CN102846592A

CN102846592A - 一种含有冰片的药物组合物

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Publication number: CN102846592A
Application number: CN2012103476896A
Authority: CN
Inventors: 陈容; 徐扬; 冯仲异; 史朝辉
Original assignee: Bikai Pharmaceutical Industry Co Ltd Hainan
Current assignee: Bikai Pharmaceutical Industry Co Ltd Hainan
Priority date: 2012-09-19
Filing date: 2012-09-19
Publication date: 2013-01-02
Anticipated expiration: 2032-09-19
Also published as: CN102846592B

Abstract

本发明属于医药技术领域，本发明提供了一种含有冰片的药物组合物，该药物组合物含有吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯，冰片的药物组合物。该药物组合物成分明确，质量可控；该药物组合物控制冰片中龙脑的含量，以提高药物组合物的血药浓度及粘膜吸收率；本发明所述的药物组合物可以用于制备栓剂，软膏剂、胶囊剂、泡腾片、凝胶剂、洗剂、膜剂或泡沫剂；本发明所述的药物组合物对HR-HPV和/或LR-HPV、宫颈疾病等均有很好的治疗作用，适于临床广泛应用。

Description

一种含有冰片的药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种含有吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯、冰片的药物组合物。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出130多种，不同的亚型引起不同的临床表现，侵犯不同的组织部位。按发癌性分类，可分为低危型HPV和高危型HPV。

HR-HPV主要包括13种亚型，与宫颈癌、宫颈鳞状上皮瘤变(CIN)的发生密切相关。宫颈持续感染HR-HPV 8～10年即可发展成宫颈癌，而“宫颈癌”是继乳腺癌后的第二大妇科癌症，全球新发病例46万/年，亚洲占一半，80％发生在发展中国家，每年死于宫颈癌的患者近20万人。我国新发病例13万/年，死于宫颈癌4-5万/年，发病率和死亡率均呈现增加趋势。“宫颈癌”是目前唯一病因明确的可防治的癌症，清除HR-HPV是阻断病程、预防宫颈癌的决定因素。

近十几年来，以保妇康栓(主要成分为莪术油和冰片)为代表的中药被广泛应用于女性生殖道HPV感染的治疗，并取得了一定的疗效，但所使用的莪术油成分复杂，活性成分含量多变，且易挥发，明显影响疗效；因此，急需开发成分明确，含量稳定的药物组合物来预防治疗HPV感染以及其诱发的良性或恶性病变，特别是对至宫颈癌的HR-HPV感染。

冰片最早见于《名医别录》，称龙脑香，系龙脑香科植物龙脑香Dryobalarops aram atica Gaerta.f.树脂的加工品，又称梅片。始载于宋《开宝本草》之艾纳香冰片系从菊科植物艾纳香Blum ea balsam ifera(L.)DC.叶提取的，又称艾片。近代以樟脑、松节油等为原料经化学反应人工合成的，称为合成冰片，又称机片。龙脑香即龙脑冰片的主要成分为右旋龙脑(d-borneol)；艾片主要为左旋龙脑(l-borneol)；合成冰片为目前临床所常用，除含有不低于55％消旋龙脑外，还含有约35％的异龙脑(isoborneol)以及其它成分。

龙脑化学名称为：1，7，7-三甲基二环[2，2，1]庚-2-醇，分子式为C₁₀H₁₈O，在化学上属萜类物质。龙脑具有内向构型(endo-configuration)和外向构型(exo-configuration)两种类型之分。其分子结构式分别如下：

正龙脑异龙脑

从结构图中可以看出主要为-OH(羟基)位置不一样。

在化学应用上，一般把正龙脑简称龙脑，而异龙脑仍称异龙脑。现在书面上的龙脑名称如没有作说明的话，一般就是正龙脑。

正龙脑按旋光不同分为左旋龙脑(艾片)和右旋龙脑(梅片)。由正龙脑和异龙脑结构式可以看出，它们分子结构中有三个不对称碳原子，二分子中的偕二甲基桥为顺式，因此它的异构体有四个，即：d-正龙脑，L-正龙脑，d-异龙脑，L-异龙脑。其d与L的区别就在于它们的旋光性不同，即-OH与偕二甲基桥界面所成角度的不同，即d-正龙脑为34°～37.7°，而L-正龙脑为143.3°～146°。因龙脑空间结构中-OH位置的不一样，从而带来物理化学性质的不同，比如颜色、气味、药用价值均有所差异

