CN102847142B - 一种治疗化疗、放疗综合症口服生物药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本专利涉及治疗癌症病人放疗、化疗综合症的一种口服生物新药。具体涉及该种生物新药组成成份和生产工艺。该生物新药成份包括重组人源超氧化物歧化酶(Recombinant human superoxide dismutase rhSOD)，抗氧化剂维生素C和脂溶性维生素E，抗氧化金属硫蛋白(metallothionein)MT，甘露醇、海藻糖，以及小分子团水。该制品复合抗氧化、清除自由基能力强，提高免疫力，改善生存状态，实用效果显著。

Description

一种治疗化疗、放疗综合症口服生物药及其制备方法

一、技术领域

本专利涉及应用重组人源超氧化物歧化酶(Recombinant human superoxidedismutase rhSOD)制成的一种口服生物新药，具有高效治疗癌症放、化疗综合症，保护白细胞、淋巴细胞不受损伤，有效维持白细胞、淋巴细胞的数量，从而加速癌症病人的治疗及身体健康恢复进程。在临床应用上其效果令人惊喜，这是癌症患者的福音。

二、背景技术

1956年，英国哈曼博士提出“自由基学说”，认为自由基对细胞大分子、基因、脂类和蛋白质的损伤是造成多种疾病、衰老的直接原因。

当自由基从细胞膜上夺取一个电子后，就产生了一个新的自由基，这种夺取电子的连锁反应导致细胞完整性的缺失，成为高血压、癌症、糖尿病和其它疾病产生的诱因。经过几十年的科学研究，这一学说得到世界公认。

1985年全球118位科学家在罗马发表联合声明：“自由基是百病之源，SOD是自由基的清除剂”。

1998年，罗伯、费瑞和罗伊格纳诺三位著名科学家向全世界宣布：SOD缺少和活性降低是人类生老病死的根本原因，补充SOD可以达到预防和治疗各种疾病，如免疫系统疾病、类风湿、风湿性关节炎、放射性损伤等疾病。由于对SOD理论及其应用的贡献，他们三人获得诺贝尔生理医学奖。

自由基学说在现代癌症的放、化治疗过程中，又得到了新的发展。

癌症病人进行放、化疗时，放射线不可避免的使正常细胞发生生物分子电离，产生大量超氧阴离子(O₂ ^.-)自由基。由于大量自由基的聚集，引起肠道尿道的炎症、呕吐、脱发、白细胞降低等放射综合症，对身体产生不良影响，同时对白细胞、淋巴细胞产生严重损伤，大幅度降低其数量。因此，人的身体在放、化疗过程中特别虚弱，表现病体状态。

为解决上述问题，就需要在放、化疗过程中将体内产生的自由基及时清除掉，保证器官不受损伤。

超氧化物歧化酶(SOD)是迄今发现的唯一以自由基为底物的蛋白酶，是自由基的清除剂。

SOD通过歧化反应清除生物细胞中的自由基，从而保证机体器官及细胞不受氧化自由基的毒害与损伤。

SOD清除自由基歧化过程：

由SOD的上述歧化过程将超氧阴离子自由基(O₂ ^.-)歧化为O₂和H₂O，这样清除掉了自由基，保证人体器官不受损伤。癌症病人特别在放、化疗期间，应大量增加体内SOD。

现在医学研究证明：肿瘤患者体内SOD含量值不到正常人的30％，糖尿病人SOD含量是正常人的45％，60岁以上老人SOD含量只有青年人的50％。医学研究院对66位60岁以上衰老病人临床研究中发现：当体内SOD活性增加16％时，血浆中超氧阴离子自由基减少34％，其中92％的老人觉得有较高体能，89％的老人对寒冷有耐受力，免疫力有明显提高。

本发明申请单位，四平华科生物科技有限公司具有国家发明专利，专利号：200710055369.2；发明名称为一步法制备基因重组人源铜、锌超氧化歧化酶方法。本公司提供专利产品rhSOD，做了如下动物试验和临床试验。

