CN102875547B

CN102875547B - 一种长春西汀化合物及其制法

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Publication number: CN102875547B
Application number: CN201110197507.7A
Authority: CN
Inventors: 陶灵刚
Original assignee: Hainan Lingkang Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hainan Lingkang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-07-15
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2015-05-27
Anticipated expiration: 2031-07-15
Also published as: CN102875547A

Abstract

本发明公开了一种长春西汀化合物及其制法，该方法包括如下步骤：将长春西汀粗品用适量的有机溶剂溶解后进行柱层析上样，以中性氧化铝作为固定相，用乙酸乙酯和异丙醇的混合溶剂作为流动相，在柱温为室温的条件下进行洗脱，收集洗脱液；(2)将长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，用异丙醇重结晶，干燥，制得长春西汀。本方法工艺简单，成本低，收率高，提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用，适合于工业化生产。

Description

一种长春西汀化合物及其制法

技术领域

本发明涉及一种化合物及其制法，具体涉及一种长春西汀化合物的制法，属于药物技术领域。

背景技术

长春西汀(Vinpocetine，Calan)，又名阿朴长春胺酸乙酯，白色或类白色结晶性粉末，化学名称为：(3α，16α)-象牙烯宁-14-羧酸乙酯，分子式：C₂₂H₂₀N₂O₂，分子量：350.45，结构式为：

长春西汀首先由由匈牙利Gedeon Richter公司研发并于1978年上市。其药理作用包括：(1)增加脑血流；(2)促进脑部葡萄糖和氧的摄取和利用，增加ATP，减少缺血缺氧时乳酸的生成；(3)防止脑细胞兴奋中毒性死亡(兴奋性氨基酸导致的过度的受体兴奋)；(4)减轻脑缺氧损害，保护神经元；(5)增强多巴胺能、5羟色胺能和去甲肾上腺素能神经的功能；(6)防止脑、肝脏、肌肉组织和其它部位的缺血性损害；(7)清除自由基、抗脂质过氧化；(8)增强长期和短期记忆；(9)提高警醒程度；(10)减轻衰老性脑功能障碍；(11)清除动脉粥样硬化斑块；(12)增加心输出量和至各器官的营养血流；(13)促进血管舒张，改善血液循环，但对外周血流影响极小；(14)改善血液中脂蛋白构成；(15)提高红细胞的变形能力。

长春西汀常用于脑动脉硬化症、脑缺血性和出血性中风后遗症、短暂性脑缺血发作等脑循环障碍性疾病，用于治疗循环障碍所诱发的症状，如失语症、运用不能、记忆力差、认知功能障碍、眩晕和其他脑前庭问题及头痛等。另外，长春西汀也用于治疗多种原因导致的急慢性眼科疾病，治疗感觉神经性听力损伤。

长春西汀是生物碱长春胺的合成衍生物，长春胺是由Zabolatnaye等于1950年首次从小蔓长春花中分离得到的一种生物碱，长春胺的衍生物具有更高的生物活性和更小的毒副作用，其中最著名的是长春西汀。

关于长春西汀的合成，文献报道方法很多，如Oppolzer’醛法和三甲基氯硅烷法等，然而这些方法合成的步骤较长，收率不高，纯度低，导致制剂稳定性大幅下降，影响了其临床应用。

CN1058966A提供一种治疗脑血管疾病药物阿扑长春胺酸乙酯制备的新方法。该方法在脱水、酯化反应中加入阳性的或阴性的离子交换树脂作脱水剂，得阿扑长春胺酸乙酯反应液，将其反应液经常规处理，得阿扑长春胺酸乙酯浓缩液，在浓缩液中加入单一的有机溶媒乙醇或乙醇与二氯甲烷混合有机溶媒析晶，也可以将浓缩液加入单一的有机溶媒乙醇中或乙醇与二氯甲烷混合溶媒中析晶，得阿扑长春胺酸乙酯成品。US4035370公开了无水乙醇重结晶制备方法。

上述合成方法，收率低，而且得到的最终产物纯度不高，不适用于规模化大生产。另外，在化合物存放不当或存放时间过长时，会导致药物活性成分含量降低，色泽加强，有关物质含量升高。在某些情况下，由于生产工艺控制不当，导致药物纯度也不符合要求。

我们分析长春西汀的主要杂质为：阿朴长春胺酸、阿朴长春胺酸甲酯、和长春胺酸乙酯等。现有技术没有公开专门的纯化方法，因此有必要对不合格的产品进一步进行纯化，以高产率提供高纯度的化合物。