《冰片的药理实验研究概况》(天津中医药，Aug.2003，Vol.20，NO.4：85～87)报道龙脑的LD₅₀大于异龙脑，表明龙脑的毒性较异龙脑小，合成冰片的毒性则介于二者之间，可能与合成冰片含的异龙脑的LD₅₀较小有关；同时文献中进一步指出粘膜给药时异龙脑的刺激性大于龙脑。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了一种药物组合物及其制剂。

本发明的目的是提供一种药物组合物，该组合物对HR-HPV和/或LR-HPV感染有效。

本发明的目的是提供一种药物组合物，该组合物对阴道炎有效。

本发明的目的是提供一种药物组合物，该药物组合物中控制莪术烯和莪术醇的用量。

本发明的目的是提供一种药物组合物，该药物组合物中的冰片中龙脑的含量大于等于70％。

本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂。

本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂，所得制剂的刺激性较小。

本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂在抗HPV病毒中的应用。

本发明的目的是提供一种含有该药物组合物的制剂在治疗阴道炎中的应用。

具体而言，本发明提供了：

一种药物组合物，其特征药物组合物包含吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯、冰片，其中所述的冰片中龙脑的含量大于等于70％且小于100％。

上述所述的药物组合物，包含以下重量份的成分：

吉马酮 5-16重量份；

呋喃二烯 10-40重量份；

莪术二酮 5-25重量份；

β-榄香烯 4-11重量份；

莪术醇 0-0.5重量份；

莪术烯 0-0.5重量份；

冰片 30-90重量份。

上述所述的冰片选自天然冰片和/或合成冰片。

上述所述的冰片中龙脑的含量大于等于70％。

上述所述的药物组合物制备成阴道给药制剂或直肠给药制剂。

所述制剂包括栓剂，软膏剂、胶囊剂、泡腾片、凝胶剂、洗剂、膜剂或泡沫剂。

上述所述的药物组合物在制备预防和/或治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的应用。

其中人乳头瘤病毒感染包含高危型人乳头瘤病毒感染和/或低危型人乳头瘤病毒感染。

上述所述的药物组合物在制备预防和/或治疗阴道炎、宫颈糜烂、宫颈癌的药物中的应用。

本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

1、本方明所述的药物组合物成分明确，质量可控；

2、本发明所述的药物组合物不受原料产地的限制，适合工业大生产；

3、本发明所述的药物组合物对HR-HPV和/或LR-HPV、宫颈疾病等具有很好的治疗作用，适于临床广泛应用。

附图说明

图1空白血浆样品色谱图。

图2加入内标物和对照品的空白血浆样品色谱图(1.内标物对羟基苯甲酸乙酯，2.莪术醇，3.莪术二酮)。

图3阴道给予莪术油的血浆样品色谱图(1.内标物对羟基苯甲酸乙酯，2.莪术醇，3.莪术二酮)。

药理学试验

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

莪术油由江西省吉水药用油提炼厂生产；

吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯购自上海顺勃生物有限公司。

合成冰片(龙脑59.9％，异龙脑37.5％)由广州化工厂生产；合成冰片(龙脑70.3％，异龙脑29.7％)、合成冰片(龙脑83.9％，异龙脑16.3％)购自天津利朗化工科技有限公司。