1、口服SOD对提高体内SOD活力及抗氧化指标GSH-PX、T-AOC水平影响的研究

国际诺贝尔奖金获得者美国巴尔的摩博士沦述：在中老年人血液中起延缓衰老作用的SOD活力，随着人年龄的增长越来越少，中老年人服用SOD对健康是重要的。

解放军第一军医大学邱仞之教授研究报告：对50名病人服用“SOD”30天后，经测定：50名病人血中的SOD活力平均上升了34.7％，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)平均增加了24.4％，影响衰老的丙二醛(MDA)下降了8.1％。

2、吉林大学卫生检测中心与四平华科生物技术有限责任公司对小鼠口服rhSOD体内抗氧化指标影响的研究

1)口服灌胃rhSOD对小鼠血清及肝脏组织SOD活力的影响

结论：口服rhSOD，小鼠血清SOD活力从507.6提高到808.6，增高达59％；口服rhSOD，小鼠肝脏组织SOD活力从30.3提高到44.6，增高达47％。表明口服rhSOD，体内器官增加SOD活性是显著的。

2)口服不同剂量rhSOD对小鼠肝脏组织抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX的影响

结论：口服rhSOD，小鼠肝组织GSH-PX活性从112.8提高到152.8，增高达35％。表明口服rhSOD可显著增加谷胱甘肽过氧化物酶活力，对抗氧化有重大意义。

3)口服不同剂量rhSOD对小鼠肝组织总抗氧化能力T-AOC水平影响

结论：口服rhSOD，小鼠肝组织T-AOC水平从1.26提高到3.55，增高达181％。

以上研究报告表明：口服rhSOD，体内抗氧化指标SOD、GSH-PX以及总抗氧化能力T-AOC(total antioxidant capacity)得到极其显著提高，这对人体健康具有重大意义和作用。

3、口服rhSOD清除体内超氧阴离子自由基(O₂ ^.-)的研究

1)人口服rhSOD清除体内超氧阴离子自由基(O₂ ^.-)的研究之一

实验地点：长春圣华抗衰老医学研究院

服用人：李女士(圣华医院大夫)、女、58岁、身体无重大病

检测设备：美国自由基浓度检测仪(APOLLO-1000Lab-Trax-4/16)

实验报告

结论：人口服rhSOD，体内自由基浓度降低达46％，这表明人服用rhSOD清除自由基是显著的。降低达40％的指标说明60岁人群服用rhSOD体内状况可相当40岁的身体状况，大量应用报告都完全验证这一点，这是人类健康福音。

2)人体口服rhSOD清除自由基(O₂ ^.-)研究之二

本项目也是圣华抗衰老医学研究院进行的，检测方法是应用日本LPOKIT氧化值速测液进行检测的。生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。丙二醛(Malondialdehyde；malonic dialdehyde；Propanedial，简称：MDA)分子式OHC-CH2-CHO。日本LPOKIT主要是检测丙二醛的含量。检测方法是将人服用rhSOD前的尿液1ml和服用2小时后的尿液1ml分别滴入标准成品试验瓶内，5分钟后，显现的颜色进行比较(由白色至深红色)，越深说明MDA丙二酸含量越多，人体的自由基含量越高。