有鉴于此，本发明需要解决的技术问题是克服现有技术的不足，本发明在于提供一种长春西汀的制备方法，该方法简单，产品纯度高，收率高，对环境污染小，生产成本低，适合于工业化生产。

发明内容

一般而言，常规分离纯化方法有，例如包括反应混合物的冷却，然后经过滤收集结晶的方法；包括加热结晶，并用醇例如甲醇或其类似物洗涤，然后蒸馏除去溶剂并冷却获得结晶的方法；溶剂萃取法；稀释法；重结晶法；柱色谱；制备薄层色谱等方法。

申请人在大量现有文献的基础上，通过大量筛选的实验，发现上述文献以及一般的纯化分离方法例如结晶等方法难于获得高纯度高产率的化合物，而各种分离纯化方法以及多种条件参数又存在多种多样组合的可能性和不可预测性。本发明人经过长期认真的研究，意外发现了一种长春西汀化合物的纯化方法，令人惊奇地获得了高产率高纯度的产品。

本发明提供了一种长春西汀化合物的制法，解决了目前技术合成的长春西汀纯度低的缺点，提高了纯度，保障了用药的安全性，减少了毒副作用，提高了制剂的产品质量，该方法工艺简单，操作方便，成本低，适合于规模化生产。

本发明提供了一种利用中性氧化铝柱层析分离的方法将低纯度长春西汀化合物进行纯化的方法，本方法可以用于长春西汀制备的后处理过程，也可以用于纯度不合格的产品的纯化。

本申请人经过长期认真的大量研究，分离纯化过程中，筛选了硅胶、氧化铝或大孔树脂等各种填料色谱柱，例如硅胶的粒径为45-250μm、孔径为的硅胶；氧化铝或中性氧化铝粒径为18-200μm的氧化铝或中性氧化铝，大孔树脂型号为AmberliteXAD-6、AmberliteXAD-7、AmberliteXAD-8、Diaion HP2MG、GDX-501、HPD400、HPD450、HPD750、AmberliteXAD-9、AmberliteXAD-10、GDX-401、GDX-601等大孔树脂，本发明人意外发现应用大孔树脂对产品的纯度并没有明显改善，硅胶也不理想，而专用的中性氧化铝不仅可以充分吸附上柱物中的成分杂质及其它色素，还对本品纯化有着独到的意外效果，而且操作较简易。

本发明提供的长春西汀化合物的制法具体包括如下步骤：

(1)将长春西汀粗品用适量的有机溶剂溶解后进行柱层析上样，以中性氧化铝作为固定相，用乙酸乙酯和异丙醇的混合溶剂作为流动相，在柱温为室温的条件下进行洗脱，收集洗脱液；

(2)将长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，用异丙醇重结晶，干燥，制得长春西汀。

在本发明的一个方面，所述固定相的粒径为18-63μm，孔径为6nm的细孔中性氧化铝或粒径为50-200μm，孔径为6nm柱层析专用中性氧化铝。

在本发明的一个方面，中性氧化铝可以例如为供应商ICN的ICN allumina N优选粒径为18-63μm，孔径为6nm的细孔中性氧化铝，pH 7.5，优选粒径为18-32μm，孔径为6nm的细孔中性氧化铝，pH 7.5。或者，中性氧化铝例如为供应商Baker柱层析专用中性氧化铝，粒径为50-200μm，孔径为6nm，pH 7.0或pH 7.5。

在本发明的一个方面，作为优选，每次纯化药物的质量与色谱柱填料的质量之比为1∶10-200，优选质量比为1∶15-100。流动相的用量只要满足将药物基本上完全洗脱即可，洗脱后的流分分段收集，不同段的流分中药物的含量不同，为了获得高纯度的药物(例如纯度大于99.5％)，需将药物含量大于90％的流分合并，优选将药物含量大于95％的流分合并。

在本发明的一个方面，在本发明方法中得到的所需纯度在某种程度上依赖于杂质的量和色谱柱的操作环境。在流动相中有机溶剂的选择和用量必须是可控的，使得不会过早地把杂质洗脱出来。一般而言，本发明所用色谱柱的色谱柱包括直径为约0.1至约20cm，优选为至少4cm。色谱柱长度范围优选为约10厘米至约100厘米，更优选长度范围为约20厘米至约50厘米，最优选的长度为40厘米。