保妇康栓，由海南碧凯药业有限公司生产，根据CN03178501.8所述的方法测定冰片的含量，每粒含龙脑为标示量的62.3％，异龙脑为标示量的28.7％。

试验例1：阴道刺激性实验

动物：

健康性成熟雌性大耳白家兔25只，体重2.5～3.0kg。

试验药物：

药物1组：保妇康栓，海南碧凯药业有限公司生产，每粒重1.74g，其中含莪术油88mg，冰片75mg，其余成分为基质。

药物2组：实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为83.9％)。

药物3组：根据实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为59.9％)。

试验方法：

雌兔25只，随机分为5组，分别为空白组、机械刺激组、药物1组、药物2组、药物3组。每天定时以消毒的玻璃套管将栓剂缓缓推入阴道深处(机械刺激组只使用玻璃套管不加药物)，给药前用消毒过的玻璃套管刺激使其排尿，给药后将家兔仰卧位固定10min后放回，连续给药7天，给药量为8mg活性成分/kg。于末次试验后24h内将雌兔处死解剖，肉眼观察并记录阴道充血和炎症情况。取阴道组织，以10％甲醛液固定，分成上、中、下三段，制成5μm石蜡包埋切片，常规染色进行组织学炎症刺激程度判定染色，光镜下观察。按Eckstein标准，以充血、水肿、炎症细胞浸润及上皮细胞坏死4项指标评分。每项刺激程度分别判定为0～4分，0分为无刺激反应，4分为严重损伤，总分在0～8分为可接受，9～10分为边缘值，≥11分为不可接受。

试验结果：肉眼观察5组雌兔阴道均未见异常。各组雌兔阴道溃疡、浸润、水肿和充血评分及总分值见表1。

表1：雌兔阴道刺激实验结果

试验结论：从上表可知的机械刺激组、药物1组、药物2组、药物3组的总分均在可接受的范围内；其中药物2组、药物3组的总分数明显低于药物1组(P＜0.01)，且低于机械刺激组(P＜0.05)；药物2组的总分数低于药物3组(P＜0.05)。

试验例2：豚鼠体内的莪术醇、莪术二酮的血药浓度测定实验

仪器、试药与动物

试药

甲醇、乙腈均为色谱纯，二次蒸馏水。

内标：对羟基苯甲酸乙酯(分析纯)。

药物1组：实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为83.9％)。

药物2组：根据实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为70.3％)。

动物

军事医学科学院动物中心提供的短毛雌性豚鼠，体重500g±21g，共30只，分五组，每组6只，依次为空白对照组、辅料空白组、药物1组、药物2组、药物3组，通过阴道给予药物，连续给药21天。

采血及提取

连续给药21天后，于第22天，将每组4只豚鼠心脏取血约2ml，离心得血浆1ml，用乙醚提取3次，合并吹干，加入含内标的丙酮液待测。每组余2只豚鼠，正常喂养21天，第22天同样心脏取血及提取。

方法与结果

1、豚鼠血浆中莪术二酮的含量测定

1.1色谱条件柱前压为50kPa；不分流；气化室温度280℃；检测器温度300℃；柱温采用程序升温：起始温度100℃，以5℃/min升温至200℃，保持3min，再以30℃/min的升温速率，升至250℃，保持10min，进样量为5μl。

1.2对照品贮备液的配制和内标液的准备分别精密量取莪术醇、莪术二酮，用甲醇稀释到2.57mg/ml和5.08mg/ml的浓度，作为贮备液备用。精密称取对羟基苯甲酸乙酯用甲醇配制成3.12mg/ml的溶液备用。

1.3血浆样品的处理方法本实验采用蛋白沉淀法处理血浆，沉淀剂选择3倍量甲醇，具体处理方法为：吸取血浆100μl，精密加入内标液10μl，精密加入甲醇300μl，涡旋混合3min，12000r/min离心20min，精密吸取上清液300μl，40℃水浴吹干，精密加入50μl甲醇，涡旋1min，取上清液5μL进样。

1.4标准曲线的绘制分别取豚鼠空白血浆7份，加入适量体积的对照品贮备液，按照1.3项方法处理，制得莪术醇浓度0.001028、0.02056、0.04112、0.08224、0.1645、0.3290、0.6580mg/ml和莪术二酮浓度0.04064、0.08128、0.1626、0.3251、0.6502、1.300mg/ml的血浆样品。进样5μl，记录色谱图，分别以莪术醇和莪术二酮与对羟基苯甲酸乙酯的峰面积比Y对浓度X进行线性回归，得莪术醇的标准曲线：Y＝2.0765X+0.0031，r＝0.997，表明在0.02056～0.6580mg/ml浓度范围内，莪术醇线性关系良好；莪术二酮的标准曲线：Y＝0.1606X+0.0071，r＝0.992，表明在0.04064～1.300mg/ml浓度范围内，莪术二酮线性关系良好。