人体口服rhSOD清除自由基检测报告

结论：服用rhSOD前，尿液呈粉红色，表明人体内自由基(O₂ ^.-)含量高。

服用rhSOD后，尿液呈白色，表明人体自由基(O₂ ^.-)含量少。说明人体口服rhSOD后，体内自由基已被大量清除。

3)口服rhSOD小鼠肝组织清除丙二醛(自由基的生成物)含量影响的研究

MDA是自由基(O₂ ^.-)与血中脂质的生成物，是人衰老的主要毒物。MDA降低表明体内自由基含量的降低。

研究单位：吉林大学卫生检测中心

检测仪器：试剂盒

研究报告

结论：日服不同剂量的rhSOD，小鼠肝组织中的MDA均低于生理盐水组。口服大剂量rhSOD，MDA降低达47％。表明体内自由基已大量被清除。

4)人体口服rhSOD降低丙二醛(自由基)的研究

人口服rhSOD清除丙二醛(自由基)的效果极其显著，其效果可用美国APOLLO自由基浓度检测仪、日本氧化值速测液在线跟踪检测。下面是检测人群中的几例：

①张先生服用rhSOD前、后检测效果见说明书附图1

②霍教授服用rhSOD前、后检测效果见说明书附图2

③龚先生服用rhSOD前、后检测效果见说明书附图3

④陈教授服用rhSOD前、后检测效果见说明书附图4

以上应用实例：服用rhSOD前检测尿液呈深红色，表明体内丙二醛(自由基)含量多。服用rhSOD后检测尿液呈浅白色，表明体内丙二醛(自由基)含量少。说明口服rhSOD具有清除自由基(丙二醛)的功效。

4、口服rhSOD抗辐射功效的研究

超氧化物歧化酶(SOD)具有抗辐射功效，在美国、欧洲、日本都有应用报告和专利。

在我国，中国军事医学科学院著名专家方允中教授曾带领他的科研组做过电辐射狗血红细胞的试验。方教授在他的研究报告中写到“我们将狗血红细胞用X射线和r射线进行不同辐射量照射后，在20℃放置20个小时。观察到电离辐射可使红细胞溶血(即红细胞变成了血水)。但当在狗血的红细胞中加SOD，使其浓度达到0.1mg/ml，然后照射，则溶血程度明显减轻。

SOD对治疗肿瘤病人的放射综合症有特别疗效。丁克祥教授在“SOD临床研究集”中论述：肿瘤病进行一定时期的放、化治疗，一方面可以抑制病情发展和恶化；另一方面由于放、化疗直接作用或间接作用导致物质分子的激发与电离，由于激发和电离可诱发、产生大量超氧阴离子自由基(O₂ ^.-)，在自由基作用下不可避免地发生放射综合症。

SOD对辐射损伤有良好的保护效果，因此采用SOD制剂对放、化射线治疗肿瘤病人的过程中所引起的放、化疗综合症有很好的治疗效果。

有人研究38例膀胱癌患者在接受放、化疗过程中，放射线引起肠、膀胱、尿道发生急性炎症及其副作用。因此，每日在皮下注射4mgSOD制剂，其急性炎症或副作用得到明显控制，最大排尿量增多，每日排尿间隔延长，膀胱症状减轻，腹泻次数减少，与安慰剂双盲对照比较，其疗效均有显著性意义。

在临床上，对子宫颈癌症病患者放射治疗引起膀胱慢性炎症的使用剂量(7-30mg)的SOD制剂，炎症明显减轻。用膀胱镜检查：膀胱肿胀消失，膀胱壁软化，排尿量增加，疼痛、痉挛、排尿困难、失禁、血尿等症状都显著减轻。