上述所述的制法，其中所述的柱层析的压力为0.1-5.0pa，优选为0.5-1.5pa。

上述所述的制法，其中所述的柱层析的流速为0.6-2.0ml/min。

上述所述的制法，其中所述的流动相是乙酸乙酯∶异丙醇体积比为90∶10～60∶40的混合溶液，优选所述的流动相是乙酸乙酯∶异丙醇体积比为75∶25的混合溶液。

上述所述的制法，其中所述的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯或乙酸戊酯。

本发明人在上述基础上进行大量的优化实验，筛选得到了适宜的流动相，因此在本发明的一个方面，优选地，上述精制方法中所述的色谱柱纯化条件为：固定相填料专用中性氧化铝，所述的流动相是乙酸乙酯∶异丙醇体积比为75∶25的混合溶液，柱层析的压力为0.5-1.5pa。

在本发明的一个方面，本发明提供的长春西汀化合物的制法具体包括如下步骤：

(1)将长春西汀粗品用适量的有机溶剂溶解后进行柱层析上样，以粒径为18-200μm，孔径为约6nm的细孔专用中性氧化铝或粒径为50-200μm，孔径为6nm柱层析专用中性氧化铝作为固定相，用乙酸乙酯∶异丙醇体积比为75∶25的混合溶剂作为流动相，在柱温为室温的条件下进行洗脱，收集洗脱液；

(2)将长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入异丙醇，回流10～30分钟，冷却至0～4℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀。

本发明上述所述的精制方法，其中所述的长春西汀纯品的纯度不低于99.8％。长春西汀纯度检测方法为部颁标准的高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-碳酸铵溶液(1.75→1000ml)-乙醚(80∶25∶3)为流动相；检测波长为273nm。

本发明选用中性氧化铝柱层析方法，使用适宜的固定相和流动相，具体地说，采用中性氧化铝为固定相，一定比例的乙酸乙酯∶异丙醇混合溶剂为流动相，可以有效率地精制和纯化长春西汀。其得率和纯度均很高，是获得高纯度长春西汀的一种简单有效的方法。

本发明制得的长春西汀提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用。而且与现有技术相比，本方法工艺简便易行，反应条件温和，成本低，收率高，产品纯度高，适合于工业化生产。

具体实施方式

以下通过具体实施方式进一步解释或说明本发明内容，但实施例不应被理解为对本发明保护范围的限制。

实施例1长春西汀的制备

(1)将10g长春西汀粗品(纯度98.63％)溶于50ml二氯甲烷中，再加入10g中性氧化铝搅拌均匀，挥去溶剂后加到制备的色谱柱上端，其中柱的填充剂为粒径18-32μm，孔径6nm的ICN allumina N中性氧化铝，柱长40cm，直径4cm，柱压0.5pa，再泵入乙酸乙酯和异丙醇体积比为75∶25的混合溶剂进行柱层析，流速为0.6ml/min，柱温为室温，开始计时，取样，跟踪监测，进行分段收集，收集长春西汀洗脱部位；

(2)将上述长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入100ml异丙醇，加热回流10分钟，冷却至0℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀化合物9.35g，收率94.8％，纯度99.83％，mp 152-153℃。

对比例1长春西汀的制备

(1)将10g长春西汀粗品(纯度98.63％)溶于50ml二氯甲烷中，再加入10g硅胶搅拌均匀，挥去溶剂后加到制备的色谱柱上端，其中柱的填充剂为粒径为18-32μm、孔径为6nm的硅胶，柱长40cm，直径4cm，柱压0.5pa，再泵入98％二氯甲烷和2％甲醇的混合溶剂进行柱层析，流速为0.6ml/min，柱温为室温，开始计时，取样，跟踪监测，进行分段收集，收集长春西汀洗脱部位；

(2)将上述长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入100ml乙醇，加热回流10分钟，冷却至0℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀化合物8.81g，收率89.3％，纯度99.17％，mp 151-153℃。

实施例2长春西汀的制备

(1)将15g长春西汀粗品(纯度98.77％)溶于60ml二氯甲烷中，再加入15g中性氧化铝搅拌均匀，挥去溶剂后加到制备的色谱柱上端，其中柱的填充剂为粒径50-200μm，孔径6nm的Baker柱层析专用中性氧化铝，柱长40cm，直径4cm，柱压1.5pa，再泵入乙酸乙酯和异丙醇体积比为75∶25的混合溶剂进行柱层析，流速为2.0ml/min，柱温为室温，开始计时，取样，跟踪监测，进行分段收集，收集长春西汀洗脱部位；

(2)将上述长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入100ml异丙醇，回流30分钟，冷却至4℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀化合物14.11g，收率95.2％，纯度99.80％，mp 152-153℃。