1.5方法专属性考察豚鼠空白血浆加入莪术醇、莪术二酮对照品贮备液及内标物对羟基苯甲酸乙酯之后，按照1.3项样品处理方法处理后吸取5μl进样，与空白血浆比较，内源性杂质与对照品及内标物与相邻色谱峰分离度均在1.3以上，表明分离良好，色谱图见图1。

1.6精密度实验按照1.3项血浆样品处理方法，分别配制0.04112、0.1645、0.6580mg/ml浓度的莪术醇和0.08128、0.3251、1.300mg/ml浓度的莪术二酮空白血浆样品。连续进样3d，根据各色谱图中峰面积比值计算日内、日间精密度。结果显示，日内精密度的RSD％莪术醇高、中、低3个浓度分别为6.8、7.8和8.2，莪术二酮高、中、低3个浓度分别为7.1、5.4和9.4；日间精密度的RSD％莪术醇高、中、低3个浓度分别为7.3、6.9和11.1，莪术二酮高、中、低3个浓度分别为9.5、7.7和12.3，均符合血浆药品测定要求。

1.7稳定性实验及融冻次数考察分别取0.1645mg/mL浓度的莪术醇和0.3251mg/mL浓度的莪术二酮的空白血浆样品各6份，室温放置，分别于0、1、2、4、6、8h和第1、2、3、4、5天进样。另取-25℃冰箱保存的0.1645mg/mL莪术醇和0.3251mg/mL莪术二酮血浆样品，反复冻融5次，按1.3项下确定的血浆样品预处理方法进行样品处理，根据各色谱图峰面积比考察日内、日间稳定性，及融冻次数影响。结果见表2。

表2莪术醇和莪术二酮的日内、日间稳定性及融冻次数考察

1.8回收率考察

1.8.1含量测定方法的绝对回收率按照1.3项血浆样品处理方法，分别配制0.04112、0.1645、0.6580mg/ml浓度的莪术醇和0.08128、0.3251、1.3005mg/ml浓度的莪术二酮血浆样品6份，进样。计算各浓度血浆样品中莪术醇和莪术二酮的峰面积与内标的峰面积比值A；另配制高、中、低浓度的莪术醇和莪术二酮对照品溶液各一份，使莪术醇的浓度分别为0.04112、0.1645、0.6580mg/ml，莪术二酮的浓度分别为0.08128、0.3251、1.3005mg/ml，内标浓度均为1.209mg/ml，进样。计算各浓度对照品样品中莪术醇和莪术二酮的峰面积与内标峰面积的比值B，根据A/B×100％，计算绝对回收率，结果见表3。

表3莪术醇和莪术二酮的绝对回收率

1.8.2内标物对羟基苯甲酸乙酯的绝对回收率将1.8.1项的高、中、低3组浓度水平的实验数据中各浓度血浆样品中的内标峰面积与对照品样品中内标峰面积进行比较，得到内标物对羟基苯甲酸乙酯的绝对回收率，结果见表4。

表4内标物对羟基苯甲酸乙酯的绝对回收率

表5莪术醇和莪术二酮的方法回收率

1.8.3含量测定方法的方法回收率将1.8.1项测定结果，代回归方程分别计算各浓度血浆样品中，与对照品样品中的莪术醇与莪术二酮的量，根据两者比值计算方法回收率，结果见表5，表明方法回收率符合有关要求。

结果

1、豚鼠体内的莪术醇、莪术二酮的血药浓度

连续给药21天，以每组4只豚鼠平均值计算第22天血药浓度(ng/m1血浆)，数据见表6。

表6莪术醇、莪术二酮的血药浓度

注：与药物1组相比**P＜0.05

从冰片中龙脑的含量和血药浓度数据看，冰片中龙脑的含量增加，血药浓度也有增加，但药物1组与药物2组的莪术醇、莪术二酮的血药浓度无明显差异(P＞0.05)，药物1组与药物3组的莪术醇、莪术二酮的血药浓度均存在显著差异(P＜0.05)。