采用SOD制剂减轻放、化疗治疗肿瘤病综合症，不仅可以使患者有很好的身体状况以适应治疗，提高疗效以及增加、增强放、化疗强度，奠定机体适应基础。

关于SOD对辐射的防护效果，国内外学者有一致意见：

①SOD清除了O₂ ^.-，减轻O₂和H₂O₂反应产生强毒性^.OH的机会。

②补充SOD能增加因照射引起的SOD活性下降，增强清除O₂ ^.-的能力，使动物体内O₂ ^.-尽可能维持低水平，减轻器官损伤。

③SOD对细胞膜具有保护作用，可减轻干细胞损伤。

以下是吉林大学卫生检测中心与华科生物有限公司对rhSOD抗辐射功效研究。

1)口服rhSOD抗辐射功效研究之一

研究方法：对小鼠口服rhSOD，在连续24小时受辐射情况下，检测抗辐射的重要指标小鼠骨髓细胞染色体的畸变率变化。

口服不同剂量rhSOD对受照射小鼠染色体的畸变率的影响报告

结论：口服rhSOD，小鼠染色体畸变率从15.0降到7.3，降低达51％。表明口服rhSOD具有显著抗辐射作用，能有效保护体内各器官不受损伤。

2)口服rhSOD，抗辐射功效研究之二

研究方法：对小鼠口服不同剂量rhSOD在连续24小时受辐射情况下，检测小鼠骨髓微核率的变化。

口服不同剂量rhSOD受辐射小鼠骨髓微核率变化报告

结论：口服rhSOD，小鼠骨髓微核率从27.7降到15.5，降低达44％。表明口服rhSOD具有显著抗辐射作用，能有效保护体内器官不受损伤。

在后面的应用实例中，癌症患者口服rhSOD，在放疗、化疗过程中综合症现象大大减轻，效果令人惊奇。这就进一步验证了口服rhSOD具有抗辐射的结论。

三、发明内容

本专利是一种治疗癌症放疗、化疗综合症、保护白细胞、淋巴细胞不受损伤的口服生物新药。其机理是根据“自由基学说”以清除自由基，保护人体细胞、器官不受损伤的理论为指导研制的口服生物新药。其成分：重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)、甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白、维生素C、维生素E。本专利的生物新药功效：癌症病人服用本生物新药2-3周，在放、化疗过程中，不会产生全身乏力、厌食、恶心、呕吐、大量掉发等现象；白细胞、淋巴细胞也不会显著减少，病人体重不会有太大变化，体力、精力都将是正常状态。

金属硫蛋白MT及其用途：金属硫蛋白metal lothionein；MT，MT的重要生理功能表现在它是一种目前所知的最有效的自由基清除剂，其主要功效是清除羟自由基(·OH)。

1、本专利的重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)的特征

SOD是生物体内天然存在的抗氧化酶

自从1968年美国两位科学家从牛血中提取出SOD以来，SOD主要是从动物血提取，已进入实用阶段。从动物血中提取的SOD存在的问题在于：动物血SOD是异源蛋白，有免疫原性。虽然SOD的毒性作用很小，但作为抗原多次注射后仍有诱发免疫性问题，几率达15％。特别是1994年国际出现疯牛病、禽流感等疾病，从血中提取SOD难以清除这些病毒，所以1999年欧洲已禁止动物血SOD用于人类。

重组人源SOD是利用现代分子生物学基因重组技术，将从人体中分离得到的Cu、Zn-SOD基因转移到大肠杆菌中去，使其表达产生人源Cu、Zn-SOD蛋白。其本质是人体中天然存在的蛋白，因此重组人源SOD具有无外源性污染、无病毒残存、无蛋白种属差异、无免疫排斥等特点，具有高安全性。

1)重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)生产工艺

菌种→种子液→发酵→离心收集菌体→菌体破碎→离心收集粗酶液→过滤→超滤→纯化→离心收集上清酶液→配液→除菌→冻干

2)重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)由四平华科生物技术有限责任公司生产；2006年通过吉林省省级鉴定；2008年评为国家重点新产品；2007年评为国家中小企业技术创新基金；2010年5月通过国家验收；2012年1月24日获国家发明专利。专利号：200710055369.2；发明名称为一步法制备基因重组人源铜、锌超氧化歧化酶方法。企业评为高新技术企业。科技日报2010年10月16日头版头条报导：四平华科生物技术有限责任公司大批量生产重组人源超氧化物歧化酶，填补了我国不能生产rhSOD空白。

