶液脱色活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0.15：1，经过滤得到无色液体，对无色液体减压浓缩，浓缩温度为50℃，减压压力为-0.092MPa，得到天然的L-α-GPC，低碳醇即乙醇回收并重复使用于步骤A）的所述置换。 

本实施例的总收率为65.47%，用HPLC-ELSD检测，外标含量99.5%，光学纯度ee：99%，[α]²⁰ _D=-2.6°（C=10，H₂O，PH=5.8）。 

实施例5 

A）制取醇相树脂，先用质量百分比浓度为4%的硫酸溶液对丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂浸泡，其中质量百分比浓度为4%的硫酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为5∶1，浸泡的时间为120min，浸泡结束后放尽硫酸溶液即放尽酸溶液并且用 去离子水冲洗至pH5，再改用质量百分比浓度为4%的氢氧化钠溶液（即碱液）浸泡，该氢氧化钠溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为5∶1，碱液浸泡的时间为120min，碱液浸泡结束后放尽氢氧化钠溶液即放尽碱液，并且再次用去离子水冲洗至pH8，然后再次用质量百分比浓度为4%的硫酸溶液浸泡120min，该硫酸溶液与丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂的重量比为5∶1，再次浸泡结束后放尽酸液即放尽硫酸溶液并且进而用去离子水冲洗，冲洗结束后放尽水，最后用甲醇置换，将树脂中的水份置换成甲醇溶液，得到醇相树脂，本步骤中所述的丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂优选使用由中国上海华震科技有限公司生产的并且在本专利申请提出以前在市场广为销售的牌号为HD-2、DK110、D152或D113等； 

B）醇解反应，将粉末磷脂加入甲醇中，粉末磷脂与甲醇的重量比为1∶6，在室温下加入甲醇钠，搅拌反应2h，甲醇钠与粉末磷脂的mol比为1.5∶2，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，该醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物，用甲醇对醇解反应有机相洗涤，滤液用醋酸调节至pH6.5，而后减压浓缩浓缩温度为30℃，减压压力为-0.097MPa。当浓缩至粉末磷脂重量的1.6倍时停止浓缩，冷却后转入分液漏斗中，静置80min，得到醇解混合液； 

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与由步骤A）得到的醇相树脂按重量体积比1∶4装柱，并将由步骤B）得到的醇解混合液上柱吸附，将醇解混合液流经树脂柱的流量控制为50ml/h，用甲醇洗涤树脂除杂，最后用去离子水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液； 

D）脱色浓缩，在室温下用活性炭对由步骤C）得到的含有L-α-GPC的水溶液脱色活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0. 05：1，经过滤得到无色液体，对无色液体减压浓缩，浓缩温度为40℃，减压压力为-0.10MPa，得到天然的L-α-GPC，低碳醇即甲醇回收并重复使用于步骤A）的所述置换。 

本实施例的总收率为80.43%，用HPLC-ELSD检测，外标含量99.1%，光学纯度ee：99%，[α]²⁰ _D=-2.5°（C=10，H₂O，PH=5.5）。 

Claims (10)

1.一种天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A）制取醇相树脂，先用酸溶液对大孔型阳离子交换树脂浸泡，放尽酸溶液并用水冲洗，再用碱液浸泡，放尽碱液并再次用水冲洗，然后，再次用酸液浸泡，放尽酸液并且进而用去离子水冲洗，放尽水，最后用低碳醇置换，得到醇相树脂；

B）醇解反应，将粉末磷脂加入低碳醇中，在室温下加碱搅拌反应，反应结束后抽滤，得到醇解反应有机相，用低碳醇洗涤，滤液用醋酸调节pH 至弱碱性，减压浓缩并冷却后转入分液漏斗中，静置，分出下层低碳醇相，得到醇解混合液；

C）树脂吸附纯化，将粉末磷脂与醇相树脂装柱，将醇解混合液上柱吸附，并且控制醇解混合液流经树脂柱的流量，用低碳醇洗涤树脂除杂，最后用纯水对树指洗脱，得到含有L-α-GPC的水溶液；

D）脱色浓缩，在室温下用脱色剂对含有L-α-GPC的水溶液脱色，经过滤得到无色液体，再经减压浓缩，得到天然的L-α-GPC，低碳醇回收并重复使用于步骤A）。

2.根据权利要求1所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于步骤A）中所述的酸溶液与大孔型阳离子交换树脂的重量比为3-5∶1，所述的酸溶液为质量百分比浓度为3-5%的盐酸溶液或硫酸溶液，所述的对大孔型阳离子交换树脂浸泡的时间为150-210min，所述的用水冲洗所用的水为去离子水，并且冲洗至pH5-7；所述碱液与大孔型阳离子交换树脂的重量比为3-5∶1，所述的碱液为质量百分比浓度为3-5%的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，所述碱液浸泡的时间为150-210min，所述再次用水冲洗所用的水为去离子水，并且冲洗至pH7-10；所述的酸液与大孔型阳离子交换树脂的重量比为3-5∶1，所述的酸液为质量百分比浓度为3-5%的盐酸溶液或硫酸溶液，酸液浸泡的时间为150-210min，所述进而用水冲洗所用的水为去离子水，并且冲洗至pH值为中性。

3.根据权利要求1或2所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于所述的大孔型阳离子交换树脂为丙烯酸系大孔型阳离子交换树脂。

4.根据权利要求1所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于步骤B）中所述的粉末磷脂与低碳醇的重量比为1∶1-8；所述的在室温下加碱搅拌反应的反应时间为2-18h；所述的碱与粉末磷脂的摩尔比为1-3∶2；所述的滤液用醋酸调节至pH6.0-7.5；所述的减压浓缩是将pH6.0-7.5的滤液浓缩至粉末磷脂重量的1.2~1.8倍；所述的静置的时间为40-80min。

5.根据权利要求1所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于步骤B）中所述的醇解反应有机相为L-α-GPC、L-α-GPE、L-α-GPS以及其它副产物的混合物。

6.根据权利要求1所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于步骤C）中所述的粉末磷脂与醇相树脂的重量体积比为1∶1-5；所述的控制醇解混合液流经树脂柱的流量是将流量控制为50-80ml/h。

7.根据权利要求1所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于步骤D）中所述的脱色剂为活性炭，活性炭与含有L-α-GPC的水溶液的重量比为0.05~0.2：1，；所述的减压浓缩的浓缩温度为45-70℃，减压压力为-0.09~-0.1 MPa。

8.根据权利要求1或4所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于所述的低碳醇为甲醇、乙醇、正丙醇。

9.根据权利要求4所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于其特征在于所述的在室温下加碱搅拌反应的反应时间为4h，其特征在于所述的碱为甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、氢氧化钾。

10.根据权利要求6所述的天然的L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法，其特征在于所述的粉末磷脂与醇相树脂按重量体积比为1∶2；所述的控制醇解混合液流经树脂柱的流量是将流量控制为80ml/h。