2、粘膜吸收百分率

按公式D_s/D₀×100％粗略估算(％)，其中D_s＝V×C₀，两给药组的粘膜吸收百分率数据见表7。

表7栓剂的粘膜吸收率

粘膜吸收百分率的数据显示，药物3组冰片中龙脑的含量最低，吸收百分率亦最低，与药物1组、药物2组相比均存在显著性差异(P＜0.05)；但药物1组与药物2组相比，虽然粘膜吸收率随冰片中龙脑含量的增加而增加，但粘膜吸收率并无显著性差异(P＞0.05)。

试验例3：对人宫颈癌Hela细胞生长和凋亡的影响

样品及主要试剂

药物1组：保妇康栓，海南碧凯药业有限公司生产，每粒重1.74g，其中含莪术油88mg，冰片75mg，其余成分为基质；将保妇康栓溶于44mlRPMI-1640培养液中，浓度为3.70×10³mg/l(活性成分)，待溶液澄清后，用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌，分装后4℃避光保存备用。

药物2组：取实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为83.9％)；将栓剂溶于44mlRPMI-1640培养液中，浓度为3.70×10³mg/l(活性成分)，待溶液澄清后，用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌，分装后4℃避光保存备用。

药物3组：取实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为70.3％)；将栓剂溶于44mlRPMI-1640培养液中，浓度为3.70×10³mg/l(活性成分)，待溶液澄清后，用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌，分装后4℃避光保存备用。

药物4组：取实施例1所得栓剂(冰片中龙脑的含量为59.9％)；将栓剂溶于44mlRPMI-1640培养液中，浓度为3.70×10³mg/l(活性成分)，待溶液澄清后，用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌，分装后4℃避光保存备用。

MTT，碘化丙锭(PI)为Sigma公司产品。

RPMll640购自Gibco公司，其它试剂为进口、国产分析纯；FITC标记鼠IgG₁、鼠抗人Fas单抗由美国Caltag实验室提供。

细胞株与细胞培养

宫颈癌Hela细胞由暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室提供。液氮冻存的人宫颈癌Hela细胞经复苏后培养于含有10％胎牛血清(杭州四季青公司)、青霉素、链霉素各100U/ml的RPMI-1640培养液中，在37℃、5％CO₂和95％湿度的培养箱中培养，细胞两天换液，85％汇片时传代，取对数生长期细胞进行实验。

方法

1、MTT比色分析法测定细胞抑制率

Hela细胞以完全培养液调为5×10⁴/ml，接种于96孔培养板中150μl/孔，然后分别加入50μl药物组药物，用RPMI-1640培养液作对照，总体积200μl/孔，每组均设3个平行孔。置于37℃50ml/lCO₂条件下培养48h，轻轻吸去上清液，加入100/ml不含血清的RPMI-1640培养液，同时每孔加入5mg/ml的MTT10μl，继续培养4h。培养结束后，加入150μlDMSO每孔，在震荡器上震荡10min，使紫色结晶完全溶解。用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。

2、流式细胞仪法测定Hela细胞凋亡和细胞Fas基因表达对数生长期的Hela细胞，胰酶消化后，以5×10⁴/ml的密度传代、接种于6孔板，加入3ml RPMI-1640培养基培养至贴壁后，分别加入1ml药物组的药物，以加入等体积完全培养液的Hela细胞作为对照组；继续培养48h后，胰酶消化成单细胞悬液，冰PBS洗涤2次，800r/min离心5min，弃上清，分别缓慢加入预冷的70％乙醇或PBS，4℃过夜。取细胞悬液，PBS洗涤离心及后续处理后流式细胞仪测定细胞凋亡和Fas蛋白。

3、统计学处理

实验所得数据均以均数表示，应用SPSS 13.0统计分析软件包进行统计处理，采用单因素方差分析及均数间多重比较。

实验结果

1、对Hela细胞生长的影响

药物1～4组对Hela细胞体外生长均显示有显著抑制作用。随着培养液中药物浓度的增加，对Hela细胞增殖的抑制率不断提高。可见本发明药物对宫颈癌Hela细胞的抑制作用呈一定的剂量依赖性。