2、本专利的甘露醇特征

甘露醇是重组人源超氧化物歧化酶的支架，保证rhSOD能存放在支架上，并具有利尿、降低颅内压、眼内压及治肾功效。

3、本专利的海藻糖特征

海藻糖是重组人源超氧化物歧化酶的保护剂，海藻糖将rhSOD封存在支架内，并具有保护细胞、天然食用甜味糖功效。

4、本专利的金属硫蛋白特征

具有高效抗氧化，清除自由基，护肝、肾、脑等器官，防治血管内皮细胞脂质过氧化作用的功效。

5、本专利的维生素C、维生素E特征

维生素C、维生素E是体内的天然抗氧化剂。功效是捕获各种反应所生成的自由基(O₂ ^.-)，防止其与脂质反应或中断已发生的链式反应，达到保护生物的目的。本发明使用脂溶性维生素E，以便人容易吸收。维生素C还对SOD有保护作用。

本生物口服新药是应用重组人源超氧化物歧化酶、金属硫蛋白及抗氧化剂维生素C维生素E的复合作用，清除自由基，其效果极其显著并具有消炎、保护细胞的作用。

6、本专利的产品制备工艺：

1)配液rhSOD+小分子团水→rhSOD水溶液_I

水溶液_I+甘露醇→rhSOO、甘露醇水溶液_II

水溶液_II+海藻糖→rhSOO、甘露醇、海藻糖水溶液_III

水溶液_III+金属硫蛋白→rhSOD、甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白水溶液_IV

水溶液_IV+维生素C和脂溶性维生素E→水包油溶液_V。

2)配液中的水为小分子团水，其特征是：

①小分子团水是弱碱性，其PH值为7.2-8.5，能有效控制人体酸性化。

②小分子团水具有强溶解力、强扩散力、强渗透力，所以能够提高溶液的均匀性。

③小分子团水低电位，具有清除疾病自由基的功效，与rhSOD形成复合效应，能够提高人体内SOD活性。

④小分子团水容易被体内每一个细胞吸收和利用，它的生物学利用率比普通水要高很多。

⑤小分子团水与纯净水的差别：

小分子团水是由5-8个水分子组成；它的17氧核磁共振(017NMR)谱线半高宽值在80Hz以下，最好在45-60Hz之间。

纯净水是由13个以上的水分子组成；它的17氧核磁共振谱线值应在128Hz-150Hz。

在玻璃反应釜中加入小分子水溶剂，小分子团水17氧核磁共振(017NMR)核磁共振谱线半高宽值45Hz-60Hz，然后加入rhSOD，最初与rhSOD的比例是(2-5)∶1，在15℃-35℃下进行搅拌，搅拌速度为10-50r/mim，这样多的小分子水是为了更好地溶解rhSOD，以及溶解和分散后面工艺过程中加入的甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白、维生素C和脂溶性维生素E。

3)过滤

离心收集的上清粗酶液应用滤芯孔径0.45μm的过滤器进行过滤，去除酶液中颗粒杂质。过滤后酶液再应用板式超滤膜设备进行超滤，降低粗酶液中的杂质及其他金属离子的浓度，达到纯化目的。

4)除菌

无菌工作环境中，将配制的酶液应用已消毒灭菌的滤芯孔径0.22μm的过滤器进行过滤，降低酶液中的生物负荷于要求范围内，达到除菌目的。

5)冻干

SOD无菌酶液、辅料一起混合溶解、过滤，过滤后的混合酶液分装、进入冻干机开始冻干。冻干过程：首先进行预冻，在设定温度下保温两个小时，然后冷阱降温。一个小时后，真空泵启动，使冻干箱内真空度达到10Pa一下，此时进行冻干机程序控温，经过升华干燥、解析干燥两个过程冻干产品达到要求水分后，停止冻干程序，将产品移出冻干箱进行粉碎和包装，本次冻干结束。