对比例2长春西汀的制备

(1)将15g长春西汀粗品(纯度98.77％)溶于60ml二氯甲烷中，再加入15g硅胶搅拌均匀，挥去溶剂后加到制备的色谱柱上端，其中柱的填充剂为粒径63-200μm，孔径6nm的硅胶，柱长40cm，直径4cm，柱压1.5pa，再泵入乙酸乙酯和异丙醇体积比为75∶25的混合溶剂进行柱层析，流速为2.0ml/min，柱温为室温，开始计时，取样，跟踪监测，进行分段收集，收集长春西汀洗脱部位；

(2)将上述长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入100ml乙醇，加热回流30分钟，冷却至4℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀化合物12.07g，收率81.5％，纯度98.89％，mp 151-153℃。

实施例3长春西汀的制备

(1)将14g长春西汀粗品(纯度98.56％)溶于55ml二氯甲烷中，再加入14g中性氧化铝搅拌均匀，挥去溶剂后加到制备的色谱柱上端，其中柱的填充剂为粒径18-32μm，孔径6nm的ICN allumina N中性氧化铝，柱长40cm，直径4cm，柱压1.0pa，再泵入乙酸乙酯和异丙醇体积比为75∶25的混合溶剂进行柱层析，流速为1.0ml/min，柱温为室温，开始计时，取样，跟踪监测，进行分段收集，收集长春西汀洗脱部位；

(2)将上述长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入100ml异丙醇，加热回流20分钟，冷却至4℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀化合物13.34g，收率96.7％，纯度99.84％，mp 152-153℃。

对比例3长春西汀的制备

(1)将14g长春西汀粗品(纯度98.56％)溶于55ml二氯甲烷中，再加入14g硅胶搅拌均匀，挥去溶剂后加到制备的色谱柱上端，其中柱的填充剂为粒径为18-32μm、孔径为6nm的硅胶，柱长40cm，直径4cm，柱压1.0，再泵入丙酮/二氯甲烷/甲醇5/4.9/0.1的混合溶剂进行柱层析，流速为1.0ml/min，柱温为室温，开始计时，取样，跟踪监测，进行分段收集，收集长春西汀洗脱部位；

(2)将上述长春西汀洗脱液部位，减压蒸干，加入100ml乙醇，加热回流20分钟，冷却至4℃过夜，过滤收集结晶，干燥，制得长春西汀化合物12.21g，收率88.5％，纯度98.76％，mp 151-153℃。

通过上述实施例和比较例所用参数和结果进行比较，可以看出，本发明提供的长春西汀化合物的精制方法，制得的纯化品收率高，纯度好；取得了意想不到的技术效果，是理论上无法预期的，获得了高产率高纯度的产品。而本发明范围外的方法得到的产品，纯度低，收率也低。

本发明人还筛选了一些大孔树脂为填充剂的离子树脂交换柱的纯化方法，由于使用离子树脂交换柱会引入杂质离子，纯度也并没有得到明显改善。本发明人在筛选实验中发现本发明的中性氧化铝柱方法显著优于这些纯化方法。

本发明的上述描述旨在用作说明，而不是限制。对本领域技术人来说，可以进行本文所述实施方案中的多种变化或修改。在没有脱离本发明的范围或精神内可以得到这些变化。本申请所引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims

1.一种如式(I)所示的长春西汀化合物的制法，

具体步骤如下：

(1)将长春西汀粗品用适量的有机溶剂溶解后进行柱层析上样，以中性氧化铝作为固定相，用乙酸乙酯和异丙醇的混合溶剂作为流动相，在柱温为室温的条件下进行洗脱，收集洗脱液；且其中所述的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸丁酯或乙酸戊酯；

2.根据权利要求1所述的制法，其特征在于：所述的固定相是粒径18-200μm、孔径6nm的中性氧化铝。

3.根据权利要求1－2任一所述的制法，其特征在于：柱层析的压力为0.5-1.5pa。

4.根据权利要求1－2任一所述的制法，其特征在于：柱层析的流速为0.6-2.0ml/min。

5.根据权利要求1－2任一所述的制法，其特征在于：所述的流动相是乙酸乙酯∶异丙醇体积比为75∶25的混合溶液。

6.根据权利要求1－2任一所述的制法，其中所述的有机溶剂为二氯甲烷。

7.根据权利要求1－2任一所述的制法，其特征在于：制得的长春西汀的纯度不低于99.8％。

8.根据权利要求7所述的制法，其特征在于：柱层析的流速为0.6-2.0ml/min。

9.根据权利要求8所述的制法，其特征在于：所述的流动相是乙酸乙酯∶异丙醇体积比为75∶25的混合溶液。

10.根据权利要求9所述的制法，其特征在于：柱层析的压力为0.5-1.5pa。