表8各组处理方法对不同细胞增殖的抑制作用(n＝9，

)

注：与对照组相比**P＜0.01；与药物1组相比#P＜0.05。

2、各药物组诱导Hela细胞凋亡

各药物组作用Hela细胞48h后，细胞的凋亡数与对照组相比有明显增加，见表9。

表9各药物组对Hela细胞凋亡的影响(n＝9，

)

组别	凋亡细胞数	细胞总数	凋亡率(％)
				对照组	271±2	12000	2.3
药物1组	523±4	12000	4.4**
				药物2组	3552±9	12000	29.6**#
药物3组	3254±2	12000	27.1**#
				药物4组	2968±4	12000	24.7**#

注：与对照组相比**P＜0.01；与药物1组相比#P＜0.05

3、各药物组诱导Hela细胞Fas表达

各药物组作用Hela细胞48h后，Hela细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组，细胞Fas蛋白表达率明显增加，见表10。

表10各药物组引起Hela细胞fas蛋白的表达

注：与对照组相比**P＜0.01；与药物1组相比#P＜0.05

试验结论：上述试验表明，本发明药物组合物中对于冰片中龙脑含量的控制具有重要意义。

试验例4：体外抗菌试验

采用微量连续二倍稀释法测定本发明实施例1药物组合物对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、表皮葡萄球菌、普通变形杆菌、粪链球菌、淋病奈瑟氏菌的标注菌株和大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、表皮葡萄球菌、普通变形杆菌、粪链球菌、淋病奈瑟氏菌临床分离株的最小抑菌浓度(MIC)，采用平板转染法测定本发明药物组合物对上述细菌的最小杀菌浓度(MBC)。将大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、表皮葡萄球菌、普通变形杆菌、阴道加特纳菌接种于MH肉汤，置普通培养箱37℃培养24h；粪链球菌接种于TPY肉汤(厌氧菌营养肉汤)，置厌氧培养箱37℃培养48h；淋病奈瑟氏菌接种于汗5％小牛血清的MH肉汤，置5％CO₂培养性37℃培养48h。

表11对标准菌株的MIC和MBC

由上表可知，本发明药物组合物对试验所选用的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、表皮葡萄球菌、普通变形杆菌、粪链球菌、淋病奈瑟氏菌的标注菌株和阴道加特纳菌临床分离参考株均有较明显的抑制和灭活作用，其MBC为MIC的2～4倍。

表12对405株临床分离菌株的MIC、MIC₅₀、MIC₉₉和MBC

(mg组合物/ml)

菌株	株数	MIC	MIC₅₀	MIC₉₉	MBC
						金黄色葡萄球菌	100	0.32～1.40	1.0062	1.115	0.66～6.00
大肠杆菌	120	6.25～50	18.1076	22.2854	24.5～100
						表皮葡萄球菌	50	0.34～3.11	0.6093	1.2652	1.54～6.25
变形杆菌	100	12.5～50	25.3597	32.9731	25～100
						淋病奈瑟氏菌	24	0.165～0.35	0.2052	0.2252	0.165～0.78
阴道加特纳菌	11	0.35～1.56	0.6362	0.9047	0.72～1.48

由上表可见，本发明药物组合物对试验所选用的405株临床分离菌株均有一定的抑制和灭活作用，其MBC为MIC的2～4倍。

试验例5：体外抗真菌试验

采用微量连续二倍稀释法测定本发明实施例1药物组合物对念珠菌的MIC，采用平板转染法测定本发明药物组合物对念珠菌的MBC。采用微量连续二倍稀释法测定本发明药物组合物对霉菌的MIC，采用平板转染法测定本发明药物组合物对霉菌的MBC。

表13对试验菌株的MIC和MBC

由上表可知，本发明药物组合物对试验所选用的白色念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、副克柔念珠菌、热带念珠菌、青霉菌、黄曲霉菌的标注菌株或临床分离参考株均有较明显的抑制和灭活作用，其MBC为MIC的1～4倍。