四、说明书附图说明

图1是张先生(69岁)211年12月1日服用rhSOD2小时后检测的效果；

图2是霍教授(56岁)服用rhSOD前后检测的效果；

图3是龚先生服用rhSOD前后检测的效果；

图4是陈教授(68岁)服用rhSOD前后检测的效果。

五、具体实施方式

1、治疗化疗、放疗综合症口服生物新药制备

依据发明内容中的6，本发明的产品及制备工艺，制备出“抗化疗、放疗综合疗”新药。

本专利以小分子水为溶剂，占重量4％-5％；重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)纯度≥85％、比活≥17000U/mg(prot)、药品中活性＞1000万U/100g、占重量36％；甘露醇药用级，比例占重量的30％；海藻糖药用级，占重量的25％；金属硫蛋白占重量0.01％-0.1％；维生素C占重量2％；维生素E占重量2％。

本生物制药为白色粉末，无味、无毒副作用。具体工艺包括：

1)重组人源超氧化物歧化酶(rhSOD)生产工艺

菌种→种子液→发酵→离心收集菌体→菌体破碎→离心收集粗酶液→过滤→超滤→纯化→离心收集上清酶液→配液→除菌→冻干；

2)配液工艺过程：

在玻璃反应釜中加入小分子水溶剂，小分子团水17氧核磁共振(017NMR)核磁共振谱线半高宽值45Hz-60Hz，然后加入rhSOD，最初与rhSOD的比例是(2-5)∶1，在15℃-35℃下进行搅拌，搅拌速度为10-50r/mim，

rhSOD+小分子水→(rhSOD)水溶液_I

然后在相同的温度15℃-35℃下依次加入甘露醇和搅拌、加入海藻糖并搅拌、加入金属硫蛋白并搅拌、加入维生素C和脂溶性维生素E并搅拌，搅拌速度为10-50r/mim，依次得到(rhSOD、甘露醇水溶液)_II，(rhSOD、甘露醇、海藻糖)水溶液_III、(rhSOD、甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白)水溶液_IV和水包油溶液_V，该溶液包括：重组人源超氧化物歧化酶、甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白、维生素C、维生素E和水，

3)过滤

离心收集的水包油溶液_V应用滤芯孔径0.45μm的过滤器进行过滤，去除酶液中颗粒杂质，过滤后酶液再应用板式超滤膜设备进行超滤，降低粗酶液中的杂质及其他金属离子的浓度，达到纯化目的；

4)除菌

无菌工作环境中，将配制的酶液应用已消毒灭菌的滤芯孔径0.22μm的过滤器进行过滤，降低酶液中生物负荷于要求范围内，达到除菌目的；

5)冻干包装

将灭菌过滤后的浓缩液放入冻干设备中冻干并加工成粉状，按照需要的质量包装。

该工艺制备的“抗化疗、放疗综合症”新药包括：

抗氧化酶：重组人源超氧化物歧化酶；

抗氧化剂：维生素C和脂溶性维生素E；

小分子团水溶剂；

抗氧化酶支架：甘露醇；

抗氧化酶保护剂：海藻糖；

抗氧化金属硫蛋白，

其中重组人源超氧化物歧化酶纯度≥85％、比活≥17000U/mg(prot)、口服药中活性比活＞1000万U/100g，占重量36％；甘露醇药用级、占重量30％；海藻糖占重量25％；金属硫蛋白占重量0.01％-0.1％；维生素C占2％；脂溶性维生素E占2％；小分子水占重量4％-5％。

2、应用实例

1)上海某大学霍教授癌症亲属接受化疗治疗后服用rhSOD的应用效果

我患病的亲属王女士，63岁，河北省农村农民。于2010年4月检出患直肠结肠癌，经手术切除继续进行放疗和化疗，每隔1-2个月定期复查。术后继续进行放疗和化疗期间身体反应强烈，表现为血液系统：白细胞总数显著降低。胃肠道系统：腹痛，恶心，呕吐，没有食欲、排便紊乱，腹泻与便秘交替出现。整体情况：消瘦、虚弱、失眠、头晕、全身无力、精神萎靡。自2011年3月起，开始服用四平华科生物技术公司生产的重组人源超氧化物岐化酶口服胶囊，每天口服2粒。同时，因术后复查结果表明没有肿瘤复发迹象，所以停止一切化疗和放疗，同时也停止继续服用升白血球的药物。2011年4月复查结果白血球开始回升，淋巴细胞绝对值仍低于正常值。此时已服用rhSOD一个月，患者整体状况开始好转。主要表现为：头痛减轻，头晕消退，食欲增加，体力和精神状态都逐渐恢复，睡眠好转。2011年5月复查结果白血球明显回升。此时已服用rhSOD二个月，患者整体状况明显好转。主要表现为：头痛、头晕都已消失、胃口正常，体力恢复，体重增加、精神状态良好，面色红润，睡眠正常，心情平和愉快。能稍微做一些家务活。2011年7月复查结果白血球回落，但淋巴细胞也低于正常值。此时已服用rhSOD四个月，患者体力和精神状态出现反复，胃口也不好。经询问发现病人因有陈旧性腰痛病，近期服用了自购的治腰疼中药(内含全虫，即蝎子等毒性成份)。分析白细胞下降可能与服用该中药有关，即嘱立即停止服用该中药，只服用rhSOD。2011年8月复查结果白血球明显回升，淋巴细胞绝对值已恢复正常。此时已服用rhSOD五个月，患者体力和精神状态明显好转，食欲增加、体重增加、面色红润，能做一些轻体力的家务活。

2011年10月复查结果白血球已恢复到正常值，淋巴细胞绝对值在正常值范围内继续回升。此时已服用rhSOD七个月，患者体力和精神状态良好，饭量增加、体重增加、红光满面、心情好转，能从事正常的家务活。

王女士历次复查的白细胞检查结果汇总

2010年5月-2011年2月一直服用升白血球药物，效果不佳。

2011年3月开始服用rhSOD，停止所有其他药物，白血球开始回升。

                          霍##2012-1-18

霍克克教授系上海某大学基因工程国家重点研究室、遗传学研究所、药学院博士生导师。2010年曾来四平华科生物技术有限责任公司考察，并现场服用SOD，应用日本氧化值速测液对服前、服后尿液中的丙二醛(自由基)含量检测，清除效果极为显著。

2)韩国生命源科技发展公司吴总的应用rhSOD报告

我父亲今年59岁，2009年12月25日在北京301医院确诊：胃癌晚期，于2009年12月30日手术，术后化疗。

2010年2月8日第一次化疗结束。化疗期间全身乏力、厌食、恶心、呕吐、难受、人消瘦面黄。2010年2月10日口服四平华科rhSOD。2010年2月25日进行第二次化疗，副作用症状无太明显减轻，期间继续服用rhSOD。2010年3月20日进行第三次化疗，副作用有所减轻。3月26日出院后，每天加量服用rhSOD。2010年4月16日进行第四次化疗，副作用有明显减轻、无恶心、无呕吐、饮食正常、头发无脱发、面部红润、体重有所增加。2010年5月3日进行第五次化疗，于5月10日结束，化疗副作用完全消失，不仅体重增加，体力、身体状况也非常好。我父亲现已出院，每天仍继续服用rhSOD。以上情况属实，本人负全责。

3)四平市农行某职员接受化疗治疗后服用rhSOD的应用效果

四平市农行职员顾女士因患乳腺癌，经放射线治疗后，身体免疫力下降，出现脱发、恶心等症状，并且经常感到头晕、乏力。服用四平华科重组人源超氧化物歧化酶一段时间后，身体状况明显好转。几年来很少感冒，每年进行两次复查，身体健康情况有很大好转，现已上班工作。以上这些情况没有一点虚夸。

注：本材料由四平热力公司李总提供。

4)中国药学会生化药物专业委员会委员、中国生化制药学会专家委员会委员、兰州生化药物研究所所长苏教授服用rhSOD的应用效果

我多年患有关节疼痛病，2010年5月以来服用rhSOD至今，结果令人兴奋。现在膝关节内外侧剧烈疼痛基本消失，全身乏力、行走不便、蹲下起不来、腿肚抽筋等现象再未出现。我今冬再没发生感冒，精神状态很好，每天坚持阅读文献、撰写文稿以及室内外家务劳动。