表14对白色念珠菌临床分离菌株的MIC、MIC₅₀、MIC₉₉和MBC

(mg组合物/ml)

株数	MIC	MIC₅₀	MIC₉₉	MBC
					50	1.33～6.00	0.0878	0.0910	6.00～10.5

由上表可见，本发明药物组合物对变色试验所选用的50株白色念珠菌临床分离菌株有一定的抑制和灭活作用。

试验例6：抗阴道毛滴虫试验

采用体外培养法测定本发明1实施例药物组合物对阴道毛滴虫的最小杀虫浓度。阴道毛滴虫在改良的CPLM培养基37℃培养48h，滴虫运动活泼，生长良好，自然死亡率＜2％，试验用阴道毛滴虫液含虫浓度为1.8～2.5×10³/ml。

结果表明，本发明药物组合物体外对杀灭阴道毛滴虫有效。

制备实施例

实施例1

处方：吉马酮14.9g、呋喃二烯39g、莪术二酮24g、β-榄香烯9.1g，莪术醇0.5g、莪术烯0.5g，冰片75g(冰片中龙脑的含量为83.9％)。

剂型：栓剂。

制备方法：将处方量的吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯与71g聚山梨酯80混匀，冰片75g用适量的乙醇溶解，与上述溶液混匀。

处方量的聚氧乙烯硬脂酸酯1533g，置水浴上加热使熔化，加入上述药液，搅匀，灌装，制成栓剂1000只，每只1.74g。

实施例2～8

按如下处方制备栓剂，制备方法同实施例1，(冰片中龙脑的含量为60.5％)。

实施例	2	3	4	5	6	7	8
								吉马酮	11.2	6	9	10	11	13	14
呋喃二烯	37.3	33	30	28	25	15	11
								莪术二酮	16.5	8	9	15	18	20	23
β-榄香烯	10.8	10	9.5	8	6.5	5	4.5
								莪术醇	0	0.05	0.15	0.1	0.4	0.35	0.5
莪术烯	0.5	0	0.2	0.3	0.4	0.5	0.45
								冰片	30	40	50	60	70	80	90
聚山梨酯80	53	61	64	71	72	82	82
								聚氧乙烯硬脂酸酯	1651	1668	1452	1751	1533	1522	1577

实施例9

处方：吉马酮6.5g、呋喃二烯32g、莪术二酮21g、β-榄香烯8.5g，莪术醇0.45g，冰片35g(冰片中龙脑的含量为70.3％)。

剂型：泡腾片。

制备方法：

1)取β-环糊精，按25ml/g加水适量，搅拌使其全溶，必要时加热，得β-环糊精溶液；吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇，冰片35g，用无水乙醇稀释后缓慢加入β-环糊精溶液中，继续搅拌至成均相，冰箱中放置过夜，抽滤，用少量石油醚洗涤3次，冷冻，的得白色粉末。

2)将上述白色粉末与35g冰片、枸橼酸150g和乳糖160g混匀；另取碳酸氢钠120g与乳糖160g混匀，分别用5％PVP无水乙醇溶液作为粘合剂制粒，50℃干燥，整粒，加入PEG6000适量，混匀，压片。

实施例10

处方：吉马酮7.5g、呋喃二烯31g、莪术二酮19g、β-榄香烯5.5g、莪术醇0.51g、莪术烯0.35g，冰片45g(冰片中龙脑的含量为61.3％)。

剂型：胶囊剂

制备方法：

1)囊皮制备：按明胶∶甘油∶水＝10∶3.7∶9.5的重量份混合物，取明胶，加入适量水使明胶吸水膨胀。另取甘油及余下的水置煮胶锅中加热至70℃2，混合均匀，加入膨胀的明胶，搅拌，熔融，保温，真空抽气除去气泡，虑过，加入约3％重量份的聚乙二醇400，混匀，然后保温50℃，备用。

2)内容物制备：取300g聚乙二醇400加热至80℃，加入冰片45g，待完全溶解后加入150g聚乙二醇4000搅拌至溶解，温度降至40～50℃时，加入处方量的吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯，搅拌均匀，降温至25～30℃，过胶体磨磨2遍，每次5min，制成内容物，保温条件下，制成1000粒软胶囊。