我从事牦牛血提取SOD的研发工作已有多年。SOD具有良好的抗炎功效，实验室研究结果显示出SOD对大鼠模拟炎症治疗能力已与我自己的病历吻合；SOD具有延缓机体衰老功效。随着年龄的增长，SOD作为机体重要抗氧化系统其量不断下降，造成体内自由基堆积，导致衰老，免疫功能下降等多种疾病产生，若能即时补充外源性SOD，能使机体延缓衰老进程；SOD具有抗肿瘤的功效，我将此品介绍于几位癌症患者，他们在手术前，化、放疗期间服用SOD大大减轻了化疗、放疗带来的副作用。

本发明披露的一种治疗化疗、放疗综合症口服生物新药及其制备方法，该口服生物新药还可以应用于抗衰老和提高免疫力的领域。该领域的熟练的技术工作者对上述工艺和组成成分进行增减和变化，都不会超越本发明的发明概念，都可能造成对本发明的侵权。

Claims (2)

1.一种治疗化疗、放疗综合症口服生物药的制备方法，所述的口服生物药由以下组分制成：

抗氧化酶：重组人源超氧化物歧化酶；

抗氧化剂：维生素C和脂溶性维生素E；

小分子团水溶剂；

抗氧化酶支架：甘露醇；

抗氧化酶保护剂：海藻糖；

抗氧化金属硫蛋白，

其中重组人源超氧化物歧化酶纯度≥85％、比活≥17000U/mg(prot)、口服药中活性比活＞1000万U/100g，占重量36％；甘露醇药用级、占重量30％；海藻糖占重量25％；金属硫蛋白占重量0.01％-0.1％；维生素C占2％；脂溶性维生素E占2％；小分子水占重量4％-5％，具体步骤如下：

1)重组人源超氧化物歧化酶rhSOD生产工艺

菌种→种子液→发酵→离心收集菌体→菌体破碎→离心收集粗酶液→过滤→超滤→纯化→离心收集上清酶液→配液→除菌→冻干；

2)配液工艺过程：

在玻璃反应釜中加入小分子水溶剂，小分子团水17氧核磁共振O17NMR核磁共振谱线半高宽值45Hz-60Hz，然后加入rhSOD，最初与rhSOD的比例是2-5∶1，在15℃-35℃下进行搅拌，搅拌速度为10-50r/mim，

rhSOD+小分子水→rhSOD水溶液_I

然后在相同的温度15℃-35℃下依次加入甘露醇和搅拌、加入海藻糖并搅拌、加入金属硫蛋白并搅拌、加入维生素C和脂溶性维生素E并搅拌，搅拌速度为10-50r/mim，依次得到rhSOD、甘露醇水溶液_II，rhSOD、甘露醇、海藻糖水溶液_III、rhSOD、甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白水溶液_IV和水包油溶液_V，该溶液包括：重组人源超氧化物歧化酶、甘露醇、海藻糖、金属硫蛋白、维生素C、维生素E和水；

3)过滤

离心收集的水包油溶液_V应用滤芯孔径0.45μm的过滤器进行过滤，去除酶液中颗粒杂质，过滤后酶液再应用板式超滤膜设备进行超滤，降低粗酶液中的杂质及其他金属离子的浓度，达到纯化目的；

4)灭菌

无菌工作环境中，将配制的酶液应用已消毒灭菌的滤芯孔径0.22μm的过滤器进行过滤，降低酶液中生物负荷于要求范围内，达到除菌目的；

5)冻干包装

将灭菌过滤后的浓缩液放入冻干设备中冻干并加工成粉状，按照需要的质量包装。

2.根据权利要求1的一种治疗化疗、放疗综合症口服生物药的制备方法制备的一种治疗化疗、放疗综合症口服生物药。