实施例11

处方：吉马酮8.5g、呋喃二烯29g、莪术二酮21g、β-榄香烯4.5g、莪术醇0.27g、莪术烯0.46g，冰片55g(冰片中龙脑的含量为89.1％)。

剂型：膜剂。

制备方法：取聚乙烯醇800g于800ml水中浸泡24小时，在80℃温度下水浴中溶解；将吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯，冰片，溶解于1000ml乙醇(W/V＝75％)中，将上述聚乙烯醇溶液混合，搅拌均匀；在上述混合液中加入抗氧化剂焦亚硫酸钠10g、保湿剂甘油80g、增塑剂三醋酸甘油80g，搅拌均匀；按常规方法脱出气泡，涂覆成膜后，干燥，分切，即得1000张膜剂产品。

实施例12

处方：吉马酮9.5g、呋喃二烯26g、莪术二酮23g、β-榄香烯4.2g，莪术醇0.19g、莪术烯0.01g，冰片65g(冰片中龙脑的含量为63.9％)。

剂型：凝胶剂

制备方法：取卡波姆20g溶胀于丙二醇760g中，静置至溶胀完全后调节pH值到4～7，并加入丙二醇600g制成基质备用；将吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯，冰片65g溶于120g聚乙二醇400中得混合溶液，搅匀，将混合液与上述基质混合均匀，分装，即得。

实施例13

处方：吉马酮10.5g、呋喃二烯23g、莪术二酮24.5g、β-榄香烯4.6g，莪术醇0.26g、莪术烯0.47g，冰片70g(冰片中龙脑的含量为87.5％)。

剂型：洗剂

制备方法：取冰片70g，加适量乙醇使其溶解；将吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯与氮酮20g，2500g吐温80混合均匀，加入乙醇至2800g，搅拌均匀后加入注射用水至10kg，搅匀，分装，得浓溶液，使用时加水稀释10倍使用。

实施例14

处方：吉马酮12.5g、呋喃二烯17g、莪术二酮18.5g、β-榄香烯6.3g，莪术醇0.47g、莪术烯0.36g，冰片80g(冰片中龙脑的含量为73.1％)。

剂型：软膏剂

制备方法：将凡士林800g在温控80～100℃下熔化后，控温115～120℃灭菌，将已灭菌的凡士林冷却到70～80℃；将羊毛脂40g在控温115～120℃灭菌；将二甲亚砜25g控温55～65℃至熔化；将凡士林放入配料罐中，放入一半时搅拌；再将冰片、二甲亚砜和羊毛脂共熔，过滤并投入配料罐中搅拌；然后将吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯加入配料罐中，搅拌均匀，即成。

Claims

1.一种药物组合物，其特征药物组合物中包含吉马酮、呋喃二烯、莪术二酮、β-榄香烯、莪术醇、莪术烯、冰片，其中冰片中龙脑的含量大于等于70％且小于100％。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的药物组合物，包含以下重量份的成分：

吉马酮 5-16重量份；

呋喃二烯 10-40重量份；

莪术二酮 5-25重量份；

β-榄香烯 4-11重量份；

莪术醇 0-0.5重量份；

莪术烯 0-0.5重量份；

冰片 30-90重量份。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述的冰片选自天然冰片和/或合成冰片。

4.根据权利要求3所述的冰片，其中所述的冰片中龙脑的含量大于等于70％且小于100％。

5.根据权利要求1或2所述的药物组合物制备成阴道给药制剂或直肠给药制剂。

6.根据权利要求5所述的制剂，其中制剂包括栓剂，软膏剂、胶囊剂、泡腾片、凝胶剂、洗剂、膜剂或泡沫剂。

7.根据权利要求1或2所述的药物组合物在制备预防和/或治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其中人乳头瘤病毒感染包含高危型人乳头瘤病毒感染和/或低危型人乳头瘤病毒感染。

9.根据权利要求1或2所述的药物组合物在制备预防和/或治疗阴道炎、宫颈糜烂、宫颈癌的药物中的应用。